Hire Restaurant vum E-cadherin an β-catenin zu gastric cancer

hire Restaurant vum E-cadherin an β-catenin zu gastric Kriibs VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung D'E-cadherin-catenin komplex spillt eng wichteg Roll an epithelial cell- Zell Haftung an der Ënnerhalt vun Otemschwieregkeeten Architektur. Perturbation an der Expressioun oder Funktioun vun dëse komplexe Resultater am Verloscht vun intercellular Haftung, mat méiglech konsequent Zell Transformatioun an entholl Werdegang. VerfÜgung Method VerfÜgung Mir der hire Restaurant vum E-cadherin an β-catenin zu engem Set vu 50 studéiert Primärschoul gastric erhéijen vum Verloscht vun heterozygosity (Loh) Analyse benotzt, Gentherapie stattfannen Duerchmusterung, erkennen aberrant gët an immunohistochemistry (IHC). VerfÜgung Resultater VerfÜgung a héich Frequenz (75%) vun Loh war um 16q22.1 fonnt wouvun E -cadherin nët. Dräi Fäll (6%) huet de identesch missense stattfannen, A592T. Dëst stattfannen ass net wahrscheinlech staark un der carcinogenesis vun gastric Kriibs ze droen, well eng héich Frequenz (1,6%) vun dëser stattfannen och zu 187 normal Persounen fonnt gouf. Mir fonnt och eng héich Frequenz (0.36%, 0%) vun dëser stattfannen an 280 Broscht erhéijen an 444 anere erhéijen, inklusiv Colon an rectum, haett, endometrium, ovary, testis, Nier, Schild carcinomas an sarcomas, bzw.. Mir analyséieren och déi aberrant E-cadherin mRNAs an der gastric erhéijen a fonnt, datt 7 erhéijen (18%) aberrant mRNAs zousätzlech zu der normaler mRNA haten. Dës aberrant mRNAs produzéiere kann Manque E-cadherin Molekülle geplatzt schwaach Zell-Zell Haftung an invasiv Behuele vun carcinoma Zellen. Reduzéiert Ausdrock vu E-cadherin an β-catenin war op der Frequenz vun 42% an 28% identifizéiert, bzw.. Speziell, Schatzkummer 11 erhéijen (22%) positiv cytoplasmic staining fir β-catenin IHC. Eng Associatioun war tëscht reduzéiert Ausdrock vu E-cadherin an β-catenin fonnt. Ausserdeem, war eng Associatioun tëscht reduzéiert Ausdrock vu E-cadherin an diffusen histotype fonnt. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Eis Resultater d'Hypothes Ënnerstëtzung déi hire Restaurant vum E-cadherin an β-catenin eng Roll an der Initiatioun an Werdegang vun gastric Kriibs Leeschtung . VerfÜgung Background VerfÜgung e-cadherin (120 kDa; chromosome 16q) ass eng klassesch cadherin a Formen de Schlëssel funktionell Komponent vun onvergläichleche junctions tëscht epithelial Zellen [1]. Et ass duerch eng Rei vun undercoat Proteinen gebonnen, déi catenins (α, β an γ) an den actin cytoskeleton [1]. Dëst linkage tëscht transmembranous cadherins an actin Filamenter vun der cytoskeleton ass néideg staark Zell-Zell Haftung fir Form. Eng intakt E-cadherin - catenin komplex ass fir den Ënnerhalt vun normal intercellular Haftung néideg. Am Liicht vun dëser, hu verschidden Gruppen proposéiert, datt an carcinomas, E-cadherin Funktiounen wéi eng Invasioun suppressor Protein sou datt seng Verloscht Genehmegungen oder der Invasioun vun bascht normal Stoffer verbessert. Immunohistochemical Studien am mënschleche Cancers, dorënner gastric Kriibs, hunn dacks gewisen, datt en Deel vun invasiv carcinomas an carcinomas zu situ aberrant Niveau vun E-cadherin an /oder catenin Ausdrock am Verglach zu hire Zesummenhang normal Otemschwieregkeeten weisen VerfÜgung [2-4] . Am Allgemengen, E-cadherin an catenin staining zu gutt-ënnerscheet Cancers staark ass, dass hir Zell adhesiveness erhalen a sinn manner invasiv, mä ass vun Pro-ënnerscheet erhéijen reduzéiert déi hir Zell-Zell Haftung a weisen staark invasiv gelooss verluer hunn [2, 3]. VerfÜgung E-cadherin ass an Kontakt inhibition vun Zell Wuesstem Équipe vun