Spremembe v E-kadherina in beta-catenin v želodcu cancer

spremembami na E-kadherina in beta-catenin raka želodca
Abstract
Ozadje
E-kadherina-catenin kompleks igra ključno vlogo pri epitela mobilnega celično adhezijo in pri vzdrževanju tkiva arhitekturo. Motnje v izražanju ali funkcijo tega kompleksa vodi v izgubo medcelično adhezijo, z možnostjo preoblikovanja posledično celic in napredovanja tumorja.
Metode
smo raziskovali spremembe za E-kadherina in beta-catenin v nizu 50 primarne želodčnih tumorjev z uporabo izgubo heterozigotnosti analizo (LOH), pregleda genske mutacije, odkrivanje okvarjenih transkriptov in imunohistokemijo (IHK).
Rezultati
A visoko frekvenco (75%) LOH je bila odkrita na 16q22.1 vsebuje E -cadherin locus. Trije primeri (6%) je pokazala enako missense mutacijo, A592T. Ta mutacija ni verjetno, da močno prispeva k karcinogenosti raka želodca, saj je bilo ugotovljeno tudi nizke frekvence (1,6%) te mutacije pri 187 zdravih posameznikih. Prav tako smo zaznali nizke frekvence (0,36%, 0%) te mutacije v 280 tumorjev dojke in 444 drugih tumorjev, vključno z debelega črevesa in danke, pljuč, endometrija, jajčnikov, testisov, ledvic, ščitnice karcinomi in sarkomi oz. Smo analizirali tudi nenormalnih mRNK-E kadherina v želodčnih tumorjev in ugotovili, da je imel 7 tumorji (18%) nenormalnih mRNK poleg običajnega mRNA. Te neobičajne mRNA lahko povzroči nenormalne molekule-E kadherina, zaradi šibkega celic celične adhezije in invazivni obnašanja celic karcinoma. Zmanjšana ekspresija E-kadherina in beta-catenin bila ugotovljena pri frekvenci 42% in 28%. Posebej, 11 tumorji (22%) razstavljene pozitivno citoplazemske obarvanje za β-catenin IHC. Združenje je bilo med zmanjšano izražanje E-kadherina in beta-catenin. Poleg tega je bila odkrita povezava med zmanjšanim izražanjem E-kadherina in razpršeno histotype.
Zaključek
Naši rezultati potrjujejo hipotezo, da spremembe v E-kadherina in beta-catenin igrajo vlogo pri začetku in napredovanje raka želodca .
Ozadje
E-kadherina (120 kDa; kromosomom 16q) je klasična kadherina in predstavlja ključno funkcionalno komponento spoštovanje križiščih med epitelnih celic [1]. Je vezan preko niza Poddlaka proteinov so catenins (α, beta in gama) k aktina citoskeleta [1]. Ta povezava med transmembranous cadherins in aktinskih filamentov iz citoskeleta je potrebno, da se tvori močno adhezijo celic celic. Nepoškodovano E-kadherina - catenin kompleks za vzdrževanje normalne medceličnem oprijema potrebno. Glede na to, je več skupin predlagal, da se v karcinomov, E-kadherina funkcije kot molekule za vdor supresor tako da njegove dovoljenja izgube ali povečuje vdor sosednjih normalnih tkivih. Imunohistokemične študije na človeških raka, vključno z rakom želodca, so pogosto pokazale, da
delež invazivnih karcinomov in karcinomov in situ kažejo nenormalnih vrednosti E-kadherina in /ali catenin izražanja v primerjavi z njimi povezanih normalnega tkiva [4/2] . Na splošno velja, E-kadherina in catenin obarvanje je močna v dobro diferenciranega raka, ki ohranjajo svoj mobilni zlepljenosti in manj invazivne, vendar pa se zmanjša v slabo diferenciranih tumorjih, ki so izgubile celica-celica, oprijem in kažejo močno invazivno obnašanje [2, 3].
