Plos ONE: Zvišane interlevkin-32 Expression je povezana s Helicobacter pylori, ki so povezani gastritis

Povzetek

Ozadje

interlevkin-32 (IL-32) je pred kratkim odkril vnetnih citokinov, vključenih v vnetne bolezni. Preučevali smo izražanje IL-32 in njegova uredbe mehanizma v vnetnega odziva bolnikov z Helicobacter pylori
( H. pylori
) okužba.

Design in metode

IL-32 mRNA in beljakovin izraz v želodčnih tkivih je bila odkrita s kvantitativno PCR v realnem času in imunohistokemijo. Ureditev IL-32 v človeški želodca epitelij celične linije AGS je preiskovala različnih citokinov stimulacijo in drugačne H. pylori
okužba sev.

Rezultati

želodca IL-32 mRNA in izražanje proteina so zvišane pri bolnikih z H. pylori
okužbe in v pozitivni korelaciji z gastritisom. V H. pylori
okuženimi bolniki je bila stopnja mRNA IL-32 povezana tudi s tisto vnetnih citokinov IL-1β in TNF-a. In vitro
IL-1β in TNF-α lahko upregulate IL-32 mRNA in raven beljakovin v AGS celic, kar je odvisno od NF-κB signala poti. Ureditev IL-32 izražanja v odgovor na H. pylori
-infection bi lahko oslabili s pomočjo nevtralizirajočih protiteles blokirati IL-1β in TNF-a. Poleg tega, H. pylori
okuženimi AGS celice povzročijo tudi IL-32 mRNA in izražanja proteinov, ki je bil odvisen od CagA.

Sklepi

IL-32 stopnja povišano bolnikih s H . pylori
okužbe in njen izraz ureja vnetnih dražljaji, kar kaže, da se lahko IL-32 igrajo pomembno vlogo v patogenezi H. pylori
-povezana gastritis

Navedba. Peng L-y, Zhuang Y Li W-h Zhou Y-y, Wang T-t, Chen N, et al. (2014) Zvišane interlevkin-32 Expression je povezana s Helicobacter pylori
-povezana gastritis. PLoS ONE 9 (3): e88270. doi: 10,1371 /journal.pone.0088270

Urednik: Ivo G. Boneca, Institut Pasteur Pariz, Francija

Prejeto: 24. avgust, 2013; Sprejeto: 8. januar 2014; Objavljeno: 14. marec 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprta s sredstvi iz Medical Science Youth Training projekt kitajske ljudske osvobodilne vojske (13QNP108) in Nacionalnega Temeljni raziskovalni program Kitajske (973 Program, št 2009CB522606). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Helicobacter pylori
( H. pylori
) je Gram-negativna, mikroaerofilnih bakterije, ki colonizes želodec približno 50% prebivalstva na svetu. Vztrajno okužba H. pylori
povzroča kronično in vztrajno gastritis in povečuje tveganje za nastanek čira na želodcu in rak želodca.

H. pylori
okuženimi želodčna sluznica je označen s tem, infiltracija imunskih celic in produkcije vnetnih faktorjev. Th1 in odziv Th2 so poročali, da posreduje imunski odziv na H. pylori
in Th1 odziv je mislil, da je prevladujoča [1]. Potem indukcija Th17 odziv v H. pylori
okuženimi želodec potrjuje [2]. Poleg Th1, Th2 in Th17 celic, regulatorne celice T (Tregs) prav tako igrajo pomembno vlogo pri H. pylori
-povezana gastritis [3]. Medtem, proinflammtory citokine, kot so IL-1β, TNF-a in IL-6, so tudi dokazano, da se povišano H. pylori
okuženimi želodec [4], in citokini lahko vplivajo T celic imunskega odziva pri vnetnih obolenjih, kar nakazuje, da je lahko vnetni dejavniki ključnega pomena H. pylori
-povezana želodca vnetje. Vendar natančen mehanizem procesa še ni povsem pojasnjen.

