Promjene E-kadherina i beta-katenina u želučanom cancer

izmjenama E-kadherina i beta-katenina kod raka želuca
apstraktne pregled pozadine
E-kadherina-katenina kompleksa igra ključnu ulogu u staničnoj epitela adhezija stanica i za održavanje arhitekture tkiva. Perturbacija u izražavanju ili funkciju ovog kompleksa rezultira gubitkom međustanične adhezije, uz moguću transformaciju posljedičnim stanica i progresiji tumora.
Metode pregled smo proučavali i promjene u E-kadherina i beta-katenina u skup od 50 osnovnih želučanih tumora pomoću gubitka heterozigotnosti (LOH) analizu genske mutacije screening, otkrivanje neprirodnih transkripata i imunohistokemijski (IHC). | Rezultati
visokom učestalošću (75%) Loh je otkriven na 16q22.1 sadrži E -cadherin mjesto. Tri slučaja (6%) pokazalo je identičan missens mutaciju, A592T. Ova mutacija vjerojatno neće jako doprinijeti karcinogenezi raka želuca, jer je pronađen niske frekvencije (1.6%) te mutacije u 187 normalnim pojedincima. Također detektira niske frekvencije (0,36%, 0%) ove mutacije u 280 tumora dojke i 444 drugih tumora, uključujući debelog crijeva i rektuma, pluća, endometrija, jajnika, testisa, bubrega, karcinoma štitnjače i sarkoma, respektivno. Također smo analizirali aberantnih E-kadherina mRNA u gastričnih tumora i otkrili da 7 tumora (18%) imali su poremećene mRNA uz normalne mRNA. Ta poremećena mRNA mogu proizvoditi abnormalne molekule E-kadherina, što rezultira slabom adhezije stanica-stanica i invazivno ponašanje stanica karcinoma. Smanjena ekspresija E-kadherina i beta-katenina identificiran na frekvenciji od 42% i 28%, respektivno. Posebno, 11 tumora (22%) su pokazale pozitivnu citoplazmatski bojanje β-katenina IHC. Udruga je pronađen između smanjene ekspresije E-kadherina i beta-katenina. Osim toga, udruga je otkrivena između smanjene ekspresije E-kadherina i difuznog Histotip. Pregled Zaključak
Naši rezultati podupiru hipotezu da promjene E-kadherina i beta-katenina igraju ulogu u pokretanju i napredovanje karcinoma želuca . pregled Pozadina pregled, E-kadherina (120 kDa; kromosomu 16q) je klasični kadherina i čini ključnu funkcionalnu komponentu prianjanja spojevima između epitelnih stanica [1]. Je vezan preko niza poddlake proteina, katenini (α, P i y) na aktinskog citoskeleta [1]. Ova povezanost između transmembranous kadherina i aktin filamenata citoskeleta potrebno da se dobije jaku adheziju stanica-stanica. Netaknutog E-kadherina - katenina kompleks je potreban za održavanje normalne međustanične adhezije. U svjetlu toga, nekoliko je skupina predložila da se u karcinomima, funkcije E-kadherina kao invazija supresorski molekule, tako da je njegov gubitak dozvole ili pojačava invaziju na susjedna normalna tkiva. Imunohistokemijska istraživanja u ljudskim raka, uključujući rak želuca, često su pokazala da je udio invazivnih karcinoma i karcinoma in situ
pokazuju neobične vrijednosti E-kadherina i /ili katenina izražavanja u odnosu na njihove srodne normalnog tkiva [2-4] , Općenito, E-kadherina i katenina bojenje je jak u dobro diferenciranim karcinomima koji održavaju stanica ljepljivost i da su manje invazivne, ali je smanjen u slabo diferenciranim tumorima koji su izgubili adheziju stanica-stanica i pokazuju snažnu invazivno ponašanje [2, 3], pregled E-kadherin je uključen u kontakt inhibicije rasta stanica induciranjem staničnog ciklusa [5]. Ima sposobnost da inhibira staničnu proliferaciju u povećanju p27 uključen u regulaciju staničnog ciklusa [5], iako je mehanizam kojim E-kadherin regulira p27 je još nejasna. Dakle, E-kadherina, uglavnom opisana kao invazije supresorski [6], može djelovati kao veliki rast /proliferacije valova.
