Uppreglering av CLDN1 i magsäckscancer är korrelerad med minskad överlevnad

Uppreglering av CLDN1 i magsäckscancer är korrelerad med minskad överlevnad Bild Sammanfattning
Bakgrund sälja The genetiska förändringar i magcancer är extremt komplexa och pålitliga tumörmarkörer har ännu inte identifierats. Det finns också anmärkningsvärda geografiska skillnader i fördelningen av denna sjukdom. Vårt mål var att identifiera de mest differentiellt reglerade gener i 20 gastriska adenokarcinom från en norsk urval jämfört med matchade normal slemhinna, och vi har släkt våra iakttagelser till prognos, överlevnad och kronisk Helicobacter pylori
infektion.
Metoder
biopsier från mag adenokarcinom och närliggande normal magslemhinna erhölls från 20 patienter omedelbart efter kirurgisk resektion av tumören. Hela genomet, cDNA microarray analys på RNA isolerat från provparen att jämföra genuttrycksprofilerna mellan tumören mot matchas slemhinna. Proverna mikroskopiskt undersöktes för att klassificera gastrit. Förekomsten av H. pylori
undersöktes med hjälp av mikroskopi och immunohistokemi.
Resultat
130 gener visade differential reglering över en fördefinierad cut-off nivån. Interleukin-8 och Claudin-1 (CLDN1
) (IL-8
) var den mest konsekvent uppreglerade gener i tumörerna. Mycket hög CLDN1
uttryck i tumör identifierades som en oberoende och betydande prediktor genen av minskad postoperativ överlevnad. Det fanns helt olika uttrycksprofiler mellan tumörgruppen och kontroll slemhinna gruppen, och de histologiska undergrupper av blandad typ, diffus typ och tarmcancertypen visade ytterligare under klustring. Uppregleras gener kartlades till cell-adhesion, kollagenrelaterade processer och angiogenes, medan normala funktioner tarm såsom matsmältning och utsöndring var förknippade med nedåtreglerade gener. Vi avser de aktuella resultaten till vår tidigare studie på genen respons gastric epitelceller till H. pylori
infektion.
Slutsatser
CLDN1
var mycket uppreglerat i magcancer, och CLDN1
expression oberoende associerat med en dålig postoperativ prognos, och kan ha viktig prognostiskt värde. IL-8 Mössor och CLDN1
kan representera centrala länkarna mellan genen svar hos akut H. pylori
infektion av gastric epitelceller, och i slutändan magcancer.
Nyckelord
Magcancer Interlukin 8 claudin-en Helicobacter pylori
cDNA microarray överlevnadsprognosen bakgrund
Magcancer (GC) är bara andra till lungcancer i världsomfattande cancerrelaterade dödsfall, men det finns stora geografiska skillnader i GC fördelning. Data från 2010 visar att GC förekomsten i Norge är mycket låg (män 6,9, honor 3,0 per 100.000) [1] jämfört med mindre utvecklade områden, särskilt i östra Asien, där förekomsten är cirka sex gånger (män 42,4, kvinnor 18,3 per 100.000) [2].
