Zmeny e-cadherinu a beta-kateninu v žalúdku cancer

zmenách E-cadherinu a beta-kateninu u rakoviny žalúdka
abstraktné
pozadia
The E-cadherin-katenin komplexu hrá kľúčovú úlohu v epitelu buňka- adhézie buniek a pri udržiavaní architektúry tkaniva. Odchýlka v expresii alebo funkcii tohto komplexu vedie k strate intercelulárnej adhézie, s možnou následnou transformáciou buniek a progresie nádoru.
Metódy
Študovali sme zmeny z E-cadherinu a beta-kateninu v sade 50 primárneho gastrických nádorov pomocou stratu heterozygotnosti (LOH), analýza génovej mutácie skríningu, detekcie aberantne transkriptov a imunohistochémia (IHC).
Výsledky
vysokú frekvenciu (75%) LOH bola detekovaná v 16q22.1, obsahujúce E -cadherin locus. Tri prípady (6%) ukázali identický missense mutáciu, A592T. Táto mutácia je nepravdepodobné, že by výrazne prispievajú k karcinogenéze rakoviny žalúdka, pretože malý počet prípadov (1,6%) z tejto mutácie bola tiež nájdená v 187 normálnych jedincov. Tiež zistil nízku frekvenciu (0,36%, 0%) tejto mutácie v 280 nádorov prsníka a 444 iných nádorov, vrátane rakoviny hrubého čreva a konečníka, pľúc, endometria, vaječníkov, semenníkov, štítnej žľazy, obličiek, karcinómy a sarkómy, v danom poradí. Tiež sme analyzovali aberantne mRNA E-cadherinu v nádorov žalúdka a bolo zistené, že 7 nádorov (18%) malo aberantne mRNA okrem normálnej mRNA. Tieto aberantne mRNA môže spôsobiť abnormálne molekuly E-cadherinu, čo má za následok slabé adhézie bunka-bunka a invazívne správanie buniek karcinómu. Znížená expresia E-cadherinu a p-kateninu bol identifikovaný na frekvencii 42% a 28%, v danom poradí. Špeciálne, 11 nádorov (22%) vykazovali pozitívne cytoplazmatické farbenie pre β-katenin IHC. Asociácia bola zistená medzi zníženou expresiou E-cadherinu a beta-kateninu. Okrem toho bola zistená súvislosť medzi zníženou expresiou E-cadherinu a difúznej histotype.
Záver
Naše výsledky podporujú hypotézu, že zmeny e-cadherinu a beta-kateninu hrať úlohu v iniciácii a progresii rakoviny žalúdka .
pozadí
E-cadherinu (120 kDa; chromozóm 16Q) je klasická cadherinu a tvorí kľúčovou funkčná súčasť je dodržaná prechodu medzi epitelových buniek [1]. Je viazaná prostredníctvom série podsady proteínov sa catenins (α, p a y) na aktinového cytoskeletu [1]. Táto väzba medzi transmembránový kadheriny a aktinových filament cytoskeletu je nutné vytvoriť silnú adhéziu bunka-bunka. Neporušený E-cadherin - katenin komplex pre udržanie normálnej intercelulárnej adhézie vyžadovaná. S ohľadom na to, niekoľko skupín navrhol, aby v karcinómov, E-cadherinu funguje ako invázia potláčajúcich molekuly tak, že jeho strata povolenia alebo zvyšuje invázii do susedných normálnych tkanív. Imunohistochemické štúdie u ľudskej rakoviny, vrátane rakoviny žalúdka, často ukázali, že určitá časť invazívnych karcinómov a karcinómov in situ
vykazujú nenormálne hladinu E-cadherinu a /alebo katenin vyjadrenia v porovnaní s ich príbuzných normálnou tkanive [2-4] , Všeobecne platí, že E-cadherinu a katenin farbenie je silná v dobre diferencovaných nádorov, ktoré udržujú ich mobilné priľnavosť a sú menej invazívne, ale je znížená v zle diferencované nádory, ktoré stratili svoju adhéziu bunka-bunka a vykazujú silnú invazívne správanie [2, 3].
