Változások az E-cadherin és β-catenin gyomorrákban

Elváltozások E-cadherin és β-catenin a gyomorrák
Abstract
alapon
Az E-cadherin-catenin komplex döntő szerepet játszik az epithelium sejt-sejt adhézió és a karbantartási szövet építészet. Perturbáció kifejezett vagy funkciója összetett elvesztését eredményezi, intercelluláris adhéziós, az esetleges következményes sejttranszformációs és a tumor progresszióját. Katalógusa Módszerek katalógusa Megvizsgáltuk a változások az E-cadherin és β-catenin egy sor 50 elsődleges gyomor tumorok használatával elvesztése heterozigótaság (LOH) elemzését, génmutáció szűrés, felderítése aberráns átiratok és immunhisztokémiai (IHC). katalógusa Eredmények
nagyfrekvenciás (75%) LOH detektáltuk 16q22.1 tartalmazó E -cadherin locus. Három esetben (6%) mutatott azonos missense mutáció, A592T. Ez a mutáció nem valószínű, hogy hozzájárul a karcinogenezis gyomorrák, mert az alacsony frekvenciájú (1,6%) az e mutációt is találtak a 187 normál egyének. Azt is kimutatták, alacsony frekvenciájú (0,36%, 0%) E mutáció 280 emlőtumorok és 444 egyéb tumorok, beleértve a vastagbél és a végbél, tüdő, endometrium, petefészek, here, a vese, a pajzsmirigy karcinómák és szarkómák, ill. Azt is elemeztük a aberráns E-cadherin mRNS-ek a gyomor tumorok és megállapította, hogy a 7-tumorok (18%) volt aberráns mRNS mellett a normál mRNS. Ezek a rendellenes mRNS-ek lehetnek rendellenes E-cadherin molekulák, így a gyenge sejt-sejt adhézió és invazív viselkedését karcinóma sejtekhez. Csökkent expresszióját az E-cadherin és β-catenin azonosítottuk a gyakorisága 42% és 28% volt. Speciálisan, 11 tumorok (22%) mutatott pozitív citoplazmatikus festődés β-catenin IHC. Egy találtak összefüggést csökkent expressziója E-cadherin és β-catenin. Sőt, társulás volt kimutatható között csökkentett expresszióját az E-cadherin és diffúz Szövettípus.
Következtetés
Eredményeink alátámasztják azt a hipotézist, hogy a változtatások az E-cadherin és β-catenin szerepet játszanak a kialakulásában és progressziójában a gyomorrák .
Háttér
E-cadherin (120 kDa; kromoszóma 16q) egy klasszikus cadherin és formák a legfontosabb funkcionális eleme tapadás csomópontok között hámsejtek [1]. Ez van kötve keresztül egy sor alapozóréteg fehérjék, a catenins (α, β és γ), hogy az aktin citoszkeleton [1]. Ez a kötés között transzmembrán kadherinek és aktin sejtváz szükséges alkotnak erős sejt-sejt adhéziót. Intakt E-cadherin - catenin komplexum fenntartásához szükséges a normális intercelluláris adhéziós. Ennek fényében több kutatócsoport azt javasolta, hogy a rosszindulatú daganatai, E-cadherin funkcionál inváziót gátló molekula, mint annak elvesztése megengedi, vagy növeli az invázió szomszédos normál szövetben. Az immunhisztokémiai vizsgálatok a humán rákok, beleértve a gyomorrákot, gyakran kimutatták, hogy egy részét invazív karcinómák és karcinómák in situ
mutatják aberráns szint az E-cadherin és /vagy catenin expresszió képest a kapcsolódó normális szövet [2-4] . Általánosságban, az E-cadherin és catenin festéssel erős a jól differenciált rákok, amelyek megtartják sejt tapadóképességet és kevésbé invazív, de csökken a rosszul differenciált tumorok, amelyek elvesztették a sejt-sejt adhézió és azt mutatják, erős invazív viselkedését [2, 3].