Zell Zyklus verhaft Pinguin [5]. Et ass d'Fäegkeet Zell Zouhuelen vun der upregulation vun p27 an der Zell Zyklus Regulatioun [5], obwuel de Mechanismus vun deem reguléieren E-cadherin p27 kloer ass nach Équipe zu inhibit. Dofir, E-cadherin, allgemeng als eng Invasioun suppressor beschriwwen [6], als e grousse Wuesstem /Prolifératioun suppressor Akt kann. VerfÜgung Eng wichteg Funktioun vun β-catenin zu Zell sécher, huet opgekläert ginn [7]. An d'Flichte vun engem mitotic Signal vun ausserhalb der Zell, β-catenin ass zu engem Komplex mat der adenomatous polyposis belaascht (APC) Gentherapie Produit, eng serine threonine Glucogène synthetase kinase (GSK-3β) an en adapter FAQ axin sequestered (oder e homologue conductin), Meldunge phosphorylation an ofgeschnidden vun gratis β-catenin vun der ubiquitin-proteasome System [8]. Wann e mitotic Signal vun der Wnt Passerelle geliwwert gëtt, déi vun der Associatioun vun de Wg /Wnt Famill vun secreted glycoproteins an hir Membran receptor frizzled, féiert dat zu Aktivatioun vun der disheveled (DSH) FAQ, déi zu der Zell Membran agestallt ass. Der Aktivatioun DSH downregulates d'FAQ komplex, sou datt et net méi β-catenin phosphorylate kann, wat ass dann net deforméiert. Der Verëffentlechung vun β-catenin vum phosphorylation an ofgeschnidden komplex ënnerstëtzt β-catenin Stabiliséierung a sécher. Dëst Resultat vun enger Erhéijung vun gratis cystolic β-catenin déi un d'Keimzell translocates a Photo'en direkt d'Transkriptiouns Faktoren Lef an Tcf, zu der Aktivatioun vun der Gentherapie Ausdrock Haaptfiguren. Dofir β-catenin stécht verschidde Funktiounen am E-cadherin-mediated Zell-Zell Haftung an Wnt sécher [8]. VerfÜgung Verloscht vun der E-cadherin nët op de laange Aarm vun chromosome 16 (16q22) existeiert an gastric (24 %), hepatocellular (50%), lobular Broscht (50-100%) an oesophageal (66%) carcinomas [4, 9-12]. Et muss zu Mënsch Cancers puer Reportagen op E-cadherin Gentherapie kennen ginn [13]. An schlecht-ënnerscheet erhéijen, wéi lobular Broscht Kriibs an diffusen-Typ gastric Kriibs, E-cadherin kennen spillen eng wichteg Roll am entholl Entwécklung [14, 15]. Puer Studien hunn zu Famillje mat enger ierflecher diffusen Typ vun gastric Kriibs [16, 17] germline Projet'en an d'E-cadherin Gentherapie gemellt. Nëmme kann eng Minoritéit vun gastric Cancers vun E-cadherin kennen virgesin gin. Reegelméissegen somatic Projet'en vun β-catenin Gentherapie hunn zu klenge colorectal adenomas an intestinal Typ gastric Kriibs [18, 19] fonnt ginn. Déi meescht vun de Projet'en Équipe de Verloscht vun serines oder threonines aus der GSK-3β phosphorylation Regioun. Genetesch hire Restaurant an β-catenin Ofschaaffe Zell-Zell adhesiveness goufen an zwou gastric Kriibs Zell Linnen, HSC39 an 40A observéiert; souwuel ergi sech aus der selwechter Zell carcinoma vun de Mo. signet Ring a weisen eng diffusen Wuesstem Muster [20, 21]. Dëst stattfannen Resultater an engem gekierzt β-catenin datt d'Regioun fir dÉxistenz β-catenin Éloquence. Transfection vun dësen Zell Linnen mat Wëld-Typ β-catenin bewosst adhesiveness Restauratioun [21]. VerfÜgung Hei, mir standing E-cadherin a Beta-catenin Gentherapie stattfannen an Ausdrock Analyse vun enger Serie vun 50 Primärschoul gastric erhéijen, fir ze verstoen besser d'Bedeelegung vun den hire Restaurant vum E-cadherin an β-catenin an der carcinogenesis vun gastric Kriibs. VerfÜgung spontan a Methoden VerfÜgung Echantillon VerfÜgung vun der Etude waren 50 erhéijen an entspriechend normal Echantillonen, vun deenen zwee erhéijen (17 an 23) goufen aus der selwechter Famill, de Rescht sporadesch (Table 1). Dës Fäll goufen duerch de Chiffer vu wirklech, Universitéit Hospital vun