Interlevkin-8 je najbolj up-urejena gen v celotnem genomu profiliranje H. pylori izpostavljeni epitelijskih celic želodca

Interlevkin-8 je najbolj up-reguliran gena v celotnem genomu profiliranje H. pylori PODJETJA
izpostavljeni želodca epitelnih celic
Abstract
Ozadje
povezavo med Helicobacter pylori
okužbe in zgornje bolezni prebavil je dobro uveljavljena. Vendar pa je le majhen delež H. pylori
prevozniki razvoj bolezni, in obstajajo velike geografske razlike v penetrantnih bolezni. Razlaga te uganke je v interakciji med bakterijo in gostiteljem. H. pylori
zunanje membrane fosfolipaze A (OMPLA) je bilo predlagano, da igra vlogo pri virulence to bakterijo. Cilj te raziskave je bil profil najpomembnejši celični poti in biološki procesi prizadeti v epitelijskih celic želodca v 24 urah H. pylori
izpostavljenosti, in preuči vnetni odziv na OMPLA + in OMPLA -. H. pylori
variante
Rezultati
interlevkin-8 je bilo najbolj pomembno reguliran gen in se zdi, da igrajo zelo pomembno vlogo pri odzivu epitelijskega na H. pylori
okužbe in v patološke procese, ki povzročajo želodčne bolezni. MAPK in NF-kappaB mobilnih poti so močno vključena, vendar ni videti, da pojasni impresivno IL-8
odziv. Tam je zaznamovala up-regulacijo TP53BP2
, katerih ustrezna protein ASPP2 lahko interakcijo s H. pylori
CagA in povzroča izrazito p53 zatiranje apoptoze. Drugi regulatorji apoptoze je tudi pokazala abberant ureditev. Smo ugotovili tudi up-regulacije več onkogeni in dol-ureditev tumorskih zaviralnih genov čimprej je v prvih 24 urah po okužbi. H. pylori
OMPLA sprememba fazi ne zdi, da vplivajo na vnetno epitelne genov mobilni odgovor v tem poskusu.
Zaključek
v celotno analizo genoma epitelijske odgovor na H. pylori
izpostavljenosti, IL 8
dokazano najbolj zaznamovala up-regulacijo in je sodeloval v številnih najpomembnejših procesov celičnega odzivanja na okužbo. Prišlo disregulacijo apoptoze, zaviralnih genov in onkogenov že v prvem 24 h H. pylori
infekcije, ki lahko predstavljajo zgodnje znake želodčnega tumorigeneze. OMPLA +/- ni vplivala na akutni vnetni odziv na H. pylori
.
Ozadje
H. pylori
je uveljavljen kot primarni vzrok peptičnega in pobudnik večstopenjski kaskade, ki vodi do adenokarcinomom želodca. Čeprav rak želodca je četrti najpogostejši rak na svetu, in drugi le za pljučnega raka pri povzročanju smrtnih primerov raka povezanih [1], obstajajo izjemne razlike v distribuciji te bolezni med zahodnih in vzhodnih državah. Zmanjšanje raka želodca vzporednice H. pylori
prevlado v zahodnem svetu, vendar je ta pojav ni popolnoma razložiti velike geografske razlike v želodcu distribucijo raka. Razlog, zakaj le 1-2% od H. pylori
okuženimi posameznikov razvoj želodčne malignom ostaja nepojasnjeno, in vključuje tako razlike v bakterijskih sevov, kar je najpomembneje cagA
statusa, gostiteljske genetike in okoljskih vidikov.
