Изменения Е-кадгерина и бета-катенин при раке желудка

Изменения Е-кадгерина и бета-катенин при раке желудка
Аннотация
Справочная информация
E-кадгерин-катенина комплекс играет решающую роль в эпителиальной межклеточной адгезии и в поддержании тканевой архитектуры. Возмущение в выражении или функции этого комплекса приводит к потере межклеточной адгезии, с возможным последующим трансформации клеток и опухолевой прогрессии.
Методы
Мы изучали изменения Е-кадгерина и бета-катенина в наборе 50 первичных опухоли желудка с помощью потеря гетерозиготности (LOH) анализа, мутации гена скрининг, обнаружение аберрантных транскриптов и иммуногистохимии (IHC).
Результаты
высокой частотой (75%) LOH было обнаружено в 16q22.1, содержащей E -cadherin локус. Три случая (6%) показали одинаковую миссенс-мутации, A592T. Эта мутация, вероятно, не сильно способствуют канцерогенеза рака желудка, так как низкая частота (1,6%) из этой мутации был также найден в 187 здоровых людей. Мы также обнаружили низкую частоту (0,36%, 0%) этой мутации в 280 опухолей молочной железы и 444 других опухолей, в том числе толстой и прямой кишки, легких, эндометрия, яичников, семенников, почек, щитовидной железы и карциномы сарком, соответственно. Мы также проанализировали аберрантных Е-кадгерин мРНК в опухолях желудка и обнаружили, что 7 опухоли (18%) имели аберрантных мРНК в дополнение к нормальной мРНК. Эти аберрантных мРНК может привести к ненормальной Е-кадгерин молекул, что приводит к слабой межклеточной адгезии и инвазивного поведения раковых клеток. Снижение экспрессии Е-кадгерина и бета-катенина был идентифицирован на частоте 42% и 28%, соответственно. Специально, 11 опухолей (22%), показывает положительное окрашивание цитоплазмы для β-катенина IHC. Связь была обнаружена между уменьшением экспрессии Е-кадгерина и бета-катенина. Кроме того, ассоциация была обнаружена между уменьшением экспрессии Е-кадгерина и диффузного histotype.
Заключение
Наши результаты подтверждают гипотезу о том, что изменения Е-кадгерина и бета-катенина играют определенную роль в инициации и прогрессирования рака желудка .
фона
E-кадгерина (120 кДа; хромосома 16q) является классическим кадгерина и формирует ключевую функциональную составляющую прилипания соединений между эпителиальными клетками [1]. Он связан через серию подшерстком белков, в катенинов (α, р и у) к цитоскелета [1]. Эта связь между трансмембранного кадхеринами и актиновых филаментов цитоскелета необходимо сформировать сильную межклеточную адгезию. Неповрежденное Е-кадгерин - катенин комплекс необходим для поддержания нормальной межклеточной адгезии. В свете этого, несколько групп предложили, что в карцином, функции Е-кадгерина как молекула инвазия супрессора таким образом, что ее разрешения потери или усиливает вторжение в соседних нормальных тканей. Иммуногистохимическое исследования в злокачественных опухолях человека, включая рак желудка, часто показано, что доля инвазивных карцином и карцином на месте
показать отклоняющиеся уровни Е-кадгерина и /или экспрессии катенина по сравнению с их соответствующей нормальной ткани [2-4] , В общем, Е-кадгерин и катенин окрашивание сильна в хорошо дифференцированных видов рака, которые поддерживают их клеток клейкостью и менее агрессивны, но снижается в плохо дифференцированных опухолей, которые потеряли свою межклеточную адгезию и показывают сильное инвазивного поведения [2, 3].
Е-кадгерин участвует в контактного ингибирования роста клеток путем индукции клеточного цикла [5]. Он обладает способностью ингибировать пролиферацию клеток с помощью повышающей регуляции р27, участвующих в регуляции клеточного цикла [5], хотя механизм, с помощью которого Е-кадгерин регулирует Р27 до сих пор неясно. Таким образом, Е-кадгерин, как правило, описывается как вторжение супрессоров [6], может выступать в качестве основного супрессора роста /пролиферации.