Island diagnostizéiert. Ray kritt frësch op den Dag vun Agrëff oder aus paraffin-Ënnerbewosstsinn Material. Informatiounen iwwert d'entholl Etapp, histotype an Schouljoer war och aus der selwechter Departement chrétienne. DNA fir Hinnen alleguer war vun der proteinase K Behandlung isoléiert [22]. RNS fir RT-Hinnen alleguer war mat Dräilännereck Reagent (cuisine Research Center, INC. USA) ofgebaut. Fir d'A592T stattfannen, opgefouert mir 187 normal Individuen, 280 Broscht an 444 anere Kriibs Patienten mat Colon an rectum, haett, endometrium, ovary, testis, Nier, Schild carcinomas an sarcomas. All eenzel Identifikatiounen sech aus der Kontroll Echantillon virun Analyse geläscht, a Enquêteuren waren also fir d'Identifikatioun vun Echantillon blinded déi net méi ze bestëmmter Persounen verdanken kënnen. Zoustëmmung war fir de Patient Echantillon ugin. Fir Fäll 294 an 728 matt A592T stattfannen, analyséiert mir hir pedigrees a fonnt, datt et an der Rassekaz vum Fall keng aner Kriibs Fäll goufen 294, mä et waren aner 5 Kriibs Fäll vun der Rassekaz vum Fall 728, dorënner 2 Aarbecht Cancers, 1 Haut Kriibs, 1 haett Kriibs an 1 Kriibs vun ongeklärten origin.Table 1. Satz vun hire Restaurant vum e-cadherin an β-catenin zu enger Serie vu 50 gastric erhéijen. VerfÜgung Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad Gene kennen
Aberrant mRNA
E-CAD
β-cat
Sample
zu VerfÜgung zu um 16q22.1
an schiefgang VerfÜgung vun E-CAD
IHC
IHC VerfÜgung
1 VerfÜgung T3N3 VerfÜgung diff VerfÜgung +
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND VerfÜgung GTG (Val) → GTC (Val) op cd832 VerfÜgung ND VerfÜgung - VerfÜgung - VerfÜgung 23 VerfÜgung begéint VerfÜgung + VerfÜgung GCC (Ala) → zu Enn (dëss um cd592) * VerfÜgung ND VerfÜgung +++ /- VerfÜgung +++ /- VerfÜgung 43 VerfÜgung T3N2 VerfÜgung diff VerfÜgung + VerfÜgung - VerfÜgung -
- VerfÜgung +++ /- VerfÜgung 50 VerfÜgung T3N1 VerfÜgung diff VerfÜgung -
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) op cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
- VerfÜgung CAC (Seng) → CAT (Seng) op cd632 VerfÜgung - VerfÜgung +++ /- VerfÜgung ++ /- ∇ VerfÜgung GGC (Gly) → GGT (Gly) op cd865
360 VerfÜgung T2N1 VerfÜgung int VerfÜgung G3 VerfÜgung + VerfÜgung IVS4 + 10C → G VerfÜgung + ♣ VerfÜgung ++ /- VerfÜgung +/- VerfÜgung 369
begéint VerfÜgung +
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR-71C → G VerfÜgung 568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) op cd751 VerfÜgung 636 VerfÜgung T3N1 VerfÜgung diff VerfÜgung +
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) op cd751 VerfÜgung 694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) op cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND VerfÜgung AAC (ASN) → AAT (ASN) op cd751 VerfÜgung - VerfÜgung +++ /- VerfÜgung +++ /- ∇ VerfÜgung 738 VerfÜgung T3N2 VerfÜgung diff
VerfÜgung - VerfÜgung - VerfÜgung - VerfÜgung -∇ VerfÜgung 750
ND VerfÜgung AAC (ASN) → AAT (ASN) begéint bei cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) op cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30 VerfÜgung 3 VerfÜgung 7 VerfÜgung 21 zu 14 VerfÜgung Total VerfÜgung 40 zu 50 zu 38 zu 50 zu 50 VerfÜgung% zu 75