Važna funkcija beta-katenina u staničnu signalizaciju, je razjašnjen [7]. U odsutnosti mitotičkim signala iz izvan stanice, β-katenina je izdvojeno u kompleksu s genskom produktu adenomatozna polipoza (APC), serin treonin glikogen sintetaze kinaze (GSK-3β) i adapter protein axin (ili homologa conductin), omogućujući fosforilaciju i degradaciju slobodnog beta-katenina od ubikvitina-proteasomalni sustava [8]. Kada mitotički signal isporučen od Wnt put po organizaciji obitelji WG /Wnt izlučenih glikoproteina i membrane receptora frizzled, to dovodi do aktivacije raskuštranog (DSH) protein, koje je angažirala na staničnu membranu. Aktivirana DSH downregulates kompleks proteina, tako da se više ne može fosforiliraju P-katenina, koji se onda ne degradira. Oslobađanje P-katenina od fosforilacije i razgradnje kompleks potiče stabilizaciju β-katenina i signalizaciju. To rezultira povećanjem slobodnog cystolic P-katenina koji prelazi u jezgru i neposredno se vežu za faktore transkripcije LEF i TCF, što dovodi do aktivacije ekspresije gena. Stoga β-katenina obavlja različite funkcije u adhezije stanica-stanica E-kadherina posredovane i Wnt signaliziranja [8].
Gubitak lokusu E-kadherina na dugom kraku kromosoma 16 (16q22) javlja u želuca (24 %), hepatocelularnog (50%), lobularni grudi (50-100%) i jednjaka (66%) karcinomi [4, 9-12]. Bilo je nekoliko izvješća o genske mutacije E-kadherina u ljudskim tumorima [13]. U slabo diferencirani tumori, kao što su lobularni karcinom dojke i difuznog tipa raka želuca, E-kadherina mutacije imaju važnu ulogu u razvoju tumora [14, 15]. Nekoliko je istraživanja ukazalo germinativne mutacije u genu na E-kadherina u porodicama s naslijeđenim difuznog tipa raka želuca [16, 17]. Samo manji broj želučanih karcinoma može se objasniti E-kadherina mutacija. Česti somatske mutacije β-katenina gena nađene su u malim adenoma kolona i crijevna tipa rakom želuca [18, 19]. Većina mutacija uključeni gubitak serina ili threonines iz fosforilacije regiji GSK-3β. Genetske promjene u P-katenina ukidanje stanica-stanica ljepljivost su promatrane u dva želučanim staničnim linijama raka, HSC39 i 40A; i potječu iz istog karcinom stanica prstena pečatnjaka želuca i pokazuju difuzno obrazac rasta [20, 21]. Ova mutacija rezultira krnjeg P-katenina koji nemaju regiju za interakciju s beta-katenina. Transformacija tih staničnih linija s divljeg tipa P-katenina obnavlja staničnu ljepljivost [21].
Ovdje, proveli smo E-kadherina i beta-katenina genske mutacije i izražavanja analizu u nizu od 50 osnovnih želučanih tumora kako bi se razumjeli bolje sudjelovanju izmjenama E-kadherina i beta-katenina u karcinogeneze raka želuca.
