PLOS ONE: Elevated Interleukin-32 expression est associée à Helicobacter pylori Gastritis

Résumé

Contexte

interleukine-32 (IL-32) est une cytokine pro-inflammatoire récemment découvert impliqué dans inflammatoire maladies. Nous avons étudié l'expression de l'IL-32 et de son règlement mécanisme dans la réponse inflammatoire des patients avec Helicobacter pylori
( H. Pylori
) infection.

Conception et méthodes

IL-32 de l'ARNm et l'expression des protéines dans les tissus gastriques a été détectée par quantitative en temps réel par PCR et immunohistochimie. La régulation de l'IL-32 dans la lignée cellulaire de l'épithélium gastrique humaine AGS a été étudiée par différents stimulation par des cytokines et différents H. L'infection par une souche de pylori.

Résultats

Gastric IL-32 ARNm et l'expression des protéines ont été élevés chez les patients avec H. pylori
infection et positivement corrélée avec la gastrite. Dans H. les patients infectés par des pylori, le niveau d'ARNm d'IL-32 a également été corrélée avec celle des cytokines pro-inflammatoires IL-1 et TNF-a. In vitro, l'IL-1β
et le TNF-α pourrait réguler à la hausse de l'ARNm de l'IL-32 et des protéines dans les cellules AGS, ce qui est dépendante de la voie de signalisation NF-kB. La régulation de l'IL-32 expression en réponse à H. pylori de la -infection pourrait être affaiblie à l'aide d'anticorps neutralisants pour bloquer l'IL-1β et TNF-α. En outre, H. les cellules AGS infectées par pylori ont également induit par l'IL-32 de l'ARNm et l'expression de la protéine, qui dépendait de CagA.

Conclusions

IL-32 niveau est élevé chez les patients atteints H . pylori
infection et son expression est régulée par des stimuli pro-inflammatoires, ce qui suggère que l'IL-32 peut jouer un rôle dans la pathogenèse de H. pylori
gastrite
la PI

Citation:. Peng L, Y Zhuang, Li W-h, Zhou Y-y, Wang T-t, Chen N, et al. (2014) Elevated Interleukin-32 expression est associée à Helicobacter pylori
Gastrite la PI. PLoS ONE 9 (3): e88270. doi: 10.1371 /journal.pone.0088270

Editeur: Ivo G. Boneca, Institut Pasteur Paris, France

Reçu: Août 24, 2013; Accepté: 8 Janvier 2014; Publié le 14 Mars, 2014

Droit d'auteur: © 2014 Peng et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Ce travail a été soutenu par des subventions du projet de formation des jeunes sciences médicales de l'Armée de libération du peuple chinois (13QNP108) et Programme national de recherche fondamentale de la Chine (973 Programme, No. 2009CB522606). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

Helicobacter pylori
( H. pylori
) est une bactérie microaérophile Gram négatif qui colonise l'estomac d'environ 50% de la population mondiale. L'infection persistante de H. pylori
provoque une gastrite chronique et persistante et augmente le risque d'ulcère gastro-duodénal et le cancer gastrique.

H. pylori de la muqueuse gastrique a été infecté par caractérisée par l'infiltration de cellules immunitaires et de la production de facteurs inflammatoires. Th1 et Th2 sont rapportés à la médiation réponse immunitaire à H. pylori
, et la réponse Th1 est considéré comme prédominant [1]. Ensuite, l'induction de la réponse Th17 dans H. estomac infecté par des pylori est confirmée [2]. Outre les cellules Th1, Th2 et Th17, les cellules T régulatrices (Treg) jouent également un rôle important dans H. pylori
gastrite la PI [3]. Pendant ce temps, les cytokines proinflammtory comme l'IL-1β, TNF-α et IL-6 a également été démontré à être élevée dans H. infecté par estomac pylori [4], et ces cytokines pourraient influencer la réponse immunitaire des cellules T dans les troubles inflammatoires, ce qui suggère que des facteurs inflammatoires peuvent être cruciaux dans H. inflammation gastrique pylori de la PI. Cependant, le mécanisme exact du processus n'a pas été complètement élucidé.