IL-32 je na novo opredeljena vnetnih citokinov, ki jih proizvajajo imunskih celic (NK celic, T celic, monociti) in zunaj imunske celice (endotelne celice , epitelne celice) [5] - [7]. To je bila prvotno klonirali kot gena IL-2 inducirane in se imenuje NK-4, vendar je njena funkcija ni bil znan do leta 2005 [5], [8]. Obstaja šest spojnice variante, vključno z IL-32α, β, γ, δ, ε, in ζ in raznolike vloge so lahko igrali s svojimi različnimi izooblike. Vendar pa ni bila odkrita posebna receptorja za IL-32, čeprav nevtrofilcev proteinaze 3 veže na IL-32 z visoko afiniteto [9]. IL-32 igra pomembno vlogo pri različnih vnetnih obolenj in njen izraz Dokazali so, da korelira z resnostjo bolezni pri revmatoidnem artritisu, Crohnova bolezen in atopični dermatitis [10] - [12]. Poleg tega, IL-32 je bila vpletena v nekaterih nalezljivih bolezni, vključno z H. pylori
okužba [13] - [16]. Vendar pa je povezava med IL-32 izražanja in H. pylori
inducirano gastritis in natančen mehanizem regulacija tudi to, ali je samo- /parakrin vpliv na izražanje IL-32 je mogoče vključiti v proces še vedno ni znan.

V tej študiji smo ugotovili, IL -32 izraz v biopsijo pri bolnikih s H. pylori
okužbe in analizirati odnos med želodčno ravni IL-32 in resnost vnetja sluznice. Kasneje smo raziskali vpliv vnetnih dražljajev in H. pylori
okužbe na IL-32 izražanja v človeške želodčne epitelij celičnih linij. Naši rezultati so pokazali, da bi se IL-32 vpleten v patogenezo H. pylori
-povezana gastritis.

Etika Statement

Materiali in metode

Človekove želodca biopsije sluznice so bili zbrani z rutinskim endoskopijo v bolnišnici Xinqiao tretjega vojaške Medical University . Kri je bila pridobljena na isto temo, ki je prestal endoskopijo za H. pylori
seroloških testov. Študija je odobril Odbor za etiko bolnišnice Xinqiao, tretji Vojaške zdravstvene University. Pisna privolitev je bila pridobljena iz vsakega predmeta

Predmeti

želodcu tkiva in krvi so bili zbrani od 54 bolnikov. (Moški /ženske = 27/27; povprečna starost 47 ± 1,2 let) z H. pylori
okužbe, ki je prestal endoskopijo v bolnišnici Xinqiao tretjega vojaške Medical University. H. pylori
okužba bila potrjena s testom hitro ureaze, seroloških testov, ^{13C-urea dihalnega testa in histologijo. Bolniki so bili razvrščeni kot H. pylori
pozitivna, če sta dva od štirih testov pozitiven. Normalno želodca tkiva iz 47 predmetov (moški /ženske = 23/24, povprečna starost 47 ± 1,3 let)., Ki so imeli negativne rezultate za vse štiri teste so vpisani kot kontrole}

biopsijo in ocena Histologija

biopsija vzorci so bili odvzeti iz predmetov na vsaki endoskopijo. Ena je bila takoj zamrznili v tekočem dušiku in shranili pri -80 ° C za ekstrakcijo RNA. Preostanek biopsijo osebkov so bile določene s formalinom in vdelali v parafin. Hematoksilinom-eozinom (H & E) obarvajo oddelki so obravnavali dva izkušena histopathologist. Histološka resnost gastritis bila ocenjena od normalnega do hudo glede na gostoto infiltracije mononuklearnih in polymorphnuclear celice v skladu z uveljavljenimi merili [17], [18].

Cell Culture

želodca epitelnih linija AGS (ATCC, American Type Culture Collection) smo gojili pri 37 ° C in 5% CO _{2 v F12 Ham je (Hyclone, Logan, UT, ZDA), ki vsebuje 10% fetalnega telečjega seruma (FCS). AGS Celice smo zasejali v šestih vdolbinami z gostoto 1 x 10 ^{6 celic /dobro in stimulirali z 10 ng /ml TNF-a ali /in 10 ng /ml IL-1β (PeproTech, Rocky Hill, NJ , ZDA); Celice smo zbrali po označenih časih za analizo IL-32 mRNA in izražanja proteinov. Za signalne poti, v inhibicije testu, inhibitor NF-κB (BAY 11-7082), MEK1 /2 zaviralcem (U0126), p38 /MAPK zaviralcem (SB203580), JNK zaviralcem (SP600125), JAK inhibitorjev I (vse po 10 mikrometrov in vseh iz Calbiochem, San Diego, CA, ZDA) ali DMSO vozila (Sigma, Saint Louis, MO, ZDA) dodamo celični kulturi 1 uro pred stimulacijo citokinske.}}