Materijali i metode
uzorci
uključeni u studiju bili su 50 tumora i odgovarajući normalni uzorci, od kojih su dva tumora (17 i 23) bili su iz iste obitelji, a ostatak sporadična (tablica 1). Ovi slučajevi su dijagnosticirana od strane Odjela za patologiju KBC Islanda. Tkivo je dobiven svježe na dan kirurškog zahvata ili s paraffin-embedded materijala. Podaci o tumoru fazu, Histotip i stupanj je također stekao iz istog odjela. DNA za PCR je izoliran proteinaze K liječenju [22]. RNA za RT-PCR je ekstrahirana pomoću Tri reagens (Molecular Research Center, INC. USA). Za A592T mutacije, prikazan smo 187 normalnih osoba, 280 prsa i 444 drugih pacijenata oboljelih od raka s debelog crijeva i rektuma, pluća, endometrija, jajnika, testisa, bubrega, karcinoma štitnjače i sarkoma. Svi pojedinačni identifikatori su uklonjeni iz kontrolnih uzoraka prije analize, a istražitelji su tako zaslijepljeni identifikaciju uzoraka koji se više ne može pratiti na određenim pojedincima. Pristanak se od pretpostavke za uzorcima bolesnika. Za slučajeve 294 i 728 sa A592T mutacijom, analizirali smo njihove rodovnice i utvrdili da nije bilo drugih slučajeva raka u pedigreom predmeta 294, ali bilo je i drugih 5 slučajeva raka u pedigreom predmeta 728, uključujući 2 raka prostate, 1 kožu rak, rak pluća 1 i 1 rak nejasno origin.Table 1. Sažetak izmjenama E-kadherina i beta-katenina u nizu 50 želučanih tumora. pregled Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad genske mutacije
Aberantna mRNA
E-cad
P-mačka
Uzorak
pregled pregled pregled po 16q22.1
i polimorfizmi
E-cAD
IHC
IHC pregled
1 pregled T3N3 pregled razl pregled +
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) na cd832 pregled ND pregled -
- 23 pregled susreo pregled + pregled GCC (Ala) → ACC (Thr ) na cd592 * pregled ND pregled +++ /- pregled +++ /- pregled 43 pregled T3N2 pregled razl pregled +
- -
- pregled +++ /- pregled 50 pregled T3N1 pregled razl pregled -
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) na cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
- Pregled, CAC (His) → CAT (mu) na cd632
- +++ /- pregled ++ /- ∇ pregled GGC (Gly) → GGT (Gly) na cd865
360 pregled T2N1 pregled int pregled G3 pregled + pregled IVS4 + 10C → G pregled + ♣ pregled ++ /- pregled +/- pregled 369
susreo pregled +
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR-71c → G pregled 568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) na cd751 pregled 636 pregled T3N1 pregled razl pregled +
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) na cd751 Netlogu 694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) na cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND pregled, AAC (ASN) → AAT (ASN) na cd751
- +++ /- pregled +++ /- ∇ pregled 738 pregled T3N2 pregled razl
+
- -
- -∇ pregled 750 pregled susreo pregled ND pregled, AAC (ASN) → AAT (ASN) na cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) na cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30 pregled 3
7
21 pregled, 14 pregled Ukupan pregled 40 pregled, 50 pregled, 38 pregled, 50 pregled, 50
%
75
