Sobre regulación de CLDN1 en el cáncer gástrico se correlaciona con una reducción survival

sobre regulación de CLDN1 en el cáncer gástrico se correlaciona con una menor supervivencia
Resumen Antecedentes

Los cambios genéticos en el adenocarcinoma gástrico marcadores tumorales son extremadamente complejos y fiables aún no han sido identificados. También existen notables diferencias geográficas en la distribución de esta enfermedad. Nuestro objetivo fue identificar los genes más diferencialmente regulados en 20 adenocarcinomas gástricos entre una selección de Noruega, en comparación con la mucosa normal correspondiente, y hemos relacionado nuestros hallazgos con el pronóstico, la supervivencia y el Helicobacter pylori
infección crónica.
Métodos
las biopsias de adenocarcinomas gástricos y mucosa gástrica normal adyacente se obtuvieron de 20 pacientes inmediatamente después de la resección quirúrgica del tumor. Todo el genoma, el análisis de microarrays de ADNc se realizó en el ARN aislado de los pares de muestras para comparar los perfiles de expresión génica entre el tumor contra mucosa emparejado. Las muestras se examinaron al microscopio para clasificar gastritis. La presencia de H. pylori
se examinó mediante microscopía e inmunohistoquímica.
Resultados
130 genes mostraron regulación diferencial por encima de un nivel de corte predefinido. La interleucina-8 (IL-8
) y Claudín-1 (CLDN1
) fueron los más consistentemente genes regulados en los tumores. Muy alta CLDN1
expresión en el tumor fue identificado como un gen predictor independiente y significativo de la supervivencia postoperatoria reducida. Había claramente diferentes perfiles de expresión entre el grupo del tumor y la mucosa del grupo de control, y los subgrupos histológicos de tipo mixto, tipo difuso y el cáncer de tipo intestinal demostraron además sub-agrupación. Hasta reguladas genes fueron asignadas a la adhesión celular, los procesos relacionados con el colágeno y la angiogénesis, mientras que las funciones intestinales normales, tales como la digestión y excreción se asociaron con reguladas por los genes. Nos relacionamos los hallazgos actuales a nuestro estudio anterior sobre la respuesta génica de las células epiteliales gástricas a H. pylori
.
Conclusiones
CLDN1
estaba altamente regulado en marcha en el cáncer gástrico, y CLDN1
expresión se asoció independientemente con un pronóstico postoperatorio pobres, y puede tener valor pronóstico importante. IL-8 y
CLDN1
pueden representar enlaces centrales entre la respuesta génica observada en la infección aguda por H. pylori Red de células epiteliales gástricas y cáncer gástrico en última instancia.
Palabras clave
El cáncer gástrico interleucina 8 claudina-1 Helicobacter pylori
cDNA microarray Supervivencia El pronóstico Antecedentes
cáncer gástrico (CG) es sólo segundo a cáncer de pulmón en las muertes relacionadas con el cáncer en todo el mundo, sin embargo, hay grandes diferencias geográficas en la distribución de GC. Los datos de 2010 demuestran que la incidencia de GC en Noruega es muy baja (hombres 6,9, las hembras 3,0 por 100.000) [1] en comparación con las zonas menos desarrolladas, especialmente en Asia Oriental, donde la incidencia es aproximadamente 6 veces (hombres 42.4, mujeres 18.3 por 100.000) [2].
