Les altérations de la E-cadhérine et β-caténine dans Transformations de cancer

gastriques de la E-cadhérine et β-caténine dans le cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan
Le complexe E-cadhérine-caténine joue un rôle crucial dans l'épithélium Cell- l'adhésion cellulaire et dans le maintien de l'architecture tissulaire. Perturbation dans l'expression ou la fonction de ces résultats complexes en perte d'adhérence intercellulaire, avec possibilité de transformation cellulaire conséquente et la progression tumorale.
Méthodes
Nous avons étudié les modifications de la E-cadhérine et β-caténine dans un ensemble de 50 primaire tumeurs gastriques en utilisant la perte d'hétérozygotie (LOH) analyse, le dépistage de la mutation du gène, la détection de la transcription aberrants et immunohistochimie (IHC).: Résultats
Une fréquence élevée (75%) de LOH a été détecté à 16q22.1 contenant E locus -cadherin. Trois cas (6%) ont montré la mutation faux-sens identique, A592T. Cette mutation ne sont pas susceptibles de contribuer fortement à la carcinogenèse du cancer gastrique, en raison d'une fréquence faible (1,6%) de cette mutation a également été trouvé chez 187 individus normaux. Nous avons également détecté une faible fréquence (0,36% 0%) de cette mutation dans 280 tumeurs du sein et 444 d'autres tumeurs, y compris le côlon et du rectum, du poumon, de l'endomètre, de l'ovaire, du testicule, du rein, des carcinomes de la thyroïde et les sarcomes, respectivement. Nous avons également analysé l'ARNm de la cadhérine E-aberrantes dans les tumeurs gastriques et a constaté que les tumeurs 7 (18%) présentaient des ARNm aberrant, en plus de l'ARNm normal. Ces ARNm aberrants peuvent produire des molécules cadhérine E-anormales, ce qui entraîne une faible adhérence cellule-cellule et le comportement invasif des cellules de carcinome. l'expression réduite de la Cadherine E et β-caténine a été identifié à la fréquence de 42% et 28%, respectivement. Spécialement, 11 tumeurs (22%) présentaient une coloration cytoplasmique positive pour β-caténine IHC. Une association a été trouvée entre l'expression réduite de la E-cadhérine et β-caténine. En outre, une association a été détectée entre l'expression réduite de la E-cadhérine et histotype diffuse.
Conclusion
Nos résultats soutiennent l'hypothèse que les altérations de la E-cadhérine et β-caténine jouent un rôle dans l'initiation et la progression du cancer gastrique .
Contexte
E-cadhérine (120 kDa; chromosome 16q) est un cadhérine classique et constitue la composante fonctionnelle clé de jonctions d'adhérence entre les cellules épithéliales [1]. Il est lié par l'intermédiaire d'une série de protéines sous-couches, les caténines (α, ß et y) vers le cytosquelette d'actine [1]. Ce lien entre cadhérines transmembranaires et les filaments d'actine du cytosquelette est nécessaire de former une forte adhésion cellule-cellule. Un E-cadhérine intact - complexe caténine est nécessaire pour le maintien de l'adhésion intercellulaire normal. À la lumière de cela, plusieurs groupes ont proposé que dans les carcinomes, les fonctions E-cadhérine comme une molécule invasion suppresseur de telle sorte que ses permis de perte ou améliore l'invasion des tissus normaux adjacents. Les études immunohistochimiques dans les cancers humains, y compris le cancer gastrique, ont souvent montré qu'une proportion de carcinomes invasifs et des carcinomes in situ
montrent des niveaux aberrants de E-cadhérine et /ou l'expression de caténine par rapport à leur tissu normal lié [2-4] . En général, la E-cadhérine et caténine coloration est forte dans les cancers bien différenciés qui maintiennent leur adhérence cellulaire et sont moins invasives, mais est réduite dans les tumeurs mal différenciées qui ont perdu leur adhérence cellule-cellule et montrer un comportement envahissant forte [2, 3].