6 VerfÜgung 18 zu 42 zu 28 VerfÜgung T, entholl (Gréisst a invasiveness); N, Node (Ofschloss vun Metastasen); M, Metastasen; G1, gutt ënnerscheet; G2, mëttelméisseg ënnerscheet; G3, schlecht ënnerscheet; G4, net ënnerscheet; Ënnerscheed, diffusen (Ofschloss vun G4 dat =); mi, gemëscht; int, Daarm; erfëllt, wahrscheinlech metastatic entholl aus Mo. entholl; squ, squamous epithelial; Loh, Verloscht vun heterozygosity; E-CAD, E-cadherin; β-cat, β-catenin; IHC, immunohistochemistry; CD, codon; UTR, untranslated Regioun; +, Positiv Loh, aberrant E-CAD mRNA, E-CAD an β-cat IHC; -, negativ Loh, E-cadherin Gentherapie stattfannen, aberrant E-CAD mRNA, E-CAD an β-cat IHC; ND, net alles oder net gemaach; +/-, ++ /- An +++ /-, méi wéi 50% Zellen positiv; - /+, - /++ An - /+++, méi wéi 50% Zellen negativ; *, Somatic stattfannen; ♦, germline stattfannen; ♣, Enregistréiere vun intron 7 tëscht exons 7 an 8, stoppen codon 374; ♥, Läsche vun leschten 72 Base vun Exon 7, Exon 8 a éischt 124 Base vun Exon 9, stoppen codon 322; ♠, Läsche vun exons 8 a 9; Läsche vun leschten 84 Base vun Exon 8, stoppen codon 358; ∇, dës Echantillon zougedréckt och cytoplasmic staining fir β-catenin IHC VerfÜgung Loh Determinatioun VerfÜgung Microsatellite lues fir Loh Analyse vun chromosome benotzt 16q huet:. D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 an D16S512 fir d'16q22.1 Regioun mat E -cadherin nët (Genom Datebank). D'polymerase Kette Reaktioun (Hinnen alleguer) Produiten zu enger acrylamide sequencing gelies getrennt goufen a ginn zu engem positiv-Attack Nylon Membran, Hybond-N + (Amersham, Aylesbury, UK) an bei 80 ° C fir op d'mannst 2 h gebakene. D'Net-radioaktiv erkennen Method benotzt der Hinnen alleguer Produiten ze visualiséieren gouf schonn beschriwwen [23]. Autoradiograms sech visuell vun op d'mannst zwee liesen Aenzeien, DNA d'Intensitéit vun alleles aus normal an entholl vergläichen. D'Feele oder e groussen Verloscht vun engem allele am entholl Verglach zu de normal Referenzmaterial Prouf war den Loh considéréiert. VerfÜgung stattfannen Duerchmusterung VerfÜgung All 16 exons vun E-cadherin Gentherapie an Exon 3 vun β-catenin Gentherapie sech fir opgefouert inactivation kennen mat engem Hinnen alleguer-SSCP (Single staarkt conformation polymorphism) Analyse op Frankräich DNA Skeletter. D'primers fir E-cadherin an β-catenin am SSCP Analyse benotzt goufen an eiser leschter Artikel [4] an Park et al beschriwwen. [1999], respektiv, an aus Pharmacia Biotech oder Tag Kopenhagen A /S bestallt. Frankräich DNA war um 30 NG pro 25 μl Reaktioun Mëschung mat 5 pmol vun de Stiermer an ëmgedréint primers, 2,5 nmol vun all dNTP, 0,5 Unitéiten vun DynaZyme polymerase benotzt. komponéiert vun 30 Spiller vun denaturation bei 72 ° C an 94 ° C, 30 Spiller vun annealing bei 55-70 ° C, an endlech 60 s vun Extensioun der Echantillon waren zu 35 Zykle Kick. war e waarmen Ufank vun Schan der Aktivitéit am éischten Zyklus op ronn 70 ° C, no engem preincubation Zäit vun 5 min bei 94 ° C benotzt. A 4 μl aliquot vun Hinnen alleguer Produiten war mat 7 μl vu Dës villt Gedeessems Hoerfaarw gemëscht (95% Dës villt Gedeessems, 0,05% bromophenol blo an 0,05% xylene cyanol), fir 10 min bei 94 ° C denatured an snapcooled op Äis. Aliquots vun 2 μl sech gläichzäiteg op zwou Net-denaturing polyacrylamide gels (5% acrylamide mat 2% Kräiz verbënnt), entweder mat 5% glycerol oder subtil glycerol analyséiert. Electrophoresis war zu 1 × TBE op vertikalen gels um 6w Iwwernuechtung oder fir 6 h bei Raumtemperatur gesuergt. D'Hinnen alleguer Produiten sech als microsatellite lues visualized. Echantillon mat Manque Mobilitéit Bande ware fir 35 Zykle erëm Implikatioune wéi uewe beschriwwen. A 5 μl aliquot vun Hinnen alleguer Produiten dann mat 10 incubated war U exonulease ech an 2 U statspaye alkaline phosphatase exzessiv primers an dNTPs (US70995, Amersham) ze läschen. Message vun béiden strands sech duerch Thermo sequenase DNA polymerase (Thermo Sequenase Radiolabeled Terminator Cycle Sequencing Kit, Amersham) benotzt déi zwee original Hinnen alleguer primers alles. Mir standing der Analyse A592T stattfannen iwwert déi Cancers, ausser de Kriibs vun ongeklärten Urspronk, an