okužba AGS celic z H. pylori

H. pylori
11637 sev in njegova izogenimi CagA negativni mutant (CagA ^{- sev) gojimo na možgane srca infuzijo plošč, ki vsebujejo 10% kunčje krvi pri 37 ° C pod mikroaerofilnih pogojih (5% O _{2 10% CO 2, 85% N 2). H. pylori
speremo off kulture plošče s PBS in centrifugirali pri 2500 × g 5 min, nato pa resuspendirali v PBS za optično količinsko gostoto pri 600 nm (1 OD 600 = 1 × 10 9 H. pylori
/ml). Različna okužbe (MOI) po 1, 10 in 100 je bila uporabljena za okužbo AGS celic. Za nevtralizacijo testih nevtralizirajoča protitelesa proti TNF-a (nTNF-a, 1 ug /ml, Biolegend) ali IL-1β (nil-1β, 1 ug /ml, eBioscience) dodamo v sistemu coculture.}}

RNA Isolation in Quantitative Real-time PCR

RNA je bila vzeta iz biopsijo ali celice, ki jih TRIzola reagent® (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA) in obratno kopiranih na cDNA uporabo ReverTra Ace (TOYOBO, Osaka, Japonska). Kvantitativni PCR v realnem času smo izvedli s sistemom za zaznavanje iQ5 (Bio-Rad, ZDA). Primerji PCR so bili zasnovani za prečkanje meje za ekson-intron in se uporabljajo za odkrivanje mRNA ekspresije IL-32, TNF-α, IL-1β in β-aktina in njihove sekvence so naslednji: IL-32, naprej, 5 ' -ACGACTTCAAAGAGGGCTACC-3 '; obratno, 5'-GCCTCGGCACCGTAATCCAT-3 '; TNF-α, naprej, 5'-TCTCTAATCAGCCCTCTGGC-3 '; obratno, 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3 '; IL-1β, naprej, 5'-GTTCTTTGAAGCTGATGGCC-3 '; obratno, 5'-GTGGTCGGAGATTCGTAGCT-3 '; β-aktin, naprej, 5'-TTCCTTCCTGGGCATGGAGTCC-3 '; obratno, 5'-TGGCGTACAGGTCTTTGCGG-3 '. β-aktin uporabimo kot notranjo kontrolo. Relativno izražanje genov je bila izračunana kot krat sprememb po metodi ΔΔCt.

Imunohistokemija

Štirideset-parafin vgrajeni vzorce smo narežemo na 5-Lun sekcije. Potem ko deparaffinized in hidrirani, so odseki v citratnem pufru (pH = 6,0) podvržemo toploto inducirane priklic antigena v mikrovalovni pečici in obdelamo s 3% vodikovega peroksida. Po inkubaciji z kunčjega anti-humani IL-32 (Abcam, MA, ZDA) preko noči pri 4 ° C, Predstavitve smo obdelali s hrenovo peroksidazo konjugiranega sekundarnega anti-kunčjega protitelesa (Zhongshan zlati most Biotech., Beijing, Kitajska), čemur sledi substratom 3,3'-diaminobenzidine tetrahidroklorid (DAB). Izotipa ujema protitelo pa smo uporabili kot negativno kontrolo. Slike so bile pridobljene pod mikroskopom, ki je opremljen z digitalnim fotoaparatom Nikon Eclipse 80i (Tokio, Japonska). Za semi-kvantitativno analizo imunohistokemijo, je vsak del izbran za ocenjevanje IL-32 imunskim barvanjem v želodcu tkivih in je bila ocenjena na naslednji način: rezultat 0, ne izraz; rezultat 1, nizko izražanje; rezultat 2, vmesni izraz; rezultat 3, visoko ekspresijo.

Western Blot

Celice izperemo v ledeno mrzlo PBS in nato prekinjeno v liznega pufra (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 2,5 mM natrijev pirofosfat, 1 mM glicerofosfata, 1 mM Na3VO4, 1 ug /ml leupeptina in inhibitor proteaze). Koncentracija proteinov smo izmerili z BCA protein poskusnim kit (boster, Wuhan, Kitajska). Celični lizati ločimo z 12% SDS-PAGE in prenesli v poliviniliden difluorid membrano. Membrane smo blokirali 1 h s 3% serumskega albumina goveje v Tris-pufrom-Tween pri sobni temperaturi in nato inkubirali preko noči pri 4 ° C s kunčjim anti-humani IL-32 (Abcam, MA, ZDA) ali z proti miške človek β-aktin ((Tianjin Sungene Biotech Co., Ltd, Kitajska). hrenovo peroksidazo konjugiranih sekundarna protitelesa je bila uporabljena v skladu z instructures proizvajalca. proteini obresti so bile vidne tudi s pomočjo Supersignal® West Dura Trajanje substrat reagenta (Thermo, IL , ZDA).