E-cadhérine est impliqué dans l'inhibition de contact de la croissance cellulaire en induisant un arrêt du cycle cellulaire [5]. Il a la capacité d'inhiber la prolifération cellulaire par la surexpression de p27 impliqués dans la régulation du cycle cellulaire [5], bien que le mécanisme par lequel la E-cadhérine régule p27 est encore peu clair. Par conséquent, la E-cadhérine, généralement décrit comme un suppresseur d'invasion [6], peut agir comme un suppresseur majeur de croissance /prolifération.
Une fonction importante de β-caténine dans la signalisation cellulaire, a été élucidé [7]. En l'absence d'un signal mitotique à partir de l'extérieur de la cellule, β-caténine est séquestrée dans un complexe avec le produit polypose adénomateuse familiale (APC) du gène, une sérine thréonine glycogène synthétase kinase (GSK-3β) et une axine protéine adaptatrice (ou un homologue Conductin), permettant la phosphorylation et la dégradation de la β-caténine libre par le système ubiquitine-protéasome [8]. Lorsqu'un signal mitotique est administré par la voie Wnt, par association de la famille Wg /Wnt des glycoprotéines sécrétées et leur récepteur membranaire de type frizzled, elle conduit à l'activation de la (Dsh) protéine décoiffée, qui est recruté à la membrane cellulaire. DSH actif régule négativement le complexe protéique, de sorte qu'il ne peut plus phosphoryler β-caténine, qui est alors pas dégradée. La libération de β-caténine à partir du complexe de phosphorylation et de la dégradation favorise la stabilisation β-caténine et de la signalisation. Cela se traduit par une augmentation de la β-caténine cystolic libre qui subit une translocation vers le noyau et se fixe les facteurs de transcription et Lef Tpi, conduisant à l'activation de l'expression des gènes directement. Par conséquent β-caténine exécute des fonctions distinctes dans l'adhérence cellule-cellule E-cadhérine médiation et dans la signalisation Wnt [8].
Perte du locus de la E-cadhérine sur le bras long du chromosome 16 (16q22) se produit dans l'estomac (24 %), hepatocellular (50%), lobulaire (50-100%) et de l'œsophage (66%) carcinomes [4, 9-12]. Il y a eu plusieurs rapports sur les mutations du gène E-cadhérine dans les cancers humains [13]. Dans les tumeurs mal différenciées, telles que le cancer du sein lobulaire et le cancer gastrique de type diffus, mutations cadhérine E jouent un rôle important dans le développement tumoral [14, 15]. Plusieurs études ont rapporté des mutations germinales dans le gène E-cadhérine dans les familles avec un type diffus héréditaire de cancer gastrique [16, 17]. Seule une minorité de cancers gastriques peut être expliquée par des mutations E-cadhérine. mutations somatiques fréquentes du gène β-caténine ont été trouvés dans les petits adénomes colorectaux et cancer gastrique de type intestinal [18, 19]. La plupart des mutations impliquées la perte de sérines ou thréonines de la région de phosphorylation de GSK-3β. altérations génétiques dans β-caténine abolissant adhésivité entre cellules ont été observées dans les deux lignées cellulaires de cancer gastrique, HSC39 et 40A; les deux dérivent de la même chevalière cellulaire du carcinome de l'estomac et de montrer un modèle de croissance diffuse [20, 21]. Cette mutation se traduit par une β-caténine tronquée dépourvue de la région d'interaction avec les β-caténine. La transfection de ces lignées cellulaires de type sauvage β-caténine restaure adhésivité cellulaire [21].
