La interleucina-8 es el único gen más hasta reguladas en su totalidad del genoma de perfiles de H. pylori expuesta células epiteliales gástricas cells

epitelial de interleucina-8 es el único gen más hasta reguladas en su totalidad del genoma de perfiles de H. pylori
expuesto gástricos
Extracto
Antecedentes
La asociación entre el Helicobacter pylori
infección y la enfermedad gastrointestinal superior está bien establecida. Sin embargo, sólo una pequeña fracción de H. pylori
portadores desarrollan la enfermedad, y hay grandes diferencias geográficas en la penetrancia de la enfermedad. La explicación a este enigma radica en la interacción entre la bacteria y el host. H. pylori
membrana externa fosfolipasa A (OMPLA) se ha sugerido que desempeñar un papel en la virulencia de esta bacteria. El objetivo de este estudio fue para el perfil de las vías celulares y procesos biológicos afectados en las células epiteliales gástricas durante 24 h de H. pylori
exposición más relevante, y para estudiar la respuesta inflamatoria a OMPLA + y OMPLA -. H. pylori
variantes
resultados
interleucina-8 era el gen más significativamente hasta reguladas y parece desempeñar un papel primordial en la respuesta de células epiteliales a H. pylori infección
y en el procesos patológicos que conducen a la enfermedad gástrica. MAPK y NF-kappaB vías celulares se activaron con fuerza, pero no parecen explicar el impresionante IL-8
respuesta. Se observó una notable regulación de TP53BP2
, cuya proteína correspondiente ASPP2 puede interactuar con H. pylori CagA
y causar supresión de p53 marcada de la apoptosis. Otros reguladores de la apoptosis también mostraron regulación aberrante. También se identificaron sobre regulación de varios oncogenes y la baja regulación de los genes supresores de tumores ya durante las primeras 24 h de infección. No parecía pylori
variación de fase H. OMPLA para influir en la respuesta de genes de células epiteliales inflamatoria en este experimento.
Conclusión
En el análisis del genoma completo de la respuesta epitelial a H. pylori
exposición, IL- 8
demostraron el más marcado sobre regulación, y estuvo involucrado en muchos de los procesos más importantes de la respuesta celular a la infección. Había desregulación de la apoptosis, los genes supresores de tumores y oncogenes tan pronto como en la primera 24 h de H. pylori
infección, que puede representar señales tempranas de la tumorigénesis gástrico. OMPLA +/- no afectó a la respuesta inflamatoria aguda de H. pylori
.
Antecedentes
H. pylori
está bien establecida como la causa principal de la úlcera péptica y el iniciador de la cascada de múltiples etapas que lleva a adenocarcinoma gástrico. Aunque el cáncer gástrico es el cuarto cáncer más común en todo el mundo y en segundo lugar solamente al cáncer de pulmón en la causa de las muertes relacionadas con el cáncer [1], existen notables diferencias en la distribución de esta enfermedad entre los países occidentales y orientales. La disminución en el cáncer gástrico es paralela a H. pylori
prevalencia en el mundo occidental, pero este fenómeno no explica por completo las grandes diferencias geográficas en la distribución del cáncer gástrico. La razón por la cual sólo el 1-2% de H. pylori
individuos infectados desarrollan neoplasias gástricas permanece sin explicación, e incluye tanto las diferencias en las cepas bacterianas, lo más importante cagA
estado, la genética del huésped y los aspectos medioambientales.
H . pylori
carcinogénesis implica la acción indirecta de las bacterias a través de la inflamación crónica de la mucosa corpus gástrico, y también la acción directa de H. pylori
en las células epiteliales. La inflamación persistente se asocia con aumento de la producción de varias citocinas pro-inflamatorias, tales como IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-7 e IL-8 [2] que aumentan la apoptosis, la hiperproliferación y la producción de oxígeno reactivo y nitrógeno especies que causan daños en el ADN y las mutaciones. Además, la acción directa de H. pylori
en las células epiteliales también puede promover la carcinogénesis. cagA
+
H. pylori cepas
inyectan productos bacterianos en células epiteliales a través de un proceso de inyección de tipo IV sofisticado, que activa la señalización intracelulares vías, en particular la familia de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK) vía [3] y el factor nuclear kappa B (NF-kB), y puede facilitar epitelial-mesenquimal transición [4], todos los cuales pueden contribuir a la transformación neoplásica. Por otra parte, el desarrollo de tumores se asocia con la proliferación y la inhibición de la apoptosis [5, 6], mientras que la apoptosis excesiva se considera que promueve la formación de la úlcera gástrica. El efecto de H. pylori