E-cadherin részt vesz a kontakt gátlás a sejtnövekedés indukálásával sejtciklus [5]. Azt a képességét, hogy gátolja a sejtproliferációt által fokozza a p27 részt vesz a sejtciklus szabályozásában [5], bár a mechanizmus, amellyel az E-cadherin szabályozza a p27 még nem tisztázott. Ezért, E-cadherin, általában le, mint egy invázió szupresszor [6], működhet, mint egy nagy növekedésének /proliferációjának szuppresszor.
Fontos funkciója a β-catenin a Cell Signaling, már felderítették [7]. Hiányában egy mitotikus jel a sejten kívülről, β-catenin szekvesztrálódik egy komplex az adenomás polyposis coli (APC) gén terméke, egy szerin treonin glikogén szintetáz kináz (GSK-3β), és egy adapter protein axin (vagy egy homológja conductin), lehetővé téve a foszforiláció és lebomlását szabad β-catenin által az ubiquitin-proteaszóma rendszer [8]. Amikor egy mitotikus jel által szállított Wnt útvonal, a szövetség a WG /Wnt család kiválasztódik glikoproteinek és membránreceptora pirított, azt eredményezi, hogy aktiválja a kócos (Dsh) fehérje, amely toborzott a sejtmembránon. Az aktivált Dsh gátló módon szabályozza a fehérje komplex, úgy, hogy az már nem foszforilálni β-catenin, amely aztán nem degradálódott. A kiadás β-catenin a foszforiláció és lebomlás komplex elősegíti β-catenin stabilizálása és jelzés. Ennek eredménye a növekedést szabad cystolic β-catenin, amely a sejtmagba, és közvetlenül kötődik a transzkripciós faktorok Lef és a TCF, ami a aktiválását génexpressziót. Ezért a β-catenin végez elkülönült feladattal, E-cadherin által közvetített sejt-sejt adhézió és a Wnt jelátvitel [8].
Elvesztése az E-cadherin lókusz a kromoszóma hosszú karján 16 (16q22) jelentkezik gyomor (24 %), hepatocelluláris (50%), lobularis mell (50-100%) és a nyelőcső (66%) karcinómák [4, 9-12]. Voltak több jelentések E-cadherin gén mutációk humán rákos [13]. A gyengén differenciált tumorok, mint például a lobularis emlőrák és diffúz típusú gyomorrák, E-cadherin mutációk fontos szerepet játszanak a tumor fejlődését [14, 15]. Számos tanulmány beszámolt csírasejt-mutáció az E-cadherin gén családok öröklött diffúz típusú gyomorrák [16, 17]. Csak egy kis része a gyomor rák lehet elszámolni az E-cadherin mutációk. Gyakori szomatikus mutációk β-catenin gén találtak kis kolorektális adenoma és intestinalis típusú gyomorrák [18, 19]. A legtöbb mutációk érintett a veszteség a szerin vagy treonin a GSK-3β foszforilációját régióban. Genetikai elváltozások a β-catenin eltörlése a sejt-sejt tapadóképesség észleltek két gyomor rákos sejtvonalban, a HSC39 és 40a; Mindkét származhat ugyanazon pecsétgyűrű sejtes karcinóma, a gyomor és mutat egy diffúz növekedési mintát [20, 21]. Ez a mutáció eredménye egy csonkított β-catenin, amely nélkülözi a régióban kölcsönhatás β-catenin. Transzfekció ilyen sejtvonalak a vad típusú β-catenin visszaállítja celluláris tapadóképesség [21].