Statistična analiza

Vsi rezultati so bili povzeti kot povprečje ± standardna napaka srednje vrednosti (SEM), in statistične analize smo izvedli s pomočjo GraphPad Prizma 5.0 Software. razlike med dvema . skupine so bili analizirani s strani Mann-Whitney U preskusov in več skupin so analizirali z enosmerno analizo variance (ANOVA), ko so bile odkrite odstopanja, je Spearman je korelacija uporablja za oceno stopnje povezanosti med spremenljivkami P <. 0.05 smo imeli statistično značilne.

Rezultati

Zvišane vrednosti IL-32 mRNA ravni, ugotovljena pri bolnikih s H. pylori
Okužba

Da bi preučili, ali je IL-32 vpleteni v patogenezo H. pylori PODJETJA
povzroča gastritis, smo najprej določili IL-32 mRNA izraz v želodcu biopsijo iz predmetov z in brez H. pylori
okužbe. Kot je prikazano na sliki. 1A, je IL-32 izraz bistveno višja v H. pylori
-positive vzorcev kot v H. pylori
HBeAg negativnih vzorcev (P < 0,001). Oceniti ali je bila ekspresija IL-32, povezane s stopnjo vnetja pri H. pylori
okuženimi želodca vzorce smo razdelili vzorce v normalnih in blagih, zmernih in hudih gastritis skupin, ki temeljijo na oceni histologijo, kot je opisano v Materiali in metode. Rezultati so pokazali, da je raven IL-32 mRNA H. pylori
-positive vzorci so bili pozitivni korelaciji s stopnjo vnetja želodca (sl. 1B). Poleg tega je raven IL-32 mRNA je tudi pokazala pozitivno korelacijo s TNF-a in ravni IL-1β mRNA (sl. 1C).

Povečana IL-32 Protein Expression pri bolnikih s H. pylori
Okužba

Za vizualizacijo IL-32 izraz v želodčnih biopsijo, je Imunohistokemijsko IL-32 izvedena na parafinskih vgrajeni tkiva. Kot je prikazano na sliki. 2B, nekaj IL-proizvodnjo 32 celic so odkrili v H. pylori
HBeAg negativnih želodca tkiva, medtem ko je v H. pylori
-positive želodca tkiva, smo ugotovili, da je IL-32 protein izraz bistveno povečala (sl. 2C). Poleg tega, semi-kvantitativno ovrednotenje IL-32 radioinkorporacijo potrdili, da je ekspresija IL-32, pri želodčnih tkivih H. pylori
okuženimi bolniki na ravni beljakovin je v primerjavi s tistimi v H je tudi znatno povečal. pylori
HBeAg negativnih želodca tkiva in v blagi gastritis.

IL-32 mRNA in beljakovin ravni so molekul s TNF-a in IL-1β

Ker smo ugotovili pozitiven odnos med IL -32 ravni mRNA in stopnja vnetja želodca v želodčnih tkiv in korelacija med IL-32 mRNA in IL-1β in TNF-α mRNA, ureditev vnetnih citokinov na IL-32 mRNA izražanja so raziskovali v AGS celicah. Kot je prikazano na sliki. 3A, potem ko je bil obdelan s citokini za 24 ur, IL-32 raven mRNA signifikantno molekul: 5,0 ± 0,5-krat s TNF-a, 6,9 ± 0,5-krat z IL-1β in 11,2 ± 1,4-krat z IL-1β in TNF-α. Ta učinek je bil povsem odvisen od NF-κB signalne poti kot predhodnem zdravljenju z NF-κB zaviralca BAY 11-7082, vendar ne JNK, p38 /MAPK, signalizacija zaviralci MEK1 /2 ali JAK /STAT inhibira indukcijo IL-32 mRNA po stimulaciji s TNF-a ali IL-1β (sl. 3C). Poleg tega Western blot potrdila, da je bil IL-32 raven proteina povzročijo tudi TNF-a in /ali IL-1β stimulacijo ki odvisni od NF-κB signalne poti (sl. 3B in D). Mi poleg preučevali, ali je bil TNF-α in IL-1β, vključenih v H. pylori
inducirano uravnavanjem IL-32 izražanja. AGS celice so bile okužene z H. pylori
in hkrati zdravijo z nevtralizirajočih protiteles proti blokira TNF-a ali IL-1β. Kot je prikazano na sliki. 3E, H
. pylori
inducirano IL-32 protein izražanje je bistveno zmanjšalo z uporabo navedenih citokinov blokiranje protitelesa.