Ici, nous avons effectué la E-cadhérine et de la bêta-caténine mutation du gène, et l'analyse de l'expression dans une série de 50 tumeurs gastriques primaires afin de comprendre mieux l'implication des altérations de la E-cadhérine et β-caténine dans la carcinogenèse du cancer gastrique. Matériaux et méthodes
échantillons
inclus dans l'étude étaient 50 tumeurs et des échantillons normaux correspondants, dont deux tumeurs (17 et 23) étaient de la même famille, le reste sporadique (tableau 1). Ces cas ont été diagnostiqués par le Département de pathologie, Hôpital universitaire d'Islande. On a obtenu un tissu fraîchement le jour de l'intervention chirurgicale ou d'un matériau enrobé de paraffine. Informations concernant le stade de la tumeur, histotype et le grade a également été acquis dans le même département. ADN pour la PCR a été isolé par la proteinase K traitement [22]. L'ARN pour la RT-PCR a été extrait en utilisant le réactif Tri (Molecular Research Center, INC. USA). Pour la mutation A592T, on a criblé 187 individus normaux, 280 et 444 sein d'autres patients atteints de cancer du côlon et du rectum, du poumon, de l'endomètre, de l'ovaire, du testicule, du rein, des carcinomes de la thyroïde et sarcomes. Tous les identificateurs individuels ont été retirés des échantillons de contrôle avant l'analyse, et les enquêteurs ont ainsi été aveuglés à l'identification des échantillons qui ne peut plus être attribuée à des individus spécifiques. Le consentement a été présumé pour les échantillons de patients. Pour les cas 294 et 728 avec A592T mutation, nous avons analysé leurs pedigrees et constaté qu'il n'y avait pas d'autres cas de cancer dans le pedigree des cas 294, mais il y avait d'autres 5 cas de cancer dans le pedigree de cas 728, dont 2 cancers de la prostate, 1 peau le cancer, le cancer du poumon et de 1 1 d'un cancer peu clair origin.Table 1 Résumé des altérations de la E-cadhérine et la β-caténine dans une série de 50 tumeurs gastriques.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad mutations génétiques
Aberrant ARNm
E-cad
échantillon de
β-cat



à 16q22.1
et polymorphismes

E-cad
IHC
IHC

1
T3N3
diff
+
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) à cd832
ND | -
- 23
rencontré
+
GCC (Ala) → ACC (Thr ) à cd592 *
ND | +++ /-
+++ /-
43
T3N2
diff
+
- -
-
+++ /-
50
T3N1
diff
-
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) à cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
-
CAC (His) → CAT (His) à cd632
- +++ /-
++ /- ∇
GGC (Gly) → GGT (Gly) à cd865
360
T2N1
int
G3
+
IVS4 + 10C → G
+ ♣
++ /-
+/-
369
rencontré
+
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR-71C → G
568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (Asn) → AAT (Asn) à cd751
636
T3N1
diff
+
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (Asn) → AAT (Asn) à cd751
694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) à cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND de l'AAC (Asn) → AAT (Asn) à cd751
- +++ /-
+++ /- ∇
738
T3N2
diff
+
- -
- -∇
750
rencontré
ND de l'AAC (Asn) → AAT (Asn) à cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) à cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30 3
7
21
14
total
40
50
38
50
50
%
75
6
18
42
28
T, tumeur (taille et invasivité); N, noeud (degré de métastases); M, les métastases; G1, bien différencié; G2, modérément différencié; G3, mal différencié; G4, non différenciée; diff, diffus (degré de différenciation = G4); mi, mixte; int, de l'intestin; rencontré, tumeur métastatique probablement de tumeur à l'estomac; squ, épithéliales squameuses; LOH, perte d'hétérozygotie; E-cad, E-cadhérine; β-cat, β-caténine; IHC, immunohistochimie; cd, codon; UTR, région non traduite; +, LOH positif, aberrant E-cad ARNm, E-cad et β-cat IHC; -, LOH négative, E-cadhérine mutation du gène aberrant