E-kadherina je vključen v zaviranja rasti celic stikov z indukcijo aretacijo celičnega ciklusa [5]. Ima sposobnost, da inhibira celično proliferacijo z uravnavanjem p27 sodeluje pri regulaciji celične cikla [5], čeprav je mehanizem, s katerim E-kadherina uravnava P27 je še vedno nejasen. Zato, E-kadherina, na splošno opišemo kot invazijo supresorski [6], lahko delujejo kot pomemben supresorski rast /proliferacije.
Pomembna funkcija beta catenin v celici signalizacijo, je bil pojasnjen [7]. V odsotnosti mitotičnega signala od zunaj celice, ki se β-catenin vežejo na kompleks s adenomatozna polipoza coli (APC) genskega produkta, serin treonin glikogen sintetazo kinaze (GSK-3p) in napajalnik proteina axin izvedeni (ali homolog conductin), ki omogoča fosforilacije in degradacijo prostega beta catenin s sistemom ubikvitin-proteazomske [8]. Ko je mitotični signala dostavi NT poti, z združitvijo družine Wg /NT za izločajo glikoproteinov in njihove membranskega receptorja frizzled, vodi do aktivacije razmršenimi (DSH) proteina, ki zaposli na celično membrano. Aktivirani DSH zmanjša število kompleks beljakovin, tako da ne more več fosforilacije beta-catenin, ki se nato ne razgrajuje. Sprostitev beta catenin od fosforilacije in razgradnje kompleks spodbuja stabilizacijo β-catenin in signalizacijo. To ima za posledico povečanje prostega cystolic beta catenin ki premikanjem v jedro in se neposredno veže transkripcijski faktorji LEF in TCF, ki vodi do aktivacije genske ekspresije. Zato β-catenin opravlja različne funkcije v oprijema E-kadherina posredovana celica-celica in NT signalizacije [8].
Izguba E-kadherina lokus je na dolgem kraku kromosoma 16 (16q22) se pojavi v želodcu (24 %), hepatocelularni (50%), lobularni dojk (50-100%) in požiralnika (66%) karcinomi [4, 9-12]. Bilo je nekaj poročil o E-kadherina genskih mutacij v človeških raka [13]. V slabo diferenciranih tumorjih, kot so lobularnega raka dojke in raka želodca difuzno tipa,-E kadherina mutacije igrajo pomembno vlogo pri razvoju tumorjev [14, 15]. Številne študije so poročali zarodne mutacije gena E-kadherina v družinah z dedno difuznega tipa raka želodca [16, 17]. Samo manjši del želodca raka lahko odpade na E-kadherina mutacij. Pogoste somatske mutacije β-catenin gena so našli v majhnih debelega adenomov in raka želodca črevesne tipa [18, 19]. Večina mutacij vključenih izgubo serines ali treonini iz GSK-3p fosfatnem regiji. Opazili so genetske spremembe v beta catenin odpravljajo celica-celica zlepljenosti v dveh želodčnih raka celičnih linij, HSC39 in 40A; both izhajajo iz istega pečatni prstan karcinomom želodca in kažejo razpršeno vzorec rasti [20, 21]. Ta mutacija rezultati v okrnjeni beta catenin ki nima regijo za interakcijo z beta-catenin. Transfekciji teh celičnih linij z divjim tipom ß-catenin obnavlja celične zlepljenosti [21].
Tu smo izvedli E-kadherina in beta-catenin genske mutacije in analizo izražanja v serijo 50 primarnih želodčnih tumorjev, da bi razumeli boljše vpletenosti spremembami na E-kadherina in beta-catenin v karcinogenosti raka želodca.