E-cadherin sa podieľa na kontaktné inhibície bunkového rastu tým, že indukujú zastavenie bunkového cyklu [5]. Že má schopnosť inhibovať proliferáciu buniek o upregulaci p27 zapojených do regulácie bunkového cyklu [5], aj keď mechanizmus, ktorým E-cadherin reguluje p27 je stále nejasná. Z tohto dôvodu, E-cadherin, je všeobecne popísané ako invázia supresor [6], môže pôsobiť ako hlavný rastu /proliferácie enie.
Dôležitú funkciu beta-kateninu v bunkovej signalizácii, bol objasnený [7]. V neprítomnosti mitotického signálu z mimo bunky, β-katenin je izolovaný v komplexe s produktom génu adenomatóznej polypózy coli (APC), serín treonín glykogén-syntetázu kinázy (GSK-3p) a adaptér proteínov Axin (alebo homológov conductin), čo umožňuje fosforyláciu a degradácii voľného p-kateninu u ubiquitin-proteasomu systému [8]. Keď je mitotické signálu dodaného Wnt dráhou, spojením rodiny Wg /Wnt vylučovaných glykoproteínov a ich membránovým receptorom Frizzled, vedie k aktivácii neupraveného (DSH) proteínu, ktorý je do zamestnania, na bunkovej membráne. Aktivovaný DSH downreguluje komplex bielkovín, tak, že už nemôže fosforylovať p-katenin, ktorý je potom nie je degradovaný. Uvoľnenie beta-kateninu z fosforylácie a degradácie komplexu podporuje stabilizáciu β-katenin a signalizáciu. To má za následok zvýšenie voľného cystolic beta-kateninu, ktorý premiestni do jadra, a priamo sa viaže transkripčné faktory LEF a TCF, čo vedie k aktivácii génovej expresie. Preto β-katenin plní odlišné funkcie v E-cadherin-sprostredkovanú adhéziu bunka-bunka a Wnt signalizácie [8].
Strata E-cadherinu lokuse na dlhom ramienku chromozóme 16 (16q22) sa vyskytuje v žalúdku (24 %), hepatocelulárny (50%), lobulárna prsníka (50-100%) a pažeráka (66%), karcinómy [4, 9-12]. Tam bolo niekoľko správ o génovej mutácie E-cadherinu v ľudských nádorových ochorení [13]. V zle diferencovaný nádory, ako je rakovina prsníka a lobulárního difúzneho typu rakoviny žalúdka, mutácie E-cadherinu hrajú dôležitú úlohu pri vývoji nádoru [14, 15]. Niektoré štúdie uvádzajú zárodočnej mutácie v géne pre E-cadherinu v rodinách s dedičným difúzneho typu rakoviny žalúdka [16, 17]. Iba menšina karcinómov žalúdka môže byť vysvetlená pomocou E-cadherinu mutácií. Časté somatické mutácie β-katenin génu boli nájdené v malých kolorektálneho adenómu a karcinómu žalúdka intestinálneho typu [18, 19]. Väčšina mutácií podieľa stratu Serina alebo treonínu z fosforylačných oblasti GSK-3P. Genetické zmeny v beta-kateninu odstraňujú bunka-bunka priľnavosť bola pozorovaná u dvoch bunkových línií karcinómu žalúdka, HSC39 a 40A; ako vyplývajú z rovnakej pečatný prsteň karcinómu žalúdka a ukazujú difúzne štruktúru rastu [20, 21]. Táto mutácia vedie k skráteného P-kateninu, ktorému chýba oblasť pre interakciu s beta-kateninu. Transfekcia týchto bunkových línií divokého typu beta-kateninu obnovuje bunkovú adhéziu. [21]
Tu sme vykonali E-cadherinu a beta-katenin génovú mutáciu a analýzu expresie v sérii 50 primárnych nádorov žalúdka, aby sa pochopiť, lepšie zapojenie zmenách E-cadherinu a beta-kateninu v karcinogenéze karcinómu žalúdka.