Gastric adenocarcinom är anmärkningsvärt heterogena genetiskt, cytologiskt och arkitektoniskt jämfört med andra gastrointestinala karcinom. Sökandet efter tillförlitliga tumörmarkörer och konsekventa prognostiska indikatorer har visat sig vara svårt. Flera författare har försökt att förutsäga GC sjukdom och prognos baserad på en eller flera gener [3-8], men det finns skillnader mellan studierna och för närvarande ingen gen signatur eller biomarkörer är i rutinmässig klinisk användning. Förstå mekanismerna bakom magsäckscancer är en av de stora utmaningarna i cancer genomik. Lauren klassificeringen delar adenokarcinom i tre olika histologiska subtyper: intestinala och diffusa typer och en blandad variant [9], som är tänkt att ta olika vägar för cancer. Tarm typ är hänförlig till en flerstegs progression av kronisk gastrit genom gastric atrofi, metaplasi, dysplasi och slutligen malign sjukdom [10]. Diffusa typer kan uppstå från kronisk inflammation utan
en tydlig manifestation av mellan premaligna steg [11-13]. Den blandade typen visar icke-homogena blandningar av både intestinal och diffus typ arkitektur, och kan utgöra en separat cancer kategori med exklusiva genmutationer och en mer aggressiv kurs [14, 15]. Trots omfattande forskning om genetiska förändringar av GC, mekanismerna bakom sjukdomen är fortfarande långt ifrån förstås, och sjukdomen inte lätt kan förklaras med en adenom-carcinom modell som i kolorektal cancer. Det finns tre molekylära mekanismer som driver gastric cancer: Kromosom instabilitet, mikro instabilitet och epigenetiska förändringar [16]. Nettoresultatet är aktivering av onkogener, inaktivering av tumörsuppressorgener och avreglering av signalvägar [11, 12]. Avvikande cellcykelreglering och förändringar i expression av tillväxtfaktorer och cytokiner reglerar differentiering och överlevnad av tumörceller. Mutationer av cell adhesion och angiogena gener spelar en viktig roll i den invasiva och metastatiska beteendet hos GC-celler.
Syftet med den aktuella studien var att identifiera de mest differentiellt reglerade gener i kirurgiskt opererande magcancer jämfört med matchad normal slemhinna, med hjälp av hela genomet cDNA microarray profilering. Vi försöker också att identifiera gener som påverkar GC prognos och överlevnad. Resultaten jämförs med den gastriska epitelceller genen respons på H pylori
infektion, som analyserades i en tidigare publicerad papper [17]. Denna studie adderar stöd till betydelsen av IL-8 Mössor och CLDN1
i gastric cancer, liksom visar viktiga genetiska förändringar i GC och deras eventuella betydelse för H. pylori
infektion.
Metoder
Tissue och patientkarakteristika
biopsier erhölls från patienter som diagnostiserats med icke-magmunnen magcancer vid endoskopi polikliniken vid Akershus universitetssjukhus, Norge. Bröst-buken datortomografi bildåtergivning genomfördes för att utesluta patienter med metastaserande sjukdom. 20 patienter med både intestinala och diffusa typer av GC inkluderades. Patienter och kliniskt patologiska egenskaper redovisas i tabell 1. Vid intagningen för elektiv kirurgi skrivna ades informerat samtycke till deltagande i studien erhölls från deltagarna. Inom 5 minuter för avlägsnande av de viktigaste kirurgiska provet togs prover från både tumör gränsen och från friska gastric corpal slemhinna i samma mage område men mer än 5 cm från tumören, och lagras på RNAlater
(Applied Biosystems , USA). Alla prover lagrades i + 4 ° C under ca 1-2 veckor för att tillåta fullständig vävnadspenetrering av RNAlater
, innan prover torkades och permanent lagrade i -80 ° C. Alla prov förvärv och hantering utfördes av samma individual.Table 1 Patient egenskaper och kliniskt patologiska egenskaper hos de 20 gastriska tumörer som användes i studien
Sex
Honor n = 5, hanar n = 15
etnicitet
kaukasiska n = 18, asiatiska n = 2 Review Ålder vid kirurgi
Totalt: 68,7 år (± 12,5) Review Kvinnor: 65,7 år (± 21,8) katalog Män: 69,7 år (± 8,6)
Postoperativ överlevnad (avlidna personer) Review Totalt: 13,2 månader (± 8,8) katalog Kvinnor (n = 4): 16,6 månader (± 6,4) katalog män (n = 10): 12,0 månader (± 9,7 ) Review Postoperativ överlevnad (levande personer vid studiens slut) Review Totalt: 45,8 månader (± 7,9) katalog Kvinnor (n = 1): 48,0 månader
män (n = 5): 44,9 månader (± 8,8) katalog Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP
49 mm (± 27) Review tumörstadium
T1 2
T2
10
T3
5
T4
3
Nodal stadium
N0
10
N1
5
N2
3
N3 2
Histologisk typ
Intestinal
5
Diffus
12
Mixed
3
Patient egenskaper och kliniskt patologiska egenskaper hos de 20 gastriska tumörer som används i studien. Värdena är medelvärdet plus /minus standardavvikelse.