sobre la apoptosis del epitelio gástrico ha mostrado pruebas contradictorias. Varios estudios in vitro han mostrado que H. pylori
estimular apoptosis [7, 8], mientras que algunos estudios in vivo demuestran la inhibición de la apoptosis [9, 10]. inyección CagA en células epiteliales gástricas hasta regula la proteína MCL anti-apoptótica [11] e interfiere con la proteína estimulante de la apoptosis 2 de p53 (ASPP2) [12]. causas de inhibición ASPP2 degradación mejorada de p53, de una manera similar a los virus tumorales de ADN, lo que disminuye la actividad apoptótica, lo que puede explicar el aumento del riesgo de GC asociado con cagA
+
H. pylori infección
.
Tannæs et al. han informado anteriormente de que el H. pylori pldA
gen, que codifica la membrana externa bacteriana fosfolipasa A (OMPLA), muestra la variación de fase que resulta en "ON" (OMPLA +) y "OFF" (OMPLA - ) de conmutación de la actividad OMPLA debido a un deslizamiento espontáneo en un tracto homopolímero (C) del gen [13]. El OMPLA + variante se asoció con un aumento de la supervivencia bacteriana en un ambiente ácido, la adhesión, la hemólisis y la liberación de la ureasa y VacA en comparación con el OMPLA - variante [14]. OMPLA también se ha implicado en la virulencia de otros patógenos gastrointestinales [15], y un enlace entre la actividad OMPLA y la inflamación gástrica ha sido sugerido en un estudio anterior [16].
Aunque la respuesta de las células epiteliales gástricas a H. pylori
exposición ha sido objeto de muchos experimentos desde el descubrimiento de la bacteria en 1984 [17], sólo unos pocos estudios han utilizado la tecnología de microarrays de ADNc [18-29]. Casi todos estos experimentos se han realizado en Asia H. pylori
cepas, y no hay autores han comparado la respuesta de las células epiteliales de OMPLA + contra OMPLA - bacterias. El objetivo del presente estudio fue investigar la respuesta temporal de la expresión génica de las células epiteliales gástricas expuestos a una cepa de H. pylori
obtenido clínicamente, y para examinar la contribución de OMPLA en la respuesta inflamatoria. Se ha hecho hincapié en las respuestas biológicas más importantes que utilizan términos de ontología de genes (GO) y vías de señalización celular asociadas.
: Resultados de la Estudiar la morfología celular después de la infección por H. pylori
a las 3 y 6 h, no
El expuesta células -exposed y H. pylori se tiñeron y se examinaron con microscopio de inmunofluorescencia (Figura 1). En ambos 3 y 6 h no hubo diferencia significativa en la capacidad entre la OMPLA + y OMPLA - H. pylori
para adherirse a las células AGS, y no hubo diferencias significativas en los cambios morfológicos en las células AGS en respuesta a la exposición a las dos variantes. No fuimos capaces de identificar diferencias estadísticamente significativas en la expresión de genes entre las células expuestas a OMPLA + y OMPLA - variantes en ningún momento durante las 24 h de co-cultivo (p Hotel < 0,05). Por lo tanto, llegamos a la conclusión de que el análisis de los resultados se pudo realizar sin mayor consideración de las diferencias en la variación de fase. imágenes Figura 1 de inmunofluorescencia de células AGS expuestos a H. pylori. células AGS eran no expuesta, o expuestos a OMPLA + y OMPLA- H. pylori
a una MOI de 300: 1 y co-cultivaron durante 3 y 6 h. Las bacterias fueron teñidas con conejo anti-Helicobacter
anticuerpo. Las imágenes fueron capturadas por microscopía fluorescente.
El perfil de ADNc de H. pylori
expuesta células AGS se compararon contra las células de control no infectadas a los seis puntos de tiempo separados dentro de 24 h. 7498 sondas de chips correspondientes a 6237 genes humanos mostraron expresión diferencial en las células infectadas en comparación con las células control a no menos de 1 punto en el tiempo (p Hotel < 0. 05) (archivo adicional 1: Tabla S1). El número de genes expresados ​​diferencialmente de manera significativa en cada punto de tiempo en comparación con no infectado AGS-células, y la forma en que se superponen en diferentes puntos de tiempo se ilustran en la Tabla 1 y la Figura 1 2.Table número de genes regulados diferencialmente
Time