materiály a metódy
vzorky
zaradenie do štúdie bolo 50 tumorov a zodpovedajúce normálne vzorky, z ktorých dva nádory (17 a 23) boli z rovnakej rodiny, zvyšok sporadické (Tabuľka 1). Tieto prípady boli diagnostikované Ústavu patológie FN Islandu. Tkanivo bola získaná čerstvo v deň chirurgického zákroku alebo zo zaliatych parafínu materiáli. Informácie týkajúce sa štádiom nádoru, histotype a stupeň bol tiež získala z rovnakého oddelenia. DNA pre PCR bola izolovaná na proteináza K liečeniu [22]. RNA pre RT-PCR sa extrahuje Tri činidlo (Molecular Research Center, INC. USA). Pre A592T mutáciu sme premietali 187 normálnych jedincov, 280 prsia a 444 ďalších pacientov s rakovinou s hrubého čreva a konečníka, pľúc, endometria, vaječníkov, semenníkov, obličky, karcinómu štítnej žľazy a sarkómov. Všetky jednotlivé identifikátory boli odstránené z kontrolných vzoriek pred analýzou, vyšetrovatelia a bol tak oslepený k identifikácii vzoriek, ktoré môžu byť už vysledovať na konkrétnych osôb. Súhlas bol predpokladaný u vzoriek pacientov. V prípadoch, 294 a 728 s A592T mutáciu sme analyzovali ich rodokmene a zistil, že tam boli žiadne iné prípadov rakoviny v rodokmeni prípadu 294, ale tam boli iné 5 prípadov rakoviny v rodokmeni prípadu 728, vrátane 2 rakoviny prostaty, 1 koža rakovina, rakovina pľúc 1 a 1 rakovina nejasné origin.Table 1 Zhrnutie zmenách E-cadherinu a beta-kateninu v sérii 50 nádorov žalúdka.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad génové mutácie
Aberrant mRNA
E-cad
beta-CAT
Sample



na 16q22.1 stroje a polymorfizmy
E-CAD
IHC
IHC

1
T3N3
diff
+
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) pri cd832
ND - -
23
stretol
+
GCC (Ala) → ACC (Thr ) pri cd592 *
ND
+++ /-
+++ /-
43
T3N2
diff
+ - Španielsko -
-
+++ /-
50
T3N1
diff
-
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) na cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
-
CAC (His) → CAT (His) pri cd632 -
+++ /-
++ /- ∇
GGC (Gly) → GMT (Gly) pri cd865
360
T2N1
int
G3
+
IVS4 + 10C → G
+ ♣
++ /-
+/-
369
stretol
+
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR-71C → G
568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (Asn) → AAT (ASN) pri cd751
636
T3N1
diff
+
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (Asn) → AAT (ASN) pri cd751
694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) na cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND
AAC (Asn) → AAT (ASN) pri cd751 -
+++ /-
+++ /- ∇
738
T3N2
diff
+ -
- -
-∇
750
stretol
nd
AAC (ASN) → AAT (ASN) na cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) na cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30 Sims 3
7
21
14
Celkom
40
50
38
50
50%
75
6
18
42
28
T, nádor (veľkosť a invasiveness); N, uzol (stupeň metastáz); M, metastázy; G1 dobre diferencovaný; G2, mierne diferencované; G3, zle diferencované; G4, nerozlišujú; diff, difúzne (stupeň diferenciácie = G4); mi, zmiešané; int, črevá; splnená, metastatický nádor pravdepodobne od žalúdka nádoru; SQU, dlaždicového epitelu; LOH, strata heterozygotnosti; E-cad, E-cadherin; β-cat, β-katenin; IHC, imunohistochémia; cd, kodónoch; UTR, nepreložené oblasti; +, Pozitívne LOH, úchylné E-cad mRNA, E-CAD a β-cat IHC -, negatívne LOH, E-cadherin génová mutácia, aberantne E-cad mRNA, E-CAD a β-cat IHC; ND, nie je určená ani neurobil; +/- ++ /- A +++ /- viac ako 50% buniek pozitívnych; - /+, - /++ A - /+++, viac ako 50% buniek negatívny; *, Somatická mutácie; ♦, zárodočná mutácia; ♣, vloženie IntronA 7 medzi exóny 7 a 8, stop kodónoch 374; ♥, delécie posledných 72 báz exónu 7, exón 8 a prvých 124 báz exónu 9, stop kodóne 322; ♠, delécie exóny 8 a 9; Vypustenie posledných 84 báz exónu 8, stop kodónoch 358; ∇, tieto vzorky tiež ukázal cytoplazme farbenie na β-katenin IHC stanovenie