Efter resektion av tumören, var den främsta provet utsätts för histolopathological granskning av två ledande specialist patologer för att bekräfta diagnosen och klassificera tumören enligt Lauren klassificering [9]. undersöktes antral och corpal magslemhinnan undersöktes med avseende på gastrit, atrofi och metaplasi, och närvaron eller frånvaron av H. pylori
ades mikroskopiskt undersöktes och därefter identifieras genom immunhistokemi. Det uppdaterade Sydney System används för att klassificera och grad graden av gastrit [18, 19].
Studien godkändes av den norska regionala kommittén för medicinsk och hälsoforskning etik (REC South East). Alla prover och patientdata kodades och förblindad före analys.
RNA-isolering, kvalitetskontroll och cDNA-syntes
Totalt RNA isolerades med användning av RNeasy Blod och vävnads kit (Qiagen GmbH, Tyskland) enligt tillverkarens standardberedningen protokoll . RNA-koncentrationen och kvalitet bestämdes med hjälp av en Nanodrop ND-1000 spektrofotometer (Nanodrop Technologies, USA) och Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, USA). RNA integritet Antalet var tillräckliga för cDNA-syntes.
Illumina TotalPrep RNA förstärkning Kit (Ambion Inc., USA) användes för att förstärka RNA för hybridisering på Illumina BeadChips. För att syntetisera första sträng-cDNA genom omvänd transkription, använde vi totalt RNA från varje prov uppsamlades ovan. Efter den andra strängen cDNA-syntes och cDNA-reningssteg, in vitro
transkription att syntetisera cRNA cDNA oligonukleotid microarray analys framställd över natten under 12 h. Sälja The genuttrycksprofilerna mättes med användning Illumina Human HT-12 v3 expression BeadChip (Illumina, USA), som gör det möjligt för genomet hela expressionsanalys (48800 transkript, motsvarande cirka 37800 gener) av 12 prover parallellt på en enda microarray. 35967 av sonderna konstruerades med hjälp av RefSeq (bygga 36,2, släpp 22) bibliotek och 12.837 sonder härleddes från Unigene (build 199) databas [20, 21].
Immunohistokemi
Förekomsten av H. pylori
i kirurgiska prover analyserades med hjälp av en polyklonal anti-Helicobacter
-antikropp (Dako, Danmark, kod B0471, utspädning 1: 200). 4 pm sektioner av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnads från icke-tumör slemhinna applicerades på belagda diabilder. Avparaffinering, var rehydrering och epitopretrieval utförs i en Dako PT Link (Dako, Danmark) vid 97 ° C under 20 min. Immunfärgning Förfarandet utfördes i en Dako Autostainer Plus applicera Envision ™ Flex, Högt pH-systemet (Dako, Danmark).
Bioinformatik och statistik
R /bioledare [22, 23] med paketet Beadarray [24] användes för förbehandling av microarray textdata från BeadStudio. Rumsliga artefakter avlägsnades med användning av BASH [25] innan expressionsdata var log 2-transformerade och -kvantilen normaliseras. Loggen 2-faldig förändring (FC) för varje sond på matrisen inom varje vävnad par (tumör mot matchad normal slemhinna) beräknades därefter, och uppgifterna laddas in i J-express programpaket [26]. Rang produkttestning [27] genomfördes därefter för att testa om det differentiella uttrycket mellan tumörvävnad och matchas normal slemhinna var betydande. Differential uttryck förklarades betydande om det justerade p-värde, det vill säga FDR q-värde, var mindre än 0,05. Hierarkisk klustring utfördes med hjälp av genomsnittlig koppling och euklidiska avståndsmätning. Analyserna utfördes med användning av J-express programpaket [26]
För att producera en rimlig storlek lista över de mest differentiellt uttryckta gener, mindre uttryckta gener filtrerades vid en cut-off nivå FC >. 1,5, som producerar en lista över de 130 mest differentiellt uttryckta gener. Detta dataset importerades till Onto-Express och Pathway Express [28, 29], en del av Onto-Tools programsvit för funktionsanalys, och grupperas i Gene ontologi (GO) termer och Kegg (Kyoto Encyclopedia of gener och genom) cellulära signalvägar [30]. Pathway Express beräknar ett Impact Factor (IF), som används för att rangordna de påverkade signalvägar, baserat på den faldig förändring, antalet av de inblandade generna i reaktionsvägen, och mängden av perturbation av gener nedströms [31].