Важной функцией -катенина в клеточной сигнализации, было выяснено [7]. При отсутствии митотического сигнала из вне клетки, β-катенин секвестируется в комплексе с продуктом аденоматозный полипоз палочки (APC) гена, серин треонин гликоген-синтетазы киназы (GSK-3 β) и ​​Axin адаптер белка (или гомолог conductin), что позволяет фосфорилирование и деградацию свободного -катенина системой убиквитин-протеасомным [8]. Когда митотический сигнал доставляется по пути Wnt, путем объединения семьи Wg /Wnt секретируемых гликопротеинов и их мембранного рецептора завитой, это приводит к активации взъерошенном (DSH) белок, который набираемого к клеточной мембране. Активированный Dsh подавляет белковый комплекс, так что он больше не может фосфорилировать -катенином, который затем не ухудшается. Выпуск бета-катенина из фосфорилирования и деградации комплекса способствует стабилизации β-катенина и сигнализации. Это приводит к увеличению свободного cystolic -катенина, который транслоцируется в ядро ​​и непосредственно связывает транскрипционные факторы Леф и TCF, что приводит к активации экспрессии гена. Поэтому β-катенин выполняет различные функции в Е-кадгерин-опосредованной межклеточной адгезии и в Wnt сигнализации [8].
Потеря Е-кадгерина локуса на длинном плече хромосомы 16 (16q22) происходит в желудке (24 %), гепатоцеллюлярный (50%), дольковый молочной железы (50-100%) и пищевода (66%) карцином [4, 9-12]. Там было несколько сообщений о E-кадгерина мутации гена в злокачественных опухолях человека [13]. В слабо дифференцированной опухолей, таких как очаговая рак молочной железы и диффузного типа рака желудка, E-кадгерина мутации играют важную роль в развитии опухоли [14, 15]. В нескольких исследованиях сообщалось зародышевых мутации в гене Е-кадгерина в семьях с наследственной диффузной типа рака желудка [16, 17]. Лишь меньшинство рака желудка может быть объяснено E-кадгерина мутаций. Частые соматические мутации гена β-катенина были обнаружены в небольших колоректальных аденом и кишечного типа рака желудка [18, 19]. Большинство мутаций включал потерю серинам или треонина из фосфорилирования области ГСК-3 β. Генетические изменения в бета-катенина, отменяющие межклеточной адгезионной наблюдались в двух желудочных линий раковых клеток, HSC39 и 40А; оба получают из того же перстнем-клеточного рака желудка и показывают диффузный характер роста [20, 21]. Эта мутация приводит к усеченной бета-катенина, который испытывает недостаток в регион для взаимодействия с бета-катенина. Трансфекция этих клеточных линий дикого типа -катенином восстанавливает клеточный адгезионной [21].
Здесь мы провели Е-кадгерина и бета-катенина мутации гена и анализа экспрессии в серии из 50 первичных опухолей желудка, чтобы понять, лучше вовлечением изменений Е-кадгерина и бета-катенина в канцерогенеза рака желудка.
материалы и методы
образцы
Включенные в исследовании, были 50 опухолей и соответствующие нормальные образцы, из которых две опухоли (17 и 23) были из того же семейства, остальные спорадические (таблица 1). Эти случаи были диагностированы в отделении патологии, Университетская больница Исландии. Ткань была получена только что в день операции или из залитой в парафин материала. Информация, касающаяся стадии опухоли, histotype и класс также была приобретена из того же отдела. ДНК для ПЦР выделяли протеиназой К [22]. РНК для ОТ-ПЦР экстрагировали с помощью Tri Reagent (Molecular Research Center, INC. США). Для мутации A592T мы провели скрининг 187 нормальных людей, 280 молочных желез и 444 других больных раком с толстой и прямой кишки, легких, матки, яичников, семенников, почек, щитовидной железы и карциномы сарком. Все индивидуальные идентификаторы были удалены из контрольных образцов перед анализом, и, таким образом, исследователи были ослеплены к идентификации образцов, которые больше не могут быть прослежены к конкретным лицам. Согласие предполагалось для образцов пациентов. В тех случаях, 294 и 728 с мутацией A592T, мы проанализировали их родословные и обнаружили, что там не было никаких других случаев рака в родословной случае 294, но были и другие 5 случаев рака в родословной случае 728, в том числе 2-х видов рака простаты, 1 кожи рак, рак легких 1 и 1 рак неясной origin.Table 1 Резюме изменений Е-кадгерина и бета-катенина в серии из 50 опухолей желудка.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad генные мутации