adenocarcinoma gástrico es notablemente heterogénea genéticamente, citológicamente y arquitectónicamente en comparación con otros carcinomas gastrointestinales. La búsqueda de marcadores tumorales fiables y consistentes indicadores de pronóstico ha demostrado ser difícil. Varios autores han intentado predecir la enfermedad de GC y el pronóstico basado en los genes individuales o múltiples [3-8], pero existen discrepancias entre los estudios, y en la actualidad no hay ninguna firma gen o biomarcadores están en uso clínico de rutina. La comprensión de los mecanismos subyacentes cáncer gástrico es uno de los principales retos en la genómica del cáncer. La clasificación Lauren divide adenocarcinomas en tres diferentes subtipos histológicos: tipos intestinales y difusos y una variante mixta [9], que se cree que tomar diferentes vías de la carcinogénesis. El tipo intestinal es atribuible a una progresión de etapas múltiples de gastritis crónica a través de atrofia gástrica, metaplasia, displasia y la enfermedad en última instancia maligna [10]. tipos difusos pueden surgir de la inflamación crónica sin
una clara manifestación de pasos intermedios premalignas [11-13]. El tipo mixto muestra mezclas no homogéneas de la arquitectura de tipo intestinal y difuso, y podría representar una categoría separada del cáncer con mutaciones genéticas exclusivos y un curso más agresivo [14, 15]. A pesar de una amplia investigación sobre los cambios genéticos de GC, los mecanismos que subyacen a la enfermedad todavía están lejos de entenderse, y la enfermedad no pueden ser fácilmente explicados por un modelo de adenoma-carcinoma, como en el cáncer colorrectal. Hay tres mecanismos moleculares que conducen a la carcinogénesis gástrica: la inestabilidad cromosómica, la inestabilidad de microsatélites y alteraciones epigenéticas [16]. El resultado neto es la activación de oncogenes, la inactivación de genes supresores de tumores y la desregulación de las vías de señalización [11, 12]. regulación y cambios en la expresión de factores de crecimiento y citoquinas ciclo celular aberrante regulan la diferenciación y la supervivencia de las células tumorales. Las mutaciones de la adhesión de células y genes angiogénicos juegan un papel importante en el comportamiento invasivo y metastásico de células GC. Francia El objetivo del presente estudio fue identificar los genes más diferencialmente regulados en el adenocarcinoma gástrico resecado quirúrgicamente comparación con la mucosa normal correspondiente, utilizando todo el genoma de perfiles de microarrays de ADNc. También intentamos identificar los genes que influyen en el pronóstico y la supervivencia GC. Los resultados se comparan a la respuesta génica de células epiteliales gástricas a H. pylori
infección, que fue analizado en un artículo publicado anteriormente [17]. Este estudio añade soporte a la importancia de la IL-8 y
CLDN1
en la carcinogénesis gástrica, así como demuestra cambios genéticos importantes en GC y su posible repercusión en el H. pylori
.
Métodos
tejidos y las características del paciente
las biopsias se obtuvieron de pacientes con diagnóstico de adenocarcinoma gástrico no cardias en la clínica endoscopia ambulatoria en el hospital Universitario Akershus, Noruega. tomografía computarizada toracoabdominal se realizó para excluir a los pacientes con enfermedad metastásica. Se incluyeron 20 pacientes con ambos tipos intestinales y difusos de GC. Los pacientes y las características clínico-patológicos se presentan en la Tabla 1. En la admisión para la cirugía electiva, escrito, el consentimiento informado para la participación en el estudio se obtuvo de los participantes. Dentro de los 5 minutos de la eliminación de los principales pieza quirúrgica, se tomaron muestras tanto de la frontera del tumor y de la mucosa sana CORPAL gástrico dentro de la misma área del estómago, pero más de 5 cm de distancia del tumor, y se almacenan en RNAlater
(Applied Biosystems , ESTADOS UNIDOS). Todas las muestras se almacenaron en + 4 ° C durante aproximadamente 1 a 2 semanas para permitir la penetración completa de tejido RNAlater
, antes de muestras se secaron y se almacenan de forma permanente en -80 ° C. Toda adquisición y manipulación de muestras se llevaron a cabo por los mismos 1 Características de los pacientes individual.Table y características clínico-patológicas de los 20 tumores gástricos utilizados en el estudio Sexo seguro
hembras n = 5, n = 15 machos
Etnia
Europeo n = 18, n = 2 asiática
Edad en la cirugía
total: 68,7 años (± 12,5)
mujeres: 65,7 años (± 21,8)
hombres: 69,7 años (± 8,6)
La supervivencia postoperatoria (sujetos fallecidos)
total: 13,2 meses (± 8,8)
hembras (n = 4): 16.6 meses (± 6,4)
varones (n = 10): 12,0 meses (± 9,7 )
la supervivencia postoperatoria (individuos vivos al final del estudio)
total: 45,8 meses (± 7,9)
hembras (n = 1): 48.0 meses
varones (n = 5): 44,9 meses (± 8.8) El tamaño del tumor

49 mm (± 27)
El estadio tumoral
T1 T2
2
10
T3 página 5
T4
3
etapa nodal
N0
10
N1 página 5
N2 N3 página 3

2 histológico de tipo intestinal

5
difusa página 12
Mixta página 3
características de los pacientes y las características clínico-patológicas de los 20 tumores gástricos utilizados en el estudio. Los valores son la media más /menos la desviación estándar.