der Famill vun de Fall 728 direkt sequencing benotzt. VerfÜgung Aberrant mRNA VerfÜgung 1-5 μg vun der total RNS Duerchmusterung war reversely an cDNA ausserdeem benotzt éischt staarkt cDNA Synthes Kit (Amersham Pharmacia Biotech). All Echantillon sech fir E-cadherin cDNA geläscht an insertions iwwerpréift. E-cadherin cDNA war mat primer Puer Ex7-rEx10 /2 an Ex9 /2a-rEx11 fir d'Regioun vun exons 7-10 Zeechesaatz Kalzium bindend Siten [24] Kick. Hinnen alleguer Produiten goufe vun agarose gelies electrophoresis visualized. Anormal Fragmenter sech excised an Nepgen benotzt vir an ëmgedréint primers d'Grenze vun der geläscht an insertions ze bestëmmen. Hei, déi mer BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaktioun Kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA) an automatiséiert sequencer Abi PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) fir sequencing VerfÜgung Immunohistochemical staining VerfÜgung Immunohistochemistry fir E-cadherin an β -catenin war op 5-μm Sektiounen aus paraffin-Ënnerbewosstsinn entholl Otemschwieregkeeten Bleck mat monoclonal antibodies E-cadherin 5H9 an Geess Anti-Catenin Beta (Research Diagnostic Galaxy NJ, USA) gesuergt, respektiv, mat der antigen retrieval Protokoll vun Hazelbag beschriwwen et al. [1995]. Tumours sech duerch Intensitéit vun staining als negativ graded (-), schwaach positiv (+), mëttelméisseg positiv (++) a staark positiv (+++) VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung A Χ 2 Test oder. Fisher d'exakt Test benotzt war d'Relatioun tëscht der uewen Parameteren ze bewäerten. VerfÜgung Resultater VerfÜgung d'Heefegkeet vun Loh um 16q22.1 Regioun war 75% (Table 1). VerfÜgung Dräi erhéijen (6%) huet de selwechten missense stattfannen A592T vun Exon 12, vun deenen 2 Fäll germline stattfannen hat, an ee Fall haten somatic stattfannen. Informatiounen fir nogewise schiefgang war an Table 1. Dräi vun 187 (1,6%) normal Individuën an 1 vun 280 (0.36%) Broscht erhéijen zougedréckt dëser germline stattfannen abegraff. D'stattfannen war net zu 444 aner erhéijen (Table 2) .Table 2 Heefegkeet vun A592T missense stattfannen an gastric Kriibs, aner Kriibs an normal Persounen VerfÜgung Variablen
A592T fonnt /total
%
Gastric Kriibs VerfÜgung 3/50 VerfÜgung 6 VerfÜgung Broscht Kriibs VerfÜgung 1/280 VerfÜgung 0,36 VerfÜgung Aner Kriibs *
0/444 VerfÜgung 0 VerfÜgung normal Populatioun VerfÜgung 3/187 VerfÜgung 1,6 VerfÜgung * dorënner Colon an rectum, haett, endometrium, ovary, testis, Nier, Schild carcinomas an sarcomas. VerfÜgung Ausserdeem, 3 vun 280 Broscht erhéijen zougedréckt aner missense stattfannen GCC (Ala) → tcc (Ser) bei der identesch codon 592, vun deenen 2 Fäll germline stattfannen goufen; déi drëtt ass onkloer, well déi normal Otemschwieregkeeten erreechbar war. D'histological Typ vun de 4 Broscht erhéijen war ductal. An der Famill vun de Fall 728, VerfÜgung fonnt mir, datt de Patient mat Haut Kriibs an ee vun de Patienten mat Aarbecht Kriibs huet déi selwecht germline stattfannen den Fall 728. Spannen, nee kennen sech an der entholl Echantillon vun deenen zwee Fäll festgestallt. Wahrscheinlech waren d'mutated alleles während entholl Entwécklung verluer. D'agesat Alterskategorien fir déi Fäll mat germline Projet'en am Rassekaz goufen 78 Joer fir Fall 728, 73 Joer fir d'Haut Kriibs an 76 Joer fir d'Aarbecht Kriibs. VerfÜgung Mir hu net stattfannen vun SSCP an DNA sequencing zu Exon entdecken 3 vun de β-catenin Gentherapie an der 50. gastric erhéijen. VerfÜgung Seven gastric erhéijen aberrant gët vun der E-cadherin gewisen. 