H . pylori
nastanek raka vključuje posredne aktivnosti bakterij s kronično vnetje želodčne sluznice corpus, pa tudi neposredno delovanje H. pylori
na epitelnih celic. Obstojne Vnetje je povezana s povečano proizvodnjo različnih vnetnih citokinov, kot so IL-1β, TNF-a, IL-6, IL-7 in IL-8 [2], ki povečujejo apoptoza, hiperproliferacije in proizvodnjo reaktivnega kisika in dušika vrste, ki povzročajo poškodbe DNK in mutacije. Poleg tega je neposredno delovanje H. pylori
na epitelnih celic lahko spodbuja tudi rakotvornost. cagA
+
H. pylori
sevi injicirati bakterijskih produktov v epitelnih celic s prefinjeno procesa vbrizgavanja tipa IV, ki aktivira znotrajcelične signalne poti, zlasti na z mitogeni aktivira protein kinazo družine (MAPK) pot [3] in kapa B jedrske faktor (NF-κB) in lahko olajša epitelijskih-mezenhimskih prehod [4], od katerih so vsi lahko prispevajo k neoplastične transformacije. Poleg tega je razvoj tumorja povezana s širjenjem in inhibicijo apoptoze [5, 6], medtem ko je pretirana apoptozo mislil, da spodbuja želodčne nastanek razjede. Učinek H. pylori
na želodčnega epitela apoptoze je pokazala nasprotujoče si dokaze. Več vitro študije so pokazale, da je H. pylori
spodbujajo apoptozo [7, 8], medtem ko nekatere vivo študije kažejo inhibicijo apoptoze [9, 10]. CagA injiciranje v epitelijskih celic želodca navzgor ureja anti-apoptotske MCL protein [11] in moti-apoptoze spodbujanje proteina 2 p53 (ASPP2) [12]. inhibicije ASPP2 vzroki okrepljeno razgradnjo p53, na podoben način kot DNA tumorskih viruse, s čimer se zmanjšuje apoptotske aktivnosti, ki bi lahko pojasnil povečano tveganje za GC, povezano z cagA
+
H. pylori
okužbe .
Tannæs et al. so že poročali, da je H. pylori pldA
gen, ki kodira za bakterijsko zunanje membrane fosfolipaze A (OMPLA), prikazuje spreminjanje faze za posledico "ON" (OMPLA +) in "OFF" (OMPLA - ) preklapljanje OMPLA aktivnosti zaradi spontanega zdrs v homopolimer (C) trakta gena [13]. OMPLA + varianta je bila povezana s povečano bakterijsko preživetje v kislem okolju, spoštovanje, hemolize in sprostitev ureaze in VacA primerjavi z OMPLA - variante [14]. OMPLA je bil vpleten tudi v virulence drugih prebavnih patogenov [15], in povezava med OMPLA dejavnostjo in vnetje želodca, je bilo predlagano v prejšnji raziskavi [16].
Čeprav želodčnega epitela celičnega odziva H. pylori
izpostavljenost je bila predmet številnih poskusih od odkritja bakterije v 1984 [17], le nekaj študij so uporabili cDNA mikromrež tehnologija [18-29]. Skoraj vsi ti poskusi so bili izvedeni na azijske H. pylori
sevov, in ne avtorji primerjali odziv epitelijskih celic na OMPLA + proti OMPLA - bakterije. Cilj trenutne raziskave je bil ugotoviti časovno izražanje genov odziva epitelijskih celic želodca izpostavljeni klinično pridobljenih H. pylori
seva, in preučiti prispevek OMPLA na vnetnega odziva. Poudarek je na najbolj pomembnih bioloških odzivov uporabo Gene ontologijo (GO), pogoje in s tem povezane celične signalne poti.
Rezultati
Za študij celično morfologijo po H. pylori
okužbe na 3 in 6 ur, ne -exposed in H. pylori
izpostavljene celice smo obarvali in pregledati z imunofluorescenco mikroskopom (slika 1). Tako na 3 in 6 ur ni bilo bistvene razlike v sposobnosti med OMPLA + in OMPLA - H. pylori
držati AGS celice, in ni bilo nobenih pomembnih razlik v morfoloških sprememb je AGS celice v odziv na izpostavljenost obeh variant. Nismo mogli ugotoviti nobene statistično pomembne razlike v izražanju genov med celicami, ki so izpostavljeni OMPLA + in OMPLA - variante na kateri koli časovni točki nad 24 ur sočasne kulture (p
< 0,05). Zato smo sklenili, da bi se analiza rezultatov izvaja brez nadaljnje obravnave razlik v spremembo faze. Slika 1 Imunofluorescentne slike AGS celic izpostavljenih H. pylori. AGS celice smo niso izpostavljeni, ali izpostavljene OMPLA + in OMPLA- H. pylori
pri MOI 300: 1 in sočasno kultiviramo 3 in 6 h. Bakterije smo obarvali z zajčjih Helicobacter
protitelesa. Slike so bile posnete s fluorescenčno mikroskopijo.