Después de la resección del tumor, el espécimen principales se sometió a un examen histolopathological por dos patólogos especialistas de alto nivel para confirmar el diagnóstico y clasificar el tumor de acuerdo con la clasificación de Lauren [9]. mucosa gástrica en antro y CORPAL se examinaron para la gastritis, la atrofia y la metaplasia, y la presencia o ausencia de H. pylori
se examinó microscópicamente y posteriormente identificados por inmunohistoquímica. El Sistema de Actualización de Sydney se utilizó para clasificar y calificar el grado de gastritis [18, 19]. Francia El estudio fue aprobado por el Comité Regional de Noruega para el médico y Ética de la Investigación de la Salud (REC sudeste). Todas las muestras y los datos del paciente se codifican y cegados antes del análisis.
Aislamiento de ARN, control de calidad y la síntesis de ADNc
ARN total fue aislado utilizando el RNeasy sangre y tejidos kit (Qiagen GmbH, Alemania) según el protocolo de preparación estándar del fabricante . La concentración de ARN y la calidad se determinaron utilizando un espectrofotómetro NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Technologies, EE.UU.) y Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, EE.UU.). El número integridad del ARN era adecuado para la síntesis de ADNc. México La Illumina TotalPrep kit de amplificación del ARN (Ambion Inc, EE.UU.) se utilizó para amplificar ARN para la hibridación de Illumina BeadChips. Para sintetizar primera cadena de ADNc por transcripción inversa, se utilizó ARN total de cada muestra recogida anteriormente. Después de la segunda síntesis de ADNc y etapas de purificación de cDNA, la transcripción in vitro para sintetizar
cRNA se preparó durante la noche durante 12 horas.
ADNc análisis de microarrays de oligonucleótidos
Los perfiles de expresión génica se midieron utilizando Illumina humano HT-12 expresión v3 BeadChip (Illumina, EE.UU.), que permite el análisis de expresión de todo el genoma (48800 transcripciones, que corresponde a aproximadamente 37800 genes) de 12 muestras en paralelo en un único microarray. 35967 de las sondas fueron diseñados utilizando el RefSeq (36,2 construir, liberar 22) y la biblioteca de 12.837 sondas se derivaron de la UniGene (Build 199) base de datos [20, 21].
Inmunohistoquímica
La presencia de H. pylori
en los especímenes quirúrgicos se analizó utilizando un anticuerpo policlonal anti-Helicobacter
-anticuerpo (Dako, Dinamarca, B0471 código, la dilución 1: 200). 4 micras secciones de tejido incluido en parafina y fijado en formalina de la mucosa no tumoral se aplicaron en portaobjetos recubiertos. Desparafinización, rehidratación y recuperación del epítopo se realizaron en un Dako PT Link (Dako, Dinamarca) a 97 ° C durante 20 min. El procedimiento de inmunotinción se llevó a cabo en un Dako Autostainer Plus aplicar el Envision ™ Flex, el sistema de pH alto (Dako, Dinamarca).
Bioinformática y estadísticas
R /BioConductor [22, 23] con el paquete BeadArray [24] se utilizaron para el preprocesamiento de los datos de texto de microarrays de BeadStudio. artefactos espaciales fueron eliminadas mediante BASH [25] antes de los datos de expresión eran de registro 2-transformadas y cuantil normalizado. El registro de cambios 2 veces (FC) de cada sonda en la matriz dentro de cada par de tejido (tumor vs mucosa normal emparejado) se calcula entonces, y los datos se carga en el paquete de software J-express [26]. a continuación, se realizó la prueba Rango producto [27] para probar si la expresión diferencial entre el tejido tumoral y la mucosa normal correspondiente fue significativa. La expresión diferencial fue declarado significativo si el valor p ajustado, es decir, el valor de q FDR, fue inferior a 0,05. La agrupación jerárquica se realizó utilizando el promedio de vinculación y la medida de la distancia euclídea. Los análisis se realizaron con el paquete de software J-Express [26]
Para producir una lista de tamaño razonable de los genes más expresados ​​diferencialmente, los genes expresados ​​en menor fueron filtradas a cabo a un nivel de corte de FC >.; 1,5, produciendo una lista de los 130 genes expresados ​​diferencialmente más. Este conjunto de datos se ha importado a en-Express y Pathway expreso [28, 29], que forma parte de la suite de software en-herramientas, para el análisis funcional, y agrupados en ontología de genes (GO) términos y KEGG (Kyoto Enciclopedia de genes y genomas) celular vías de señalización [30]. Vía expreso calcula un factor de impacto (FI) que se utiliza para clasificar las vías de señalización afectadas, basado en el factor de cambio, el número de los genes implicados en la ruta, y la cantidad de perturbación de genes abajo [31].