6 pregled 18 pregled, 42 pregled, 28 pregled, T, tumora (veličina i invazivnost); N, čvor (stupanj metastaza); M, metastaze; G1, dobro diferencirani; G2, umjereno diferencirani; G3, slabo diferencirani; G4, ne razlikuju; diff, difuzni (stupanj diferencijacije = G4); mi, mješovita; int, crijeva; ispunjeni, metastatski tumor vjerojatno od tumora želuca; squ, pločastog epitela; LOH, gubitak heterozigotnosti; E-CAD, E-kadherina; β-mačka, β-katenina; IHC, imunohistokemijski; cd, kodon; UTR, netranslatirano područje; +, Pozitivan LOH, nenormalna E-cad mRNA, E-cad i β-mačka IHC -, negativna LOH, genske mutacije E-kadherina, nenormalna E-cad mRNA, E-cad i β-mačka IHC; ND, nije određeno, ili ne radi; +/- ++ /- A +++ /-, više od 50% pozitivnih stanica; - /+, - /++ I - /+++, više od 50% stanica negativna; *, Somatske mutacije; ♦, klica mutacija; ♣, umetanje introna 7 između eksona 7 i 8, stop kodon 374; ♥, brisanje posljednjih 72 baza eksona 7, eksona 8 i prvih 124 bazama eksona 9, stop kodon 322; ♠, brisanje eksona 8 i 9; brisanje posljednjih 84 baza eksona 8, stop kodon 358; ∇, ovi uzorci su također pokazali citoplazmatski bojenje za β-katenina IHC određivanje pregled Loh
mikrosatelitni markera koji se koriste za Loh analizu kromosoma 16q bili su:. D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 i D16S512 za 16q22.1 regiji koja sadrži E -cadherin mjesto (Genome Database). Se lančana reakcija polimeraze (PCR), produkti su razdvojeni na akrilamid sekvencijskom gelu i prenese u pozitivno nabijenih najlonsku membranu Hybond N + (Amersham, Aylesbury, UK) i pečena najmanje 2 sata na 80 ° C. Metoda nije radioaktivan otkrivanje koristi za vizualizaciju PCR produkata je ranije [23] što je opisano. Autoradiogram su vizualno najmanje dva recenzenta, uspoređujući intenzitet alela od normalne i tumorske DNK. Odsutnost ili značajno smanjenje jedan alel u tumor u usporedbi s normalnom referencom uzorku smatra Loh, pregled Mutacija screening pregled svih 16 eksona gena E-kadherina i eksona 3 β-katenina gena su u testovima deaktiviranja mutacije s PCR-SSCP (single strand konformaciju polimorfizam) analizu na genomske DNA predložaka. Primeri za E-kadherina i beta-katenina koriste u SSCP su opisani u našem prethodnom članku [4] i Park i sur. [1999], odnosno, i naručio od Pharmacia Biotech ili TAG Kopenhagen A /S. Genomska DNA upotrebljava se, na 30 ng po 25 ul reakcijske smjese koja sadrži 5 pmol naprednim i reverznim klicama, 2,5 nmol svakog dNTP, 0,5 jedinice Dynazyme polimeraze. Uzorci su amplificirani u 35 ciklusa sastavljenih od 30 sekunda denaturacije na 94 ° C, 30 s za zagrijavanjem na 55-70 ° C, i na kraju 60 s u produžetku na 72 ° C. Vrući start je korišten dodavanjem enzima u prvom ciklusu na oko 70 ° C, nakon nekog vremena prethodne inkubacije od 5 min na 94 ° C. A 4 ul alikvota PCR produkata se pomiješa sa 7 ul formamida boje (95% formamid, 0,05% bromfenol plavo i 0,05% ksilen cijanol), denaturirani pri 94 ° C kroz 10 min i snapcooled na ledu. Alikvoti 2 ul analizirani istovremeno na dvije ne-denaturirajućim poliakrilamidnim gelovima (5% akrilamida sa 2% umreživanja), bilo koji sadrži 5% glicerola ili nema glicerola. Elektroforeza je provedena na 1 × KME na vertikalnim gelova na 6W preko noći ili tijekom 6 sati na sobnoj temperaturi. PCR produkti su vizualizirani kao mikrosatelitskih markera. Uzorci s abnormalnim kretanju nizovi ponovno pojačani tijekom 35 ciklusa kako je gore opisano. Je 5 ul alikvota PCR proizvoda je zatim inkubirana s 10 U exonulease i 2. U kozice alkalna fosfataza ukloniti prekomjerne primera i dNTPs (US70995, Amersham). Sekvence obje niti su određene termo Sequenase DNA polimeraze (Thermo Sequenase Radioaktivno Terminator Ciklus sekvenciranje Kit, Amersham) pomoću dva izvorna PCR početnice. Izvršili smo analizu A592T mutaciju na tim raka, osim raka nejasnog podrijetla, u obitelji slučaju 728 pomoću izravnog sekvenciranja.