den dataset ingicks PASW Statistics (SPSS version 18.0.2) att utföra bivariat korrelationsanalys för att välja gener som är associerade med kliniskt patologiska parametrar. Både Pearson och Spearman korrelationskoefficienter användes för att identifiera korrelerar gener. Bland gener som korrelerade, var vi särskilt intresserade av de som uppvisade en liknande uttryck i vår tidigare publicerad studie av H. pylori
-exposed gastric epitelceller [17]. De utvalda generna utsattes sedan för en Cox multivariat regressionsanalys för att undersöka om någon av generna var oberoende prediktorer för postoperativ överlevnad i GC patienter, oberoende av histologisk typ, tumörstadium och storlek, nodal sjukdom och ålder vid kirurgi. I en prediktor gen som identifierades var olika cut-off halter tillämpas för att konstruera höga och låga uttrycksnivå grupper, före statistisk signifikans mellan grupperna bestämdes med användning av en log-rank (Mantel-Cox) test. En Kaplan-Meier överlevnads tomt skapades för att demonstrera skillnad i överlevnad mellan hög- och låg-uttrycksgrupper. Sälja The microarray data finns tillgängliga under numret E-MTAB-1440 i ArrayExpress databasen [32].
Resultat
Gene expression
hela genomet uttryck profilering av 20 matchade gastric tumörprover utfördes med användning av cDNA microarrays. Rang produkt statistiska tester [27] av stocken 2-faldig förändring (FC) expressionsvärden på cirka 38000 gener på mikromatrisskivan avslöjade 2297 gener som var signifikant uppregleras och 2259 gener som var betydligt nedregleras i tumören vävnad jämfört med matchad normal slemhinna (p < 0,01). 130 filtrerade gener som differentiellt regleras av en genomsnittlig FC > 1,5 är listade i tabell 2, och utgör datauppsättningen på vilken ytterligare analys utförs. Av de differentiellt reglerade gener, 30 gener visade uppreglering och 100 gener nedregleras. IL-8
var den enskilt mest reglerade genen uppregleras i 18 av 20 vävnads par, med en genomsnittlig FC 2,6 (Figur 1), följt av COL1A1 Mössor och CLDN1
(Figur 2 ). Den mest nedregleras genen var PGA4
, är anmärkningsvärt nedreglerade i 18 av 20 vävnads par, följt av GIF Mössor och ATP4A
. Hierarkisk klustring av dataset (Figur 3) visade att tumör och kontrollvävnader bildade helt olika genuttryck kluster. Inuti tumörklustret, de olika histologiska kategorierna diffunderar, intestinal och blandas cancer bildades nästan exklusiva enskilda kluster, vilket visar nära genetisk likhet inom vart och ett av de histologiska undergrupper. Bland kontrollvävnader, och bland H. pylori
positiva individer, ingen särskild klustring var seen.Table 2 De differentiellt reglerade gener i gastric tumör vs kontroll slemhinna
uppregleras gener (n = 30)
vid nedregleras gener (n = 100)
Gene symbol
Genomsnittlig FC
Gene symbol
Genomsnittlig FC

Gene symbol
Genomsnittlig FC
Gene symbol