Profil cDNA H. pylori PODJETJA
izpostavljen AGS celic smo primerjali proti ne-okuženih kontrolnih celicah v šestih ločenih časovnih točkah v 24 urah. 7498 čip sonde, ki ustrezajo 6237 človeških genov je pokazala, diferencialni izraz v okuženih celicah v primerjavi s kontrolo celic na nič manj kot 1 časovni točki (p
< 0. 05) (Dodatni datoteka 1: Tabela S1). Število bistveno različno izraženih genov pri vsaki časovni točki v primerjavi z ne-okuženo AGS-celice in kako se prekrivajo v različnih časovnih točkah so prikazani v tabeli 1 in sliki 2.Table 1 Število različno reguliranih genov
Time

0.5

1

3

6

12

24

Up-urejeno
0
2
91
123
1679
2997
navzdol regulirano
0
1
26
65
2034
2492
Skupaj
0
3
117
188
3713
5489
Število bistveno različno reguliranih genov (p
<0,05) na vsaki od časa vzorčenja točk po obdobju sodelovanja inkubaciji s H. pylori
v AGS celicah
Slika 2 Vennov diagram z znatno reguliranih genov. Vennov diagrami različno izraženih genov H. pylori
okuženimi AGS celic v primerjavi s kontrolnimi celicami (p
< 0,05). Na križišči krogi se prekrivajo gene na navedeni časovnih točkah. AGS = niso okuženi nadzor AGS celice.
Ni bilo nobenega močno izražena gene 0,5 h zmerno povečanje števila genov od 1 do 6 ur, in 20-kratno povečanje od 6 do 24 ur. Z eno mesto vzorčenja do drugega, večina genov prekrivajo, vendar veliko število edinstvenih geni so tudi različno urejeno v vsaki časovni točki (slika 2). Približno 47% celotnega števila značilno izraženih genov smo navzgor regulirana, in 53% pokazali navzdol ureditev v primerjavi s kontrolo. Med več kot 6000 značilno izraženih genov, je bil IL-8
enotnega najbolj različno izražene gen (slika 3). Slika 3 Hiarchical kopičenje najbolj bistveno različno reguliranih genov. Hiarchical povezovanje bistveno različno reguliranih genov (log2FC > 1,5, p
< 0,05). Arrow točk na IL-8
.
Seznam vseh pomembnih genov smo analizirali za pridruženih Kjotskega Enciklopediji genov in genomov (kegg) signalnih poti, ki ga Peš-pot Express v vsaki časovni točki. Pomembno vplivala poti z ustreznim faktorjem vpliva (IF) so predstavljeni v tabeli 2. Zgodnje poti odziv signalov, ki so bili znatno prizadeta vključeni v epitelne celice signalizacijo v H. pylori
okužba pathway interakcij receptor citokinov, citokinov, Toll-u podobnega receptorja ( TLR) signalnih poti, kot tudi mnoge povezane z rakom poti in imunoloških poti. V 1 uri, je IL-8
vpleten v večini prizadetih signalnih poteh. Na 3 in 6 ur, večina najvišje uvrščeni poti je več genov v skupni, kot NFKB1, NFKB2, NFKBIA, NFKBIE, BIRC2, BIRC3, JUND, CCND1
in Akt3
. Sistem fosfatidilinozitol signalizacija je dodeljena visoka IF ob 6. uri zaradi pomena enega samega gena, PIK3C2B
, ki je navzdol ureja dnevnik 2FC z -0.58 in igra ključno vlogo pri tej poti. Po 12 urah, so bili najbolj prizadeti mobilnih poti levkocite transendotelijski migracije, celične adhezijske molekule DNA replikacija pot, p53 signalizacijo pot kot tudi nekaj poti, povezanih z rakom. Relativno podobni rezultati so vidni po 24 ur, pa so nekatere poti, povezanih z rakom, nadalje predstavljena navzdol po seznamu (podatki niso prikazani, samo top 10 iz tabele 2) .table 2 Čas tečaja: kegg celičnih poti in genske ontologije