materiali in metode
vzorci
, vključenih v raziskavo je bilo 50 tumorji in pripadajoče običajnih vzorcev, od katerih sta dva tumorji (17 in 23) so iz iste družine, ostalo pa občasno (tabela 1). Ti primeri so diagnosticirali z oddelka za patologijo, University Hospital Islandijo. Tkivo je bilo pridobljeno sveže na dan operacije ali iz-parafina vgrajenih materialov. Informacije v zvezi s stopnjo tumorja, histotype in razred smo pridobili tudi iz istega oddelka. DNA PCR smo izolirali s proteinazo zdravljenju K [22]. RNA za RT-PCR je bila vzeta s pomočjo Tri Reagent (Molekularna Research Center, INC. ZDA). Za A592T mutacije, smo pregledala 187 običajne posameznike, 280 prsi in 444 drugih bolnikih z rakom debelega črevesa in danke, pljuč, endometrija, jajčnikov, testisov, ledvic, ščitnice karcinomov in sarkomom. Vse posamezne identifikacijske oznake so bili odstranjeni iz kontrolnih vzorcev pred analizo, in preiskovalci so tako zaslepljeni z identifikacijo vzorcev, ki jih ni več mogoče izslediti določenim posameznikom. Soglasje je bilo domnevno za vzorce bolnikov. Za primere, 294 in 728 s A592T mutacije, smo analizirali njihove rodovnike in ugotovila, da ni bilo nobenih drugih primerov raka v rodovnik primera 294, vendar pa so bili drugi 5 primerov raka na poreklo primeru 728, vključno z 2 prostati, 1 kožo rak, 1 pljučni rak in 1 rak nejasnega origin.Table 1 Povzetek sprememb v E-kadherina in beta-catenin v serijo 50 želodčnih tumorjev.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad genske mutacije
Aberrant mRNA
E-cad
beta-cat
Vzorec



na 16q22.1
in polimorfizmi
E-cAD
IHC
IHC

1
T3N3
diff
+
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) na cd832
ND
- -
23
izpolnjeni
+
GCC (Ala) → ACC (CX ) na cd592 *
ND
+++ /-
+++ /-
43
T3N2
diff
+ -
-
-
+++ /-
50
T3N1
diff
-
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) pri cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
-
CAC (His) → CAT (njegova) na cd632 -
+++ /-
++ /- ∇
GGC (Gly) → GGT (Gly) na cd865
360
T2N1
int
G3
+
IVS4 + 10C → G
+ ♣
++ /-
+/-
369
izpolnjeni
+
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR-71c → G
568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) v cd751
636
T3N1
diff
+
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) v cd751
694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) pri cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND
AAC (ASN) → AAT (ASN) v cd751 -
+++ /-
+++ /- ∇
738
T3N2
diff
+ -
- -
-∇
750
izpolnjeni
ND
AAC (ASN) → AAT (ASN) v cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) pri cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30
3
7
21
14
Skupaj
40
50
38
50
50
%
75
6
18
42
28
T, tumor (velikost in invazivnost); N, vozlišče (stopnja metastaz); M, metastaze; G1, dobro razlikuje; G2, zmerno razlikuje; G3, slabo diferencirane; G4, ne razlikuje; diff, difuzna (stopnja diferenciacije = G4); mi, mešani; int, črevesje; izpolnjeni, metastatski tumor verjetno iz tumorja na želodcu; squ, skvamoznega epitelija; LOH, izguba heterozigotnosti; E-CAD, E-kadherina; β-mačka, β-catenin; IHC, imunohistokemija; cd kodon; UTR, neprevedeno regijo; +, Pozitiven LOH, zmotna E-cad mRNA, E-cad in β-cat IHC - negativna LOH, E-kadherina genska mutacija, zmotna E-cad mRNA, E-cad in β-cat IHC; ND, ni določena ali ni storil; +/-, ++ /- In +++ /-, več kot 50% celic pozitivnih; - /+, - /++ In - /+++, več kot 50% celic negativen; * Somatska mutacija; ♦, reproduktivnih mutacija; ♣, vstavljanje intronu 7 med eksonov 7 in 8, stop kodon 374; ♥, izbris zadnjih 72 podlag eksonu 7, eksonu 8 in prvih 124 baz eksonu 9, stop kodon 322; ♠, izbris eksonov 8 in 9; izbris zadnjih 84 osnov eksonu 8, stop kodon 358; ∇, ti vzorci so pokazali tudi citoplazemske obarvanje za β-catenin IHC določanje
LOH
mikrosatelitskih označevalcev, ki se uporabljajo za analizo LOH kromosoma 16q so bili:. D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 in D16S512 za regijo 16q22.1 vsebuje E -cadherin locus (Genome Database). Je verižne reakcije s polimerazo (PCR) proizvodi ločimo v akrilamid zaporedja gel in prenesli na pozitivno zaračuna najlonsko membrano, Haybond-N + (Amersham, Aylesbury, Velika Britanija) in peče vsaj 2 uri pri 80 ° C. metoda neradioaktivno odkrivanje uporablja za vizualizacijo produktov PCR je bil prej [23] opisano. Avtoradiogrami vizualno pregledamo najmanj dva ocenjevalcev primerjavo intenzitete alel iz normalnega in tumorskega DNA. Odsotnost ali znatno zmanjšanje enega alela v tumor v primerjavi smo upoštevali kot LOH normalno referenčni vzorec.