E-cad ARNm, E-cad et β-cat IHC; ND, non déterminé ou pas fait; +/-, ++ /- +++ Et /-, plus de 50% de cellules positives; - /+ - /++ Et - /+++, plus de 50% des cellules négatives; *, Une mutation somatique; ♦, mutation germinale; ♣, l'insertion de l'intron entre les exons 7 7 et 8, codon d'arrêt 374; ♥, suppression des 72 dernières bases de l'exon 7, exon 8 et 124 premières bases de l'exon 9, codon stop 322; ♠, délétion des exons 8 et 9; suppression des dernières 84 bases de l'exon 8, codon stop 358; ∇, ces échantillons ont également montré une coloration cytoplasmique pour β-caténine IHC détermination
LOH
marqueurs microsatellites utilisés pour l'analyse de LOH du chromosome 16q étaient:. D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 et D16S512 pour la 16q22.1 région contenant E locus -cadherin (base de données du génome). Les produits de réaction en chaîne par polymérase (PCR) ont été séparés dans un gel de séquençage à base d'acrylamide et transférés sur une membrane en nylon chargée positivement, Hybond-N + (Amersham, Aylesbury, UK) et cuits pendant au moins 2 h à 80 ° C. Le procédé de détection non-radioactive utilisée pour visualiser les produits de PCR a été décrit précédemment [23]. Les autoradiogrammes ont été inspectés visuellement par au moins deux examinateurs, comparant l'intensité des allèles de l'ADN normal et la tumeur. L'absence ou une diminution significative d'un allèle dans la tumeur par rapport à l'échantillon de référence a été considérée comme normale LOH.
Dépistage des mutations
Tous les 16 exons du gène de la E-cadhérine et de l'exon 3 du gène de la β-caténine ont été criblés pour mutations d'inactivation avec une PCR-SSCP (polymorphisme de conformation simple brin) analyse des modèles d'ADN génomique. Les amorces pour la E-cadhérine et β-caténine utilisées dans l'analyse SSCP ont été décrits dans notre précédent article [4] et Park et al. [1999], respectivement, et commandés auprès de Pharmacia Biotech ou TAG Copenhagen A /S. L'ADN génomique a été utilisé à 30 ng par mélange réactionnel 25 pi contenant 5 pmol de l'amorces avant et inverse, 2,5 nmoles de chaque dNTP, 0,5 unités de polymerase Dynazyme. Les échantillons ont été amplifiés dans 35 cycles constitués de 30 secondes de dénaturation à 94 ° C, 30 s d'hybridation à 55-70 ° C et, enfin, 60 l d'extension à 72 ° C. Un démarrage à chaud a été utilisé en ajoutant l'enzyme dans premier cycle à environ 70 ° C, après un temps de pré-incubation de 5 min à 94 ° C. Une aliquote de 4 ul des produits de PCR ont été mélangés avec 7 ul de colorant de formamide (95% formamide, 0,05% de bleu de bromophénol et 0,05% de xylene cyanol), dénaturés à 94 ° C pendant 10 min et snapcooled sur la glace. Des portions aliquotes de 2 ul ont été analysées simultanément sur les deux non-dénaturantes (gels de Polyacrylamide à 5% d'acrylamide avec 2% de reticulation), contenant soit 5% de glycerol ou dépourvues de glycérol. L'électrophorèse a été effectuée dans 1 x TBE verticaux sur des gels à 6w pendant une nuit ou pendant 6 h à température ambiante. Les produits de PCR ont été visualisés comme les marqueurs microsatellites. Des échantillons avec des bandes de mobilité anormales ont été amplifiés à nouveau pendant 35 cycles comme décrit ci-dessus. Une aliquote de 5 pi des produits de PCR a ensuite été incubé avec 10 U exonulease I et 2 U phosphatase alcaline de crevette pour enlever les amorces et les dNTP (US70995, Amersham) excessives. Les séquences des deux brins ont été déterminées par thermo ADN polymérase séquénase (Thermo Sequenase radiomarqué Terminator Cycle Sequencing kit, Amersham) en utilisant les deux amorces de PCR initiales. Nous avons effectué l'analyse A592T de mutation sur les cancers, à l'exception du cancer d'origine incertaine, dans la famille des cas 728 en utilisant le séquençage direct.