Itt végeztünk az E-cadherin és a béta-catenin gén mutáció és expressziós analízissel egy sor 50 primer gyomor tumorok annak érdekében, hogy megértsék jobb bevonása a változtatások az E-cadherin és β-catenin a karcinogenezis gyomorrák. katalógusa anyagok és módszerek
mintákat
tartalmazza a vizsgálatban 50 tumort és a megfelelő normál mintákat, amelyek közül kettő daganatok (17 és 23) volt ugyanabból a családból, a többi szórványos (1. táblázat). Ezek esetet diagnosztizáltak a Department of Pathology, University Hospital Izland. Tissue kapunk napján frissen műtét vagy paraffinba ágyazott anyag. Tájékoztatás a tumor stádiuma, Szövettípus és fokozat is szerzett ugyanazon az osztályon. DNS-PCR-t izoláljuk, a K-proteináz kezelésre [22]. RNS RT-PCR-t extraháltunk TRI-reagens alkalmazásával (Molecular Research Center, INC. USA). Az A592T mutációt, akkor árnyékolt 187 normál egyének, 280 mell és 444 egyéb daganatos betegek vastagbél és a végbél, tüdő, endometrium, petefészek, here, a vese, a pajzsmirigy karcinóma és szarkóma. Minden egyes azonosítókat kivesszük a kontroll minták az analízis előtt, és nyomozók így ismerték az azonosítása minták már nem lehet visszavezetni egyes személyekkel. Hozzájárulás vélelmezhető, hogy a beteg minták. Azokban az esetekben, 294 és 728 a A592T mutáció, elemeztük a pedigréje, és megállapította, hogy nem volt más rákos megbetegedések törzskönyve esetében 294, de voltak más 5 rákos megbetegedések törzskönyve esetében 728, köztük 2 prosztatarák, 1 bőr rák, 1 tüdőrák és 1 rák tisztázatlan origin.Table 1 Összefoglalás elváltozásának E-cadherin és β-catenin egy sor 50 gyomor daganatok.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad génmutációk
aberráns mRNS Matton E-cad Matton β-macska Matton Sample Matton katalógusa

16q22.1 Matton és polimorfizmusok
E-cad Matton IHC Matton IHC katalógusa
1 katalógusa T3N3 katalógusa diff katalógusa +
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) a cd832 katalógusa ND katalógusa - -
23 katalógusa találkozott katalógusa + katalógusa GCC (Ala) → ACC (Thr ) a cd592 * katalógusa ND katalógusa +++ /- www.Booked.hu +++ /- www.Booked.hu 43 katalógusa T3N2 katalógusa diff katalógusa +
- -
- www.Booked.hu +++ /- www.Booked.hu 50 katalógusa T3N1 katalógusa diff katalógusa -
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) nál nél cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
- Www.Booked.hu CAC (His) → CAT (His) at cd632
- +++ /- www.Booked.hu ++ /- ∇ katalógusa GGC (Gly) → GGT (Gly) a cd865
360 katalógusa T2N1 katalógusa int katalógusa G3 katalógusa + katalógusa IVS4 + 10C → G katalógusa + ♣ katalógusa ++ /- www.Booked.hu +/- katalógusa 369
találkozott katalógusa +
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR-71c → G katalógusa 568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) a cd751 katalógusa 636 katalógusa T3N1 katalógusa diff katalógusa +
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (ASN) → AAT (ASN) a cd751 katalógusa 694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) nál nél cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND katalógusa AAC (ASN) → AAT (ASN) a cd751
- +++ /- www.Booked.hu +++ /- ∇ katalógusa 738 katalógusa T3N2 katalógusa diff
+ -
- -
-∇ katalógusa 750 katalógusa találkozott katalógusa ND katalógusa AAC (ASN) → AAT (ASN) a cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) nál nél cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30 katalógusa 3 katalógusa 7 katalógusa 21 katalógusa 14
Összesen katalógusa 40 katalógusa 50 katalógusa 38 katalógusa 50 katalógusa 50 katalógusa% katalógusa 75
6 katalógusa 18 katalógusa 42 katalógusa 28