Mutacija presejalni
vseh 16 eksonov za E-kadherina gena in ekson 3 β-catenin gena so bili pregledani za inaktivacije mutacije z analizo PCR-SSCP (enovlakenske mesnatosti polimorfizem) na genomske tarčne DNA. Primerji za E-kadherina in beta-catenin, ki se uporabljajo pri analizi SSCP so bili opisani v prejšnjem članku [4] in Park et al. [1999], v tem zaporedju, in naročiti pri Pharmacia Biotech ali TAG Copenhagen A /S. Genomsko DNA smo uporabili pri 30 ng na 25 ul reakcijske zmesi, ki vsebuje 5 pmol za naprej in vzvratno temeljni premazi, 2,5 nmol vsakega dNTP, 0,5 enote DynaZyme polimerazo. Vzorce smo pomnožili v 35 ciklih, sestavljene iz 30 sekund za denaturacijo pri 94 ° C, 30 s za žarjenje pri 55-70 ° C, in končno 60 y za podaljšanje pri 72 ° C. Vroč začetek je z dodajanjem encima v prvem krogu na približno 70 ° C, po času poprejšnje 5 min pri 94 ° C uporabiti. A 4 ul alikvot produktov PCR smo zmešali s 7 ul formamida barve (95% formamida, 0,05% bromofenol modre in 0,05% ksilena cyanol), denaturirani pri 94 ° C za 10 minut in snapcooled na ledu. Alikvote 2 ul bili analizirani istočasno na dveh-denaturirnih brez poliakrilamidnih gelih (5% akrilamida z 2% navzkrižnim povezovanjem), bodisi vsebuje 5% glicerola ali brez glicerola. Elektroforeza bila izvedena v 1 x TBE na navpičnih gelov na 6W čez noč ali 6 ur pri sobni temperaturi. PCR produkt smo prikazali kot označevalcev mikrosatelitno. Vzorci z nenormalnimi pasovih mobilnosti smo ponovno pomnožili v 35 ciklov, kot je opisano zgoraj. 5-ul alikvot produktov PCR smo nato inkubirali z 10 U exonulease I in 2 U kozice alkalne fosfataze za odpravo čezmernih začetnih oligonukleotidov in dNTP (US70995, Amersham). Zaporedja obeh sklopov smo določili s termo polimerazo Sequenase DNA (Thermo Sequenase radioaktivno označenega Terminator Cycle Sequencing Kit, Amersham) z uporabo dveh izvirnih PCR začetnih oligonukleotidov. Opravili smo analize A592T mutacije na teh rakov, razen raka neznanega izvora, v družini primeru 728 uporablja neposredno zaporedje.