IL-32 est une cytokine pro-inflammatoire nouvellement identifiée produite par des cellules immunitaires (cellules NK, lymphocytes T, monocytes) et les cellules non immunitaires (cellules endothéliales , des cellules épithéliales) [5] - [7]. Il a été clone à l'origine comme un gène induit par l'IL-2 et NK-4 appelée, mais sa fonction est inconnue jusqu'en 2005 [5], [8]. Il y a six variants d'épissage, y compris l'IL-32α, β, γ, δ, ε et ζ et divers rôles sont potentiellement joués par ses différentes isoformes. Cependant, un récepteur spécifique de l'IL-32 n'a pas été découvert, bien que la proteinase 3 neutrophile se lie à l'IL-32 avec une haute affinité [9]. IL-32 joue un rôle important dans diverses maladies inflammatoires et son expression a été démontré une corrélation avec la gravité de la maladie dans la polyarthrite rhumatoïde, la maladie et la dermatite atopique, la maladie de Crohn de [10] - [12]. En outre, l'IL-32 avait été impliqué dans certaines maladies infectieuses, y compris H. pylori de l'infection [13] - [16]. Cependant, l'association entre l'IL-32 et l'expression H. gastrite induite par pylori et son mécanisme de régulation précise notamment si auto- /effets paracrines sur l'expression de l'IL-32 peut être impliqué dans le processus était encore inconnu.

Dans la présente étude, nous avons détecté IL -32 expression dans les échantillons de biopsie de patients avec H.
pylori infection et a analysé la relation entre l'IL-32 gastrique niveau et la sévérité de l'inflammation de la muqueuse. Par la suite, nous avons exploré l'impact des stimuli pro-inflammatoires et H.
pylori infection par l'IL-32 expression dans des lignées de cellules de l'épithélium gastrique humain. Nos résultats ont montré que l'IL-32 pourrait être impliquée dans la pathogenèse de H. gastrite de la PI pylori.

Matériel et méthodes de

Déclaration
éthique

biopsies de la muqueuse gastrique humaines ont été recueillies par endoscopie de routine à l'hôpital Xinqiao de la troisième université médicale militaire . Le sang a été obtenu à partir du même sujet qui a subi une endoscopie pour H. pylori
test de sérologie. L'étude a été approuvée par le Comité d'éthique de l'hôpital Xinqiao, troisième université médicale militaire. Le consentement éclairé écrit a été obtenu de chaque sujet

Sujets

tissus gastriques et de sang ont été collectées à partir de 54 patients. (de mâle /femelle = 27/27; âge moyen 47 ± 1,2 ans) avec H. pylori
infection qui a subi une endoscopie à l'hôpital Xinqiao de la troisième université médicale militaire. H. pylori de l'infection a été confirmée par test rapide-uréase, test de sérologie, ^{13C-urée test d'haleine et de l'histologie. Les patients ont été classés comme H. pylori
positif si deux des quatre tests étaient positifs. tissus gastriques normaux de 47 sujets (hommes /femmes = 23/24; âge moyen 47 ± 1,3 ans). qui ont eu des résultats négatifs pour les quatre essais ont été inscrits en tant que témoins}

Biopsy Specimens et évaluation histologie

les biopsies ont été prélevés sur les sujets à chaque endoscopie. L'un a été immédiatement congelé dans de l'azote liquide et stockés à -80 ° C pour l'extraction d'ARN. Le reste des échantillons de biopsie ont été fixés au formol et inclus dans de la paraffine. Hématoxyline-éosine (H & E) tachée sections ont été examinées par deux histopathologiste expérimenté. La gravité histologique de la gastrite a été classé à la normale à sévère en fonction de la densité des infiltrant mononucléaires et cellules polymorphnuclear selon les critères établis [17], [18].