Aberrant ARNm criblage
1-5 pg de l'ARN total a été transcrit en inverse en ADNc en utilisant trousse de synthèse brin d'ADNc (Amersham Pharmacia Biotech). Tous les échantillons ont été examinés pour E-cadhérine suppressions d'ADNc et insertions. E-cadhérine ADNc a été amplifié en utilisant des paires d'amorces EX7 REX10 /2 Ex9 et /2a-rEx11 pour la région des exons 7-10 codant pour des sites de liaison de calcium [24]. Les produits de PCR ont été visualisés par électrophorèse sur gel d'agarose. des fragments anormaux ont été excisées et séquences en utilisant des amorces avant et inverse pour déterminer les limites des suppressions et des insertions. Ici, nous avons utilisé BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit Ready Reaction (Perkin-Elmer, Foster City, CA) et séquenceur automatisé ABI PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) pour le séquençage
coloration immunohistochimique
immunohistochimie pour E-cadhérine et β caténine a été effectuée sur des coupes de 5 um à partir de blocs de tissus tumoraux paraffine avec des anticorps monoclonaux E-cadhérine 5H9 et Goat Anti-caténine Beta (diagnostic Research, Inc. NJ, USA), respectivement, en utilisant le protocole de récupération d'antigène décrit par Hazelbag et al. [1995]. Tumeurs ont été classés par l'intensité de la coloration négative (-), faiblement positif (+), (++) et (+++) analyse modérément positif fortement positive
statistique
A Χ 2 essai ou. Résultats de test exact de Fisher a été utilisé pour évaluer la relation entre les paramètres ci-dessus.
la fréquence de LOH à région 16q22.1 était de 75% (tableau 1) Trois tumeurs de. (6%) ont montré la même mutation A592T des faux-sens exon 12, dont 2 cas eu mutation germinale, et un cas a eu une mutation somatique. Des informations sur les polymorphismes détectés a été inclus dans le Tableau 1. Trois de 187 (1,6%) des individus normaux et 1 280 (0,36%), les tumeurs du sein a montré que cette mutation de lignée germinale. La mutation n'a pas été trouvé dans 444 autres tumeurs (tableau 2) .Table 2 Fréquence de mutation dans A592T missense cancer gastrique, le cancer et d'autres individus normaux
Variables
A592T /total
%
cancer gastrique
3/50
6 cancer du sein

1/280
0,36
Autre cancer *
0/444
0
population normale
3/187
1.6
* y compris du côlon et du rectum, du poumon, de l'endomètre, de l'ovaire, du testicule, du rein, des carcinomes de la thyroïde et les sarcomes.
en outre, 3 280 tumeurs du sein ont montré une autre mutation GCC missense (Ala) → TCC (Ser) au niveau du codon 592 identique, dont 2 cas étaient mutation germinale; le troisième était incertaine parce que le tissu normal était indisponible. Le type histologique des tumeurs 4 du sein était canalaire.
Dans la famille des cas 728, nous avons constaté que le patient avec le cancer de la peau et l'un des patients atteints de cancer de la prostate a montré la même mutation germinale comme cas 728. Fait intéressant, aucune mutation ont été détectés dans les échantillons de tumeur de ces deux cas. Probablement, les allèles mutés ont été perdus au cours du développement de la tumeur. Le début des siècles pour les cas avec des mutations germinales dans le pedigree avait 78 ans pour les cas de 728, 73 ans pour le cancer de la peau et de 76 ans pour le cancer de la prostate.
Nous ne détectons mutation par SSCP et le séquençage d'ADN dans l'exon 3 le gène β-caténine dans les tumeurs gastriques 50.