T, tumor (méret és inváziós); N csomópont (mértéke metasztázis); M, metasztázis; G1, jól differenciált; G2, közepesen differenciált; G3, rosszul differenciált; G4, nem differenciált; diff, diffúz (mértékű megkülönböztetést = G4); mi, vegyes; int, bél; teljesülnek, áttétes daganat valószínűleg gyomorrák; squ, laphám; LOH, elvesztése heterozigótaság; E-cad, E-cadherin; β-CAT, β-catenin; IHC, immunhisztokémia; cd, kodon; UTR, transzlálódó régió; + Pozitív LOH, aberráns E-cad mRNS, E-cad és β-macska IHC - negatív LOH, E-cadherin gén mutáció, aberráns E-cad mRNS, E-cad és β-macska IHC; ND, nincs meghatározva vagy nem tenni; +/-, ++ /- És +++ /-, több mint 50% a sejtek pozitív; - /+, - /++ És a - /+++, több mint 50% a sejtek negatív; *, Szomatikus mutáció; ♦, mutációi; ♣, beillesztése intron 7 között exonok a 7. és 8., stop kodon 374; ♥, törlését elmúlt 72 bázisok exon 7, 8. exon és az első 124 alapjait exon 9, stop kodon 322; ♠, törlését exon 8. és 9. törlés utolsó 84 bázisok 8. exon, stop kodon 358; ∇, ezek a minták is mutatott citoplazmatikus festés a β-catenin IHC. Katalógusa LOH meghatározás katalógusa mikroszatellit markereket használnak LOH elemzés kromoszóma 16q voltak: D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 és D16S512 a régió 16q22.1 tartalmazó E -cadherin locus (Genome Database). A polimeráz láncreakció (PCR) termékek szétválasztjuk egy akrilamid szekvenáló gélen és átvisszük egy pozitív töltésű nejlon membránra, Hybond-N + (Amersham, Aylesbury, Egyesült Királyság) és a sült legalább 2 órán át 80 ° C-on. A nem radioaktív kimutatási módszer, hogy szemléltesse a PCR-termékeket korábban már leírták [23]. Autoradiogramokat vizuálisan ellenőrizni legalább két látogató, összehasonlítva az intenzitása allélek a szokásos és a tumor DNS-t. A hiánya vagy jelentős csökkenése az egyik allél a tumorban, mint a normál referencia mintát tekintettük LOH.
Mutációanalízis
Mind a 16 exonjának E-cadherin gén exon 3 β-catenin gén szkríneltünk inaktiválás mutációk egy PCR-SSCP (egyszálú konformáció polimorfizmus) elemzést genomiális DNS sablonokat. A primereket az E-kadherin és β-catenin használt SSCP analízis leírt korábbi cikkben [4] és Park et al. [1999], illetve, és elrendelte a Pharmacia Biotech vagy TAG Copenhagen A /S. A genomiális DNS-t alkalmaztunk 30 ng per 25 pl reakciókeverékben, amely 5 pmól, a forward és reverz primert, 2,5 nmol dNTP, 0,5 egység DynaZyme polimeráz. A mintákat amplifikáltuk 35 ciklus álló 30 s denaturálás 94 ° C, 30 s a lánckapcsolódás 55-70 ° C-on, és végül 60 s a 72 ° C-on. Hot start alkalmaztunk hozzáadásával az enzim első ciklusban körülbelül 70 ° C-on, miután egy előinkubálás idő 5 perc 94 ° C-on. A 4 ul alikvot A PCR-termékek összekeverünk 7 ul formamid festékkel (95% formamid, 0,05% brómfenolkék és 0,05% xilol-cianol), denaturált 94 ° C-on 10 percig, és snapcooled jégen. Aliquotjait 2 ul analizáltuk egyidejűleg két nem denaturáló poliakrilamid gélen (5% akrilamid, 2% keresztkötést), vagy amely 5% glicerint, vagy hiányzik a glicerin. Az elektroforézist végeztünk 1 × TBE függőleges gélek 6W éjszakán át, vagy 6 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A PCR-termékeket tettük láthatóvá, mint a mikroszatellit markereket. Azok a minták, rendellenes mobilitás sávokat amplifikáltuk ismét 35 cikluson keresztül a fent leírtak szerint. Egy 5 ul alikvot PCR-termékeket ezután inkubáljuk 10 U exonulease I és 2 U garnélarák alkalikus foszfatáz eltávolítására túlzott primereket és dNTP (US70995, Amersham). Szekvenciák mindkét szál határoztuk meg Thermo Sequenase DNS polimerázzal (Thermo Sequenase Radioiabeled Terminator Cycle Sequencing Kit, Amersham) a két eredeti PCR-primerek. Elvégeztük az A592T mutáció elemzést e rák, kivéve a rákos tisztázatlan eredetű, a család esetében 728 direkt szekvenálás.