LOH
mikrosatelitních markerov používaných pre LOH analýzou chromozómu 16Q boli :. D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 a D16S512 pre región 16q22.1 obsahujúce E -cadherin locus (Genome Database). Polymerázová reťazová reakcia (PCR) produkty boli oddelené v akrylamid sekvenčné gélu a prenesené na kladne nabité nylonovú membránu, Hybond-N + (Amersham, Aylesbury, UK) a pečie po dobu aspoň 2 hodín pri teplote 80 ° C. Nerádioaktívny detekčné metóda používa na vizualizáciu PCR produktov bolo opísané skôr [23]. Autorádiogramami boli vizuálne skontrolované najmenej dvoma posudzovateľov, porovnaním intenzity alel z normálnej a nádorovej DNA. Absencia alebo významný pokles jednej alely v nádore v porovnaní bolo považované za LOH normálne referenčné vzorka.
Mutácie skríning
všetkých 16 exónov E-cadherin génu a exónu 3 β-katenin génu boli vyšetrované na inaktivačné mutácie s analýzou PCR-SSCP (single strand konformační polymorfizmus) na genómovej DNA šablón. Primery pre E-cadherinu a beta-kateninu použité v analýze SSCP boli popísané v našom predchádzajúcom článku [4] a Park et al. [1999], respektíve, a objednal od Pharmacia Biotech alebo TAG Copenhagen A /S. Genómovej DNA bola použitá pri 30 ng na 25 ul reakčnej zmesi obsahujúce 5 pmol dopredný a reverzných primérov, 2,5 nmol každého dNTP, 0,5 jednotiek polymerázy DynaZyme. Vzorky boli amplifikovanej v 35 cykloch pozostávajúcich z 30 sekúnd denaturácie pri 94 ° C, 30 s zapálení pri 55-70 ° C, a nakoniec 60 s o predĺženie pri 72 ° C. Horúci štart bol použitý pridaním enzýmu v prvom cykle, pri asi 70 ° C, po dobu predbežnej inkubácie 5 min pri 94 ° C. A 4 ul alikvotná časť PCR produktov sa zmieša so 7 ul formamidu farbiva (95% formamidu, 0,05% brómfenolovej modrej a 0,05% xylenkyanolu), denaturácia pri 94 ° C počas 10 minút a snapcooled na ľade. Alikvótne 2 ul boli analyzované súčasne na dvoch nedenaturujícím polyakrylamidovom gélu (5% akrylamidu, s 2% zosieťovania), a to buď s obsahom 5% glycerolu alebo chýba glycerol. Elektroforéza bola vykonávaná v 1 x TBE na zvislých gély na 6W cez noc alebo po dobu 6 hodín pri teplote miestnosti. PCR produkty boli vizualizované ako mikrosatelitních markerov. Vzorky s abnormálnymi pásom pre mobilitu boli znovu amplifikovanej za 35 cyklov, ako je popísané vyššie. 5 ul alikvotná časť PCR produktov potom bola inkubovaná s 10 U exonulease I a 2 U garnáty alkalickej fosfatázy na odstránenie nadmernej primery a dNTP (US70995, Amersham). Sekvencia oboch reťazcov bola stanovená termo Sequenase DNA polymerázy (Thermo Sequenase Rádioaktívne značené Terminátor Cycle Sequencing Kit, Amersham) pomocou dvoch pôvodných PCR primérov. Vykonali sme analýzu A592T mutácia v týchto nádorov, s výnimkou rakoviny nejasného pôvodu, v rodine prípadu 728 pomocou priameho sekvenovania.