Aberrant mRNA presejalni
1-5 ig celotne RNA smo obratno prevedejo v cDNA s pomočjo prvi sklop cDNA sintezo kit (Amersham Pharmacia Biotech). Vsi vzorci so bili pregledani za E-kadherina cDNA brisanja in vstavki. E-kadherina cDNA smo pomnožili z uporabo primarnih parov EX7-REX10 /2 in Ex9 /2a-rEx11 za regijo eksonov 7-10 kodirajo vezavo kalcija mest [24]. PCR produkti so bili vizualiziramo z agarozno gelsko elektroforezo. Nenormalne fragmente smo izrezali in sekvenco s pomočjo naprej in nazaj, temeljni premazi za določitev ločnice izbrisov in vstavki. Tu smo uporabili BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA) in avtomatizirano sekvencer ABI PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) za sekvenciranje
Imunohistokemijsko
imunohistokemija za E-kadherina in ß -catenin smo izvedli na 5-Lun sekcije od blokov tkiva tumorskih-parafinskih integrirani z monoklonskih protiteles E-kadherina 5H9 in Goat Anti-Catenin Beta (Research Diagnostični, Inc. NJ, ZDA), in sicer z uporabo protokola nalaganja antigen, ki ga Hazelbag opisan et al. [1995]. Tumorji so razvrščena po intenzivnosti obarvanja kot negativni (-), rahlo pozitiven (+), zmerno pozitiven (++) in močno pozitivno (+++)
Statistična analiza
Χ 2 ali test. Fisherjev natančni test za oceno razmerja med zgornjimi parametri je bila uporabljena.
Rezultati
pogostnost LOH na 16q22.1 regiji je bilo 75% (tabela 1).
Trije tumorji (6%) je enak missense mutacija A592T eksona 12, od katerih je imel 2 primera zarodne imunoglobulinske proge mutacijo, in v enem primeru je imel somatsko mutacijo. Informacije za odkritih polimorfizmov je bil vključen v tabeli 1. Tri od 187 (1,6%) zdravih posameznikih in 1 280 (0,36%) tumorjih dojke je pokazala ta zarodne imunoglobulinske proge mutacijo. Mutacija ni bilo mogoče najti v 444 drugih tumorjev (tabela 2) .table 2 Pogostost A592T missense mutacije pri raku želodca, drugi rakom in zdravih posameznikih
Spremenljivke
A592T /skupno
%
rak želodca
3/50
6 rak
dojk
1/280
0,36
Drugo rak *
0/444
0
normalni populaciji
3/187
1.6
* vključno debelega črevesa in danke, pljuč, endometrija, jajčnikov, testisov, ledvic, ščitnice karcinomov in sarkomom.
Poleg tega 3 280 tumorjev dojk je pokazala še missense mutacij GCC (Ala) → TCC (Ser) na enak kodonu 592, od tega 2 primera reproduktivnih mutacija; tretja je bila nejasna, saj je normalno tkivo ni na voljo. Histološka vrsta 4 tumorjih dojke je duktalni.
V družini primeru 728, smo ugotovili, da je bolnik s kožnim rakom in eden od bolnikov z rakom prostate, je pokazala enako zarodne imunoglobulinske proge mutacijo kot primera 728. Zanimivo je, brez mutacij bili odkriti v vzorcih tumorjev teh dveh primerih. Verjetno so se mutirani aleli izgubljeno v razvoj tumorjev. Nastopu starosti za primere z reproduktivnih mutacije v rodovniku so bili 78 let za primer 728, 73 let za kožnega raka in 76 let za rakom na prostati.
Nismo odkrili mutacijo s SSCP in DNA sekvenciranje v eksonu 3 β-catenin gen v 50 želodčnih tumorjev.