360 Tumours, 369, 568, 717 an 750 ugewisen Enregistréiere vun intron 7 tëscht exons 7 an 8. klinescher 755 zougedréckt a Läsche vun leschten 72 Base vun Exon 7, Exon 8 a éischt 124 Base vun Exon 9. klinescher 808 zwee aberrant mRNAs ugewisen, Endlech vun deenen déi eng Auteuren vun exons 8 a 9, an ee Fall mat Läsche vun leschten 84 Base vun Exon 8 (Table 1). VerfÜgung, mir standing immunohistochemical staining vun e-cadherin an β-catenin. Eng regional Variant vun der staining war ganze erhéijen fonnt. D'scorings +/-, ++ /- an +++ /- kuckt méi wéi 50% Zellen positiv, an scorings - /+, - /++ an - /+++ beweist méi wéi 50% Zellen negativ. Negativ (-) oder reduzéiert (- /+, - /++, - /+++ an +/-) Ausdrock vu E-cadherin an β-catenin war an 21/50 (42%) fonnt ginn an 14/50 ( 28%) Fäll, bzw.. Ausserdeem, fir β-catenin IHC, 11 erhéijen zougedréckt och positiv cytoplasmic staining (Table 1). Eng bedeitend Veräin huet tëscht negativ oder reduzéiert Ausdrock vu E-cadherin an β-catenin (p = 0,048, Χ 2 Test) fonnt. Och mir eng Associatioun tëscht reduzéiert Ausdrock vu E-cadherin an diffusen histotype (p = 0,04, Fisher an d'genee Test). VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Déi héich Frequenz vun Loh um 16q22.1 Regioun fonnt mobiliséiert staark, dass et eent oder méi entholl suppressor Genen an dëser Regioun, deenen hir Date carcinogenesis vun gastric Kriibs ausgeléist hätt. D'E-cadherin Gentherapie gouf zu chromosome 16q22.1 Ëmgéigend [26]. D'reduzéiert Ausdrock an der Gentherapie Projet'en vun E-cadherin an e puer Zorte vun Cancers dorënner gastric an lobular Broscht Kriibs identifizéiert ginn, wat beweist, datt d'E-cadherin Gentherapie eng entholl suppressor Gentherapie ass [2-4], [13-17, 27] . An dëser Etude 3 Fäll (6%) huet de identesch missense stattfannen A592T. D'Kalzium-verbindlech motifs am extracellular Beräicher 1-5 etabléiert sinn als Schlësselelement fir d'Funktioun vum E-cadherin erauskoum, well e syntheteschen Protein mat enger eenzeger Aminosaier-Seier Wiessel vun enger Kalzium-verbindlech Motiv keen adhesiveness zougedréckt [28] . Och, an mënschlechen Zell Linn MKN45 aus gastric Kriibs, deen knapper Zell-Zell Haftung gefeelt huet, e 4-Aminosaier-Seier Läschen gouf op der Grenz tëscht exons 6 a 7, fonnt déi considéréiert gouf de conformation ronderëm de Schlëssel Kalzium-verbindlech ze änneren motifs an de Kondom Besëtz vun der E-cadherin Molekülle [29] zu ofschafen. Déi eenzeg Aminosaier-Seier Wiessel am Moment Etude ass bannent de fënneften extracellular Domän vun E-cadherin etabléiert, wou en Kalzium-verbindlech Motif existéieren kéint. Et ass erdenklech, dofir, datt d'Projet'en am dräi Fäll och Funktioun vun der E-cadherin zerstéiert. Spannen, och déi dräi Fäll zougedréckt um 16q22.1 Loh der E-cadherin nët mat. Also kann et considéréiert ginn, datt zwou genetesch Evenementer zu inactivation vun der Gentherapie doraus Doudesfäll am zwou alleles vun E-cadherin Gentherapie, bzw.. D'Experienz uewe datt d'E-cadherin Gentherapie eng entholl-suppressor Gentherapie ass, well se am Aklang mat der klassescher zwee-Hit Theorie fir entholl suppressor Genen [30] ass. Virdrun Studien zu lobular Broscht Kriibs ënnerstëtzen och dëser Meenung [4, 14]. An Zell Linn MKN45 verwisen (schlecht ënnerscheet adenocarcinoma) mat schwaach Zell-Zell Haftung, eng 12-BP am Kader Läsche vun E-cadherin Gentherapie a Verloscht vun der Wëllschwäin Typ allele goufen erwëscht [29]. Mä dës Zell Linn awer nach staark Ausdrock vun mRNAs a Proteinen, suggeréiert, dass net nëmmen reduzéiert Ausdrock mä och strukturell abnormalities selwer an inactivation vun der E-cadherin-mediated Zell Haftung System Resultat kann [29]. Dofir, eng eenzeg Aminosaier-Seier an dëser Etude fonnt Wiessel verursaache kann strukturell Changementer vun E-cadherin an Resultat vun limitéiert