Aberrant mRNA detekčnej
1-5 ug celkovej RNA bola reverzne transkribovaných na cDNA s použitím prvý syntéza vlákna cDNA kit (Amersham Pharmacia Biotech). Všetky vzorky boli vyšetrené na E-cadherinu cDNA delécií a inzerciou. E-cadherin cDNA bola amplifikovaná za použitia párov primerov EX7-REX10 /2 a Ex9 /2A-rEx11 pre oblasť exónov 7-10 kódujúcich miesta väzby vápnika [24]. PCR produkty boli vizualizované elektroforézou na agarosovém gélu. Abnormálne fragmenty boli vyrezané a sekvenované s použitím smerovaného a spätného primeru pre určenie hranice delécií a inzerciou. Tu sme použili BigDye Terminátor Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA) a automatizovaného sekvenátoru ABI PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) pre sekvencovanie
Imunohistochemické farbenie
imunohistochemické pre E-cadherinu a beta -catenin bola vykonaná na 5 um úsekov z parafínových blokov nádorového tkaniva s monoklonálnymi protilátkami E-cadherinu 5H9 a kozie anti-katenin Beta (Research Diagnostic, Inc. NJ, USA), v danom poradí, s použitím protokolu získanie antigénu popísaného Hazelbag et al. [1995]. Nádory boli odstupňované podľa intenzity farbenia ako záporný (-), slabo pozitívna (+), stredne pozitívny (++) a silne pozitívny (+++)
Štatistická analýza
Χ 2 testu alebo. Fisherov presný test bol použitý, aby posúdila vzťahy medzi vyššie uvedenými parametrami.
Výsledky
frekvenciu LOH v 16q22.1 regióne bolo 75% (pozri tabuľku 1).
Tri nádory (6%) ukázala rovnaký missense mutácie A592T exónu 12, z ktorých 2 prípady mal zárodočnú mutáciu a jeden prípad mal somatickou mutáciu. Informácie o zistených polymorfizmov bol zahrnutý v tabuľke 1. Tri z 187 (1,6%) normálnych jedincov a 1 280 (0,36%) nádorov prsníka ukázala táto mutácia zárodočnej línie. Mutácie nebola nájdená v 444 iných nádorov (tabuľka 2) .Table 2 Frekvencia A592T missense mutácie v rakovine žalúdka, iné nádorových a normálnych jedincov
Premenné
A592T /celkový
%
karcinóm žalúdka
3/50
6 rakovina prsníka
1/280
0,36
Ostatné rakovina *
0/444
0
normálnej populácie
3/187
1,6
* vrátane hrubého čreva a konečníka, pľúc, endometria, vaječníkov, semenníkov, obličky, karcinómu štítnej žľazy a sarkómov.
navyše, 3 280 nádorov prsníka ukázala ďalší missense mutácie GCC (ALA) → TCC (SER) u zhodného kodóne 592, z toho 2 boli zárodočná mutácia; Tretí bol nejasný, pretože normálne tkanivo bola nedostupná. Histologický typ zo 4 nádorov prsníka je duktálny.
V rodine prípadu 728, sme zistili, že pacient s rakovinou kože a jeden z pacientov s karcinómom prostaty, vykazovala rovnaký embryonálny mutáciu prípade 728. Je zaujímavé, žiadne mutácie boli detekované vo vzorkách nádorových týchto dvoch prípadov. Pravdepodobne, mutované alely boli v priebehu vývoja nádoru stratená. Nástup vek pre prípady s zárodočnej mutácie v rodokmeni bolo 78 rokov pre prípad, 728 73 rokov na rakovinu kože a 76 rokov pre rakovinu prostaty.
Sme nezistili mutáciu tým, SSCP a DNA sekvenovania v exóne 3 β-katenin gén v 50. nádorov žalúdka.
Sedem gastrických nádorov ukázala nenormálne prepisy E-cadherinu. Nádory 360, 369, 568, 717 a 750 zobrazí vloženie intronom 7 medzi exóny 7 a 8. nádoru 755 ukázala odstránenie posledných 72 báz exónu 7, exón 8 a prvých 124 báz exónu 9. Nádorové 808 zobrazených dve aberantne mRNA, z ktorých jeden mal deléciu exónov 8 a 9, a v jednom prípade s vypustením posledných 84 báz exónu 8 (Tabuľka 1).