Аберрантная мРНК

E-хам

бета-кошка

Пример

<й>
<й>
<й>
в 16q22.1

и полиморфизмы цени на E-хама

IHC

IHC
<бр> 1
T3N3
Diff
+
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) в cd832
ND
- Форум -
23
встретились
+
НКУ (Ала) → ACC (Тре ) в cd592 *
ND
+++ /-
+++ /-
43
T3N2
Diff
+
- Форум - <бр> -
+++ /-
50
T3N1
Diff
-
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) в cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
-
CAC (His) → CAT (Его) в cd632
-
+++ /-
++ /- ∇
GGC (Gly) → ГГТ (Gly) в cd865
360
T2N1
INT
G3
+
IVS4 + 10C → G
+ ♣
++ /- +/-

369
встретились
+
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR-71C → G
568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) в cd751
636
T3N1
Diff
+
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) в cd751
694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) в cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND
AAC (ASN) → AAT (ASN) в cd751
-
+++ /-
+++ /- ∇
+738
T3N2
Diff <бр> +
-
-
-
-∇
750
встретились
ND
AAC (ASN) → AAT (ASN) в cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) в cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30 страница 3 из 7
21
14
Общее
40
50
38
50
50%

75
6
18
42
28
T, опухоли (размер и инвазивность); N, узел (степень метастазирования); M, метастазирование; G1, хорошо дифференцированы; G2, умеренно дифференцированные; G3, слабо дифференцирована; G4, не дифференцированы; Diff, диффузный (степень дифференцировки = G4); ми, смешанные; INT, кишечника; мет, метастатической опухоли, вероятно, от опухоли желудка; Squ, плоскоклеточный эпителиальной; LOH, потеря гетерозиготности; E-хама, Е-кадгерин; β-кошки, β-катенин; IHC, иммуногистохимия; CD, кодонов; УТР, нетранслируемой области; + Положительная LOH, аберрантных мРНК E-хам, E-хама и β-кошка IHC; -, отрицательные LOH, мутации гена E-кадгерина, аберрантных мРНК E-хам, E-хама и β-кошка IHC; ND, не определено или не сделано; +/- ++ /- И +++ /-, более чем 50% клеток, положительных; - /+, - /++ И - /+++, более 50% клеток, отрицательный; *, Соматические мутации; ♦, зародышевая мутация; ♣, введение интрона 7 между экзонов 7 и 8, стоп-кодона 374; ♥, удаление последних 72 оснований экзона 7, 8-й экзон и первые 124 баз экзоне 9, стоп-кодона 322; ♠, удаление экзонов 8 и 9; удаление последних 84 оснований экзона 8, стоп-кодона 358; ∇, эти образцы также показали, окрашивание цитоплазмы для β-катенина IHC определения
LOH
микросателлитных маркеров, используемых для LOH анализа хромосомы 16q были:. D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 и D16S512 для региона 16q22.1, содержащего E -cadherin локус (Геном базы данных). Полимеразной цепной реакции (ПЦР) Продукты разделяли в геле акриламид секвенирования и переносили в положительно заряженную нейлоновую мембрану, Hybond-N + (Amersham, Эйлсбери, Великобритания) и выпекали в течение не менее 2 ч при 80 ° С. Метод обнаружения нерадиоактивны используется для визуализации продуктов ПЦР было описано ранее [23]. Авторадиограммы были визуально проверены по крайней мере двумя рецензентами, сравнивая интенсивность аллели от нормальной и опухолевой ДНК. Отсутствие или значительное уменьшение одного аллеля в опухоли по сравнению с нормальным эталонным образцом считалась LOH.
Мутация скрининг
