Alterações de E-caderina e β-catenina em câncer gástrico

Alterações de E-caderina e β-catenina em câncer gástrico arte abstracta
Fundo
O complexo E-caderina-catenina desempenha um papel crucial na adesão célula-célula epitelial e na manutenção da arquitetura do tecido. Perturbação na expressão ou função deste complexo resulta na perda da adesão intercelular, com possibilidade de transformação celular consequente e progressão tumoral.
Métodos
Estudamos as alterações de E-caderina e β-catenina em um conjunto de 50 primário tumores gástricos usando perda de heterozigosidade análise (LOH), a triagem de mutação genética, detecção de transcritos aberrantes e imuno-histoquímica (IHQ).
Resultado
Uma alta frequência (75%) de LOH foi detectada em 16q22.1 contendo e lócus -cadherin. Três casos (6%) apresentaram a mutação missense idênticos, A592T. Esta mutação não é susceptível de contribuir fortemente para a carcinogênese do câncer gástrico, porque uma baixa frequência (1,6%) desta mutação também foi encontrada em 187 indivíduos normais. Nós também detectada uma frequência baixa (0,36%, 0%) desta mutação em tumores da mama e 280 444 outros tumores, incluindo os do cólon e do recto, do pulmão, do endométrio, ovário, testículo, do rim, carcinomas e sarcomas, respectivamente. Foram também analisadas as ARNm de caderina-E aberrantes em tumores gástricos e verificou que 7 os tumores (18%) tiveram mRNAs aberrantes em adição ao ARNm normal. Estes mRNAs aberrantes podem produzir moléculas anormais de caderina-E, o que resulta na adesão célula-célula e fraco comportamento invasivo das células de carcinoma. redução da expressão de E-caderina e β-catenina foi identificado com a frequência de 42% e 28%, respectivamente. Especialmente, 11 tumores (22%) apresentaram coloração citoplasmática positivo para β-catenina IHC. Uma associação foi encontrada entre redução da expressão de E-caderina e β-catenina. Além disso, foi detectada uma associação entre a expressão reduzida de E-caderina e histotipo difusa.