Nakoniec sme vykonali imunohistochemické farbenie E-cadherinu a beta-kateninu. Bolo zistené regionálne variácie farbenie cez nádorov. Tieto scoring +/-, ++ /- a +++ /- odkazovať na viac ako 50% buniek pozitívnych a scoring - /+, - /++ a - /+++ označujúca viac ako 50% buniek negatívny. Negatívne (-) alebo znížená (- /+, - /++, - /+++ a +/-) expresie E-cadherinu a beta-kateninu bol zistený u 21/50 (42%) a 14/50 ( 28%) prípadov, v uvedenom poradí. Okrem toho, pre β-katenin IHC, 11 nádorov tiež ukázal pozitívne cytoplazmatické farbenie (tabuľka 1). Významná súvislosť bola zistená medzi záporným alebo zníženej expresie E-cadherinu a beta-kateninu (p = 0,048, × 2 test). Tiež sme našli súvislosť medzi zníženou expresiou E-cadherinu a difúznej histotype (p = 0,04, Fisherov presný test).
Diskusia
vysoká frekvencia LOH v 16q22.1 regióne silno naznačuje, že existuje jeden alebo viac tumor supresorové gény v tomto regióne, ktorého strata by mohla vyvolať karcinogenéze rakoviny žalúdka. Gen E-cadherin bol mapovaný na chromozóme 16q22.1 [26]. boli zistené zníženej expresie génu a mutácie E-cadherinu v niekoľkých typov rakoviny, vrátane žalúdočných a lobulárna karcinóm prsníka, čo naznačuje, že gén E-cadherin je nádorový supresorový gén [2-4], [13 - 17, 27] , V tejto štúdii 3 prípady (6%) ukázala, že identický missense mutácie A592T. Motívy vápnik viažuci sa nachádza v extracelulárnej domény 1-5 sú považované za kľúčový prvok pre funkciu E-cadherinu, pretože syntetické molekuly s jediným aminokyselinové substitúcie v motíve vápnik viažuci nevykazovali žiadnu priľnavosť [28] , Aj v ľudskej bunkovej línii MKN45 z karcinómu žalúdka, ktorý postrádal tesné adhéziu bunka-bunka, 4-amino-kyseliny, delécie bol nájdený na hranici medzi exóny 6 a 7, ktorý bol považovaný k zmene konformácie okolité kľúč vápnik viažuci motívy a zrušiť adhézne vlastnosti molekúl E-cadherin [29]. Jediný aminokyselina substitúcie v tejto štúdii sa nachádza v piatom extracelulárnej domény E-cadherinu, kde by mohol existovať motív vápnik záväzné. Je teda vylúčené, že mutácie v týchto troch prípadoch aj funkciu E-cadherinu zničené. Je zaujímavé, že tieto tri prípady tiež ukázal, Loh v 16q22.1, obsahujúce E-cadherinu lokus. Takže ho možno považovať, že dva genetické udalosti vedúce k inaktivácii génu došlo v oboch alelách E-cadherin génu, v uvedenom poradí. Uvedené zistenia ukázali, že gén E-cadherin je tumor-supresorové gén, pretože je v súlade s klasickým dvoch prístupov teórie pre tumor supresorových génov [30]. Predchádzajúce štúdie v lobulárna rakoviny prsníka tiež podporujú tento názor [4, 14]. V bunkovej línii vyššie uvedených MKN45 (zle diferencované adenokarcinóm) so slabou adhéziou bunka-bunka, zistilo 12-bp deléciu v ráme E-cadherin génu a stratu alely divokého typu [29]. Ale táto bunková línia stále vykazovali silnú expresiu mRNA a proteínov, čo naznačuje, že nielen znížená expresia, ale aj štrukturálne abnormality samotné môže mať za následok deaktiváciu E-cadherin-sprostredkované bunkové adhézie systému [29]. Z tohto dôvodu, jeden amino-kyseliny substitúcia nájsť v tejto štúdii môže spôsobiť štrukturálne zmeny E-cadherinu a viesť k obmedzenej priľnavosti bunka-bunka, aj keď dve z týchto prípadov (23 a 294) ukázala, dostatočnú expresiu proteínu.