Все 16 экзонов гена Е-кадгерина и экзона 3 гена β-катенина подвергали скринингу инактивация мутации с анализом ПЦР-SSCP (одноцепочечной конформационного полиморфизма) на геномных ДНК-матриц. Праймеры для Е-кадгерина и бета-катенина, используемые в анализе SSCP были описаны в нашей предыдущей статье [4] и Парк и др. [1999], соответственно, и заказал от Pharmacia Biotech или TAG Copenhagen A /S. Геномную ДНК использовали при 30 нг на 25 мкл реакционной смеси, содержащей 5 пмоль прямого и обратного праймеров, 2,5 нмоль каждого дНТФ, 0,5 единиц полимеразы DynaZyme. Образцы были усилены в 35 циклов, состоящих из 30 с денатурация при 94 ° С, 30 с отжигом при 55-70 ° C, и, наконец, 60 с удлинение при 72 ° С. Горячий старт был использован путем добавления фермента в первом цикле на уровне около 70 ° С, после времени предварительной инкубации 5 мин при 94 ° С. А 4 мкл аликвоты ПЦР-продуктов смешивали с 7 мкл формамида красителя (95% формамид, 0,05% бромфенол синий и 0,05% cyanol ксилол), денатурировали при 94 ° С в течение 10 мин и snapcooled на льду. Аликвоты 2 мкл анализировали одновременно на двух неденатурированных полиакриламидных гелей (5% акриламида с 2% сшивки), либо, содержащий 5% глицерина или отсутствие глицерина. Электрофорез проводили в течение 1 × КЭ на вертикальных гелей на 6W в течение ночи или в течение 6 ч при комнатной температуре. Продукты ПЦР визуализировали в качестве микросателлитных маркеров. Образцы с аномальными полосы подвижности были усилены вновь в течение 35 циклов, как описано выше. В 5 мкл аликвоты продуктов ПЦР затем инкубировали с 10 U exonulease I и 2 U креветки щелочной фосфатазы для удаления избыточных праймеров и дНТФ (US70995, Amersham). Последовательности обеих нитей определяли с помощью термо- секвеназой ДНК-полимеразы (Thermo секвеназой радиоактивной Terminator Cycle Sequencing Kit, Amersham) с помощью двух исходных ПЦР-праймеров. Мы провели анализ мутации A592T на этих видов рака, кроме рака неясного происхождения, в семье случае 728 с использованием прямого секвенирования.
Аберрантная мРНК скрининг
1-5 мкг общей РНК обратно транскрибируется в кДНК с использованием первый набор синтеза цепи кДНК (Amersham Pharmacia Biotech). Все образцы были исследованы на E-кадгерина кДНК выпадений и вставок. Е-кадгерин кДНК амплифицировали с использованием пары праймеров ЕХ7-rEx10 /2 и EX9 /2a-rEx11 для области экзонов 7-10 кодирующих участков связывания кальция [24]. ПЦР-продукты визуализировали с помощью электрофореза в агарозном геле. Аномальные фрагменты были вырезаны и секвенировали с использованием прямого и обратного праймеров для определения границ выпадений и вставок. Здесь мы использовали BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Perkin-Elmer, Фостер Сити, Калифорния) и автоматизированного секвенатора ABI PRISM ™ 3100 (фирма Perkin-Elmer) для секвенирования
иммуногистохимического окрашивания
иммуногистохимии для Е-кадгерина и р -catenin проводили на 5 мкм секций из залитых парафином блоков опухолевой ткани с моноклональными антителами, Е-кадгерин 5H9 и козьими антителами против катенин бета (исследования Диагностическая, Inc. Нью-Джерси, США), соответственно, с помощью протокола получения антигена, описанного Hazelbag и другие. [1995]. Опухоли были классифицированы по интенсивности окрашивания, как отрицательные (-), слабо положительный (+), умеренно положительной (++) и сильно положительной (+++)
Статистический анализ
Χ 2 тест или. точный критерий Фишера использовали для оценки взаимосвязи между указанными параметрами.
Результаты
частота LOH в 16q22.1 области составила 75% (таблица 1).
Три опухоли (6%) показали то же самое миссенс мутации A592T экзона 12, из которых 2 случая были зародышевой линии мутации, и один случай имел соматической мутации. Информация для обнаруженных полиморфизмов был включен в таблице 1. Три из 187 (1,6%) здоровых людей и 1 из 280 (0,36%) опухолей молочной железы показали эту зародышевую мутации. Мутация не была найдена в 444 других опухолей (таблица 2) .table 2 Частота мутации A592T миссенс в рак желудка, другой рак и здоровых людей
Переменные