el conjunto de datos se entró en SPSS (SPSS versión 18.0.2) para llevar a cabo análisis de correlación de dos variables para seleccionar los genes que asocian con parámetros clínico. Se emplearon ambos coeficientes de correlación de Pearson y Spearman para identificar los genes que correlacionan. Entre los genes que se correlacionaron, estábamos particularmente interesados ​​en los que mostraron una expresión similar en nuestro estudio publicado anteriormente de H. pylori
-exposed células epiteliales gástricas [17]. Los genes seleccionados se sometieron a un análisis de regresión multivariante de Cox para investigar si alguno de los genes fueron predictores independientes de la supervivencia postoperatoria en los pacientes con cáncer gástrico, independientemente del tipo histológico, el estadio del tumor y el tamaño, la enfermedad ganglionar, y la edad de la cirugía. En el único predictor gen que fue identificado, se aplicaron diferentes niveles de corte para construir grupos de alto y bajo nivel de expresión, antes de significación estadística entre los grupos se evaluó mediante una prueba (Mantel-Cox) de log-rank. Una parcela de supervivencia de Kaplan-Meier fue creado para demostrar la diferencia en la supervivencia entre los grupos de alto y bajo de expresión. ¿Cuáles son disponibles bajo el número E-MTAB-1440 El microarray de datos en la base de datos ArrayExpress [32].
resultados
La expresión génica
Total de perfiles de expresión del genoma de 20 muestras de tumores gástricos emparejados se ha realizado mediante microarrays de ADNc. Rango producto de prueba estadística [27] del registro 2 veces el cambio (FC) valores de expresión de aproximadamente 38.000 genes en el chip micromatriz reveló 2297 genes que estaban significativamente hasta reguladas y 2259 genes que fueron significativamente las reguladas en el tumor tejido en comparación con mucosa normal correspondiente (p < 0,01). Los 130 genes filtradas que fueron regulados diferencialmente por una FC media > 1.5 se enumeran en la Tabla 2, y constituyen el conjunto de datos en la que se realiza un análisis adicional. De los genes más diferencialmente regulados, 30 genes mostraron sobre regulación y 100 genes se redujeron reguladas. IL-8
era el único gen más regulada de manera ascendente-, hasta reguladas en 18 de los 20 pares de tejidos, con una FC media de 2,6 (Figura 1), seguido de COL1A1 y
CLDN1 gratis (Figura 2 ). El gen más abajo reguladas era PGA4
, siendo notablemente las reguladas en 18 de los 20 pares de tejidos, seguido de GIF Opiniones y ATP4A
. La agrupación jerárquica del conjunto de datos (Figura 3) mostró que los tejidos tumorales y de control forman claramente diferentes grupos de expresión génica. Dentro del grupo de tumor, las diferentes categorías histológicas se difunden, cáncer intestinal y mixto formado grupos individuales casi exclusiva, demostrando semejanza genética estrecha en cada uno de los subconjuntos histológicos. Entre los tejidos de control, y entre el H. pylori