Zell-Zell Haftung, obschonn zwee vun de Fäll (23 an 294) duer FAQ Ausdrock zougedréckt. VerfÜgung, Spannen der selwecht Haaptrei Variant vun somatic an germline stattfannen war gläichzäiteg zu verschiddene gastric Patienten fonnt. Case 23 mat somatic stattfannen haten en agesat Alter vun 56 Joer, mä Fäll 294 an 728 matt germline stattfannen haten agesat Alter vun 71 an 78 Joer, respektiv. Eng Erklärung fir dëse Phänomen kéint dat Verloscht vun zweet allele vun E-cadherin am Fall 23 ganz fréi geschitt, doduerch carcinogenesis triggerring relativ fréi am Fall 23. Mä et ass eng aner Méiglechkeet, datt dës stattfannen am Fall 23 just eng Roll gespillt an Werdegang vun der entholl, mä net an der Initiatioun, wou aner genetesch Evenementer wahrscheinlech responsabel fir d'Initiatioun vun der gastric Kriibs ginn hätt. Mä Fäll 294 an 728 matt germline Projet'en hat spéit agesat Alter. Dëst kann well de inactivation vun aneren allele ganz spéit geschitt. En Artikel gemellt, dass d'obligatoresch wwerreeche mat gekierzt Projet'en am E-cadherin Gentherapie an hir 80er a 90er onberéiert [31] bliwwen. Dofir, weider Identifikatioun vun genetesch an /oder Ëmweltproblemer modifiers datt fir d'Variabel Alter vun agesat Kont vläicht soll eraus gedroen ginn. Speziell, Fall 294 haten dräi erhéijen an de Mo, déi normalerweis mat genetesch erhéijen zu Linn ass Multiple ginn [30]. D'Frequenz (6%) vun stattfannen A592T zu 50 gastric erhéijen VerfÜgung ass schéin, datt zu normal Populatioun véier-fantastesch suggeréiert eng Kéier, datt dës stattfannen jo zu der tumourigenesis zu engem Ziel vun gastric erhéijen bäigedroen. Futhermore, 0,36% vun Broscht erhéijen, a keen aneren erhéijen, zougedréckt identesch germline stattfannen, wat beweist, datt et eng histological Ënnerscheed fir dës stattfannen an gastric Kriibs an aner Kriibs ginn hätt. VerfÜgung Nëmmen aner zwee Fäll vun A592T stattfannen an der Famill Schatzkummer 728. Fall besonnesch, war dëst stattfannen nëmmen am entspriechende normal Otemschwieregkeeten fonnt, mee net an der entholl Otemschwieregkeeten, suggeréiert, dass d'mutated alleles während der tumourigenesis verluer huet. Vun dësen kann mir dat stattfannen spille kann net eng Roll an der tumourigenesis vun Aarbecht a Haut Kriibs ofzeschléissen, mä et hätt gastric-Kriibs spezifesch ginn. VerfÜgung Mir schléissen, datt d'A592T stattfannen d'Liewensdauer Risiko vun Entwécklungslänner gastric Kriibs Erhéijung kann, mee ass haut eng Rei Variant vun niddereg penetrance. Eis Conclusiounen vun zwou verschiddene Haaptrei Varianten um codon 592 (A592T an A592S), wéi germline an somatic kennen, virschloen, datt dës codon enger Institutioun vun Projet'en an entholl pathogenesis ass. VerfÜgung D'breakpoints fir insertions vun intron 7 a Läsche vun exons 8 an 9 sinn op splicing Siten, am Aklang mat "gu-AG" Regel fir mRNA splicing. Et ka spekuléiert ginn, datt dës hire Restaurant net duerch alternativ splicing generéiert goufen, well kee dofir fir alternative splicing bannent Maus E-cadherin Gentherapie [32] a kee aberrant mRNAs goufen erwëscht an noncancerous Stoffer fonnt goufen. D'Projet'en um splicing Siten herrlech fir hire Restaurant vum E-cadherin mRNAs responsabel gin, obwuel keng kennen op DNA Niveau vun dëser Etude fonnt huet, viraussiichtlech well d'SSCP fir stattfannen Duerchmusterung benotzt engem niddregen Effizienz huet. Eng zousätzlech 2 geläscht zougedréckt breakpoints bei Net-splicing Siten, hir splicing ass net mat "Gu-AG" Regel zu Linn, méiglecherweis beweist dass eng Emplazéiren am Frankräich Niveau der aberrant mRNAs verursaache kann. Fall vun Exon 8 oder 9 zu gastric Kriibs virdrun Studie berichten iwwer propedeutësch [24, 