A592T /общее

%

рак желудка
3/50
6 рака молочной железы

1/280
0,36
Другие рак * <бр> 0/444
0
нормальной популяции
3/187
1.6
* включая толстой и прямой кишки, легких, матки, яичников, семенников, почек, щитовидной железы и рака саркомы.
Кроме того, 3 280 опухолей молочной железы показали еще одну мутацию миссенс GCC (ALA) → ТСС (Ser) при одинаковых кодона 592, из которых 2 случая были зародышевой мутации; третья была неясна, так как нормальная ткань была недоступна. Гистологический тип 4 опухолей молочной железы была протоковой.
В семье случае 728, мы обнаружили, что пациент с раком кожи и один из пациентов с раком простаты показали ту же зародышевую мутацию в случае 728. Интересно, что без каких-либо мутаций были обнаружены в образцах опухолей из этих двух случаев. Вероятно, мутантные аллели были потеряны в процессе развития опухоли. Наступление возраст для случаев с зародышевой мутацией в родословной были 78 лет для случая 728, 73 года для рака кожи и 76 лет для рака простаты.
Мы не обнаружили мутации с помощью SSCP и ДНК-последовательности в экзоне 3 ген β-катенина в 50-х опухолей желудка.
Семь опухолей желудка показал аберрантных стенограммы Е-кадгерина. Опухоли 360, 369, 568, 717 и 750 показаны вставки интрона 7 между экзонов 7 и 8. Опухоль 755 показали, удаление последних 72 оснований экзона 7, 8-й экзон и первых 124 оснований экзона 9. Опухоль 808 отображаемых два аберрантных мРНК, один из которых имел удаление экзонов 8 и 9, а в одном случае с удалением последних 84 оснований экзона 8 (таблица 1).
Наконец, мы проводили иммуногистохимическое окрашивание Е-кадгерина и бета-катенина. Региональное изменение окраски был обнаружен через опухолей. В задиров +/- ++ /- и +++ /- см более 50% клеток положительных и задиров - /+, - /++ и - /+++ указывает на более чем 50% клеток отрицательные. Отрицательный (-) или уменьшить (- /+, - /++ - /+++ и +/-) выражение Е-кадгерина и бета-катенина был обнаружен в 21/50 (42%) и 14/50 ( 28%) случаев соответственно. Кроме того, для β-катенина IHC, 11 опухоли также показали положительную окрашивание цитоплазмы (таблица 1). Статистически значимая связь была обнаружена между отрицательным или уменьшением экспрессии Е-кадгерина и бета-катенина (р = 0,048, х 2 тест). Кроме того, мы обнаружили связь между снижением экспрессии E-кадгерина и диффузного histotype (р = 0,04, Фишера точный тест) Обсуждение.