individuos positivos, sin agrupación particular era seen.Table 2 Los genes más diferencialmente regulados en tumor gástrico vs mucosa de control
hasta reguladas genes (n = 30)
genes regulados
-Down (n = 100) guía empresas de gene símbolo
media FC
gen símbolo
media FC

símbolo de genes
media FC
símbolo de genes
media FC
IL-8
2.58
PGA4
-5.58
MAL
-2.22
AKR7A3
-1.79
COL1A1
2.18
GIF
-5.48
SCNN1B
-2.22
KIAA1324
-1.79 2.14
CLDN1

ATP4A
-5.28
SOX21
-2.22
CCDC121
-1.78
SPP1
2.09
PGA3
-4.72
CAPN9
-2.21
FBP2
-1.76
CLDN2
2.09
ATP4B
-4.71
AGXT2L1
-2.20
FCGBP
-1.75
CEACAM6
2.09
PGA5
-4.34
HDC
-2.18
ORM2
-1.75
SERPINB5
2.06
LIPF
-3.91
GSTA1
-2.18
FAM3B
-1.73
KRT17
2.00
CPA2
-3.78
KLK11
-2.12
TRIM50
-1.73
H19
1.94
GHRL
-3.75
APLP1
-2.12
DUOX1
-1.72
CLDN7
1,93
GKN2
-3.26
MT1H
-2.09
RAP1GAP
-1.70
TFF3
1.92
KCNE2
-3.19
ADH1C
-2.09
EEF1A2
-1.70
OLFM4
1.91
SST
-3.12
DPCR1
-2.06
ANGPTL3
-1.70
THBS2
1.91
CHGA
-3.02
AKR1B10
-2.03
B3GAT1
-1.69
PI3
1.90
PSCA
-3.00
MT1G
-2.03
C6ORF105
-1.68
SULF1
1.89
CHIA
-2.88
CKB
-2.01
FGG
-1.68
BGN
1.82
GKN1
-2.88
SH3GL2
-1.99
ADA
-1.65
KRT6B
1.80
KCNJ16
-2.82
REP15
-1.97
C6ORF58
-1.63
THY1
1.72
GC
-2.66
CKM
-1.95
ZNF533
-1.60
MMP11
1.70
CLIC6
-2.65
FGA
-1.95
RPESP
-1.59
KLK6
1.67
SOSTDC1
-2.53
SLC9A4
-1.92
MT1F
-1.58
SERPINA3
1.65
ESRRG
-2.52
MFSD4
-1.92
PNPLA7
-1.57
FNDC1
1.64
CCKBR
-2.51
ALDOB
-1.89
FUT9
-1.57
COL1A2
1.63
TMED6
-2.44
SCNN1G
-1.87
RPRM
-1.56
CST1
1.63
MT1M
-2.44
IRX2
-1.87
GUCA2B
-1.56
FAP
1.60
GPER
-2.43
SLC26A9
-1.87
TCN1
-1.55
COL6A3
1.60
CKMT2
-2.36
CLCNKA
-1.87
PKIB
-1.55
SFRP4
1.56
VSIG2
-2.36
CAPN13
-1.86
SLC9A2
-1.55
TMEM158
1,53
FLJ42875
-2.33 -1.86
TTR

homer2
-1,53
MMP7
1.50
CXCL17
-2.32
GSTA2
-1.85
AKR1C4
-1.50
MMP10
1.50
CA9
-2.32
NKX6-2
-1.83
REG3A
-1.50
AKR1C2
-2,27 -1,83
CA2

PI16
-1.50 -2.24
ALDH3A1

FOLR1
-1.82
MAP7D2 CD - 1.50
SCGB2A1
-2.23 -1.81
RDH12

AQP4
-2,24 -1,80
Irx3

genes regulados diferencialmente con log2FC promedio de > 1,5 (n = 130). extraída de expresión de todo el genoma. se enumeran Los niveles medios de log2FC correspondientes a cada gen. Nueve genes. se muestra en negrita. demostrado regulación similar tanto en el estudio actual y en un estudio previo donde las células epiteliales gástricas fueron expuestos a H. pylori
[17].
Figura 1 La interleucina-8 la expresión de genes en los tumores gástricos vs emparejado mucosa de control. La línea continua representa la proporción relativa de IL-8
expresión en el tejido tumoral en comparación con el control emparejado mucosa gástrica, ya que el cambio log2 veces (tumor log2 /controlar los niveles de expresión). Una puntuación positiva indica una mayor expresión en el tumor en comparación con la mucosa gástrica normal. IL-8
era el gen más consistentemente regulado up-en el estudio. El fondo gris representa la expresión de aproximadamente 37 800 otros genes.