Aberráns mRNS szűrés katalógusa 1-5 ug teljes RNS-t reverz transzkripcióval cDNS-be a első szál cDNS-szintézis készlettel (Amersham Pharmacia Biotech). Minden mintát vizsgáltunk meg az E-cadherin cDNS törlések és beszúrások. E-cadherin cDNS-t primer párokat EX7-REX10 /2 és EX9 /2a-rEx11 a régió számára a exon 7-10 kódoló kalcium kötőhelyek [24]. A PCR-termékeket tettük láthatóvá agaróz-gélelektroforézissel. Abnormális fragmenseket kivágtuk és szekvenáltuk segítségével előre és hátra primerek, hogy meghatározzák a határokat a deléciók és inszerciók. Itt, használtuk BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA), és automata szekvenátorral ABI PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) a szekvenáláshoz
immunhisztokémiai
Immunhisztokémia az E-kadherin és β katenin végeztük 5 jim-es metszeteket paraffinba ágyazott tumorszövet blokkok monoklonális antitestekkel E-cadherin 5H9 és kecske anti-catenin Beta (Research Diagnostic, Inc. NJ, USA), illetve az antigén-visszanyerés protokoll által leírt Hazelbag et al. [1995]. A tumorokat osztályozni intenzitása festéssel negatív (-), enyhén pozitív (+), mérsékelten pozitív (++) és erősen pozitív (+++). Katalógusa Statisztikai analízis katalógusa A Χ 2 teszt, vagy Fisher-féle egzakt tesztet alkalmaztuk közötti kapcsolat értékelésére a fenti paraméterekkel. katalógusa Eredmények katalógusa a frekvencia LOH 16q22.1 régióban 75% volt (1. táblázat).
Három tumorok (6%) mutatott azonos missense mutáció A592T exon 12, ebből 2 esetben kellett mutációi, és egy esetben volt szomatikus mutáció. Információ az észlelt polimorfizmus az 1. táblázat tartalmazza Három 187 (1,6%) normál egyének és 1 280 (0,36%) emlődaganatok megmutatta ennek mutációi. A mutáció nem volt megtalálható a 444 egyéb daganatok (2. táblázat) .table 2 gyakorisága A592T missense mutáció gyomorrák, más rákos és normál egyének katalógusa változók
A592T /összesen Matton% Matton Gyomorrák katalógusa 3/50 katalógusa 6 katalógusa Emlőrák katalógusa 1/280 katalógusa 0.36 katalógusa Egyéb rák *
0/444 katalógusa 0 katalógusa Normál lakosság katalógusa 3/187 katalógusa 1.6 katalógusa * beleértve vastagbél és végbél, tüdő, endometrium, petefészek, here, a vese, a pajzsmirigy karcinóma és szarkóma. katalógusa Emellett 3 280 emlődaganatok megmutatta másik missense mutáció GCC (Ala) → TCC (Ser) az azonos kodon 592, ebből 2 esetben volt mutációi; A harmadik volt egyértelmű, mert a normál szövet volt elérhető. A szövettani típus a 4 emlődaganatok volt duktális.
Családjának esetében 728, azt találtuk, hogy a beteg a bőrrák, és az egyik a prosztatarákban szenvedő betegek azt mutatta ugyanazt a csíravonal mutációt esetben 728. Érdekes, nincs mutáció mutattunk ki a tumor minták a két esetben. Valószínűleg, a mutáns allél alatt elveszett a tumor fejlődését. A kezdeti korosztály számára az esetek csírasejt-mutáció az törzskönyve volt 78 év esetén 728, 73 év a bőrrák és a 76 év a prosztatarák. Katalógusa nem észleltünk mutációt SSCP és a DNS-szekvenálás az exon 3 a β-catenin gén a 50 gyomor tumorok.
hét gyomor daganatok mutatták, aberráns átiratok az E-cadherin. Daganatok 360, 369, 568, 717 és 750 jelenik beillesztése intron 7 közötti exon 7 és 8 Tumor 755 megmutatta törlését elmúlt 72 bázisok exon 7, 8. exon és az első 124 alapjait exon 9. Tumor 808 látható két aberráns mRNS, amelyek közül az egyik már törlés exonok a 8. és 9., valamint egy esetben a törlés utolsó 84 bázisok 8. exon (1. táblázat).