Sedem želodčnih tumorjev pokazala nenormalnih prepise E-kadherina. Tumorji 360, 369, 568, 717 in 750 prikazano vstavljanje intronu 7 med eksonov 7 in 8. tumorja 755 pokazala izbris zadnjih 72 podlag eksonu 7, eksonu 8 in prvih 124 baz eksonu 9. tumorja 808 prikazanih dveh nenormalnih mRNK, od katerih je imel eden izbris eksonov 8 in 9, in v enem primeru z izbrisom zadnjih 84 baz eksonu 8 (tabela 1).
na koncu smo izvedli imunohistokemijsko za E-kadherina in beta-catenin. Regionalna sprememba obarvanja je bila odkrita preko tumorjev. V vrezov +/-, ++ /- in +++ /- se nanašajo na več kot 50% celic pozitivnih in vrezov - /+, - /++ in - /+++ kaže več kot 50% celic negativne. Negativna (-) ali zmanjša (- /+, - /++, - /+++ in +/-) izraz E-kadherina in beta catenin je bila odkrita v 21/50 (42%) in 14/50 ( 28%) primerih, v tem zaporedju. Poleg tega je za β-catenin IHC, 11 tumorji so pokazali tudi pozitivni citoplazemske obarvanje (tabela 1). Pomemben Povezave med negativne ali zmanjšano izražanje E-kadherina in beta-catenin (p = 0,048, Χ 2 test). Prav tako smo ugotovili povezavo med zmanjšano izražanje E-kadherina in razpršeno histotype (p = 0,04, Fisherjev natančni test) razprave.
Visoko frekvenco LOH na 16q22.1 regiji, jasno kaže, da obstaja eno ali več zaviralnih genov v tej regiji, katerih izguba bi lahko sprožila karcinogenosti raka želodca. Gen E-kadherina je preslikan v kromosomu 16q22.1 [26]. Opredeljene so bile zmanjšane izraz in genske mutacije E-kadherina na več vrst raka, vključno želodca in lobularnega raka dojke, kaže, da je gen E-kadherina tumor supresorski gen [2-4], [13-17, 27] . V tej študiji 3 primerih (6%) je pokazala enako missense mutacij A592T. Motivi kalcija za vezavo, ki se nahajajo v zunajcelični domen 1-5 obravnavajo kot ključni element za delovanje E-kadherina, saj sintetično molekulo z enim aminokisline substitucije v kalcija vezavo motiv ni pokazala adhezivnost [28] . Prav tako je v celično linijo humanega MKN45 zaradi raka želodca, ki manjkalo adhezijo tesen celica celic je bil izbris 4-amino kisline na voljo na meji med eksonov 6 in 7, ki se je štelo, da spremeni konformacijo okoliško ključ kalcijev vezavo motivi in ​​k odpravi adhezivne lastnosti molekul-E kadherina [29]. Enotni amino kisline substitucija v tej študiji se nahaja v petem zunajcelični domeni E-kadherina, kjer bi lahko kalcij, ki veže motiv obstajajo. Zato je razumljivo, zato, da so mutacije v treh primerih uničeni tudi funkcijo E-kadherina. Zanimivo je, da so trije primeri so pokazali tudi Loh na 16q22.1 vsebuje E-kadherina lokus je. Tako da se lahko šteje, da sta genski dogodkov, katerih posledica inaktivacijo gena prišlo v dveh alelov E-kadherina gena oz. Zgoraj ugotovitve pokazale, da je gen E-kadherina gen, tumor-supresorski, ker je v skladu s klasično teorijo dveh zadetkov za zaviralnih genov [30]. Prejšnje študije v lobularnega raka dojk podpira tudi to mnenje [4, 14]. V celični liniji MKN45 zgoraj omenjeno (slabo diferenciran adenokarcinom) z adhezijo šibko celica-celica, so odkrili 12-bp okvirja izbrisa E-kadherina gena in izgubo alela divjega tipa [29]. Toda ta celična linija še vedno kaže na veliko ekspresijo mRNA in proteinov, kar pomeni, da ne le zmanjša izražanje, ampak tudi strukturne nepravilnosti sami lahko povzroči inaktivacijo E-kadherina posredovana sistema adhezije celic [29]. Zato je mogoče najti v tej študiji ena aminokislina substitucija povzroči strukturne spremembe E-kadherina in povzroči adhezijo omejenem celica-celica, čeprav sta primerov (23 in 294) so ​​pokazali sufficient ekspresije proteinov.