Conclusão Os nossos resultados apoiam a hipótese de que as alterações de E-caderina e β-catenina desempenha um papel na iniciação e progressão do cancro gástrico .
Fundo
e-caderina (120 kDa; cromossomo 16q) é uma caderina clássica e forma o componente funcional chave das junções de adesão entre as células epiteliais [1]. Ele está ligado através de uma série de proteínas primários com, as cateninas (α, p e y) para o citoesqueleto de actina [1]. Esta ligação entre caderinas transmembrana e os filamentos de actina do citoesqueleto é necessário para formar a adesão célula-célula forte. Um E-caderina intacta - complexo catenina é necessária para a manutenção de adesão intercelular normal. À luz disto, vários grupos propuseram que em carcinomas, funções E-caderina como uma molécula de invasão supressor de tal forma que suas autorizações de perda ou aumenta a invasão dos tecidos normais adjacentes. Estudos imunohistoquímicos em cancros humanos, incluindo o cancro gástrico, têm frequentemente demonstrado que uma proporção de carcinoma invasivo e carcinoma in situ
mostram níveis aberrantes de E-caderina e /ou expressão catenina em comparação com o seu tecido normal relacionada [2-4] . Em geral, a E-caderina e coloração catenina é forte em cancros bem diferenciadas que mantêm a sua adesividade celular e são menos invasivas, mas é reduzida em tumores fracamente diferenciadas que perderam a sua adesão célula-célula, e mostram forte comportamento invasivo [2, 3].
E-caderina está envolvida na inibição por contacto do crescimento celular através da indução de paragem do ciclo celular [5]. Tem a capacidade para inibir a proliferação celular pela regulação positiva de P27 envolvidos na regulação do ciclo celular [5], embora o mecanismo pelo qual a E-caderina p27 regula ainda não é clara. Portanto, a caderina-E, em geral, descrito como um supressor de invasão [6], pode actuar como um importante supressor de crescimento /proliferação.
Uma função importante da β-catenina na sinalização celular, foi elucidado [7]. Na ausência de um sinal mitótico de fora da célula, β-catenina é sequestrado em um complexo com o produto polipose adenomatosa coli (APC), um gene de serina treonina glicogénio sintetase quinase (GSK-3β) e uma axina proteína adaptadora (ou um conductin homólogo), permitindo que a fosforilação e a degradação de β-catenina livre pelo sistema ubiquitina-proteassoma [8]. Quando um sinal mitótico é entregue pela via Wnt, por associação da família Wg /Wnt de glicoproteínas segregadas e o seu receptor de membrana frizzled, que conduz à activação da proteína dishevelled (Dsh), que é recrutada para a membrana celular. O Dsh activada regula negativamente o complexo de proteína, de modo que ele já não pode fosforilar β-catenina, que então não é degradada. A libertação de β-catenina a partir do complexo de fosforilação e degradação promove a estabilização β-catenina e sinalização. Isto resulta num aumento de livre cystolic β-catenina, que transloca para o núcleo e se liga directamente a factores de transcrição Lef e Tcf, que conduz à activação da expressão do gene. Portanto β-catenina desempenha funções distintas na adesão célula-célula mediada por E-caderina e em sinalização Wnt [8].
Perda do locus de E-caderina no braço longo do cromossoma 16 (16q22) ocorre em gástrica (24 %), hepatocelulares (50%), de mama lobular (50-100%) e esofágicas (66%) carcinomas [4, 9-12]. Houve vários relatos sobre mutações genéticas E-caderina em cânceres humanos [13]. Em tumores pouco diferenciados, tais como o cancro da mama lobular e câncer gástrico tipo difuso, as mutações de caderina-E desempenham um papel importante no desenvolvimento do tumor [14, 15]. Vários estudos relataram mutações germinativas no gene da caderina-E em famílias com um tipo difuso herdada de câncer gástrico [16, 17]. Apenas uma minoria de cânceres gástrico pode ser explicada por mutações E-caderina. mutações somáticas do gene frequentes β-catenina têm sido encontradas em pequenas colorectal adenomas e cancro gástrico tipo intestinal [18, 19]. A maioria das mutações envolveu a perda de serinas ou treoninas região de fosforilação da GSK-3β. As alterações genéticas em β-catenina, suprimindo adesividade célula-célula foram observadas em duas linhas de células de cancro gástrico, HSC39 e 40A; ambos derivam da mesma carcinoma anel de sinete do estômago e mostrar um padrão de crescimento difuso [20, 21]. Esta mutação resulta em uma β-catenina truncada que carece da região de interacção com β-catenina. A transfecção destas linhas de células com o tipo selvagem β-catenina restaura adesividade celular [21].
Aqui, foi realizada a caderina-E e beta-catenina mutação genética e análise de expressão de uma série de 50 tumores primários gástricos, a fim de compreender o envolvimento do alterações da e-caderina e β-catenina na carcinogênese do câncer gástrico.
melhores materiais e métodos
amostras
incluídos no estudo foram 50 tumores e correspondentes amostras normais, dos quais dois tumores (17 e 23) eram da mesma família, o resto esporádicos (Tabela 1). Estes casos foram diagnosticados pelo Departamento de Patologia do Hospital Universitário da Islândia. O tecido foi obtido de fresco no dia da cirurgia ou a partir de material embebido em parafina. Informações relativas ao estágio do tumor, histotipo e grau também foi adquirida a partir do mesmo departamento. ADN para a PCR foi isolado por o tratamento com proteinase K [22]. O ARN para RT-PCR foi extraído utilizando Reagente Tri (Molecular Research Center, INC. EUA). Para a mutação A592T, nós selecionados 187 indivíduos normais, 280 de mama e 444 outros pacientes com câncer de cólon e reto, pulmão, endométrio, ovário, testículos, rins, carcinomas da tiróide e sarcomas. Todos os identificadores individuais foram removidos das amostras de controlo antes da análise, e os investigadores eram cegos, assim, para a identificação de amostras que já não podem ser rastreados para indivíduos específicos. Consentimento foi presumido para as amostras dos pacientes. Para os casos 294 e 728 com a mutação A592T, analisamos seus pedigrees e descobriu que não havia outros casos de câncer no pedigree do caso do 294, mas havia outros 5 casos de câncer no pedigree do caso do 728, incluindo 2 cancros da próstata, 1 pele cancro, o cancro um cancro do pulmão e um claro de origin.Table 1 Resumo das alterações de e-caderina e β-catenina em uma série de 50 tumores gástricos.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad mutações genéticas
aberrante mRNA
E-cad
β-cat
Amostra


Restaurant at 16q22.1
e polimorfismos
de e-cad
IHC
IHC

1

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