Figura 2 Claudín 1 la expresión génica en tumores gástricos vs mucosa control emparejado. La línea continua representa la relación relativa de CLDN1
expresión en el tejido tumoral en comparación con el control emparejado mucosa gástrica, ya que el cambio log2 veces (tumor log2 /controlar los niveles de expresión). Una puntuación positiva indica una mayor expresión en el tumor en comparación con la mucosa gástrica normal. El fondo gris representa la expresión de aproximadamente 37 800 otros genes.
Figura 3 La agrupación jerárquica de la expresión génica de 20 tumores gástricos y mucosa control. la expresión del genoma completo de pares de tejidos /20 de control del tumor se filtraron para producir un conjunto de datos que contiene los 130 genes más diferencialmente regulados. La mayoría de las muestras tumorales agrupadas por separado para las muestras de control. Las muestras de adenocarcinoma de tipo difuso se resaltan en gris claro, el tipo intestinal en gris medio y el tipo mixto en gris oscuro para ilustrar la subclustering de los tres tipos histológicos de cáncer diferentes.
Los genes del conjunto de datos actual se cotejan contra la la mayoría de los genes regulados diferencialmente identificados en nuestro estudio anterior, donde las células epiteliales gástricas fueron expuestos a H. pylori
durante 24 horas in vitro
[17]. Ambos H. pylori
células epiteliales gástricas -exposed y las biopsias de tumores demostraron importantes sobre regulación de los cinco genes comunes (IL-8, CLDN1, KRT17, CLDN7 Opiniones y MMP7
) y baja regulación de cuatro genes comunes (GPER, KIAA1324, ADA Opiniones y SLC9A2
).
ontología de genes
a continuación, el conjunto de datos de los 130 genes más diferencialmente regulados se analizó para la anotación funcional utilizando los términos de GO (Tabla 3). Entre los 30 hasta los genes regulados, los procesos de adhesión celular, y en particular la adhesión célula-célula independiente del calcio, fueron algunos de los términos más altamente enriquecido. Además, los procesos sintéticos como la morfogénesis de la piel y el desarrollo de los vasos sanguíneos, así como los procesos relacionados con colágeno tanto catabólicos y sintéticas estaban entre los términos significativos identificados. Sólo una pequeña proporción de las reguladas por los genes fueron asignadas a las ontologías específicas en comparación con los genes regulados, donde la digestión y excreción eran los términos más enriquecidos. Varios procesos metabólicos, la regulación del pH y la cobalamina y el transporte de iones también fueron significativamente enriquecido GO términos entre las reguladas por los genes (Tabla 4) .table asociaciones ontología de genes en 3 genes regulados
valor P
No se de genes implicados
% de los genes implicados
ontología de genes
GO: número
0,00066 página 3
10,0
calcio adhesión célula-célula -independiente
GO: 0016338
0,0007
2 6,67
morfogénesis de la piel
GO: 0043589
0,023 página 5
16,67
La adhesión celular
GO: 0007155
0,023
2 6,67
proceso catabólico colágeno
GO: 0030574
0,023
2 6,67
colágeno organización de fibrillas
GO: 0030199 buque
0,027
2 6,67
sangre development
GO:0001568
0.042
1
3.33
Copulation
GO:0007620
0.042
1
3.33
Regulation de la replicación del genoma retroviral
GO: 0045870
0,042
1 | 3,33
Responsen de corticosteroides estímulo
GO: 0031960
0,042
1 | 3,33
la mineralización de los dientes
GO: 0034505
Significativamente enriquecidos términos de ontología de genes en los genes regulados del conjunto de datos Tabla 4 asociaciones de ontología de genes
en los genes regulados hacia abajo
valor P
n de genes implicados
% de los genes implicados
génica ontology

GO:number

0.0
8
7.41
Digestion
GO:0007586
0.00011
5
4.63
Excretion
GO:0007588
0.0005
3
2.78
Creatine proceso metabólico
GO: 0006600
0,0019 página 3
2,78
celular proceso metabólico aldehído
GO: 0006081
0,0043 página 3
2,78
Reglamento de pH
GO: 0006885
0,013
2 1.85
transporte de cobalamina Hotels.com Ir: 0015889
0,015 página 9
8.33
Ion transport
GO:0006811
0.015
2
1.85
Secretion
GO:0046903
0.015
2
1.85
Cobalt el transporte de iones Hotels.com Ir: 0006824
0,02013
2 1.85
morfogénesis de un epitelio
GO: 0002009 términos de ontología de genes
significativamente enriquecidas en las reguladas por los genes del conjunto de datos .