Aberantna mRNA screening
1-5 ug ukupne RNA je obrnuto prepisana u cDNA pomoću prva sinteza kit lanca cDNA (Amersham Pharmacia Biotech). Svi uzorci se ispituju na E-kadherina cDNA delecije i insercije. E-kadherina cDNA je korištenjem parova početnica EX7-rEx10 /2 i Ex9 /2a-rEx11 regije eksona 7-10 kodiraju vezanja kalcija mjesta [24]. PCR proizvodi su vizualizirani elektroforezom na agaroznom gelu. Nenormalan fragmenti su izdvojeni i sekvenciran koristeći napredne i reverzne početnice za određivanje granice na delecije i insercije. Evo, koristili smo BigDye Terminator Cycle sekvenciranje za brzi odgovor Kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA) i automatskom genetskom ABI PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) za sekvenciranje pregled imunohistokemijska bojanja
imunohistokemijski na E-kadherina i P katenina je izvedena na 5-p.m rezove od blokova tkiva tumora parafin uklopljenih s monoklonskim antitijelima E-kadherina 5H9 i kozji anti-katenina Beta (Research Diagnostic, Inc. New Jersey, USA), uporabom protokola dohvat antigen je opisao Hazelbag et al. [1995]. Tumori su ocijenjeni od strane intenzitet bojenja kao negativan (-), slabo pozitivan (+), umjereno pozitivan (++) i jako pozitivan (+++)
statistička analiza
Χ 2 test ili. Fisherov egzaktni test korišten je za procjenu odnosa između navedenih parametara. pregled Rezultati
učestalosti Loh na 16q22.1 regiji je 75% (tablica 1). pregled Tri tumori (6%) pokazali su isti missense mutacija A592T od eksona 12, od kojih su 2 slučaja imao mutaci, a jedan slučaj imao mutaciji. Informacije za detektiranih polimorfizama je bio uključen u tablici 1. Tri od 187 (1,6%) normalne osobe i 1 280 (0,36%) tumora dojke pokazalo je ovo mutaci. Mutacija nije pronađena u 444 drugih tumora (tablica 2) .table 2 Učestalost A592T missense mutacije kod raka želuca, drugih karcinoma i normalnih pojedinaca pregled Varijable
A592T /ukupna
%
rak želuca pregled 3/50 pregled 6 rak pregled dojke pregled 1/280 pregled 0,36 pregled Ostalo rak *
0/444 pregled 0 pregled normalne populacije pregled 3/187 pregled 1.6 pregled * uključujući debelog crijeva i rektuma, pluća, endometrija, jajnika, testisa, bubrega, karcinoma štitnjače i sarkoma. pregled Osim toga, 3 280 tumora dojke pokazali su još missense mutacija GCC (ALA) → TCC (Ser) na identičan kodona 592, od kojih su 2 slučaja bili klica mutacija; treća je bila nejasna, jer je normalno tkivo je bio nedostupan. Histološka tipa od 4 tumora dojke je duktalni.
U obitelji slučaju 728, otkrili smo da je pacijent s rakom kože i jedan od pacijenata s rakom prostate pokazao istu mutaci kao case 728. Zanimljivo, bez mutacija otkrivene su u uzorcima tumora od ta dva slučaja. Vjerojatno, mutirani aleli su izgubili tijekom razvoja tumora. Napadaj dobi za slučajeve s rasplodnih stanica mutacija u pedigreom je 78 godina za slučaj 728, 73 godina za rak kože i 76 godina za rak prostate. Pregled, nismo pronašli mutaciju SSCP i DNA sekvenciranje u eksona 3 β-katenina gena u 50 želučanih tumora u.