Sept tumeurs gastriques ont montré la transcription aberrants de la E-cadhérine. Tumeurs 360, 369, 568, 717 et 750 affichés insertion de l'intron 7 entre les exons 7 et 8. Tumeur 755 a montré la suppression des 72 dernières bases de l'exon 7, exon 8 et 124 premières bases de l'exon 9. Tumeur 808 affiché deux ARNm aberrants, dont on avait délétion des exons 8 et 9, et un cas avec la suppression des 84 dernières bases de l'exon 8 (Tableau 1).
Enfin, nous avons effectué une coloration immunohistochimique de la E-cadhérine et de β-caténine. Une variation régionale de la coloration a été détectée dans les tumeurs. Les notations +/-, ++ /- et +++ /- reportez-vous à plus de 50% de cellules positives, et scorings - cellules /+++ indiquant plus de 50% négatifs - /+, - /++ et. Négatif (-) ou réduite (- /+ - /++ - /+++ et +/-) l'expression de la E-cadhérine et de β-caténine a été détectée dans 21/50 (42%) et 14/50 ( 28%) des cas, respectivement. En outre, pour la β-caténine IHC, 11 tumeurs ont également montré une coloration cytoplasmique positif (Tableau 1). Une association significative a été trouvée entre l'expression négative ou réduite de E-cadhérine et β-caténine (p = 0,048, Χ 2 test). En outre, nous avons trouvé une association entre l'expression réduite de la E-cadhérine et histotype diffuse (p = 0,04, Fisher test exact) Rapport de.
La fréquence élevée de LOH à région 16q22.1 suggère fortement qu'il existe une ou plusieurs les gènes suppresseurs de tumeur dans cette région, dont la perte pourrait déclencher la carcinogenèse du cancer gastrique. Le gène de la E-cadhérine a été localisé sur le chromosome 16q22.1 [26]. L'expression et des mutations génétiques réduites de la E-cadhérine dans plusieurs types de cancers, y compris le cancer de l'estomac et du sein lobulaire ont été identifiés, ce qui indique que le gène de la E-cadhérine est un gène suppresseur de tumeur [2-4], [13-17, 27] . Dans cette étude, 3 cas (6%) ont montré l'identique A592T mutation faux-sens. Les motifs de liaison du calcium situés dans les domaines extracellulaires 1-5 sont considérés comme l'élément essentiel pour la fonction de la E-cadhérine, puisqu'une molécule synthétique avec une substitution d'acide aminé unique dans un motif de liaison du calcium ont montré aucune adhésivité [28] . En outre, dans la lignée cellulaire humaine MKN45 de cancer de l'estomac, ce qui manquait serré adhésion cellule-cellule, une délétion 4-amino-acide a été trouvé à la limite entre les exons 6 et 7, qui a été considéré comme de modifier la conformation entourant la clé liant le calcium motifs et d'abolir la propriété adhésive des molécules cadhérine E-[29]. La substitution d'acide aminé unique dans la présente étude est situé dans le cinquième domaine extracellulaire de la E-cadhérine, où un motif de liaison au calcium pourrait exister. Il est concevable, par conséquent, que les mutations dans ces trois cas également détruit fonction de la E-cadhérine. Fait intéressant, les trois cas ont également montré LOH à 16q22.1 contenant le locus E-cadhérine. Ainsi, il peut être considéré que deux événements génétiques conduisant à une inactivation du gène sont produits dans les deux allèles du gène de la E-cadhérine, respectivement. Les résultats ci-dessus indiquent que le gène de la E-cadhérine est un gène suppresseur de tumeur parce qu'elle est conforme à la théorie des deux hit classique pour les gènes suppresseurs de tumeurs [30]. Des études antérieures dans le cancer du sein lobulaire soutiennent également cette opinion [4, 14]. Dans la lignée cellulaire MKN45 mentionné ci-dessus (mal adénocarcinome différencié) avec une faible adhésion cellule-cellule, à 12 pb dans le cadre suppression du gène E-cadhérine et la perte de l'allèle de type sauvage ont été détectés [29]. Mais cette lignée cellulaire a montré encore une forte expression des ARNm et des protéines, ce qui suggère que non seulement l'expression, mais réduit également les anomalies structurelles elles-mêmes peuvent entraîner une inactivation du système d'adhésion des cellules E-cadhérine à médiation [29]. Par conséquent, une substitution d'acide aminé unique trouvé dans cette étude peut provoquer des changements structurels de la E-cadhérine