H. pylori
inducirano IL-32 Expression

Da bi še dodatno preučiti neposredni učinek H. pylori
na ekspresijo IL-32 v epitelijskih celic želodca so AGS celice okužene z H. pylori
pri MOI 1, 10 in 100. Kot je prikazano na sliki. Ravni 4A in B, IL-32 mRNA in beljakovin so po H povečala. pylori
okužbe na način, ki je odvisen od odmerka. Mi poleg analizirala, ali H. pylori
lističi razlik, ki bi prispevala k različno izražanje IL-32. Celice so bile okužene z H. pylori 11637
sev in CagA ^{- sev. Čeprav CagA - okužba sev nekoliko povečal izražanje IL-32 v AGS celic, indukcijo IL-32 mRNA in raven beljakovin po CagA - je bila okužba sev bistveno nižja od tiste, ki H. pylori 11637
okužba sev (sl. 4C in D).}

Pogovor

V tej raziskavi smo ugotovili, da je v želodcu IL-32 znatno zvišane pri bolnikih z H . pylori
okužbe na ravni mRNA in koncentracije proteina. Zvišana IL-32 mRNA korelira z resnostjo vnetja želodca. Poleg tega so bile koncentracije IL-32 mRNA povezana tudi s TNF-a in ravni IL-1β mRNA v H. pylori-
pozitivne želodčne biopsija vzorcev, in enega od dveh citokinov lahko upregulate IL-32 mRNA in raven beljakovin. Poleg tega smo ugotovili, da je H. pylori
okužba želodca epitelijskih celičnih linij povzroča tudi IL-32 mRNA in izražanja proteinov. Ti rezultati kažejo, da je IL-32 je verjetno vpletena v vnetje želodca pri bolnikih s H. pylori
infekcija.

IL-32 je bil nedavno opisali kot proinflammtory faktor sodeluje v številnih vnetnih obolenj, kot kroničnega rinosinusitisa, stanje, ki ga gram pozitivne bakterije okužbe [19], [20] predvsem posledica. Zvišane vrednosti IL-32 je nato poročali HCV in HBV okužbo jeter in povezati s težo jeter vnetja in fibrozo jeter [15], [21]. V tej študiji smo pokazali, da je bil IL-32 raven mRNA bistveno zvišane pri bolnikih z H. pylori
okužbe, pa tudi opazili visoko korelacijo med IL-32 mRNA in vnetje želodca, kar kaže, da se lahko IL-32 igrajo pomembno vlogo v H. pylori-
okuženih želodec. Poleg tega je bila imunohistokemija uporabljajo za odkrivanje vir IL-32, in rezultati so pokazali, da je bil IL-32 izražen v epitelijskih celic želodca in njegovo visoko ekspresijo opazili pri H. pylori-
pozitivni želodčnih tkiva. Ker je bil IL-32 je pokazala, da inducirajo produkcijo IL-8 pri epitelijskih celic želodca in zavirala proangiogenic izločanje faktor VEGF s bronhialnih epitelnih celic [16], [22] in smo tudi opazili IL-32 raven mRNA smo v pozitivni korelaciji z IL-8 ekspresijo (podatki niso prikazani). Smiselno je, da IL-32 vpliva na delovanje epitelijskih celic želodca v H. pylori-
okuženih želodec.