0.5

1

3

6

12

24

Hasta reguladas
0
2 91 123

1679
2997
abajo reguladas
0
1 | 26
65
2034
2492
total
0
página 3 117 188

3713
5489
número de genes regulados diferencialmente de manera significativa (p <
; 0,05) en cada uno de los puntos de tiempo de muestreo después de un período de co-incubación de H. pylori
en células AGS
la figura 2 los diagramas de Venn de genes regulados de manera significativa. Los diagramas de Venn de genes expresados ​​diferencialmente de pylori
infectados células H. AGS en comparación con las células control (p
< 0,05). Los círculos de intersección indican la superposición de genes en los puntos de tiempo indicados. AGS = control no infectado células AGS.
No se expresó ninguna manera significativa los genes en el 0,5 h, un aumento moderado en el número de genes de 1 a 6 horas, y un aumento de 20 veces de 6 a 24 h. Desde un punto de muestreo al siguiente, la mayoría de los genes se solapan, sin embargo, un número considerable de genes únicos también fueron regulados diferencialmente en cada punto de tiempo (Figura 2). Aproximadamente el 47% del número total de genes expresados ​​de manera significativa fueron reguladas, y el 53% mostró una regulación a la baja en comparación con el control. Entre los más de 6000 genes expresados ​​de manera significativa, la IL-8
era el único gen expresado diferencialmente (Figura 3). Figura 3 Hiarchical agrupación de los genes más significativamente regulados diferencialmente. Hiarchical agrupación de genes regulados diferencialmente significativamente (log2FC > 1,5, p Hotel < 0,05). La flecha apunta a la IL-8
.
La lista de todos los genes importantes se analizó para asociados de Kyoto Enciclopedia de genes y vías de señalización Genomas (KEGG) por el Camino Express en cada punto de tiempo. Significativamente impactado las vías y los correspondientes factor de impacto (FI) se presentan en la Tabla 2. Las vías de señales de respuesta temprana que se vieron afectados significativamente incluido el epitelio de señalización en H. pylori
vía de infección, la interacción del receptor de citoquina-citoquina, Toll-like receptor celular ( TLR) vías, así como muchas de las vías relacionadas con el cáncer y las vías inmunológicas de señalización. A la 1 h, IL-8
participó en la mayor parte de las vías de señales afectadas. A los 3 y 6 h, la mayor parte de las vías de más alto rango tenían varios genes en común, tales como NFKB1, NFKB2, NFKBIA, NFKBIE, BIRC2, BIRC3, JUND, CCND1 Opiniones y Akt3
. El sistema de señalización fosfatidilinositol se le asigna una alta SI a las 6 h, debido a la importancia de un solo gen, PIK3C2B
, que es el regulado por un registro 2FC de -0.58 y desempeña un papel clave en esta vía. A las 12 h, las vías celulares más afectados fueron la migración transendotelial de leucocitos, moléculas de adhesión celular, vía replicación del ADN, vía de señalización de p53, así como varias vías relacionadas con el cáncer. resultados relativamente similares se observan a las 24 h, sin embargo algunas de las vías relacionadas con el cáncer están representados más abajo en la lista (datos no mostrados, único top 10 que se muestra en la Tabla 2) Por supuesto .Tabla 2 Hora: KEGG vías celulares y genes ontología
Tiempo
KEGG vía celular nombre
SI
GO genes regulados