Zaujímavé je, že rovnaký sled variant somatické a zárodočnej mutácie bola zistená súčasne v rôznych žalúdočných pacientov. Puzdro 23 sa somatickou mutáciou mal vek nástupu 56 rokov, ale prípady 294 a 728 sa zárodočnú mutácií mal nástup vek 71 a 78 rokov, resp. Jedno vysvetlenie tohto javu by mohlo byť to, že strata druhej alely E-cadherinu v prípade, že došlo k 23 veľmi skoro, čím sa triggerring karcinogenéze pomerne skoro v prípade 23, ale je tu ďalšia možnosť, že táto mutácia v prípade 23 hrá úlohu len v progresii nádor, ale nie k iniciácii, kde by iné genetické udalosti zrejme je zodpovedný za začatie rakoviny žalúdka. Ale prípady, 294 a 728 sa zárodočnými mutáciami mali neskorý nástup veku. To môže byť preto, že deaktivácia iné alely došlo veľmi neskoro. Článok uvádza, že povinné nosiče s skrátenými mutáciami v géne pre E-cadherinu v ich 80s a 90s zostala nezmenená [31]. Preto, ďalšie identifikácia genetických a /alebo životného prostredia, modifikátory, ktoré by mohli vysvetliť variabilný vekom začiatku by malo byť vykonané. Špeciálne, puzdro 294 má tri nádory v žalúdku, čo je v súlade s genetickými nádory môžu byť viacnásobné [30].
Frekvenciu (6%) zlúčeniny mutácie A592T v 50 nádorov žalúdka je takmer štyrikrát, že v normálnej populácii , opäť naznačuje, že táto mutácia skutočne prispelo k tumorogenézy v podskupine nádorov žalúdka. Futhermore, 0,36% nádorov prsníka a žiadnymi inými nádory, ukázal identickú zárodočnú mutáciu, čo naznačuje, že by mohlo dôjsť k histologické rozdiel na tejto mutácie v žalúdku rakoviny a iných nádorových ochorení.
Iba ďalšie dva prípady vystavoval A592T mutáciu v rodine puzdro 728. Špeciálne, táto mutácia bola zistená len v zodpovedajúcej normálneho tkaniva, ale nie v nádorovom tkanive, čo naznačuje, že mutované alely boli počas tumorogenézy stratená. Z nich môžeme konštatovať, že táto mutácia nemusí hrať úlohu v tumorogenézy rakoviny prostaty a kože, ale môže to byť žalúdočné rakovina špecifické.
Došli sme k záveru, že A592T mutácia môže zvýšiť riziko celého vzniku rakoviny žalúdka, ale je jasne variant sekvencie s nízkou penetráciou. Naše nálezy z dvoch rôznych sekvenčných variantov v kodóne 592 (A592T a A592S), ako zárodočné a somatické mutácie, naznačujú, že tento Kodona je hotspot mutácií v nádore patogenéze.
Zarážky pre úponov intronom 7 a vymazanie exónov 8 a 9 sú na spojovacích miestach, v súlade s "GU-AG" pravidlo pre zostrihu mRNA. Je možné špekulovať, že tieto zmeny neboli generované alternatívnym zostrihom, pretože žiadne dôkazy pre alternatívnym zostrihom boli nájdené v myšou E-cadherin génu [32] a žiadna aberantne mRNA boli detekované v nenádorové tkaniva. Mutácie na spojovacích miestach by mal byť zodpovedný za zmeny v E-cadherinu mRNA, aj keď žiadna mutácie boli nájdené na úrovni DNA v tejto štúdii, pravdepodobne preto, že SSCP použitý pre skríning mutácií má nízku účinnosť. Ďalšie 2 delécie ukázala, zarážky na non-spojovacích miest, ktorých spájanie nie je v súlade s "GU-AG" pravidlo, čo ukazuje na možnosť, že nové usporiadanie v úrovni genómu môže spôsobiť aberantne mRNA. Predchádzajúce štúdie ukázali, preskočenie exónu 8 alebo 9, u karcinómu žalúdka [24, 33]. Tieto odchýlky môžu viesť k E-kadheriny straty vápnika viažuceho motívy z dôvodu nedostatku exónov 8 a 9, a skrátené molekuly, pretože posunovými mutácií spôsobených inzercie a delécie, nakoniec uľahčujúce rozptyl buniek karcinómu.