Culture
Cell

Le gastrique ligne épithéliale AGS (ATCC, American type Culture Collection) a été cultivé à 37 ° C et 5% de CO _{2 F12 de Ham (Hyclone, Logan, UT, USA), qui contenait 10% de sérum de veau foetal (FCS). Les cellules AGS ont été ensemencées dans des plaques à six puits à une densité de 1 x 10 ^{6 cellules /puits et stimulées avec 10 ng /ml de TNF-α et /ou 10 ng /ml d'IL-1β (PeproTech, Rocky Hill, NJ , ETATS-UNIS); les cellules ont été collectées aux temps indiqués pour l'analyse de l'ARNm de l'IL-32 et l'expression de la protéine. Pour le signal voie inhibition test, inhibiteur de NF-kB (BAY 11-7082), MEK1 2 /inhibiteur (de U0126), p38 inhibiteur /MAPK (SB203580), inhibiteur de JNK (SP600125), JAK Inhibitor I (tous à 10 uM et tous de Calbiochem, San Diego, CA, USA) ou le DMSO du véhicule (Sigma, Saint Louis, MO, USA) ont été ajoutés à la culture cellulaire 1 heure avant la stimulation de cytokine.}}

infection des cellules AGS avec H. pylori

H. pylori
11637 souche et sa isogénique souche mutante CagA négatif (CagA ^{- souche) ont été cultivées sur des plaques d'infusion cerveau-coeur contenant 10% de sang de lapin à 37 ° C dans des conditions microaérophiles (5% O _{2 , 10% de CO 2, 85% N 2). H. pylori
a lavé les plaques de culture avec du PBS et on centrifuge à 2500 x g pendant 5 minutes, avant d'être remis en suspension dans du PBS pour la quantification de la densité optique à 600 nm (1 DO 600 = 1 × 10 9 H. pylori
/ml). Une multiplicité d'infection (MOI) de 1, 10 et 100 a été utilisé pour infecter les cellules AGS. Pour les dosages de neutralisation, la neutralisation d'anticorps contre le TNF-α (NTNF-α, 1 pg /ml, BioLegend) ou l'IL-1β (NIL-1β, 1 pg /ml, eBioscience) a été ajouté dans le système de co-culture.}}

Isolement de l'ARN et quantitative en temps réel
PCR

ARN a été extrait à partir d'échantillons ou de cellules de biopsie par TRIzol Reagent® (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) et reverse-transcrits en ADNc en utilisant ReverTra Ace (TOYOBO, Osaka, Japon). PCR quantitative en temps réel a été effectuée par le système de détection iQ5 (Bio-Rad, USA). Les amorces de PCR ont été conçues pour franchir une frontière exon-intron et utilisées pour détecter l'expression de l'ARNm de l'IL-32, TNF-α, IL-1β et de β-actine et leurs séquences sont les suivantes: IL-32, en avant, 5 ' -ACGACTTCAAAGAGGGCTACC-3 '; inverse, 5'-GCCTCGGCACCGTAATCCAT-3 '; TNF-α, en avant, 5'-TCTCTAATCAGCCCTCTGGC-3 '; inverse, 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3 '; IL-1β, en avant, 5'-GTTCTTTGAAGCTGATGGCC-3 '; inverse, 5'-GTGGTCGGAGATTCGTAGCT-3 '; β-actine, en avant, 5'-TTCCTTCCTGGGCATGGAGTCC-3 '; inverse, 5'-TGGCGTACAGGTCTTTGCGG-3 '. β-actine a été utilisée comme contrôle interne. L'expression relative des gènes a été calculée comme facteur de changement par la méthode ΔΔCt.

immunohistochimie

Quarante échantillons de paraffine ont été coupés en sections de 5 um. Après avoir été déparaffinées et hydratée, les sections dans un tampon citrate (pH = 6,0) ont été soumis à la chaleur induite par la récupération de l'antigène dans un four à micro-ondes et traité avec 3% de peroxyde d'hydrogène. Après incubation avec de lapin anti-IL-32 (Abcam, MA, USA) pendant une nuit à 4 ° C, Diapositives ont été traités avec l'anticorps anti-lapin secondaire peroxydase de raifort conjugué (Zhongshan Golden Bridge Biotech., Beijing, Chine), suivi par le substrat 3,3'-diaminobenzidine (DAB). Isotype anticorps appariés a été utilisé comme témoin négatif. Les images ont été acquises sur un microscope équipé d'un appareil photo numérique Nikon Eclipse 80i (Tokyo, Japon). Pour l'analyse semi-quantitative de l'immunohistochimie, chaque section a été choisie pour l'évaluation de l'IL-32 immunocoloration dans les tissus gastriques et a été notée comme suit: Note 0, aucune expression; score 1, une faible expression; score 2, expression intermédiaire; score 3, haute expression.