Ir reguladas por los genes
0.5
No hay genes importantes
No hay genes importantes
No hay genes importantes
1 | señalización de las células epiteliales de la infección por Helicobacter pylori
16.6
No PASE significativa
No hay importantes genes de citoquinas
-citoquina interacción del receptor
8.1
El cáncer de vejiga
7.5
vía de señalización de los receptores Toll-like
6.6
Base escisión reparación
6.0
de inmunodeficiencia primaria
5.9
Caminos en el cáncer
5.4 página 3
epitelial de la señalización celular en la infección por Helicobacter pylori
17,8
anti-apoptosis
No PASE significativa
Caminos en el cáncer
16,9
regulación del genoma retroviral
cáncer de pulmón microcítico
14,2
replicación
MAPK vía de señalización
14,2
T -helper 1 diferenciación celular
apoptosis
12,5
regulación negativa de la vía de señalización mediada por LPS
adipocytokine vía de señalización
12,3 regulación
negativo de la migración de células musculares lisas
El cáncer de próstata
11,4
regulación de la quimiotaxis de actividad de MAP quinasa
Toll-like receptor de la vía de señalización
11,1
aminoácidos de proteínas desfosforilación
receptor de células T vía de señalización de la activación
10,5
de neutrófilos
vía de señalización del receptor de células B Opiniones 9.9
arrastre del reloj circadiano página 6
sistema de señalización de la fosfatidilinositol
32,2
anti-apoptosis
No PASE significativa
señalización celular epitelial en la infección por Helicobacter pylori
15,5
regulación del genoma retroviral
cáncer de pulmón microcítico
14,2
replicación
Caminos en el cáncer
12,4
T-helper 1 diferenciación celular
La apoptosis
la activación de neutrófilos 11,6

adipocytokine vía de señalización
10.1 regulación
negativa de la I-kappaB
vía de señalización de los receptores Toll-like
8.9
quinasa /NF -KB cascada de MAPK vía de señalización

8,7
inducción de la quimiotaxis positivos
El cáncer de vejiga
vía de señalización del receptor de 8.5
mieloide células dendríticas diferenciación celular sobre B
8.3
12 leucocitos
la migración transendotelial
309.7 detención del ciclo celular

respuesta a la proteína desplegada
moléculas de adhesión celular (CAMs)
75,4
el transporte de aminoácidos
S-adenosilmetionina proceso biosintético
la replicación del ADN
25,0 regulación positiva de la transcripción

del ciclo celular
20,0
respuesta al estrés
Caminos en el cáncer
19,4
regulación de la quinasa MAP
actividad de señalización de p53 vía
17,0
procesamiento y presentación de antígenos
vía de señalización MAPK
15,7 13,2