Genomsnittlig FC
IL-8
2,58
PGA4
-5.58
MAL
-2.22
AKR7A3
-1.79
COL1A1
2.18
GIF
-5.48
SCNN1B
-2.22
KIAA1324
-1,79
CLDN1
2,14
ATP4A
-5.28
SOX21
-2.22
CCDC121
-1.78
SPP1
2.09
PGA3
-4.72
CAPN9
-2.21
FBP2
-1.76
CLDN2
2.09
ATP4B
-4.71
AGXT2L1
-2.20
FCGBP
-1.75
CEACAM6
2.09
PGA5
-4.34
HDC
-2.18
ORM2
-1.75
SERPINB5
2.06
LIPF
-3.91
GSTA1
-2.18
FAM3B
-1.73
KRT17
2,00
CPA2
-3.78
KLK11
-2.12
TRIM50
-1.73
H19
1.94
GHRL
-3.75
APLP1
-2.12
DUOX1
-1.72
CLDN7
1,93
GKN2
-3.26
MT1H
-2.09
RAP1GAP
-1.70
TFF3
1.92
KCNE2
-3.19
ADH1C
-2.09
EEF1A2
-1.70
OLFM4
1.91
SST
-3.12
DPCR1
-2.06
ANGPTL3
-1.70
THBS2
1.91
CHGA
-3.02
AKR1B10
-2.03
B3GAT1
-1.69
PI3
1.90
PSCA
-3.00
MT1G
-2.03
C6ORF105
-1.68
SULF1
1.89
CHIA
-2.88
CKB
-2.01
FGG
-1.68
BGN
1.82
GKN1
-2.88
SH3GL2
-1.99
ADA
-1,65
KRT6B
1.80
KCNJ16
-2.82
REP15
-1.97
C6ORF58
-1.63
THY1
1.72
GC
-2.66
CKM
-1.95
ZNF533
-1.60
MMP11
1.70
CLIC6
-2.65
FGA
-1.95
RPESP
-1.59
KLK6
1.67
SOSTDC1
-2.53
SLC9A4
-1.92
MT1F
-1.58
SERPINA3
1.65
ESRRG
-2.52
MFSD4
-1.92
PNPLA7
-1.57
FNDC1
1.64
CCKBR
-2.51
ALDOB
-1.89
FUT9
-1.57
COL1A2
1.63
TMED6
-2.44
SCNN1G
-1.87
RPRM
-1.56
CST1
1.63
MT1M
-2.44
IRX2
-1.87
GUCA2B
-1.56
FAP
1.60
GPER
-2,43
SLC26A9
-1.87
TCN1
-1.55
COL6A3
1.60
CKMT2
-2.36
CLCNKA
-1.87
PKIB
-1.55
SFRP4
1.56
VSIG2
-2.36
CAPN13
-1.86
SLC9A2
-1,55
TMEM158
1,53
FLJ42875
-2,33
TTR
-1,86
HOMER2
-1,53
MMP7
1,50
CXCL17
-2.32
GSTA2
-1.85
AKR1C4
-1.50
MMP10
1.50
CA9
-2.32
NKX6-2
-1.83
REG3A
-1.50
AKR1C2
-2,27
CA2
-1,83
PI16
-1,50
ALDH3A1
-2,24
FOLR1
-1,82
MAP7D2
- 1,50
SCGB2A1
-2,23
RDH12
-1,81
AQP4
-2,24
IRX3
-1,80
Differentiellt reglerade gener med genomsnittlig log2FC av > 1,5 (n = 130). utvinns ur hela genomet uttryck. Genomsnittlig log2FC nivåer som motsvarar varje gen listas. Nio gener. visas i fetstil. visade liknande reglering i både den aktuella studien och i en tidigare studie där gastric epitelceller utsattes för H. pylori
[17].
Figur 1 Interleukin-8 genuttryck i mag tumörer vs matchad kontrollgrupp slemhinna. Den heldragna linjen representerar det relativa förhållandet mellan IL-8
expression i tumörvävnad jämfört med matchad kontrollgrupp magslemhinnan, som förändringen log2 faldigt (log2 tumör /styra expressionsnivåer). En positiv poäng indikerar en högre uttryck i tumören jämfört med den normala magslemhinnan. IL-8
var den mest konsekvent uppreglerade genen i studien. Grå bakgrund representerar ett uttryck för cirka 37 800 andra gener.
Figur 2 Claudin ett genuttryck i mag tumörer vs matchad kontrollgrupp slemhinna. Den heldragna linjen representerar relativa förhållandet mellan CLDN1
expression i tumörvävnaden jämfört med matchad kontrollgrupp magslemhinnan, som förändringen log2 faldigt (log2 tumör /styra expressionsnivåer). En positiv poäng indikerar en högre uttryck i tumören jämfört med den normala magslemhinnan. Grå bakgrund representerar ett uttryck för cirka 37 800 andra gener.