Western Blot

Les cellules ont été lavées dans du PBS glacé puis perturbé dans un tampon de lyse (Tris 20 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, 1 mM d'EGTA, 1% de Triton X-100, le pyrophosphate de sodium 2,5 mM, 1 mM de glycérophosphate, 1 mM Na3VO4, 1 pg /ml de leupeptine et de l'inhibiteur de la protéase). La concentration en protéine a été mesurée avec un kit de dosage de protéine BCA (boster, Wuhan, Chine). Les lysats cellulaires ont été séparés par 12% de SDS-PAGE et transférés sur une membrane de difluorure de polyvinylidène. Les membranes ont été bloquées pendant 1 h avec 3% de sérum-albumine bovine dans du Tris-solution saline tamponnée-Tween à température ambiante, puis incubées pendant une nuit à 4 ° C avec le lapin IL-32 (Abcam, MA, USA) ou anti-souris anti-humain β-actine humaine ((Tianjin Sungene Biotech Co., Ltd, Chine). anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort a été utilisé selon les instructures du fabricant. les protéines d'intérêt ont été visualisées en utilisant Supersignal® Ouest Dura réactif Durée de substrat (Thermo, IL , États-Unis).

analyse statistique

Tous les résultats ont été résumés sous forme de moyenne ± erreur type de la moyenne (SEM), et l'analyse statistique a été réalisée en utilisant le logiciel GraphPad Prism 5.0. les différences entre les deux . les groupes ont été analysées par le test et plusieurs groupes de Mann-Whitney U ont été analysés par une analyse unidirectionnelle de la variance (ANOVA) lorsque les écarts sont détectés, la corrélation de Spearman a été utilisé pour évaluer le degré d'association entre les variables P. < 0,05 a été considérée statistiquement significative.

Résultats

Elevated IL-32 ARNm niveau détecté chez les patients avec H. Infection de
pylori

​​Pour étudier si l'IL-32 est impliquée dans la pathogenèse de H. pylori
induite gastrite, nous avons d'abord déterminé l'expression de l'ARNm de l'IL-32 dans les échantillons de biopsie gastrique chez des sujets avec et sans H. pylori
infection. Comme on le voit sur la Fig. 1A, IL-32 expression était significativement plus élevée chez H. pylori
échantillons -positifs que dans H. échantillons séronégatifs de pylori (P < 0,001). Pour évaluer si l'expression de l'IL-32 a été liée au degré d'inflammation dans H. échantillons gastriques infectés par pylori de, nous avons divisé les échantillons en groupes de gastrite normales et légères, modérées et sévères fondées sur l'évaluation de l'histologie comme décrit dans Matériels et Méthodes. Les résultats ont montré que les niveaux d'ARNm d'IL-32 dans H. échantillons -positif de pylori étaient positivement corrélés avec le degré d'inflammation gastrique (Fig. 1B). En outre, le niveau d'ARNm d'IL-32 a également montré une corrélation positive avec les niveaux d'ARNm de l'IL-1β et TNF-α (fig. 1C).