cáncer de pulmón microcítico
12.2
ritmo circadiano
11,9
24
La migración de leucocitos transendotelial
80,3
queratinocitos diferenciación
colesterol proceso biosintético
del ciclo celular
24,4
el transporte de aminoácidos
respuesta a la proteína desplegada
vía de señalización de p53
20,9
queratinización
proceso de biosíntesis de isoprenoides
ritmo circadiano
18,6
angiogénesis
creatina proceso biosintético
la replicación del ADN
18,0
apoptosis
respuesta al estrés oxidativo
de unión adherente
16,1
respuesta al estrés
Caminos en el cáncer
la detención del ciclo celular
14,9
la reparación por escisión de nucleótidos
14.3
metabólica de nucleótidos de pirimidina
ubiquitina proteólisis mediada
14,2
proceso
sistema de señalización de la fosfatidilinositol
13,7
inducción de la quimiotaxis positivos
tuvieron un impacto significativo KEGG vías celulares y enriquecido términos de ontología de genes ( sólo los procesos biológicos) (p <
0,05) en diferentes puntos de tiempo después de co-cultivo de H. pylori
y las células AGS. Top 10 Rutas /ontologías incluyen en el número es superior a 10. SI = factor de impacto
Dado que el análisis IR simplemente asocia genes expresados ​​diferencialmente con las ontologías, no hay ningún intento de clasificación de la verdadera importancia biológica de los genes o las ontologías individuales. Por lo tanto, se incluyeron sólo los genes con un registro 2FC > 1,5 en el análisis de GO, con exclusión de los genes expresados ​​significativamente menores que probablemente resultará en la clasificación GO errónea. Solamente los términos categorizados en Procesos biológicos se incluyen (Tabla 2), ya que estos eran los objetivos del estudio. No hay GO términos fueron enriquecidos en 0,5 o 1 puntos de tiempo h. Entre los genes regulados en 3-6 h, el SMO asocia más frecuentemente eran anti-apoptosis, y varios procesos inflamatorios y anti-microbianas, como la regulación de la replicación del genoma retroviral, T-helper 1 diferenciación celular, quimiotaxis de neutrófilos y la activación la activación inmune. En 12-24 h, los genes regulados enriquecida ontologías como la detención del ciclo celular, la apoptosis, la respuesta al estrés, el transporte de aminoácidos, la angiogénesis y la queratinización, mientras que ciertos procesos de biosíntesis son algunos de los términos reguladas por
. La agrupación jerárquica de la 245 genes con un registro 2FC > 1.5 formaron 5 grupos distintos (A-E), a una distancia umbral de 0,54, (Figura 3). Cada agrupación se examinó para GO y asociaciones de la vía de señalización celular (Tabla 3). GO análisis proporcionó términos significativos para todos los grupos (p Restaurant < 0,05). La Tabla 3 muestra las 10 vías de señalización celular impactadas significativamente superiores dentro de cada grupo, clasificados de acuerdo con la SI. El grupo A contiene 9 genes, y demostraron niveles estables en 6-12 h antes de mostrar una caída. Tres genes estaban involucrados en los procesos anti-apoptóticos y dos genes estaban involucrados en la señalización de MAPK. Sólo 3 genes fueron asignados al grupo B, donde hubo un aumento rápido y potente en la expresión durante las primeras 3 horas, seguido de un descenso. De los 3 genes de la agrupación, IL-8 y
CXCL2
parecían dictar muchos de los procesos inflamatorios agudos como la quimiotaxis, la respuesta inmune y neutrófilos activation.Table 3 perfiles Cluster: KEGG vías celulares y ontología de genes
perfil temporal de más de 24 h
Camino
Factor de Impacto celular
IR número