et entraîner limitée adhésion cellule-cellule, bien que deux des cas (23 et 294) ont montré l'expression de protéines suffisante. Le plus intéressant, le même variante de séquence de la mutation somatique et germinale a été constaté à la fois chez des patients différents gastriques. Case 23 avec mutation somatique avaient un âge de début de 56 ans, mais les cas 294 et 728 avec mutation germinale eu âges début de 71 et 78 ans, respectivement. Une explication de ce phénomène pourrait être que la perte de second allèle de E-cadhérine en cas 23 a eu lieu très tôt, ce qui triggerring carcinogenèse relativement tôt dans le cas 23. Mais il y a une autre possibilité que cette mutation dans le cas où 23 a joué un rôle que dans la progression de la tumeur, mais pas dans l'initiation, où d'autres événements génétiques pourraient probablement être responsables de l'initiation du cancer gastrique. Mais les cas 294 et 728 avec des mutations germinales avaient l'âge de début tardif. Cela peut être parce que l'inactivation d'un autre allèle a eu lieu très tard. Un article a rapporté que les transporteurs obligatoires avec des mutations dans le gène tronqué E-cadhérine dans leurs années 80 et 90 est resté inchangée [31]. Par conséquent, outre l'identification des modificateurs génétiques et /ou environnementales qui pourraient expliquer l'âge variable de déclenchement doit être effectuée. Spécialement, le cas 294 avait trois tumeurs dans l'estomac, ce qui est en ligne avec les tumeurs génétiques étant généralement multiples [30].
La fréquence (6%) de la mutation A592T dans 50 tumeurs gastriques est presque quatre fois plus que dans la population normale , ce qui suggère encore une fois que cette mutation en effet contribué à la tumorigenèse dans un sous-ensemble de tumeurs gastriques. Futhermore, 0,36% des tumeurs du sein, et pas d'autres tumeurs, a montré une mutation germinale identique, ce qui indique qu'il pourrait y avoir une différence histologique pour cette mutation dans le cancer gastrique et d'autres cancers.
Seulement deux autres cas exposés A592T mutation dans la famille de 728. spécialement cas, cette mutation n'a été détectée que dans le tissu normal correspondant, mais pas dans le tissu tumoral, suggérant que les allèles mutés ont été perdus au cours de la tumorigenèse. De ceux-ci, nous pouvons conclure que cette mutation ne peut pas jouer un rôle dans la tumorigenèse de la prostate et le cancer de la peau, mais il pourrait être gastrique cancer spécifique.
Nous concluons que la mutation A592T peut augmenter le risque à vie de développer un cancer gastrique, mais il est clairement une variante de séquence de faible pénétrance. Nos résultats de deux séquences différentes variantes au niveau du codon 592 (A592T et A592S), comme germinales et somatiques mutations, suggèrent que ce codon est un point chaud de mutations dans la pathogenèse de la tumeur.
Les points d'arrêt pour les insertions de intron 7 et la suppression des exons 8 et 9 sont des sites d'épissage, conformément à l'article "GU-AG" pour l'ARNm épissage. Il peut être supposé que ces modifications ne sont pas générées par épissage alternatif, car pas de preuves pour l'épissage alternatif ont été trouvés dans le gène de souris E-cadhérine [32] et aucun ARNm aberrants ont été détectés dans les tissus non cancéreux. Les mutations au niveau des sites d'épissage devrait être responsable des altérations de la E-cadhérine ARNm, bien que aucune mutation n'a été trouvée au niveau de l'ADN dans cette étude, probablement parce que la SSCP utilisée pour le criblage de mutation a une faible efficacité. Un supplément de 2 suppressions ont montré des points d'arrêt sur des sites non-épissage, dont l'épissage est pas conforme à la règle "GU-AG", indiquant peut-être qu'un réarrangement de niveau génomique peut provoquer des ARNm aberrants. Des études antérieures ont montré le saut de l'exon 8 ou 9 dans le cancer gastrique [24, 33]. Ces aberrations peuvent entraîner des E-cadhérines perdre des motifs de liaison du calcium en raison du manque d'exons 8 et 9, et des molécules tronquées en raison de mutations de causées par des insertions et des suppressions, enfin facilitant la diffusion des cellules de carcinome.