Высокая частота LOH в 16q22.1 области наводит на мысль, что существует один или несколько гены-супрессоры опухолей в этом регионе, чья потеря может вызвать канцерогенез рака желудка. Ген Е-кадгерин был картирован на хромосоме 16q22.1 [26]. Что сниженная экспрессия и генные мутации Е-кадгерина в нескольких типах рака, включая язвы желудка и очаговая рака молочной железы было выявлено, что указывает на то, что ген Е-кадгерина представляет собой ген-супрессор опухолей [2-4], [13-17, 27] , В этом исследовании 3 случая (6%) показали одинаковую миссенс-мутации A592T. Мотивы, связывающий кальций, расположенные в внеклеточных доменов 1-5 рассматриваются в качестве ключевого элемента для функции Е-кадгерина, так как синтетической молекулы с одной аминокислотной замены в кальций-связывающего мотива не показал адгезионной [28] , Кроме того, в линии клеток человека MKN45 от рака желудка, который не хватало плотно межклеточную адгезию, 4-амино-кислоты, делеции была обнаружена на границе экзонов 6 и 7, который был рассмотрен изменить конформацию, окружающую ключ, связывающий кальций, мотивы и упразднить клейкую свойство Е-кадгерин молекул [29]. Одиночная аминокислотной замены в настоящем исследовании, находится в пределах пятого внеклеточного домена Е-кадгерина, где может существовать кальций-связывающий мотив. Вполне возможно поэтому, что мутации в трех случаях также уничтожены функцию E-кадгерина. Интересно, что три случая также показали LOH в 16q22.1, содержащий Е-кадгерин локус. Таким образом, можно считать, что два генетических событий, приводящих к инактивации гена произошли в двух аллелей гена Е-кадгерина, соответственно. Приведенные выше результаты показали, что ген Е-кадгерина представляет собой ген-супрессор опухоли, потому что в соответствии с классической теорией два хита для генов-супрессоров опухолей [30]. Предыдущие исследования в лобулярной рака молочной железы также поддерживают это мнение [4, 14]. В клеточной линии MKN45 упоминалось выше (слабо дифференцированной аденокарциномы) со слабой межклеточной адгезии, были обнаружены в 12-ти пар оснований в рамке удаления гена Е-кадгерина и потерей дикого типа аллеля [29]. Но эта клеточная линия по-прежнему показали сильную экспрессию мРНК и белков, предполагая, что не только снижение экспрессии, но и структурные аномалии сами по себе могут привести к инактивации Е-кадгерин-опосредованной системы адгезии клеток [29]. Таким образом, одна аминокислота, заместительная найдено в этом исследовании, может вызвать структурные изменения Е-кадгерина и привести к ограничению межклеточной адгезии, хотя в двух случаях (23 и 294) показали достаточную экспрессию белка.
Интересно, что такой же вариант последовательности соматического и зародышевой мутации была обнаружена одновременно в разных пациентов желудка. Случай 23 с соматической мутации имели наступления возраста 56 лет, но случаи, 294 и 728 с мутацией зародышевой имели возраст начала действи 71 и 78 лет, соответственно. Одно из объяснений этого явления может быть, что потеря второго аллеля Е-кадгерина в случае 23 произошло очень рано, тем самым triggerring канцерогенез относительно рано в случае 23. Но есть и другая возможность, что эта мутация в случае 23 играет роль только в прогрессии опухоль, но не в инициировании, где другие генетические события, вероятно, может быть ответственен за инициацию рака желудка. Но случаи, 294 и 728 с зародышевые мутации были поздним началом возраста. Это может быть потому, что инактивация другого аллеля произошло очень поздно. В статье сообщалось, что обязательные носители с усеченными мутации в гене Е-кадгерина в их 80-ых и 90-ых остались без изменений [31]. Таким образом, дальнейшее определение генетических и /или окружающей среды модификаторов, которые, возможно, объясняют переменной возраста начала следует проводить. Специально, дело 294 было три опухоли в желудке, которая в соответствии с генетическими опухоли обычно быть кратно [30].
Частота (6%) мутации A592T в 50 опухолях желудка почти в четыре раза, что в нормальной популяции , что еще раз подтверждает эта мутация действительно способствовала tumourigenesis в подгруппе опухолей желудка. Futhermore, 0,36% опухолей молочной железы, а также без каких-либо других опухолей, показали идентичные мутации зародышевой линии, что свидетельствует о том, что может быть гистологическое разница для этой мутации при раке желудка и других раковых заболеваний.
Только другие два случая выставлены мутации A592T в семье случай 728. Специально, эта мутация была обнаружена только в соответствующей нормальной ткани, но не в ткани опухоли, что указывает, что мутантные аллели были потеряны во время tumourigenesis. Из них можно сделать вывод, что эта мутация не может играть определенную роль в tumourigenesis простаты и рака кожи, но это может быть желудочное-ракоспецифическая.