IR nombre
MAPK vía de señalización
7.3
GO: 0006916
anti-apoptosis La apoptosis

7.1
GO: 0045063
T- helper 1 diferenciación celular Hotels.com Ir: 0031665
regulación negativa de la vía de señalización mediada por LPS
GO: 0014912
regulación negativa de la migración de células del músculo liso
GO: 0043405
regulación de la quinasa MAP
actividad de señalización celular epitelial en H. pylori
12,4
GO: 0006935
quimiotaxis
citoquinas-receptor de citoquina de interacción
10.2
GO: 0006954
respuesta inflamatoria
El cáncer de vejiga
6,8
GO: 0006955
respuesta inmune
vía de señalización de los receptores Toll-like
5,9
GO: 0045091
regulación del retroviral la replicación del genoma
Caminos en el cáncer
4,8
GO: 0042119
la activación de neutrófilos
GO: 0050930
inducción de la quimiotaxis positivos
GO: 0030593
la quimiotaxis de neutrófilos
GO: 0030155
regulación de la adhesión celular
GO: 0019722
de calcio mediada por la señalización
ritmo circadiano
20,0
GO: 0006915
la apoptosis de señalización MAPK
vía
10,7
GO: 0006950
respuesta al estrés
mTOR vía de señalización
7.5
GO: 0007050
la detención del ciclo celular
unión estrecha
7,0
GO: 0030216
queratinocitos diferenciación
vía de señalización Jak-STAT
6,7
GO: 0006865
el transporte de aminoácidos
la interacción del receptor de citoquina-citoquina
6.5
IR: 0031424
queratinización
Reglamento de la autofagia
6.4
GO: 0008652
amino proceso de biosíntesis de ácidos
vía de señalización de p53
5.6
GO: 0006220
pirimidina metabolismo de nucleótidos
proceso de Reglamento del citoesqueleto de actina
vía de señalización 5.2
TGF-beta
células asesinas naturales 5.2
citotoxicidad mediada
4,7
melanogénesis
8.3
GO: 0030146
vía de señalización de la diuresis
GnRH
7,6
GO: 0030147
natriuresis
ErbB vía de señalización
6,7
GO: 0048661
regulación positiva de lisa proliferación de células musculares
Caminos en el cáncer
6.4
GO: 0002268
folicular diferenciación de células dendríticas
señalización de las células epiteliales de la infección por H. pylori
5,7
GO: 0031583
activación de la actividad de la fosfolipasa D por acoplados a proteína G de señalización
IR proteína del receptor: 0014826
vena contracción del músculo liso
GO: 0002467
formación de centro germinal
GO: 0030578
organización LMP cuerpo
GO: 0030195
regulación negativa de la coagulación de la sangre
GO: 0043507
regulación positiva de la actividad de la quinasa junio
procesamiento y presentación de antígenos
13,7
GO : 0006695
colesterol proceso biosintético
MAPK vía de señalización
9.7
GO: 0006986
respuesta a la proteína desplegada
El cáncer de vejiga
6.2
GO: 0006916
contra -apoptosis
Caminos en el cáncer
6.1
GO: 0006139
base nitrogenada, -side, -tide y el proceso metabólico de ácidos nucleicos
Reglamento del citoesqueleto de actina
6.1
GO: 0008299
proceso de biosíntesis de isoprenoides
GO: 0006601 proceso de biosíntesis de la creatina