Zanimivo je, isto zaporedje varianta somatske in zarodne mutacijo je bilo istočasno v različnih želodčnih bolnikih. Case 23 s somatsko mutacijo imela nastopu starosti 56 let, vendar primeri 294 in 728 z zarodne mutacije imel nastopom starosti 71 in 78 let, v tem zaporedju. Ena razlaga za ta pojav je lahko, da izguba drugega alela E-kadherina v primeru 23 je zgodil že zelo zgodaj, tako triggerring rakotvornost relativno zgodaj v primeru 23. Toda obstaja še ena možnost, da se ta mutacija v primeru 23 igral vlogo le v napredovanje tumor, vendar ne na začetku, ko bi drugi genetski dogodkov verjetno odgovoren za začetek raka želodca. Toda primeri, 294 in 728 s reproduktivnih mutacij imel poznim starosti. To je lahko zaradi inaktivacijo drugega alel pojavila zelo pozno. Članek poroča, da so obvezne prevozniki z okrnjenih mutacij v E-kadherina gena v svojih 80. in 90. letih ostala nespremenjena [31]. Zato je treba še identifikacija genetskih in /ali okoljskih prilagajanje, ki bi lahko predstavljajo spremenljivke starost začetku je treba izvesti. Posebej, primer 294 je imela tri tumorje na želodcu, ki je v skladu s genetski tumorji navadno ni multiple [30].
Frekvenco (6%) od mutacij A592T v 50 želodčnih tumorjev je skoraj štirikrat, da pri normalni populaciji spet kaže, da je ta mutacija dejansko prispeval k tumourigenesis v podskupini želodčnih tumorjev. Futhermore, 0,36% tumorjev dojk, in brez drugih tumorjev, so pokazali enako zarodne imunoglobulinske proge mutacije, ki kažejo, da bi lahko obstajala histološko razlika za to mutacijo pri raku želodca in drugih raka.
Samo druga dva primera razstavljena A592T mutacijo v družini primer 728. posebej je bil ta mutacija odkrita samo v ustrezni normalno tkivo, vendar ne v tumorskem tkivu, kar kaže, da so mutirani alelov izgubljena med tumourigenesis. Iz njih lahko sklepamo, da je ta mutacija ni lahko igrajo vlogo pri tumourigenesis prostate in kožnega raka, vendar pa bi se lahko želodčni rak specifična.
Sklepamo, da lahko A592T mutacija poveča tveganje za razvoj raka na želodcu življenjsko dobo, vendar je jasno varianta sekvence nizke penetrantnih. Naše ugotovitve dveh različnih zaporedje variant na kodonu 592 (A592T in A592S), kot reproduktivnih in somatskih mutacij, kažejo, da je to kodon srborit mutacij v tumorske patogenezo.
Mejne vrednosti za vstavljanje v intronu 7 in izbris eksonov 8 in 9 so na spajanje mestih, v skladu z "GU-AG" pravila za mRNA spajanje. To je mogoče razmišljal, da te spremembe niso bile ustvarjene z drugačno spajanje, ker niso bili dokazi za alternativno spajanje najti v mouse E-kadherina gena [32] in brez neobičajne mRNA bili odkriti v noncancerous tkivih. Mutacije na spajanje mestih bi morala biti odgovorna za spremembe v E-kadherina mRNA, čeprav ni bilo mutacije na voljo na ravni DNA v tej študiji, verjetno zato, ker je SSCP se uporablja za preglede mutacij ima nizko učinkovitost. Dodatnih 2 izbrisi pokazala prelomnih točk na non-spajanje mestih, ki preplete ni v skladu z "GU-AG" pravilo, morda kaže, da lahko prerazporeditve v genomski ravni povzročajo nenormalnih mRNK. Predhodne študije so pokazale preskoči eksona 8 ali 9, pri raku želodca [24, 33]. Te aberacije lahko povzroči E-cadherins izgubo kalcija, ki veže motive zaradi pomanjkanja eksonov 8 in 9, ter okrnjenih molekul zaradi premikom bralnega okvirja, ki ga vstavki in izbrisi, končno olajšujejo raztros celic karcinoma povzročajo.