Мы пришли к выводу, что мутация A592T может увеличить пожизненный риск развития рака желудка, но явно вариант последовательности низкой пенетрантностью. Наши результаты двух различных вариантов последовательностей в кодоне 592 (A592T и A592S), так как зародышевые и соматические мутации, позволяют предположить, что этот кодон является горячей точкой мутаций в патогенезе опухоли.
Контрольные точки для вставки интрона 7 и удаление экзонов 8 и 9 находятся в сплайс-сайтов, в соответствии с правилом "GU-AG" для сплайсинга мРНК. Может быть предположение, что эти изменения не были получены путем альтернативного сплайсинга, так как никаких доказательств для альтернативного сплайсинга не были найдены в пределах гена мыши E-кадгерина [32] и не отклоняющиеся мРНК не были обнаружены в нераковых тканях. Мутации в сплайсинга сайтов должны нести ответственность за изменения Е-кадгерина мРНК, хотя никакие мутации не были найдены на уровне ДНК в этом исследовании, предположительно потому, что SSCP используется для скрининга мутаций имеет низкую эффективность. Еще 2 делеции показали точки останова без сращивания сайтов, чьи сплайсинг не в соответствии с правилом "GU-AG", возможно, указывает, что перестановка в геномном уровне может привести к аберрантных мРНК. Предыдущие исследования показали, пропуск экзона 8 или 9 при раке желудка [24, 33]. Эти аберраций могут привести к Е-кадхеринами потери кальций-связывающих мотивов из-за отсутствия экзонов 8 и 9, а также усеченных молекул из-за мутаций, вызванных сдвигом рамки путем инсерции и делеции, в конце концов, облегчающих рассеяние клеток карциномы.
Пониженную экспрессию Е- кадгерина и β-катенин было обнаружено в некоторых видов рака, включая рак желудка [8]. Гетерогенный или нестабильными выражение как для Е-кадгерина и бета-катенина поперек опухолей был найден. Было показано, что в 40% от уровня Е-кадгерина аденокарциномы были подняты в их внутрисосудистых компонентов опухоли по сравнению с их экстраваскулярных отсеков [34]. Одним из объяснений может быть, что вход карциномы в внутрисосудистой отсека связан с повышающей регуляции экспрессии Е-кадгерина, и что последующее выход в экстраваскулярных ткани связан с понижающей [35]. Так как Е-кадгерин и β-катенин являются важнейшими компонентами для формирования спаек комплекса клетка-клетка, потеря которых может привести к нарушению функции комплекса, что может вызвать слабую межклеточную адгезию и наделяют инвазивные свойства на опухоль , Кроме того, снижение адгезии клетка-клетка связана с потерей контактного ингибирования пролиферации, тем самым позволяя уйти от управляющего сигнала роста, наконец, вызвав канцерогенез рака у человека [8]. В этом исследовании, связь между уровнем экспрессии E-кадгерина и бета-катенина был найден, предполагая, что потеря Е-кадгерина связывания может привести к перераспределению -катенина из клеточной мембраны в цитоплазму. Увеличенный свободный β-катенина в цитоплазму может транслокации в ядро ​​и приводит к активации экспрессии гена. Это подтверждается результатами, что два случая (676 и 738) показали отрицательное окрашивание на внутренней поверхности мембраны и положительное окрашивание в цитоплазме, одновременно. Но другие 9 опухолей (таблица 1), показывающие умеренное или сильное окрашивание в мембране также демонстрируют положительное окрашивание в цитоплазме, предполагая, что нормальная деградация свободной бета-катенина в цитоплазме ингибируется. Кроме того, мы обнаружили связь между уровнем экспрессии E-кадгерина и диффузного histotype, указывая, что изменения Е-кадгерина может играть определенную роль в слабо дифференцированных опухолей желудка. Интересно отметить, что аберрантное экспрессия Е-кадгерина и /или катенинов было показано, что независимый прогностический маркер для короткой выживаемости больных раком желудка [8]. Особый интерес вызывает тот факт, что Е-кадгерин является независимым предиктором оккультной лимфатического узла и микрометастазов в узлах не классифицируемых как Нет обычными гистологических методов [8].
Выводы
Наши результаты подтверждают, что изменения Е-кадгерина и β-катенин играют определенную роль в инициации и развитии рака желудка. Экспрессия обоих генов уменьшены при раке желудка, но механизм понижающей не ясна. LOH, мутации и изменения в сплайсинга РНК могли бы объяснить часть понижающей Е-кадгерина в развитии рака желудка.
Заявления
Благодарности
Эта работа была поддержана Научным советом исландского, Университета Исландии науки Фонд и Общество рака исландский.
Конкурирующие интересы
Никто не объявлял

• Контролируемое исследование о влиянии генотипа аполипопротеина Е на риск развития рака желудка и progression
• Модель машины поддержки вектор для диагностики метастазов в лимфатических узлах при раке желудка с Multidetector к…