Augmentation de l'IL-32 l'expression des protéines chez les patients atteints H. Infection de
pylori

​​Pour visualiser IL-32 expression dans les échantillons de biopsie gastrique, la coloration immunohistochimique de l'IL-32 a été réalisée sur les tissus enrobés de paraffine. Comme on le voit sur la Fig. 2B, quelques-unes des IL-32 des cellules productrices ont été détectés dans H. tissus gastriques séronégatifs pylori de, alors que dans H. tissus gastriques -positifs pylori de, nous avons observé que l'IL-32 expression de la protéine a été augmenté de façon significative (Fig. 2C). En outre, l'évaluation semi-quantitative de l'IL-32 immunoréactivité a confirmé que l'expression d'IL-32 dans les tissus gastriques H. les patients infectés par des pylori au niveau de la protéine a également augmenté de façon significative par rapport à ceux H. pylori
Les tissus gastriques séronégatifs et dans la gastrite légère.

IL-32 ARNm et protéine Level ont été augmentée par le TNF-α et de l'IL-1β

Parce que nous avons trouvé une relation positive entre IL -32 niveaux d'ARNm et le degré d'inflammation gastrique dans les tissus gastriques et corrélation entre l'IL-32 ARNm et IL-1β et ARNm de TNF-α, la régulation des cytokines pro-inflammatoires de l'IL-32 expression de l'ARNm a été étudiée dans les cellules AGS. Comme on le voit sur la Fig. 3A, après avoir été traitées avec des cytokines pendant 24 heures, l'IL-32 niveau de l'ARNm est significativement régulée à la hausse: 5,0 ± 0,5 fois par le TNF-α, de 6,9 ​​± 0,5 fois par l'IL-1β, et 11,2 ± 1,4 fois par l'IL-1β et le TNF-α. Cet effet était complètement dépendante de NF-kB voie de signalisation en tant que pré-traitement avec un inhibiteur de NF-kB BAY 11-7082, mais pas JNK, p38 /MAPK, inhibiteurs de la signalisation MEK1 /2 ou JAK /STAT a inhibé l'induction de l'ARNm de l'IL-32 après stimulation par le TNF-α ou IL-1β (Fig. 3C). En outre, Western blot a confirmé que l'IL-32 niveau de la protéine a également été induite par le TNF-α et /ou la stimulation de l'IL-1β qui dépendait de NF-kB voie de signalisation (Fig. 3B et D). Nous avons ensuite étudié si le TNF-α ou de l'IL-1β a été impliqué dans H. pylori
surexpression induite par l'IL-32 expression. les cellules AGS ont été infectées avec H. pylori
et traités simultanément avec des anticorps neutralisants pour bloquer le TNF-α ou de l'IL-1β. Comme on le voit sur la Fig. 3E, H
. induite par l'IL-32 expression de la protéine de pylori a été significativement diminuée en utilisant des cytokines-bloquants anticorps indiqués.

H. induite par l'IL-32 Expression pylori

Pour étudier davantage l'effet direct de H. pylori
sur l'expression de l'IL-32 dans les cellules epitheliales gastriques, les cellules ont été infectées avec AGS H. pylori
à une MOI de 1, 10 et 100. Comme le montre la Fig. niveaux 4A et B, l'IL-32 ARNm et de protéines ont été augmentés après H.
pylori infection d'une manière dépendante de la dose. Nous avons ensuite analysé si H. Les différences entre les souches de pylori contribueraient à autre expression de l'IL-32. Les cellules ont été infectées par le H. pylori 11637
souche et CagA ^{- souche. Bien que CagA - infection de la souche a légèrement augmenté l'expression de l'IL-32 dans les cellules AGS, l'induction de l'IL-32 de l'ARNm et des protéines par CagA - infection de la souche était significativement plus faible que celle de H. pylori 11637
infection par une souche (Fig. 4C et D).}

Discussion

Dans la présente étude, nous avons constaté que gastrique IL-32 a été significativement plus élevée chez les patients avec H . pylori
infection à la fois les taux de protéines et de l'ARNm. Le niveau d'ARNm d'IL-32 a augmenté en corrélation avec la gravité de l'inflammation gastrique. En outre, les niveaux d'ARNm de l'IL-32 ont aussi été corrélés avec des niveaux d'ARNm de l'IL-1β et TNF-α dans H. pylori
échantillons de biopsie gastrique positive et l'une des deux cytokines pourrait réguler à la hausse de l'IL-32 de l'ARNm et des protéines. En outre, nous avons constaté que H. pylori de l'infection de lignées cellulaires epitheliales gastriques a également induit l'ARNm de l'IL-32 et l'expression de la protéine. Ces résultats indiquent que l'IL-32 est probablement impliqué dans l'inflammation gastrique chez des patients atteints H. pylori de l'infection.