Zmanjšal ekspresijo E- kadherina in β-catenin je bilo ugotovljeno v nekaterih vrst raka, vključno z rakom [8] želodca. Heterogena ali nestabilen izraz tako za E-kadherina in beta-catenin čez tumorjev je bilo. Dokazano je, da so pri 40% adenokarcinomov stopnjah E-kadherina postavljeno v svojih intravaskularnih komponent tumorja v primerjavi z njihovimi ekstravaskularnimi predeli [34]. Ena razlaga je lahko, da vstop karcinoma v intravaskularni predelku je povezan z uravnavanjem E-kadherina izražanja in kasnejša izhod v ekstravaskularnimi tkiva povezana z downregulation [35]. Ker so E-kadherina in β-catenin ključni sestavni deli tvorijo celica-celica adhezijske kompleks, lahko izguba jih povzroči prekinitev funkcije kompleksa, ki lahko povzročijo adhezijo šibak celično celic in podeljuje invazivnih lastnosti na tumor . Poleg tega se zmanjša celične adhezije celic, povezane z izgubo inhibicijo proliferacije kontaktnega, s čimer pobeg iz kontrolne rast signala, končno sproži karcinogeneze raka človeškega [8]. V tej študiji je bila povezava med nenormalno ekspresijo E-kadherina in beta-catenin ugotovljeno, kar kaže, da je izguba E-kadherina vezave lahko povzroči prerazporeditev P-catenin od celične membrane v citoplazmo. Povečano prosto β-catenin v citoplazmi lahko translocira v jedru in vodi do aktivacije genske ekspresije. To je podprto z ugotovitvami, da dva primera (676 in 738) so pokazali negativni madeže na notranji površini membrane in pozitivni obarvanjem v citoplazmi, istočasno. Toda drugi 9 tumorji (tabela 1), ki kažejo zmerno ali močno obarvanje v membrani razstavljena tudi pozitivno barvanje v citoplazmo, kar kaže, da je normalno, degradacija prostega beta catenin v citoplazmi zaviral. Prav tako smo ugotovili povezavo med nenormalno ekspresijo E-kadherina in razpršeno histotype, kar pomeni, da lahko spremembe v E-kadherina vlogo pri slabo diferenciranih želodčnih tumorjev. Zanimivo je, da je bila abnormalnih E-kadherina in /ali catenins pokazalo, da je neodvisen napovedni marker za kratek preživetje pri bolnikih z rakom želodca [8]. Posebnega pomena je ugotovitev, da je E-kadherina neodvisen napovedovalec okultne bezgavke in micrometastasis v vozliščih razvrščene kot ne z rutinskimi histopatoloških metodami [8].
Sklepi
Naši rezultati potrjujejo, da spremembe v E-kadherina in β-catenin igrajo vlogo pri začetku in napredovanje raka želodca. Izražanja obeh genov se zmanjšajo z rakom želodca, vendar mehanizem downregulation ni jasno. LOH, lahko mutacije in spremembe v RNA spajanje pojasnjujejo del downregulation na E-kadherina raka želodca.
Izjave
Zahvala
To delo je podprl islandski raziskovalnega sveta, Univerza v Islandiji znanost sklad in islandska Cancer Society.
nasprotujočimi si interesi
Brez prijavljene

• Študija primerov in kontrol o vplivu apolipoproteina E genotipov na želodcu tveganje za nastanek raka in napredovanje
• Metoda podpornih vektorjev model za diagnozo bezgavkah metastaze raka želodca z multidetector računalniške tomografije: predhodna študija