Sedam želučanih tumora pokazalo je neprirodan transkripte E-kadherina. Tumori 360, 369, 568, 717 i 750 prikazuje umetanje introna 7 između eksona 7 i 8. tumora 755 pokazala brisanje posljednjih 72 baza eksona 7, eksona 8 i prvih 124 bazama eksona 9. tumora 808 prikazanih dva neprirodan mRNA, od kojih je jedan imao brisanje eksona 8 i 9, i jedan slučaj s brisanjem posljednjih 84 baza eksona 8 (Tablica 1). pregled Konačno, proveli smo imunohistokemijsku bojenje E-kadherina i beta-katenina. Regionalna varijacija bojenja je otkrivena preko tumora. U ocene +/- ++ /- a +++ /- odnosi se na više od 50% stanica pozitivno, a ocene - /+, - /++ i - /+++ ukazuje više od 50% stanica negativne. Negativna (-) ili smanjiti (- /+, - /++, - /+++ i +/-) izraz E-kadherina i beta-katenina otkrivena je u 21/50 (42%) i 14/50 ( 28%) slučajeva, respektivno. Nadalje, na β-katenina IHC, 11 tumora je također pokazalo pozitivno bojanje u citoplazmi (Tablica 1). Značajna povezanost između negativnog ili smanjene ekspresije E-kadherina i beta-katenina (p = 0.048, Χ 2 test). Također smo otkrili povezanost između smanjene ekspresije E-kadherina i difuzni Histotip (p = 0.04, Fisherov egzaktni test). Pregled Rasprava pregled Visoka učestalost Loh na 16q22.1 regiji snažno sugerira da postoji jedan ili više tumor supresorski geni u ovoj regiji, čiji je gubitak može izazvati karcinogeneze raka želuca. Gen E-kadherina je mapiran na kromosomu 16q22.1 [26]. Snižene ekspresije i mutacija gena E-kadherina u nekoliko vrsta raka, uključujući želučano i lobularni karcinom dojke su identificirani, što ukazuje da je gen E-kadherin tumor supresor genski [2-4], [13-17, 27] , U ovoj studiji 3 slučaja (6%) pokazala identičnu Missense mutacija A592T. Motivi veže kalcij nalazi u ekstracelularnih domena 1-5 smatra kao ključni element za funkciju E-kadherina, jer sintetičkog molekule s jednim aminokiselinskom supstitucijom na motiv koji veže kalcij ne pokazuje ljepljivost [28] , Također, u staničnoj liniji ljudskih MKN45 od raka želuca, koji nema adheziju čvrsto stanica-stanica, 4-amino-kiselina delecija pronađen na granici eksona 6 i 7, koji se smatrao mijenjati konformaciju okružuje ključ veže kalcij motivi i ukinuti ljepljivu svojstvo molekula E-kadherina [29]. Jedinstveno amino-kiselina supstitucija u ovom istraživanju nalazi se u petoj izvanstanične domene E-kadherina, gdje bi mogao postojati motiv veže kalcij. Razumljivo je, dakle, da su mutacije u tri slučaja je uništio i funkciju E-kadherina. Zanimljivo je da su tri slučaja je također pokazala LOH na 16q22.1 sadrži lokus E-kadherina. Tako se može smatrati da su dvije genetski događaja koji nastaju u inaktivacije gena došlo u dva alela gena E-kadherina, respektivno. Rezultati iznad pokazuju da je gen E-kadherin tumor-supresorski gen, jer je u skladu s klasičnom dva učitavanja teoretski gena za suzbijanje tumora [30]. Prethodna istraživanja u lobularni karcinom dojke također podržava to mišljenje [4, 14]. U staničnoj liniji MKN45 je gore navedeno (slabo diferencirani adenokarcinom) s adhezijom slabim staničnim, 12 bp u okvirnu brisanjem gena E-kadherina i gubitak divlji tip alela otkrivene su [29]. Ali ova stanična linija i dalje pokazala snažnu ekspresiju mRNA i proteina, što ukazuje da ne samo da smanjuje ekspresiju, ali i strukturne abnormalnosti se može dovesti inaktivacije sustava stanične adhezije E-kadherina posredovane [29]. Dakle, jedna amino-kiselina supstitucija naći u ovom istraživanju može uzrokovati strukturne promjene E-kadherina i rezultirati prianjanja ograničenom stanica-stanica, iako dva slučaja (23 i 294) su pokazali dovoljno proteina.