Végül végeztünk immunhisztokémiai festéssel az E-cadherin és β-catenin. A regionális eltérések a festődést egész daganatok. A scorings +/-, ++ /- és +++ /- lásd a több mint 50% a sejtek pozitív, és scorings - /+, - /++ és a - /+++ jelezve több, mint 50% a sejtek negatív. Negatív (-) vagy csökkentett (- /+, - /++, - /+++ és +/-) expresszióját az E-cadherin és β-catenin volt kimutatható 21/50 (42%) és a 14/50 ( 28%) esetben volt. Továbbá, a β-catenin IHC, 11 tumorok is mutatott pozitív citoplazmatikus festődés (1. táblázat). Szignifikáns összefüggést találtunk a negatív vagy csökkent expressziója E-cadherin és β-catenin (p = 0,048, Χ 2 teszt). Szintén találtunk összefüggést csökkent expressziója E-cadherin és diffúz Szövettípus (p = 0,04, Fisher exact teszt). Katalógusa Megbeszélés katalógusa A magas gyakorisága LOH 16q22.1 régió erősen azt sugallja, hogy van egy vagy több tumor szupresszor gének ebben a térségben, amelynek elvesztése válthatna karcinogenezissel gyomorrák. Az E-cadherin gén került leképezésre kromoszóma 16q22.1 [26]. A csökkentett expresszióját és a gén-mutációk az E-cadherin több típusú rákos megbetegedések, beleértve a gyomor- és lobularis emlőrák azonosítottak, jelezve, hogy az E-cadherin gén egy tumorszuppresszor gén [2-4], [13-17, 27] . Ebben a vizsgálatban 3 esetben (6%) mutatott azonos missense mutációt A592T. A kalcium-kötő motívumok található az extracelluláris domének 1-5 tekintik a legfontosabb eleme a funkció az E-cadherin, mivel szintetikus molekula egyetlen amino-sav-szubsztitúciós egy kalcium-kötő motívum nem mutatott tapadóképesség [28] . Továbbá, a humán sejtvonalon MKN45 származó gyomorrák, amely hiányzott szoros sejt-sejt adhézió, egy 4-amino-sav-deléciót találtak a határ közötti exonok a 6. és 7., amely tartották, hogy megváltoztassa a konformáció körülvevő kulcs kalcium-kötő motívumok és megszüntetni a tapadási tulajdonság az E-cadherin molekulák [29]. Az egyetlen aminosav-szubsztitúció a jelen tanulmányban belül található az ötödik extracelluláris doménje E-cadherin, ahol egy kalcium-kötő motívumot létezhetne. Elképzelhető tehát, hogy a mutációk a három esetben is elpusztult funkciója az E-cadherin. Érdekes, hogy a három esetben azt is kimutatta, LOH 16q22.1 tartalmazó E-cadherin locus. Tehát úgy lehet tekinteni, hogy a két genetikai eseményeket eredményező inaktiválását a gén történt a két allél az E-cadherin gén, ill. A fenti megállapításokat jelezte, hogy az E-cadherin gén egy tumor-szuppresszor gén, mivel ez összhangban a klasszikus két-hit elmélet a tumor szuppresszor gének [30]. Korábbi tanulmányok lobularis emlőrák is támogatja ezt a véleményt [4, 14]. A sejtvonal MKN45 fent említett (gyengén differenciált adenocarcinoma) gyenge sejt-sejt adhézió, egy 12 bp keretben törlését E-cadherin gén és a veszteség a vad típusú alléi detektáltuk [29]. De ez a sejtvonal még mindig mutatott erős expresszióját mRNS és fehérje, ami arra utal, hogy nem csak csökkent expressziója, hanem szerkezeti rendellenességek maguk vezethet inaktiválását az E-kadherin-közvetített sejt adhéziós rendszer [29]. Ezért egy egyetlen aminosav-szubsztitúció megtalálható ebben a tanulmányban okozhat szerkezeti változások az E-cadherin és miatt korlátozott a sejt-sejt adhézió, bár két esetben (23 és 294) azt mutatta, elegendő fehérje expresszióját.