vías de señalización celular KEGG
se analizó a continuación el conjunto de datos de asociaciones de la vía de señalización celular KEGG. 11 de los 30 genes regulados fueron asignadas a 8 KEGG vías significativas (p < 0,05). En particular, las moléculas de adhesión celular (CAM) y la vía y vía de migración de leucocitos transendotelial se les asignó un factor de alto impacto, debido a la fuerte regulación de CLDN1, CLDN7
, y thy1
genes, y el alto impacto relativo de estos genes en la vía CAM. IL-8, COL1A1, COL1A2, THBS2, SPP1, COL6A3 y
SFRP4
fueron asignadas a varias vías altamente impactadas: la migración transendotelial de leucocitos, la interacción del receptor de la matriz extracelular, la unión estrecha, la señalización de las células epiteliales en H. pylori
infección, vía de señalización de TGF, la señalización del receptor tipo toll y la señalización de Wnt (Tabla 5). Ninguno de los 100 genes regulados fueron asignadas a las importantes vías de señalización celular KEGG pathways.Table 5 KEGG
Rango
nombre de Camino
SI
valor P
1
moléculas de adhesión celular (CAMs)
734,0
0.000129
2 La migración de leucocitos transendotelial
672,1
0.000879 página 3
ECM los receptores interacción
10,9
0.00215
4 de unión estrecha
10,6
0.000296 página 5
señalización de las células epiteliales de Helicobacter
7.2
0,006
6
TGF-beta vía de señalización
6.3
0,013 página 7
adhesión focal
6.2
0,014 página 8
vía de señalización de calcio
5.1
0.035
Significativamente enriquecido KEGG vías de señalización celular en el conjunto de datos (p < 0,05). Factor de impacto (FI) se utiliza para clasificar las vías de señalización afectadas, basado en el factor de cambio, el número de los genes implicados en la ruta, y la cantidad de perturbación de genes abajo. Correlación clínico Estar entre el conjunto total de los 130 genes más diferencialmente regulados, los niveles de expresión FC de 20 genes mostraron correlación significativa con la supervivencia postoperatoria, 8 genes correlacionados con el tipo histológico, 5 genes correlacionados con el tamaño del tumor, y 1 gen correlacionan con la etapa de los ganglios linfáticos (archivo adicional 1 ). Algunos genes mostraron correlación con más de un parámetro. Debido al tamaño moderado de la muestra (n = 20), un nivel de significación de p < 0,01 fue elegido.
Cox análisis multivariado de los genes asociados con la supervivencia postoperatoria demostró que un alto nivel de expresión CLDN1
era el único gen predictor independiente de supervivencia postoperatoria. CLDN1
expresión y el tamaño del tumor covariables, fracción positiva de los ganglios linfáticos, el tipo histológico, el género y la edad de la cirugía se introdujeron en un modelo de regresión lineal (Tabla 6), lo que demuestra que sólo CLDN1
y la fracción de ganglios linfáticos positivos fueron significativas predictores de supervivencia postoperatoria. Cuando todos los determinantes no significativas donde eliminado, hubo una correlación negativa entre más fuerte CLDN1
expresión y la supervivencia postoperatoria (R = -0.7, p < 0,001). No hubo ninguna asociación significativa entre CLDN1
expresión y clasificación de Lauren, la infección por H. pylori
, el origen étnico, el tamaño del tumor o metástasis linfática status.Table nodo 6 Factores que influyen en la supervivencia después de la cirugía para el cáncer gástrico &Co-variable
coeficiente de correlación R
valor P
CLDN1
expresión (log 2 veces el cambio)
-0.53
0,008
linfa fracción nodo
-0.46
0,016
El tamaño del tumor
-0.27
0,186
Edad en la cirugía
-0.13
0,491
tipo histológico (tipo intestinal)
-0.03
0,888 género Hombre
-0.05
0,792
análisis de regresión lineal de los múltiples factores que influyen en la supervivencia postoperatoria en pacientes sometidos a cirugía para el cáncer gástrico.