Čas
kegg cellular ime pot
ČE
GO up-reguliranih genov

GO down-regulirane geni
0,5
nobenih pomembnih genov
nobenih pomembnih genov
nima pomembne gene
1
celične signalizacije epitelijskih na okužbo s Helicobacter pylori
16,6
Ni pomembno GO
nobenih pomembnih genov
citokinov-citokinov interakcije receptor
8,1
raka mehurja
7,5
receptor signalne poti Toll podobnih
6.6
zbirke izrezu popravilo
6,0
Primarna imunska
5,9
Poti v raka
5,4
3
signalizacijo celica epitelijskih na okužbo s Helicobacter pylori
17,8
anti-apoptoze
Ni pomembno GO
poteh v raku
16,9
ureditev retrovirusni genoma
drobnoceličnega pljučnega raka
14,2
replikacijo
MAPK signalne poti
14.2
T -helper 1 diferenciacija celic
apoptoza
12,5
negativno regulacijo LPS-posredovane signalne poti
Adipocytokine signalne poti
12,3
negativna regulacija priseljevanja gladkih mišičnih celic
raka prostate
11.4
ureditev MAP kinaze kemotaksi dejavnosti
Toll-like receptor signalne poti
11.1
protein aminokislina fosforilacijo
T receptor celične signalne poti
aktivacija 10.5
nevtrofilcev
B celični receptor signalne poti
9,9
segrevanjem v cirkadianega ure
6
signalnim sistemom za fosfatidil
32,2
anti-apoptoza
Ni pomembno GO
celično signaliziranje epitelnih pri okužbi z bakterijo Helicobacter pylori
15,5
ureditev retrovirusni genoma
drobnoceličnega pljučnega raka
14,2
replikacije
poti za rakom
12.4
T-helper diferenciacije 1 celico
apoptoza
11,6
nevtrofilcev aktiviranje
Adipocytokine signalne poti
10.1
negativna regulacija I-kappaB
receptorske signalne poti podobnega Toll
8.9
kinaze /NF -kB kaskadni
MAPK signalne poti
8.7
indukcija pozitivnih kemotaksi
Karcinom sečnega mehurja
8.5
mieloično dendritičnih celic receptorjev diferenciacijo celic
B signalnih poti
8.3
12
levkocitov transendotelijski migracije
309.7
celic aretacijo cikla
odgovor na nerazvito beljakovin
Cell adhezijske molekule (v živo)
75,4
aminokislina prevoz
S-adenosylmethionine biosintezne proces
replikacijo DNA
25,0
pozitivno regulacijo transkripcije
Celični cikel
20,0
odziv na stres
poteh v raku
19,4
ureditev MAP kinaze dejavnost
p53 signalizacijo pot
17,0
antigena obdelavo in predstavitev
15,7
MAPK signalnih poti
13,2
Small pljučni rak
12.2
cirkadiani ritem
11,9
24
levkocitov transendotelijski migracije
80,3
keratinocitov razlikovanje
holesterola procesu biosintezne
Cell cikla
24,4
amino prevoz kisline
odgovor na razgrnjeni beljakovine
p53 signalizacijo pot
20,9
keratinizacije
izoprenoid biosintezne proces
cirkadiani ritem
18,6
angiogenezo
kreatin procesu biosintezne
replikacijo DNA
18,0
apoptoza
odgovor na oksidativni stres
Adherens križišču
16,1
odziv na stres
poteh v raku
14.9
celični cikel prijetje
popravilo nukleotidov ekscizijski
14.3
pirimidina nukleotidov presnovna
ubikvitina posredovana proteolize
14,2
procesu
fosfatidil signalizacijo
Proste 13,7
indukcija pozitivnih kemotaksi občutno vplivala kegg celične poti in obogateni Gene ontologijo pogoje ( samo biološki procesi) (p