GO: 0009416
respuesta a la luz de estímulo
GO: 0043154
regulación negativa de la actividad de caspasa
IR: 0007566
de implantación de embriones
perfiles temporales de 5 grupos principales identificados por la agrupación hiarchical de los 245 genes más expresados ​​diferencialmente (p Restaurant < 0,05) y asociados (ontologías de genes únicos procesos biológicos) y KEGG vías de señalización celular en cada grupo en H. pylori
expusieron células AGS. Los puntos de datos son en 0,5, 1, 3, 6, 12 y 24 h de co-incubación. Las barras de error representan ± desviación estándar de expresión dentro de la agrupación. Top 10 de las ontologías que figuran en el número es superior a 10
Grupo C componen la agrupación más grande, y contenían 150 genes que no mostraron ningún cambio hasta después de 6-12 h. Los genes de respuesta GO términos de la apoptosis, la detención del ciclo celular y el estrés se enriquecieron notablemente, y muchos de estos genes, tales como Jun, GADD45A, DDIT3, mknk2, dusp1, RPS6KA5, FLNC
, y RasGRP
también estaban involucrados en MAPK señalización. Por otra parte, CSF2RA
, IL24
, IL20R
y el oncogén PIM1
estuvieron involucrados en Jak-STAT de señalización y señalización de citoquinas-citoquina.
Categoría D mostró un aumento moderado alcanzando un máximo a las 12 h, seguido por una disminución hacia 24 h. 13 genes fueron asignados a este grupo, incluyendo EDN1
, una de las isoformas de la endotelina vasoconstrictora potente, que enriqueció la práctica totalidad de los enumerados Gos. NFKB2
, una de las dos subunidades de NF-kB, HBEGF
y Ets1
también se incluyeron en este grupo.
Cluster E demostró 71 genes que mostraron baja regulación después de 6-12 h e incluyó FGFR3 Opiniones y varios genes de las proteínas de choque térmico que estuvieron involucrados en la vía de señalización MAPK y la inhibición de la apoptosis. Además, varios procesos biosintéticos IR fueron enriquecidos.
Para confirmar los resultados de microarrays, que elegimos para verificar la IL-8
, ya que éste era el gen más diferencialmente regulada solo en el estudio. ARNm y proteínas se tomaron muestras en los mismos puntos de tiempo y estudiados por RT-PCR y ELISA (Figuras 4 y 5). Se ha producido un aumento de la IL-8 mRNA
notable después de 1 h, y alcanzando un máximo de alrededor de 3 h. La IL-8
respuesta ARNm luego se dejó caer hacia 6 y 12 h. En 24 h había un segundo incremento, sin embargo con una varianza notable entre los dos experimentos. En 0,5 y 1 h de co-cultivo, la IL-8 niveles de proteína fueron bajos y no mostraron ningún cambio. Entre 3 y 6 h de co-cultivo, se produjo un importante aumento de IL-8 que no mostró un aumento adicional después de 6 h. Figura 4 curso de tiempo de IL-8 la expresión del ARNm en las células AGS co-cultivadas con H. pylori. el análisis de PCR cuantitativa de IL-8
expresión en H. pylori
células AGS infectados a los seis puntos de muestreo diferentes durante 24 h. Los puntos de datos son los valores de las tres repeticiones de cultivo celular a partir de dos experimentos independientes, las líneas A y B. representan la media calculada en cada uno de los experimentos.
Figura 5 El curso temporal de la IL-8 expresión de proteínas en células AGS co-cultivadas con H. pylori. análisis ELISA de IL-8 en la expresión de proteínas pylori
infectados células H. AGS a los seis puntos de muestreo diferentes durante 24 h. Los puntos de datos son los valores de las tres repeticiones de cultivo celular a partir de dos experimentos independientes, las líneas A y B. representan la media calculada en cada uno de los experimentos.
Por último, hemos querido comprobar que la MOI elegida fue estable con respecto al gen AGS expresión. Se utilizó IL-8
respuesta como un indicador de la expresión génica, y las células AGS se co-incubaron con H. pylori
durante 3 horas a varias MOI en dos experimentos separados (Figura 6). Hubo un modesto IL-8
respuesta a una MOI 15: 1 y 150: 1, con un notable incremento en MOI de 300: 1. Había entonces cambios insignificantes en IL-8
expresión anterior 300: 1, lo que sugiere que el inóculo original de 300: 1 era adecuada para provocar una respuesta biológica sin sobrecargar el sistema de cultivo celular. Figura 6 dosis-respuesta de la IL-8 la expresión del ARNm en las células AGS co-cultivadas con H. pylori. El análisis cuantitativo por PCR de IL-8
expresión en H. pylori
células AGS infectados, co-incubaron durante 3 h. Los puntos de datos son los valores de las tres repeticiones de cultivo celular a partir de dos experimentos independientes, las líneas A y B. representan la media calculada en cada uno de los experimentos.
Discusión
En este estudio hemos demostrado una significativa respuesta, inmediata a partir de células AGS a la exposición a un H. pylori