a detectar diferencias en la post-operatorio la supervivencia entre los individuos con alto y bajo CLDN1
expresando tumores, se utilizaron diferentes niveles de corte para crear grupos de alto y bajo que expresan expresar. Utilizando el CLDN1
media FC (FC media = 2,14) como el divisor de grupo, de alta y de baja expresar CLDN1
pacientes demostró significativamente diferentes patrones de supervivencia (p < 0,001) como se ilustra en el gráfico de Kaplan-Meier en Figura 4. Figura 4 Kaplan Meier parcela de supervivencia de los pacientes con tumores gástricos resecados. La línea continua representa la media por debajo de CLDN1
expresando tumores (FC < 2,14) y la línea de puntos representa por encima de la media CLDN1
tumores que expresan (FC > 2,14). 6 pacientes en el grupo de bajo CLDN1
expresando todavía estaban vivos al final del período de estudio, como lo demuestran los tics verticales línea continua.
Características histopatológicas de la mucosa adyacente
no canceroso de la 20 emparejado muestras de mucosa, 10 mostraron evidencia de gastritis no atrófica, y 10 demostraron gastritis atrófica multifocal. metaplasia intestinal se obtuvo a partir de 1-3 en las áreas del antro y el corpus de las muestras. Los tumores de tipo intestinal se asociaron significativamente con ambos gastritis atrófica y metaplasia intestinal (p < 0,001), mientras que los tumores de tipo difusas se asociaron con gastritis no atrófica (p < 0,001). Tanto evidencia histológica e inmunohistoquímica de H. pylori
se demostraron en la contraparte mucosa de 1 intestinal y 1 cánceres de tipo difuso (Figuras 5 y 6), ambos en pacientes caucásicos. Las otras 18 muestras no mostraron evidencia de H. pylori
. No hubo diferencias significativas entre los tipos de cánceres, los tipos de gastritis, o la presencia de H. pylori
por una parte, y la correlación con la expresión del gen de CLDN1
o IL-8
. Figura 5 Sección histológica de H. pylori induce gastritis crónica no atrófica. La flecha señala un área de inflamación activa con infiltración granulocítica característico en el epitelio de las criptas.
Figura 6 pruebas inmunohistoquímico de H. pylori. H. pylori fue descubierto en 2 de las 20 muestras de mucosa. El espécimen de la Figura 5 se ha sometido a tratamiento por inmunohistoquímica anti-Helicobacter
-anticuerpo, manchando H. pylori
marrón.
Discusión En este estudio hemos identificado CLDN1
como una de las más consistentemente genes en GC y una fuerte correlación entre la sobre regulación de CLDN1 Opiniones y reducción de la supervivencia en 20 pacientes con adenocarcinomas gástricos hasta reguladas. Esta correlación es incluso más fuerte cuando se ajusta por otros parámetros tales como fase de los ganglios linfáticos, tamaño del tumor y el tipo histológico. Nuestro tamaño de la muestra clínica es pequeña, pero los resultados son consistentes.
Claudins son proteínas que participan en uniones estrechas celulares y son importantes para el mantenimiento de epitelio normal, en particular formación de la barrera, la polaridad celular y la transducción de señales. La desregulación de estos genes han sido identificados en muchos tipos de cáncer diferentes. Sobre la base de la biología del tumor, la baja regulación de CLDN1
daría lugar a la destrucción de las uniones estrechas y la pérdida de la adhesión célula a célula provocando la progresión del tumor [33], sin embargo, la importancia clínica en la carcinogénesis gástrica es más compleja. Hay pruebas de que varios de los claudins, CLDN1
incluido, el aumento de los niveles de mostrar como epitelio gástrico progresa a intestinal metaplasia y carcinoma gástrico precoz [34]. CLDN1
podría influir en la señalización intracelular, demostrada por Liu et al. que mostró que la expresión elevada de CLDN1 en células de cáncer de mama contribuyó a un efecto anti-apoptótico a través de dos mecanismos: inhibición de la caspasa-8 de escisión, y la activación del /β-catenina vía de señalización Wnt [35]. CLDN1 se ha identificado dentro del núcleo de las células AGS de cáncer gástrico in vitro
, lo que sugiere un papel regulador de CLDN1 sobre la proliferación celular, la migración y la invasión en un nivel nuclear [36]. Wu et al. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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