< 0,05) v različnih časovnih točkah po sodelovanju kulture H. pylori
in AGS celic. Top 10 potmi /ontologije vključeni v katerih število presega 10. IF = vpliv dejavnik
Ker GO analiza preprosto poveže diferencialno izraženih genov z ontologije, ni poskus razvrstitev pravi biološki pomen posameznih genov ali ontologije. Zato smo vključili le gene z dnevnikom 2FC > 1.5 v analizi GO, razen manjših močno izraženih genov, ki so bili verjetno povzročil napačno GO razvrstitev. Le pogoji, ki so opredeljeni v okviru biološke procese so vključene (tabela 2), saj so ti v ospredju študije. Ni GO pogoji so obogatili na 0,5 ali 1 h časovnih točkah. Med up-reguliranih genov v 3-6 urah, so bili najbolj pogosto povezane GOS anti-apoptoza in več protivnetna in protimikrobna procesi, kot so ureditev retrovirusni genoma replikacije, T-helper 1 celično diferenciacijo, kemotaksa, aktivacijo nevtrofilcev in aktivacije imunskega odziva. Na 12-24 h, so up-urejena geni obogaten ontologije kot ustavitev celičnega cikla, apoptoze, stresni odziv, amino kisline, prevoz, angiogenezo in keratinizacije, medtem ko so nekateri biosintetičnih procesi med navzdol urejeno pogoji.
Hierarhičnega grupiranje od 245 genov z dnevnikom 2FC > 1.5 oblikovana 5 različnih skupin (A-E), na pragu daljavo 0,54, (slika 3). Vsak grozd je bila preučena za GO in mobilnih signalov procesi združenja (tabela 3). GO analiza zagotovila pomembne pogoje za vse grozde (p
< 0,05). Tabela 3 prikazuje top 10 bistveno vplivali celične signalne poti v posamezni skupini, postavljen v skladu z IF. Grozda je vseboval 9 genov, in dokazali stalnih ravneh na 6-12 ur, preden so se upad. Trije geni so bili vključeni v anti-apoptotičnih procesov in dva gena so bili vključeni v MAPK signalizacijo. Samo 3 geni so bili dodeljeni grozda B, kjer je hiter in močan povečanje izražanja v prvem 3 ure, ki mu sledi upadanje. Od 3 genov v skupini, IL-8
in CXCL2
je zdelo, da narekujejo veliko akutnih vnetnih procesov, kot so kemotakso imunskega odziva in nevtrofilcev activation.Table 3 Cluster profiliranja: kegg celične poti in Gene ontologijo
Časovna profil nad 24 h

Cellular Peš-pot
Impact Factor
GO število

GO ime
MAPK signalne poti
7,3
GO: 0006916
anti-apoptoza
apoptoza
7.1
GO: 0045063
T- pomočnik 1 diferenciacija celic
GO: 0031665
negativna regulacija LPS-posredovane signalne poti
GO: 0014912
negativna regulacija priseljevanja gladkih mišičnih celic
GO: 0043405
ureditev MAP kinaze dejavnost
celične signalizacije epitelijskih v H. pylori
okužbe
12,4
GO: 0006935
kemotakso
interakcije receptor citokinov-citokinov
10.2
GO: 0006954
vnetni odziv
raka mehurja
6,8
GO: 0006955
imunski odziv
receptorske signalne poti podobnega Toll
5.9
GO: 0045091
ureditev retrovirusni genom replikacija
poti v raku
4.8
GO: 0042119
aktivacijo nevtrofilcev
GO: 0050930
indukcija pozitivnih kemotaksi
GO: 0030593
nevtrofilcev kemotakso
GO: 0030155
regulacija celično adhezijo
GO: 0019722
kalcij posredovane signalne
cirkadianega ritma
20,0
GO: 0006915
apoptoza
MAPK signalizacijo pot
10.7
GO: 0006950
odziv poudariti
mTOR signalne poti
7.5
GO: 0007050