Érdekes, hogy a ugyanabban a sorrendben változata szomatikus és mutációi találtak egyidejűleg különböző gyomor betegeknél. Case 23 szomatikus mutáció volt kezdete életkora 56 év, de az esetekben 294 és 728 a mutációi voltak kezdete korosztály 71 és 78 év volt. Az egyik magyarázat erre a jelenségre az lehet, hogy veszteség második allél az E-cadherin esetében 23 elő nagyon korán, ezáltal triggerring karcinogenezissel viszonylag korán esetén 23. De van egy másik lehetőség is, hogy ez a mutáció esetén 23 szerepet játszott csak progressziójában a daganat, de nem a kezdeményezése, ahol a többi genetikai események is valószínűleg elindításáért felelős a gyomorrák. De esetekben 294 és 728 a csírasejt-mutáció volt kései kezdetű korban. Ez azért lehet, mert a inaktiválása másik allél igen későn történt. Egy cikk számolt be, hogy a kötelező fuvarozók csonka mutációk E-cadherin gén a 80-as és 90-es változatlan maradt [31]. Ezért további azonosítása genetikai és /vagy környezeti módosítók, ami megmagyarázhatná a változó korban alakul ki kell végezni. Speciálisan, az esetben 294 három daganat a gyomor, ami összhangban van a genetikai daganatok mivel általában több [30].
A frekvencia (6%) a mutáció A592T 50 gyomor daganatok szinte négyszer, hogy a normál populációban , ami arra utal, újra, hogy ez a mutáció valóban hozzájárul a tumorgenesisben egy részhalmaza gyomor daganatok. Nagycsaládok, 0,36% az emlődaganatok, és nem más daganatok, megmutatta azonos mutációi, jelezve, hogy ott lehet a szövettani különbség ez a mutáció a gyomorrák és más rákos.
Csak másik két esetben mutatott A592T mutáció a család ügy 728. Speciálisan, ez a mutáció kimutatható volt csak megfelelő normál szövetben, de nem a tumorszövetben, ami arra utal, hogy a mutáns allélek alatt elveszett a tumorképződéshez. Ezekből arra lehet következtetni, hogy ez a mutáció nem játszanak szerepet a tumorgenesisben prosztata- és bőrrákot, de lehet a gyomor-rák specifikus.
Arra a következtetésre jutottunk, hogy az A592T mutáció növelheti a élettartam kialakulásának kockázatát gyomorrák, de egyértelműen variáns alacsony penetrancia. Eredményeink két különböző szekvencia variánsok kodonnál 592 (A592T és A592S), mint csíravonal és a szomatikus mutációk, azt sugallják, hogy ez a kodon egy hotspot a mutációk tumor patogenezisében.
A töréspontok beszúrását intron 7 és törlését exon 8 és 9. a splicing oldalak, összhangban "Gu-AG" szabály mRNS splicing. Lehet feltételezi, hogy ezek a változtatások nem keletkezik alternatív splicing, mert nincs bizonyíték az alternatív splicing találtak belül egér E-cadherin gén [32], és nem aberrált mRNS mutattunk rákos szövetekben. A mutációk splicing helyek kellene, hogy felelős a változások az E-cadherin mRNS-ek, azonban nincs olyan mutációkat találtak DNS-szinten ebben a vizsgálatban, valószínűleg azért, mert a SSCP használt mutációanalízis alacsony hatékonyság. További 2 deléciók kimutatta töréspontok a nem illeszkedő oldalak, akinek a splicing nem összhangban "GU-AG" szabály, talán azt jelzi, hogy egy átrendeződés genomi szinten okozhatja a rendellenes mRNS-ek. Korábbi tanulmányok kimutatták, kihagyás exon 8. vagy 9. gyomorrákban [24, 33]. Ezek a rendellenességek vezethet E-cadherinek vesztes kalcium-kötő motívumok hiánya miatt exonok a 8. és 9., valamint csonkított molekulákat, mert a frameshift mutációk által okozott inszerciókat és deléciókat, végül megkönnyíti szóródása karcinóma sejtekhez.