Zanimljivo, isti slijed varijanta somatske i zametne linije mutacija pronađena je istovremeno u različitim želučanih bolesnika. Slučaj 23 s somatske mutacije imao pojavu dobi od 56 godina, a slučajevi 294 i 728 sa zametne linije mutacijom imao početak djelovanja dobi od 71 i 78 godina, respektivno. Jedno od objašnjenja za ovaj fenomen mogao biti da je gubitak drugog alela E-kadherina u slučaju 23 dogodila vrlo rano, čime triggerring karcinogeneze relativno rano, u slučaju 23. No, postoji još jedna mogućnost da ta mutacija u slučaju 23 igrao ulogu samo u progresiji tumor, ali ne u inicijaciji, gdje genetskih događaja vjerojatno bi mogao biti odgovoran za inicijaciju raka želuca. Ali slučajevi 294 i 728 s rasplodnih stanica mutacija imala kasnim početkom godine. To može biti zato što je inaktivacija drugog alela dogodio vrlo kasno. Članak je izvijestio da su obvezni nosači sa skraćenim mutacija u genu E-kadherina u njihovim 80-ih i 90-ih godina ostao nepromijenjen [31]. Stoga, daljnje utvrđivanje genetskih i /ili na okoliš za modifikaciju koja bi mogla čine varijablu dobi od početka treba provesti. Posebno, predmet 294 imala tri tumora u želucu, što je u skladu s genetskim tumori obično je višestruka [30].
Frekvenciju (6%) od mutacija A592T u 50 želučanih tumora je gotovo četiri puta da se u normalnoj populaciji opet ukazuje da ova mutacija doista pridonijela tumourigenesis u podskupu želučanih tumora. Nadalje, 0,36% od tumora dojke, a nema drugih tumora, pokazalo je identičan mutaci, što znači da bi moglo biti histološki razlika za ovu mutaciju u raka želuca i drugih karcinoma. Pregled, samo druga dva slučaja izlagao A592T mutaciju u obitelji slučaj 728. Posebno, ova mutacija je otkriven samo u odgovarajućim normalnog tkiva, ali ne i u tumorskom tkivu, što ukazuje da su mutirani aleli izgubljena tijekom tumourigenesis. Iz njih se može zaključiti da će ova mutacija ne može igrati ulogu u tumourigenesis prostate i raka kože, ali to bi mogao biti želuca raka specifičan. Pregled, zaključujemo da je A592T mutacija može povećati životni vijek rizik od razvoja raka želuca, ali je očito varijanta slijed niske pojavnosti. Naši rezultati iz dva različita slijeda varijante na kodon 592 (A592T i A592S), kao i rasplodnih stanica i somatske mutacije, ukazuju na to da kodon je Hotspot mutacija u tumora patogenezi.
Kontrolne točke za hvatišta introna 7 i brisanje eksona 8 i 9 su na razdvajanje mjestima, u skladu s "GU-AG" pravilo za mRNA. Može se nagađati da su ove promjene nisu bile nastaju alternativnim srastanje, jer nema dokaza za alternativnim prekrajanjem se nalaze unutar gena miša E-kadherina [32] i nema neprirodne mRNA detektirane su u noncancerous tkiva. Mutacije na razdvajanje mjestima trebalo biti odgovoran za izmjene E-kadherina mRNA, iako nema mutacije pronađene su na razini DNA u ovoj studiji, vjerojatno zato što je SSCP koristi za mutacije probir ima nisku efikasnost. Dodatnih 2 brisanja pokazala kontrolne točke na ne-razdvajanje mjesta, čija furnirom nije u skladu s "GU-AG" pravilo, možda ukazuje da je preraspodjela u genomske razini može uzrokovati neprirodni mRNA. Prethodne studije su pokazale preskakanje od eksona 8 ili 9 u rakom želuca [24, 33]. Ovi aberacije mogu rezultirati E-kadherina gubitka motiva veže kalcij zbog nedostatka eksona 8 i 9, i skraćenih molekula zbog mutacije pomaka okvira uzrokovanih umetanja i brisanja na kraju olakšavaju raspršivanje stanica karcinoma.