Klasična želodca vnetje z H. pylori
okužba, ki lahko vplivajo infiltracije imunske celice in vnetne citokine, kasneje lahko vključuje nedavno odkrili IL-32 [19] - [22]. V naši raziskavi smo ugotovili, da in vitro TNF-α in /ali IL-1β spodbudila AGS celice upregulate IL-32 mRNA in izražanja proteinov, ki podpira pozitiven odnos med IL-32 in TNF-a in IL-1β in vivo . Vendar Th17 citokinov (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 citokinov IL-4, Tregs citokinov TGF-β1 in Th1 citokinov IFN-y vse igrišča za induciranje IL-32 mRNA in izražanja proteinov v našem sistemu čeprav so poročali vsi pomembni vrste imunske celice in citokini, da bi prodrli H. pylori-
okuženih trebuhu (glej sliko S1). Ti rezultati kažejo, da je IL-32 je verjetno proizvedena pred infiltracijo teh celic, ki je podprta s poročilom, da je IL-32 inducira dendritičnih celic zorenje in spodbuja Th1 in Th17 polarizacijo [23]. Poleg tega je bila indukcija IL-32 mRNA in proteina s TNF-a ali IL-1β blokira inhibitor NF-κB PO 11-7082, kar kaže, da je molekularni mehanizem temelji ta proces verjetno NF-κB odvisni. Zanimivo je, da s pomočjo nevtralizirajočih protiteles, da blokira TNF-a ali IL-1β vzporedno s H. pylori
okužba, smo ugotovili, da je IL-32 raven beljakovin bistveno zmanjšala. Torej, naši rezultati so pokazali, da epitelijskih citokinov (TNF-α in IL-1β), odgovor na H. pylori
okužbe so pomembni za regulacijo IL-32 izražanja.

Naši rezultati tudi pokazala, da so IL-32 mRNA in beljakovin ravni na način, ki je odvisen od naslednjih H povečala. pylori
okužbe, kar kaže, da je učinek H. pylori
okužbe na IL32 izražanja neposredno fiziološka. Poleg tega CagA mutacije v H. pylori
lahko bistveno oslabi izražanje IL-32 v AGS celicah, kar pomeni, da je H. pylori
inducirano IL-32 Povecanje je odvisna od CagA. H. pylori
izražajo veliko beljakovin, da se olajša njegovo patogenezo [24]. UreB je tudi pomemben Virulenco protein za kolonizacijo H. pylori
in posredovana H. pylori
inducirano disfunkcija želodca pregrade [25], [26]. Ugotovili smo, da UreB mutacije oslabljen tudi H. pylori
inducirano IL-32 mRNA izraz (glej sliko S2). Zato je IL-32 izraz pretežno ureja prenosom CagA v epitelnih celic in drugih virulentnih beljakovin lahko vpliva tudi na patogene odziv H. pylori
na epitelijskih celic želodca.

Skratka, naši podatki pokazali, da je IL-32 izraz zvišane pri bolnikih s H. pylori
okužbe in povezane z resnostjo vnetja želodca. Ureditev IL-32 izražanja v odgovor na H. pylori
okužbe je odvisno od različnih prepleteni dejavniki. Ti podatki skupaj kažejo, da lahko IL-32 igrajo pomembno vlogo v patogenezi gastritis s H škodo. pylori
okužbe.

Podpora Informacije
Slika S1.
AGS celice smo zasejali v šestih vdolbinami z gostoto 1 x 10 ^{6 celic /jamico in stimulirali z 10 ng /ml Th17 citokinov (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 citokinov IL-4 smo Tregs citokinov TGF-β1 in Th1 citokinov IFN-γ za 24 ur in celice zberemo za analizo IL-32 mRNA in izražanja proteinov. Podatki so povprečje ± SEM treh ločenih eksperimentih in en predstavnik blot je bil prikazan
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088270.s001
(TIF)
Slika S2.
H. pylori
sev 26.695 gojili na možgane srca infuzijo plošč, ki vsebujejo 10% kunčje krvi pri 37 ° C pod mikroaerofilnih pogojih (5% O _{2, 10% CO 2, 85% N 2 ) in njena izogenimi ureazo podenota B-negativna mutant (UreB - sev) dobimo kot prej opisano [27]. Različna okužbe (MOI) 100 je bila uporabljena za okužbo AGS in ges-1 celice. Celice smo zbrali za analizo IL-32 mRNA ekspresije. Podatki so povprečje ± SEM od treh ločenih eksperimentih. * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
< 0,001
doi:. 10,1371 /journal.pone.0088270.s002
(TIF)}}

• Plos ONE: atrofični gastritis: sorodnem Faktor osteoporoze pri starejših Women
• Plos Patogeni: Caveolin-1 Varuje B6129 miši proti Helicobacter pylori, gastritis