33]. Dës geometrescher Figur Resultat kann an E-cadherins Verléierer Kalzium-verbindlech motifs wéinst Manktem vun exons 8 a 9, a gekierzt Molekülle well vun frameshift kennen déitlech insertions a geläscht, endlech Saachen Streeung vun carcinoma Zellen. VerfÜgung reduzéiert Ausdrock vun er cadherin an β-catenin gouf an e puer Cancers dorënner gastric Kriibs [8] fonnt. Heterogen oder onbestänneg Ausdrock fir zwou E-cadherin an β-catenin ganze gouf de erhéijen fonnt. Et gouf an 40% vun adenocarcinomas E-cadherin Niveau waren an hir intravascular entholl Komponente am Verglach zu hire extravascular compartments opgewuess [34] bewisen, dass. Eng Erklärung kéint sinn, datt Entrée vun enger carcinoma an eng intravascular ofgeliwwert ginn ass mat enger upregulation vun E-cadherin Ausdrock verbonnen, an datt Kierzunge Sortie an extravascular Stoffer ass verbonne mat downregulation [35]. Zanter E-cadherin an β-catenin entscheedende Komponente Zell-Zell Haftung komplex zu Form, Verloscht vun hinne kann an der Stéierungen vun der Funktioun vun de komplexe Resultat, wat schwaach Zell-Zell Haftung verursaache kann an invasiv Eegeschafte op engem entholl eegens . Ausserdeem, reduzéiert Zell-Zell Haftung ass verbonne mat Verloscht vun Kontakt inhibition vun Prolifératioun, doduerch datt en Auswee aus Wuesstem Kontroll Signal, endlech carcinogenesis vum Mënsch Kriibs ausléisen [8]. An dëser Etude, war eng Associatioun tëscht Manque Ausdrock vu E-cadherin an β-catenin fonnt, datt Verloscht vun E-cadherin suggeréiert bindend vläicht eng Ëmverdeelung vun β-catenin aus der Zell Membran un der Zytoplasma féieren. D'fräi gratis β-catenin am Zytoplasma zu ervirgaangen translocate konnt an Aktivéierung vun der Gentherapie Ausdrock bréngen. Dëst ass duerch d'Conclusiounen ënnerstëtzt déi zwee Fäll (676 an 738) zougedréckt negativ staining am zentrale Uewerfläch vun Membran a positiv staining zu Zytoplasma, gläichzäiteg. Mee aner 9 erhéijen (Tabell 1) weist moderéiert oder staark staining zu Membran och positiv staining zu Zytoplasma Schatzkummer suggeréiert datt de normal ofgeschnidden vun de gratis β-catenin zu Zytoplasma inhibited ass. Och, hunn mir eng Associatioun tëscht Manque Ausdrock vu E-cadherin an diffusen histotype, wat beweist, datt d'hire Restaurant vun der E-cadherin vläicht eng Roll am kaum-ënnerscheet gastric erhéijen Leeschtung. Spannen, aberrant Ausdrock vu E-cadherin an /oder d'catenins ass fir kuerz Iwwerliewe vun gastric Kriibs Patienten [8] eng eegestänneg prognostic Bewaacher gewise gin. Vun allem Interessi ass Opklärung datt E-cadherin ass eng onofhängeg Estimatioun vun Rulle lymph Node an micrometastasis zu Wirbelen den Nee vum Iddi histopathological Methoden séiert [8]. VerfÜgung Konklusiounen Eis Resultater VerfÜgung Ënnerstëtzung déi hire Restaurant vum E-cadherin an β-catenin eng Roll an der Initiatioun an Werdegang vun gastric Kriibs Leeschtung. Ausdrock vun zwou Genen sinn zu gastric Kriibs reduzéiert, mä de Mechanismus vun downregulation ass net kloer. Loh, Projet'en an hire Restaurant zu RNS splicing engem Deel vun der downregulation vun der E-cadherin zu gastric Kriibs erkläre konnt. VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Merci VerfÜgung Dës Aarbecht vun der Islännesch Fuerschungen, der Universitéit vun Island Science ënnerstëtzt gouf Fonds an der islännesch Cancer Society. VerfÜgung Wettsträit Interessen VerfÜgung Keen deklaréiert VerfÜgung

• E Fall-Kontroll Etude op d'Wierkung vun Apolipoprotein E genotypes op gastric Kriibs Risiko an Werdegang
• Ënnerstëtzung Vecteure Maschinn Modell fir Diagnos vun lymph Node Metastasen zu gastric Kriibs mat multidetector berechnen tomography: eng virleefeg Etude