celični cikel prijetje
Tesni stik
7.0
GO: 0030216
keratinocitni razlikovanje
Jak-STAT signalne poti
6,7
GO: 0006865
amino prevoz kisline
interakcije citokinov-citokinov receptorjev
6,5
GO: 0031424
keratinizacije
uredba avtofagija
6,4
GO: 0008652
aminokislina biosintezne proces
p53 signalnih poti
5.6
GO: 0006220
pirimidina nukleotidov metabolična Postopek
uredba aktina skeleta
5.2
TGF-beta signalnih poti
5.2
Natural killer celično citotoksičnost
4,7
Melanogenesis
8,3
GO: 0030146
diureza
GnRH signalno pot
7,6
GO: 0030147
natriureze
erbB signalne poti
6.7
GO: 0048661
pozitivno regulacijo gladko proliferacijo mišičnih celic
Poti pri raku
6,4
GO: 0002268
folikularna diferenciacija dendritičnih celic
celično signaliziranje epitelijskih v H. pylori
okužbe
5.7
GO: 0031583
aktiviranje aktivnosti fosfolipaze D, ki ga G-protein skupaj receptorja proteina signalne
GO: 0014826
žil gladkih mišic
GO: 0002467
zarodno center nastanek
GO: 0030578
PML organizacija telo
GO: 0030195
negativna regulacija strjevanja krvi
GO: 0043507
pozitivno ureditev jUN kinaze
antigen obdelavo in predstavitev
13,7
GO : 0006695
holesterol proces biosintezne
MAPK signalne poti
9.7
GO: 0006986
odziv na nerazvito beljakovin
raka mehurja
6.2
GO: 0006916
anti -apoptosis
Poti pri raku
6.1
GO: 0006139
nukleobaze, -side, -tide in proces presnove nukleinske kisline
Ureditev aktina skeleta
6.1
GO: 0008299
izoprenoid biosintezne proces
GO: 0006601 proces biosintezne
kreatin
GO: 0009416
odziv na svetlobo dražljaje
GO: 0043154
negativna regulacija kaspaze dejavnosti
GO: 0007566
implantacije zarodkov
Časovni profili 5 glavnih skupin, ki jih hiarchical grozdenja 245 najbolj različno izražene gene (p
< 0.05) in s tem povezane genske ontologije (samo biološki procesi) in kegg celične signalne poti v vsaki skupini v H. pylori PODJETJA
izpostavljeni AGS celice. Podatkovne točke so pri 0,5, 1, 3, 6, 12 in 24 ur po sodelovanju inkubacije. Napaka palice predstavlja ± standardni odklon izražanja v skupini. Top 10 ontologije našteti, kjer je število presega 10
Cluster C obsegala največji grozd, in je vseboval 150 genov, ki ni pokazal nobenih sprememb, dokler po 6-12 h. odziva geni so GO pogoji apoptosis, zastoj celičnega ciklusa in stres so izrazito obogatena, in mnogi od teh genov, kot so jun, GADD45A, DDIT3, MKNK2, DUSP1, RPS6KA5, FLNC
in RASGRP
so bile vpletene tudi v MAPK signalizacijo. Poleg tega CSF2RA
, IL24
, IL20R
in onkogena PIM1
so bili vključeni v Jak-STAT signalizacije in citokinov-citokinov signalizacijo.
Cluster D je pokazala zmerno povečanje najvišji vrednosti po 12 h, čemur sledi znižanje do 24 ur. 13 geni so bili dodeljeni tej skupini, vključno EDN1
, eden izo na močan vazokonstriktor endotelina, ki praktično obogatenega vseh naštetih izvoru. NFKB2
, eden od dveh NF-κB podenote, HBEGF
in ETS1
so bile vključene tudi v tej skupini.
Cluster E je pokazala 71 gene, ki so kazali navzdol ureditev po 6-12 h in vključeni FGFR3
in več protein toplotnega šoka gene, ki so bili vključeni v MAPK signalne poti in inhibicijo apoptoze. Prav tako je več GO so obogatili biosintetičnih procesi.