Smanjena ekspresija E- kadherina i β-katenina je pronađen u nekih vrsta raka, uključujući rak želuca [8]. Utvrđeno je heterogena i nestabilan izraz za oba E-kadherina i beta-katenina preko tumora. Pokazano je da je 40% razine E-kadherina adenokarcinoma su postavljena u svojim komponentama intravaskularne tumora u odnosu na njihove ekstra odjeljaka [34]. Jedno objašnjenje može biti da je ulaz karcinoma u intravaskularnom pretinac je povezana s ranijim koracima ekspresiju E-kadherina, i da se nakon izlaska na ekstravaskularnim tkivima povezan je s smanjenom [35]. Budući da je E-kadherina i β-katenina su ključni elementi da se oformi prianjanja kompleks stanica-stanica, gubitak od njih može dovesti do poremećaja u funkciji kompleksa, koji može uzrokovati lijepljenje slab stanica-stanica i prijenosu invazivna svojstva na tumor , Nadalje, smanjenje adhezije stanica-stanica povezano je s gubitkom dodira inhibiciju proliferacije, čime bijeg iz kontrolu rasta signala konačno pokreće karcinogeneze kod tumora u ljudi. [8] U ovom istraživanju, nađeno je povezanost između abnormalnom ekspresijom E-kadherina i P-katenina, sugerirajući da gubitak E-kadherina za vezanje može uzrokovati preraspodjela P-katenina od stanične membrane u citoplazmi. Povećana slobodnog β-katenina u citoplazmi može translociraju u jezgru i dovesti do aktivacije ekspresije gena. Tome u prilog nalazima da su dva slučaja (676 i 738) su pokazali negativno obojeni u unutarnjoj površini membrane i pozitivnim bojanjem u citoplazmi, istovremeno. No, drugi 9 tumora (tablica 1) pokazuju umjeren ili jak bojanje u membrani izlagao pozitivno bojenje u citoplazmi, što ukazuje da je normalno degradacija slobodnog ß-katenina u citoplazmi je blokiran. Također, utvrdili smo povezanost između abnormalnog ekspresije E-kadherina i difuznog Histotip, što ukazuje da su promjene u E-kadherina može igrati ulogu u slabo diferencirani želučanih tumora. Zanimljivo je da je nenormalna ekspresija E-kadherina i /ili katenini je pokazala da je neovisan prognostički marker za kratko preživljavanje u bolesnika s rakom želuca. [8] Od posebnog interesa je otkriće da E-kadherina je neovisni predskazatelj okultnog limfnog čvora i micrometastasis u čvorovima klasificiranih kao br rutinskim patohistološke metodama [8] pregled. Zaključci pregled Naši rezultati su kako promjene E-kadherina i β-katenina igrati ulogu u inicijaciji i napredovanje raka želuca. Ekspresija oba gena smanjuje u karcinomu želuca, ali mehanizam smanjenom nije jasan. LOH, mutacije i promjene u RNA spajanja može objasniti dio silazni E-kadherina u raka želuca. Pregled Izjave pregled Zahvale
Ovaj rad je podržan od strane islandskog Research Council, Sveučilište u Islandu znanosti fond i islandski Cancer Society.
suprotstavljenih interesa pregled Ništa deklarirane pregled

• Case-control studija o utjecaju apolipoproteina E genotipova na želučane rizika i progresiju raka
• Podrška vektor model stroja za dijagnozu limfnih čvorova metastaza kod raka želuca s multidetektorskom kompjutorizirana tomografija: preliminarna studija