Figur 3 Hierarkisk klustring av genuttrycket av 20 gastriska tumörer och kontroll slemhinna. Hela genomet uttryck för 20 tumör /kontrollvävnad par filtrerades för att producera en datamängd som innehåller de 130 mest differentiellt reglerade gener. De flesta tumörprover klustrade separat för kontrollproverna. De diffusa typ tumörprover är markerade i ljusgrått, till tarm typ i mellangrå och blandad typ i mörkgrå illustrerar subclustering av de tre olika histologiska cancertyper.
Gener från den aktuella datauppsättningen var kors matchas mot flesta differentiellt reglerade gener som identifierades i vår tidigare studie, där gastriska epitelceller exponerades för h pylori
under 24 timmar in vitro
[17]. Både H. pylori
-exposed gastric epitelceller och tumörbiopsier visade signifikant uppreglering av fem gemensamma gener (IL-8, CLDN1, KRT17, CLDN7 Mössor och MMP7
) och nedreglering av fyra gemensamma gener (GPER, KIAA1324, ADA Mössor och SLC9A2
).
Gene ontologi
Därefter dataset av de 130 mest differentiellt reglerade gener analyserades för funktionell anteckning med hjälp av GO termer (tabell 3). Bland de 30 uppreglerat gener, cell-adhesionsprocesser, särskilt kalciumoberoende cell-cell-adhesion, var bland de mest i hög grad anrikade termer. Dessutom syntetiska processer som huden morfogenes och blodkärlsutveckling, liksom både kataboliska och syntetiska kollagenrelaterade processer var bland de stora villkor identifierats. Endast en mindre andel av de nedåtreglerade gener kartlades till specifika ontologier jämfört med de upp-reglerade gener, där matsmältning och utsöndring var de mest anrikade termer. Flera metaboliska processer, pH-reglering och kobalamin och jontransport var också signifikant berikade GO termer bland nedregleras gener (tabell 4) .table tre Gene Ontology föreningar i upp reglerade gener
P-värde
Ingen av gener som är involverade
% av gener som är involverade
Gene ontologi
Go: antal
0,00066
3
10,0
Kalcium -oberoende cell-celladhesion
GO: 0016338
0,0007 2
6,67
Skin morfogenes
GO: 0.043.589
0,023
5
16,67
celladhesion
GO: 0007155
0,023 2
6,67
Collagen katabol process
GO: 0.030.574
0,023 2
6,67
kollagenfibrill organisation
GO: 0030199
0,027 2
6,67
Blodkärl development
GO:0001568
0.042
1
3.33
Copulation
GO:0007620
0.042
1
3.33
Regulation av retrovirala genomet replikering
GO: 0045870
0,042 1
3,33
Responsen till kortikosteroid stimulans
GO: 0.031.960
0,042 1
3,33
tand mineralisering
GO: 0034505
Betydligt anrikade Gene Ontology termer i upp- reglerade gener från dataset
Tabell 4 Gene Ontology föreningar i nedregleras gener
P-värde
Ingen av gener involverade
% av gener som är involverade
Gene ontology

GO:number

0.0
8
7.41
Digestion
GO:0007586
0.00011
5
4.63
Excretion
GO:0007588
0.0005
3
2.78
Creatine metabola processen
GO: 0006600
0,0019
3
2,78
Cellular aldehyd ämnesomsättning
GO: 0.006.081
0,0043
3
2,78
Reglering av pH
GO: 0006885
0,013 2
1,85
Kobalamin transport
Gå: 0.015.889
0,015
9
8,33
Ion transport
GO:0006811
0.015
2
1.85
Secretion
GO:0046903
0.015
2
1.85
Cobalt jontransport
Gå: 0006824
0,02013 2
1,85
Morphogenesis av en epitel
GO: 0002009
Betydligt anrikade Gene Ontology termer i nedregleras gener från dataset .