Znížená expresia E- cadherinu a β-katenin bol nájdený v niektorých typov rakoviny, vrátane rakoviny žalúdka [8]. Bolo zistené, heterogénne alebo nestabilné výraz pre E-cadherinu a p-kateninu naprieč nádorov. Bolo preukázané, že v 40% adenokarcinómov hladiny E-cadherinu boli v ich intravaskulárneho nádorových zložiek v porovnaní s ich extravaskulárnom priestorom [34]. Jedným vysvetlením môže byť to, že vstup karcinómu do intravaskulárneho priestoru je spojený s up-reguláciu expresie E-cadherinu, a že následný výstup na extravaskulárnu tkaniva je spojené s down-reguláciu [35]. Vzhľadom k tomu, E-cadherin a β-katenin sú kľúčové komponenty, ktoré tvoria adhézne komplexu bunka-bunka, strata z nich môže viesť k narušeniu funkcie komplexu, čo môže spôsobiť nízku adhéziu bunka-bunka a udeliť invazívne vlastnosti na nádoru , Okrem toho, zníženou adhéziou bunka-bunka je spojená s strata kontaktnej inhibície proliferácie, čím sa umožní únik z riadiaceho signálu rast, nakoniec vyvolalo karcinogenéze rakoviny ľudského [8]. V tejto štúdii sa zistilo, že súvislosť medzi abnormálne expresie E-cadherinu a p-kateninu, čo naznačuje, že strata E-cadherin väzbové môže spôsobiť redistribúciu beta-kateninu z bunkovej membrány do cytoplazmy. Zvýšená bez β-katenin v cytoplazme mohol premiestniť do jadra a vedú k aktivácii génovej expresie. Toto je podporované zistením, že dva prípady (676 a 738) vykazovali negatívny farbenie na vnútornom povrchu membrány a pozitívnu farbenie v cytoplazme, súčasne. Ale aj iné nádory 9 (tabuľka 1) ukazujú mierne alebo silné zafarbenie v membráne tiež vykazovali pozitívne farbenie v cytoplazme, čo naznačuje, že normálne degradácia voľné beta-kateninu v cytoplazme je inhibovaný. Tiež sme zistili súvislosť medzi abnormálne expresie E-cadherinu a difúzna histotype, čo naznačuje, že zmeny z E-cadherinu môže hrať úlohu v zle diferencovaných nádorov žalúdka. Je zaujímavé, aberantne expresie E-cadherinu a /alebo catenins bolo preukázané, že je nezávislý prognostický marker pre krátke prežitie u pacientov s karcinómom žalúdka [8]. Zvlášť zaujímavé je zistenie, že E-cadherin je nezávislý prediktor okultné lymfatických uzlín a micrometastasis v uzloch sú klasifikované ako No bežnými histopatologickými metódami [8]
. Závery
Naše výsledky potvrdzujú, že zmeny e-cadherinu a β-katenin hrajú úlohu v iniciácii a progresii karcinómu žalúdka. Expresie oboch génov sú znížené u karcinómu žalúdka, ale mechanizmus downregulace nie je jasný. LOH, mutácie a zmeny v RNA zostrihom by mohlo vysvetliť časť downregulace E-cadherinu u rakoviny žalúdka.
Vyhlásenie
Poďakovanie
Táto práca bola podporená podľa rady pre výskum islandského, Islandskej univerzity vedy fondu a islandský Cancer Society.
protichodnými záujmami
Žiadny deklarovanej

• Prípadová-control štúdie o vplyve apolipoproteínu E genotypy na žalúdočné rizika rakoviny a progresii
• Podpora vektor stroj model pre diagnostiku lymfatických uzlín u karcinómu žalúdka s multidetektorového počítačová tomografia: predbežná štúdia