Za potrditev rezultatov mikromrež, smo se odločili preveriti, IL-8
, saj je bila to ena najbolj različno urejeno gen v študiji. mRNA in proteina bile vzorčene ob istih časovnih točkah in preučevali z RT-PCR in ELISA (sliki 4 in 5). Prišlo je do povečanja v IL-8
mRNA opazen po 1 uro in dosegel najvišjo stopnjo približno 3 ure. IL-8
odziv mRNA nato padla do 6 in 12 ur. Po 24 urah se je drugo povečanje pa pri pomembnem neskladju med eksperimenti. Na 0,5 in 1 uro co-kulture, so IL-8 vsebnosti beljakovin nizka in ni pokazal nobenih sprememb. Med 3 in 6 ur sočasne kulture, je prišlo do znatnega IL-8 povečanje, ki je pokazala po 6 urah ne poveča. Slika 4 Časovni potek IL-8 ekspresijo mRNA v AGS celicah sočasno kultiviranih s H. pylori. Kvantitativna analiza PCR IL-8 pa
izražanja v H. pylori
okuženimi AGS celic na šestih različnih mestih vzorčenja več kot 24 ur. Podatkovne točke so vrednosti treh celični kulturi ponovitev iz dveh neodvisnih poskusov, A in B. črte predstavljajo izračunano pomeni v vsakem od poskusov.
Slika 5 Zakasnitev potek IL-8 protein izražanja v AGS celicah co-kultiviranih s H. pylori. ELISA analiza IL-8 protein izražanja v H. pylori
okuženimi AGS celic na šestih različnih mestih vzorčenja več kot 24 ur. Podatkovne točke so vrednosti treh celični kulturi ponovitev iz dveh neodvisnih poskusov, A in B. črte predstavljajo izračunano pomeni v vsakem od poskusov.
Nazadnje smo želeli ugotoviti, da je bila izbrana MOI stabilna, kar zadeva AGS gena izraz. Uporabili smo IL-8
odziva kot kazalec genske ekspresije in AGS celice so bile sočasno inkubiran s H. pylori
3 ure pri različnih MOI v dveh ločenih eksperimentih (slika 6). Stanje se je nekoliko IL-8
odziv na MOI 15: 1 in 150: 1, z izjemno povečanje na MOI 300: 1. Bilo je takrat zanemarljiva spremembe v IL-8
izražanja nad 300: 1, ki nakazujejo, da je prvotni inokulum 300: je bil 1 primerna za izzove biološki odziv brez preobremenitve sistema celične kulture. Slika 6 odmerka odziva IL-8 ekspresijo mRNA v AGS celicah sočasno kultiviranih s H. pylori. Kvantitativna analiza PCR IL-8 pa
izražanja v H. pylori
okuženimi AGS celice, co-inkubirali 3 ure. Podatkovne točke so vrednosti treh celični kulturi ponovitev iz dveh neodvisnih poskusov, A in B. črte predstavljajo izračunano pomeni v vsakem od poskusov.
Razprava V tej študiji smo dokazali pomembno in takojšnji odziv AGS celic za izpostavljenost do H. pylori
seva, pridobljenih iz kliničnem okolju. Več kot 6000 človeških genov je pokazala statistično značilno regulacijo diferenčnega v prvih 24 urah sodelovanja inkubacije.