Kegg cellulära signaleringsvägar
dataset analyserades sedan för Kegg cellulär signalväg föreningar. 11 av de 30 upp-reglerade generna kartlades till 8 signifikanta KEGG vägar (p < 0,05). I synnerhet celladhesionsmolekyler (CAM) vägen och leukocyter Transendothelial migration väg tilldelades en hög impact factor, på grund av den starka uppreglering av CLDN1, CLDN7
och Thy1
gener, och den höga relativa effekten av dessa gener på CAM vägen. IL-8, COL1A1, COL1A2, THBS2, SPP1, COL6A3 Mössor och SFRP4
kartlades till flera högt påverkade vägar: leukocyter Transendothelial migration, extracellulärmatrix receptorinteraktion, tight junction, epitelial cellsignalering i H. pylori
infektion, TGF signalväg, toll-like receptors signalering och Wnt-signalering (Tabell 5). Ingen av de 100 nedregleras gener kartlades till några väsentliga Kegg pathways.Table 5 Kegg cellulära signaleringsvägar
Rank
Pathway namn
IF
P-värde
1
celladhesionsmolekyler (CAMs) katalog 734,0
0,000129 2
Leukocyte Transendothelial migration
672,1
0,000879
3
ECM receptor interaktion
10,9
0,00215 4
Täta fogar
10,6
0,000296
5
Epithelial cellsignalering i Helicobacter
7,2
0,006
6
TGF-beta signalväg
6,3
0,013
7
fokaladhesion
6,2
0,014
8
Kalcium signalväg
5,1
0,035
Betydligt berikat Kegg cellulära signaleringsvägar i datamängden (p < 0,05). Impact Factor (IF) används för att rangordna de påverkade signalvägar, baserat på den faldig förändring,
antalet av de inblandade generna i reaktionsvägen, och mängden av störning av nedströms gener.
Kliniskt patologiska korrelation Bland den totala uppsättningen av de 130 mest differentiellt reglerade gener, FC expressionsnivåer av 20 gener visade signifikant korrelation med postoperativ överlevnad, 8 gener korrelerade med histologisk typ, 5 gener korrelerad med tumörstorlek och en gen korrelerade med lymfkörtelstadiet (Ytterligare fil 1 ). Vissa gener visade korrelation med mer än en parameter. På grund av den måttliga provstorleken (n = 20), en signifikansnivå p < 0,01 valdes.
Cox multivariat analys av de gener som är associerade med post-operativ överlevnad visade att en hög CLDN1
expressionsnivån var den enda oberoende prediktor genen av postoperativ överlevnad. CLDN1
uttryck och kovariater tumörstorlek, positiv lymfkörtel fraktion, histologiska typ, kön och ålder vid operation infördes i en linjär regressionsmodell (Tabell 6), vilket visar att endast CLDN1 Mössor och positiv lymfkörtel fraktion var betydande prediktorer för postoperativ överlevnad. När alla icke-signifikanta determinanter där de tas bort, fanns det en starkare negativ korrelation mellan CLDN1
expression och postoperativ överlevnad (R = -0,7, p < 0,001). Det fanns inget signifikant samband mellan CLDN1
uttryck och Lauren klassificering, H. pylori
infektion, etnicitet, tumörstorlek eller metastaserad lymfkörtel status.Table 6 Faktorer som påverkar överlevnad efter operation för magcancer
Co-variatvärde

korrelationskoefficient r
P-värde
CLDN1
uttryck (log2 faldig förändring) katalog -0,53
0,008
Lymfkörtel fraktion
-0,46
0,016
Tumörstorlek storlek~~POS=HEADCOMP
-0,27 0,186
Ålder vid kirurgi
-0,13
0,491
Histologisk typ (intestinal typ) Review -0,03
0,888
Man kön
-0,05
0,792
Linjär regressionsanalys av flera faktorer som påverkar postoperativ överlevnad hos patienter som genomgår kirurgi för magcancer.