Csökkent expressziója E- cadherin és β-catenin találtak néhány rák, beleértve a gyomorrák [8]. Heterogén vagy instabil kifejezés mind az E-cadherin és β-catenin egész daganatok találták. Bebizonyosodott, hogy a 40% -a adenokarcinómák E-cadherin szintek emelte a saját intravaszkuláris tumor komponensek, összehasonlítva azok extravascularis tér [34]. Ennek egyik magyarázata az lehet, hogy bejáratnál egy karcinóma egy intravaszkuláris rekeszek társított túlszabályzását E-cadherin expresszió, és hogy a későbbi kijáraton extravaszkuláris szövetekben van társítva downregulation [35]. Mivel az E-cadherin és β-catenin a döntő komponensek alkotnak sejt-sejt adhézió komplex, elvesztése közülük vezethet a zavar a funkció a komplex, amely okozhat gyenge sejt-sejt adhézió és ruházza invazív ingatlan a tumor . Továbbá, a csökkentett sejt-sejt adhézió társul megszűnik a kontakt gátlás a proliferáció, ami lehetővé teszi menekülés növekedés szabályozó jelet, végül kiváltó karcinogenezis az emberi rák [8]. Ebben a vizsgálatban összefüggést abnormális expressziója az E-cadherin és β-catenin találtak, ami arra utal, hogy a veszteség az E-cadherin kötő okozhat újraelosztása β-catenin a sejtmembránból a citoplazmába. A megnövekedett szabad β-catenin a citoplazmában is áthelyeződnek a magba, és vezet aktiválását génexpressziót. Ezt támasztja alá a megállapítást, hogy két esetben (676 és 738) azt mutatták, negatív festődést a belső felületén a membrán és a pozitív festődést a citoplazmában, egyszerre. De a többi 9 daganatok (1. táblázat) mutatja mérsékelt vagy erős festés membrán is kiállított pozitív festéssel citoplazmában, ami arra utal, hogy a rendes lebomlását szabad β-catenin citoplazmában gátolt. Továbbá, azt találtuk, összefüggést abnormális expressziója az E-cadherin és diffúz Szövettípus, jelezve, hogy a változások az E-cadherin szerepet játszhat a rosszul differenciált gyomor daganatok. Érdekes, aberráns expresszióját az E-cadherin és /vagy a catenins kimutatták, hogy egy független prognosztikus markereként rövid túlélési gyomorrákos betegek [8]. Különösen érdekes az a megállapítás, hogy az E-cadherin független előrejelzője okkult nyirokcsomó és mikrometasztázisok a csomópontok besorolt ​​Nem rutin kórszövettani módszerekkel [8]. Katalógusa Következtetések
Eredményeink alátámasztják, hogy a megváltozott E-cadherin és β-catenin szerepet játszanak a kialakulásában és progressziójában a gyomorrák. A két gén csökken a gyomorrák, de a mechanizmus a downregulációja nem világos. LOH, mutációk és változtatások RNS splicing megmagyarázhatja egy része a downregulációját az E-cadherin gyomorrákban. Katalógusa nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás katalógusa Ezt a munkát támogatta az izlandi Kutatási Tanács, az Izlandi Egyetem Science Alap és az izlandi Cancer Society.
Érdekütközés katalógusa Nincs bejelentett katalógusa

• Egy eset-kontroll vizsgálat hatására az apolipoprotein E genotípusok gyomorrák kockázatát és progression
• Szupport vektor gép modell diagnosztizálásához nyirokcsomó-metasztázis gyomorrák multidetektoros komputertomográfia: előzetes tanulmány