H. pylori
okužbe je bila povezana z obema stimulacijo in inhibicijo apoptoze. Nekateri poskusi na celičnih kulturah dokazati navzgor regulacijo genov, povezanih z apoptozo [7, 8], ker nekateri vivo študijah dokazali proliferacije in apoptoze inhibicijo [9, 10]. Vaca toksin Dokazano je, da povzroči apoptozo v številnih študijah [30-33], medtem ko je vloga CagA nasprotujoči. CagA je bila povezana z obema stimulacijo in inhibicijo apoptoze [11, 12, 34]. Žolčnika in celice, ki so izpostavljeni cagA
+
H. pylori
na zelo nizki inokulum (MOI 1: 1) je pokazala povečano rast celic, medtem ko je na MOI 200: 1, je bila apoptoza spodbudila [35 ]. CagA lahko celo neposredno zavira pro-apoptotske učinek VacA, kot je razvidno iz AGS celic [31]. Apoptoza pojavi po številnih celičnih dogodkov, ki vodijo do aktivacije kaspaze-3, ki se domneva, da sta osnovna efektor apoptoze. V tej študiji so tako zaviralni in stimulativnih geni so pokazali veliko različnega izražanja, kar kaže na zapletenost vpliva H. pylori
na apoptozo: kaspaznih zaviralci HSPA5
in DHCR24
pokazala podobno pozno navzdol ureditev kot toploto šok geni HSPA1B, HSPB1
, ki so povezani tudi s stimulacijo apoptozo (skupin E, tabela 3). Po drugi strani, TNFAIP3, BIRC2, BIRC3
in SERPINB2
, prav tako povezano z inhibicijo apoptoze, je pokazala zgodaj in vztrajno up-ureditev združene v gruče A. Vendar pa pozitivne regulatorji apoptoze PTPRH, TNFRSF12A, IL24, GADD45A, TRIB3, DDIT4, PHLDA4, PP1R15A
in SQSTM1
bili vsi up-urejena v podobnem vzorcu po 6-12 h (skupin C). MCL1
, anti-apoptotični gen izražen v odzivu na CagA injiciranje [11] pokazala povečanje regulacijo navzgor v teku študije. Ni prišlo do bistvenih sprememb v BCL-2
in zelo malo povečanje Bax
izražanja v naši raziskavi, dve pomembni geni, ki določajo občutljivost celic na druge apoptotska dražljaje [36-39]. Omembe vredno je bilo označenih up-regulacijo TP53BP2
, pomemben zaviralnih genov (ZTP) v raka ljudi, predvsem za spodbujanje promocije p53 apoptoze genov. Po drugi strani pa je TP53BP2
kodiranje ASPP2 proteina, ki je tudi pokazalo, da stimulira apoptozo neodvisno p53 [40-42]. Vendar Buti sod. nedavno pokazala, da CagA vbrizgati epitelijskih celic želodca usmerjenih ASPP2 proteina inhibira-p53 posredovano apoptozo [12]. Povečana TP53BP2
izraz videti v naši raziskavi, lahko zato okrepi ta učinek z večjim sodelovanjem CagA-ASPP2 da povzroči povečano zaviranje-p53 posredovane apoptoze. Dejstvo je, trenutna študija je pokazala, da ciljne p53 gene, ki sodelujejo pri apoptozi [43], kot so FAS
, DR4
, TNFRSF10B
(imenovan tudi DR5 /KILLER
), DCR1
, DCR2
, P53AIP1
, CASP6
, APAF1
in BNIP3L
ni pokazala znatno povečanje, in BNIP3L
, CASP6
in APAF1
, dvakrat na dan
in BAX
pokazala le malo povečal. Ciljne p53 geni, ki urejajo non-apoptotične celične procese, vključno Mdm2
, GADD45A
, CDKN1A
(znan tudi kot P21 WAF1 /CIP1
), EGFR
, CCND1
, CCNG2
in TGFA
je pokazala zmerno do označi predpisov. Ta razlika izražanje genov identificirati med ciljnimi p53 genov v tej študiji, lahko navede selektivno inhibicijo-p53 posredovane apoptoze zaradi povečane interakcije CagA-ASPP2, ki je skladen z ugotovitvami Buti je.
Vendar pa ta študija ni bila zasnovana za oceno, ali celotna vsota zaviralnih stimulativnimi signali olajšano apoptozo ali proliferacijo epitelijskih celic. Sedanji rezultati ponazoritev zapletenosti regulacije apoptoze v epitelnih celic v odgovor na H. pylori
izpostavljenosti in analiza grozda kažejo, da obstaja biološka usklajevanje genske ekspresije, ki ureja apoptozo. To lahko pojasni nekatere kompleksne kancerogenega mehanizem H. pylori
in adenokarcinomom želodca. Obstaja močna povezava med H. pylori
infecton, zlasti na cagA
+ genotip [44], in želodca adenokarcinom [45, 46], in so bile tudi druge vrste raka predlagal pristanišče vloga H. pylori
[47, 48]. 0,05.

• Vpliv uvoza diagnozo na praznjenje želodca pri kritično bolnih patients
• Vpliv neoadjuvantno kemoterapijo s PELF-Protokolu, v primerjavi z operacijo samo pri zdravljenju napredovalega želodca carcinoma