att upptäcka skillnader i postoperativa överlevnad mellan individer med hög och låg CLDN1
uttryckande tumörer har olika cut-off nivåer utnyttjas för att skapa hög-uttryckande och låga uttryckande grupper. Använda CLDN1
FC medelvärdet (FC medelvärde = 2,14) som gruppavdelare, hög och låg uttrycker CLDN1
patienter visade signifikant olika överlevnadsmönster (p < 0,001) som illustreras i Kaplan-Meier plot i Figur 4. Figur 4 Kaplan Meier överlevnads tomt på patienter med opererande gastric tumörer. Den heldragna linjen representerar under genomsnittet CLDN1
uttryckande tumörer (FC < 2,14) och den streckade linjen representerar över genomsnittet CLDN1
uttryckande tumörer (FC > 2,14). 6 patienter i låg CLDN1
uttryckande grupp fortfarande var vid liv vid slutet av studieperioden, vilket framgår av den heldragna linjen vertikala tics.
Histopatologiska funktioner i angränsande godartade slemhinna
Av de 20 matchas slemhinnor exemplar, 10 visade tecken på icke-atrofisk gastrit, och 10 visade multifokal atrofisk gastrit. Intestinal metaplasi poängsattes 1-3 i antrum och corpus områden av proverna. Tarmtumörer typ var signifikant associerade med både atrofisk gastrit och intestinal metaplasi (p < 0,001), medan de diffusa tumörer typ var förenad med icke-atrofisk gastrit (p < 0,001). Både histologiska och immunhistokemiska bevis av H. pylori
demonstrerades i slemhinnan motsvarigheten till en intestinal och 1 diffusa typ cancrar (fig 5 och 6), båda i kaukasiska patienter. De övriga 18 prover visade inga tecken på H. pylori
. Det fanns inga signifikanta skillnader mellan olika typer av cancer, typ av gastrit, eller förekomsten av H. pylori
å ena sidan, och korrelation med genuttrycket av CLDN1
eller IL-8
. Figur 5 Histologisk delen av H. pylori inducerade icke-atrofisk kronisk gastrit. Pilen pekar ut ett område med aktiv inflammation med karakteristiska granulocytiska infiltration i kryptan epitel.
Figur 6 Immunohistological bevis för H. pylori. H. pylori upptäcktes två av de 20 mukosa prover. Provstycket från figur 5 har utsatts för immunohistokemi behandling av anti-Helicobacter
-antikropp, färgning H. pylori
brun.
Diskussion
I denna studie identifierade vi CLDN1
som en av de mest konsekvent upp reglerade gener i GC och en stark korrelation mellan uppreglering av CLDN1 Mössor och minskad överlevnad i 20 patienter med gastric adenokarcinom. Denna korrelation är ännu starkare när justerat för andra parametrar såsom lymfkörtel skede, tumörstorlek och histologiska typen. Vår kliniska provstorleken är liten, men resultaten är konsekventa.
Claudins är proteiner involverade i cellulära tight junctions och är viktiga för att upprätthålla normal epitel, i synnerhet spärrbildning, cell polaritet och signaltransduktion. Dysreglering av dessa gener har identifierats i många olika cancerformer. Baserat på tumörbiologi, nedreglering av CLDN1
skulle leda till förstörelse av tight junctions och förlust av cell-till-cell-adhesion orsakar tumörprogression [33], men den kliniska betydelsen i gastric cancer är mer komplex. Det finns bevis för att flera av claudins, CLDN1
ingår, visar ökande nivåer som gastric epitel utvecklas till tarm metaplasi och tidig gastric cancer [34]. CLDN1
kan påverka intracellulär signalering, demonstreras av Liu et al. som visade att förhöjd expression av CLDN1 i bröstcancerceller bidragit till en anti-apoptotisk effekt genom två mekanismer: hämning av kaspas-8-klyvning, och aktivering av Wnt /β-catenin signalväg [35]. CLDN1 har identifierats i kärnan av magcancer AGS celler in vitro
, vilket tyder på en reglerande roll CLDN1 på celltillväxt, migration och invasiv på en kärn nivå [36]. Wu et al. Alla författare läst och godkänt den slutliga manuskriptet.

• Integrativa roller transformerande tillväxtfaktor-α i cytoprotektion mekanismer av gastrisk mukosal injury
• Association of tiazolidindioner med magcancer i typ 2 diabetes mellitus: en populationsbaserad fallkontroll study