cepa obtenida a partir de un entorno clínico. Más de 6000 genes humanos mostraron regulación diferencial estadísticamente significativo durante las primeras 24 h de co-incubación.
H. pylori
infección se ha asociado tanto con la estimulación y la inhibición de la apoptosis. Algunos experimentos de cultivo celular demuestran la regulación de los genes asociados con la apoptosis [7, 8], mientras que algunos estudios in vivo demuestran la inhibición de la proliferación y la apoptosis [9, 10]. toxina VacA se ha demostrado que causa apoptosis en varios estudios [30-33], mientras que el papel de CagA es contradictoria. CagA se ha asociado tanto con la estimulación y la inhibición de apoptosis [11, 12, 34]. células biliares expuestos a cagA
+
H. pylori
en un inóculo muy baja (MOI 1: 1) demostró un aumento del crecimiento celular, mientras que a una MOI de 200: 1, apoptosis fue estimulado [35 ]. CagA incluso puede antagonizar directamente el efecto pro-apoptótica de VacA, como se ve en las células AGS [31]. La apoptosis se produce después de una serie de eventos celulares, dando lugar a la activación de la caspasa-3, que se cree que constituye el efector básico de la apoptosis. En el presente estudio, ambos genes inhibidores y estimulantes mostraron expresión diferencial significativa, lo que demuestra la complejidad de la influencia de H. pylori
sobre la apoptosis: los inhibidores de caspasas HSPA5 Opiniones y DHCR24
mostró similares fines baja regulación en forma de calor genes de choque HSPA1B, HSPB1
, que también están asociados con la estimulación de la apoptosis (categoría E, Tabla 3). Por otro lado, TNFAIP3, BIRC2, BIRC3
y SERPINB2
, también se asocia con la inhibición de la apoptosis, demostró temprano y persistente regulación agrupan en el grupo A. Sin embargo, los reguladores positivos de la apoptosis PTPRH, TNFRSF12A, IL24, GADD45A, trib3, DDIT4, PHLDA4, PP1R15A Opiniones y SQSTM1
eran todos hasta reguladas en patrón similar después de 6-12 h (grupo C). MCL1
, un gen de anti-apoptótica se expresa en respuesta a la inyección CagA [11], demostraron el aumento de la regulación en el transcurso del estudio. No hubo cambios significativos en BCL-2
y muy poco aumento de BAX
expresión en nuestro estudio, dos genes importantes que determinan la sensibilidad de las células a otros estímulos de apoptosis [36-39]. Digno de mención, hubo marcado sobre regulación de TP53BP2
, un importante gen supresor de tumores (TSG) en el cáncer humano, estimulando principalmente la promoción de los genes p53 apoptosis. Por otro lado, TP53BP2
es la codificación de proteínas ASPP2, que también se ha demostrado que estimula la apoptosis independiente de p53 [40-42]. Sin embargo, Buti et al. ha demostrado recientemente que CagA se inyecta en las células epiteliales gástricas específicas proteína ASPP2 para inhibir p53 mediada por apoptosis [12]. El aumento de la expresión TP53BP2
visto en nuestro estudio, por lo tanto, podría potenciar este efecto mediante el aumento de la interacción CagA-ASPP2 para causar aumento de la inhibición de la apoptosis mediada por p53. De hecho, el estudio actual demostró que los genes diana de p53 implicados en la apoptosis [43], tales como FAS
, DR4
, TNFRSF10B
(también referido como DR5 /KILLER
), DCR1
, DCR2
, P53AIP1
, CASP6
, APAF1 Opiniones y BNIP3L
no mostró ningún aumento significativo, y BNIP3L
, CASP6 Opiniones y APAF1
, BID
y BAX
mostró sólo un pequeño aumento. genes diana de p53 que regulan procesos celulares no apoptóticos incluyendo MDM2
, GADD45A
, CDKN1A
(también conocido como P21 WAF1 /CIP1
), EGFR
, CCND1
, CCNG2
y TGFA
demostró moderada a marcada regulación. Esta expresión diferencial de genes identificados entre los genes p53 objetivo en este estudio, puede indicar la inhibición selectiva de la apoptosis mediada por p53 debido a una mayor interacción CagA-ASPP2, consistente con los hallazgos de Buti.
Sin embargo, este estudio no fue diseñado para evaluar si la suma global de señales inhibidoras y estimulantes facilitó la apoptosis o la proliferación de células epiteliales. Los resultados actuales ilustran la complejidad de la regulación de la apoptosis en las células epiteliales en respuesta a H. pylori
la exposición, y el análisis de agrupamiento sugiere que existe algún tipo de coordinación biológica de la expresión génica regulación de la apoptosis. Esto puede explicar algunos de los mecanismos cancerígenos compleja de H. pylori
en el adenocarcinoma gástrico. Existe una fuerte asociación entre H. pylori infecton
, en particular la cagA
+ genotipo [44], y el adenocarcinoma gástrico [45, 46], y también se han sugerido otros tipos de cáncer para albergar un papel para H. pylori
[47, 48]. [29]. 0.05.

• El impacto del diagnóstico de ingreso en el vaciado gástrico en pacientes críticamente enfermos
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