Expression réduite des E- cadhérine et β-caténine a été trouvé dans certains cancers, notamment le cancer gastrique [8]. expression hétérogène ou instable pour les E-cadhérine et β-caténine dans les tumeurs a été trouvé. Il a été démontré que dans 40% des adénocarcinomes niveaux E-cadhérine ont été élevés dans leurs composants de tumeur intra-vasculaires par rapport à leurs compartiments extravasculaires [34]. Une explication pourrait être que l'entrée d'un carcinome dans un compartiment intravasculaire est associée à une régulation positive de l'expression de la E-cadhérine, et la sortie subséquente dans les tissus extravasculaires est associée à la régulation négative [35]. Depuis la E-cadhérine et β-caténine sont les éléments essentiels pour former un complexe d'adhésion cellule-cellule, la perte d'entre eux peut entraîner la perturbation de la fonction du complexe, ce qui peut provoquer une faible adhérence cellule-cellule et conférer des propriétés invasives sur une tumeur . En outre, la réduction adhésion cellule-cellule est associée à une perte d'inhibition de contact de la prolifération, permettant ainsi échapper à partir du signal de commande de croissance, enfin déclencher la carcinogenèse du cancer humain [8]. Dans cette étude, une association entre l'expression anormale de la E-cadhérine et de β-caténine a été trouvé, ce qui suggère que la perte de liaison peut provoquer une redistribution de la β-caténine, à partir de la membrane cellulaire vers le cytoplasme E-cadhérine. La β-caténine libre augmenté dans le cytoplasme peut translocation vers le noyau et conduire à l'activation de l'expression génique. Cette hypothèse est étayée par les résultats que les deux cas (676 et 738) ont présenté une coloration négative dans la surface interne de la membrane et une coloration positive dans le cytoplasme, en même temps. Mais 9 autres tumeurs (tableau 1) montrant une coloration modérée ou forte dans la membrane présentaient également une coloration positive dans le cytoplasme, ce qui suggère que la dégradation normale de la β-caténine libre dans le cytoplasme est inhibée. En outre, nous avons trouvé une association entre l'expression anormale de la E-cadhérine et histotype diffuse, ce qui indique que les altérations de la E-cadhérine peuvent jouer un rôle dans les tumeurs gastriques mal différenciées. Fait intéressant, l'expression aberrante de la E-cadhérine et /ou des caténines a été montré comme un marqueur pronostique indépendant pour la survie courte chez les patients atteints de cancer gastrique [8]. Un intérêt particulier est la constatation que la E-cadhérine est un prédicteur indépendant de ganglionnaire occulte et micrométastases dans les ganglions classés comme Non par des méthodes histopathologiques de routine Conclusions de [8].
Nos résultats soutiennent que les modifications de la E-cadhérine et β-caténine jouent un rôle dans l'initiation et la progression du cancer gastrique. L'expression des deux gènes sont réduits dans le cancer gastrique, mais le mécanisme de régulation négative est pas claire. Déclarations de LOH, des mutations et des altérations de l'épissage d'ARN pourraient expliquer une partie de la régulation négative de l'E-cadhérine dans le cancer gastrique.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par le Conseil islandais de la recherche, l'Université des sciences Islande Fonds et de la Société islandaise du cancer.
intérêts concurrents Aucun déclaré

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