IL-32 a été récemment décrit comme un facteur proinflammtory impliqué dans de nombreux troubles inflammatoires tels que la rhinosinusite chronique, une condition souvent causée par une infection gram positif des bactéries [19], [20]. Elevated IL-32 a ensuite été rapporté dans le VHC et le foie infecté par le VHB et de mettre en corrélation avec la gravité de l'inflammation hépatique et la fibrose hépatique [15], [21]. Dans cette étude, nous avons montré que l'IL-32 niveau de l'ARNm a été significativement plus élevée chez les patients avec H. pylori
infection, et une forte corrélation entre l'IL-32 ARNm et inflammation gastrique a également été observée, ce qui suggère que l'IL-32 peut jouer un rôle important dans H. pylori
estomac infectés. En outre, l'immunohistochimie a été utilisé pour détecter la source de l'IL-32 et les résultats ont montré que l'IL-32 a été exprimée dans les cellules epitheliales gastriques et sa grande expression a été observée dans H. pylori
tissus gastriques positifs. Parce que l'IL-32 a été trouvé pour induire la production d'IL-8 dans les cellules épithéliales gastriques et inhibe la proangiogénique facteur sécrétion de VEGF par les cellules épithéliales bronchiques [16], [22], et nous avons également observé l'IL-32 niveau de l'ARNm est positivement corrélé avec l'expression d'IL-8 (données non représentées). Il est raisonnable que l'IL-32 influent sur la fonction des cellules épithéliales gastriques dans H. pylori
estomac infectés
.

L'inflammation gastrique classique avec H. pylori de l'infection peut être influencée par l'infiltration des cellules immunitaires et des cytokines inflammatoires, ce dernier peut comprendre l'a récemment découvert l'IL-32 [19] - [22]. Dans notre étude, nous avons constaté que le TNF-α in vitro et /ou l'IL-1β stimulés cellules AGS à upregulate IL-32 ARNm et l'expression des protéines, qui a soutenu une relation positive entre l'IL-32 et TNF-α et de l'IL-1β in vivo . Cependant, Th17 cytokines (IL-17A, IL-17F, IL-6), cytokine Th2 IL-4, Treg cytokines TGF-β1 et Th1 cytokines IFN-y ont tous échoué à induire l'IL-32 de l'ARNm et l'expression des protéines dans notre système, bien que tous les types de cellules immunitaires et des cytokines pertinentes ont été signalées pour infiltrer H. pylori
estomac infectés (voir Figure S1). Ces résultats suggèrent que l'IL-32 est probablement produit avant l'infiltration de ces cellules, qui est soutenu par le rapport que l'IL-32 induit la maturation des cellules dendritiques et favorise la Th1 et Th17 polarisation [23]. En outre, l'induction de l'IL-32 ARNm et la protéine par le TNF-α ou IL-1β a été bloquée par l'inhibiteur de NF-kB par 11 à 7082, ce qui indique que le mécanisme moléculaire qui sous-tend ce procédé est susceptible de NF-kB dépendante. Il est intéressant, en utilisant des anticorps neutralisants pour bloquer le TNF-α ou IL-1β en parallèle avec H. pylori de l'infection, nous avons observé que l'IL-32 niveau de protéine a été significativement diminuée. Par conséquent, nos résultats indiquent que les cytokines epitheliales (TNF-α et d'IL-1β) réaction à H. pylori de l'infection était important pour la régulation de l'IL-32 expression.

Nos résultats ont également montré que l'ARNm et la protéine IL-32 niveau ont augmenté d'une manière dose-dépendante suivante H. pylori
infection, ce qui suggère que l'effet de H. pylori de l'infection sur l'expression de IL32 est directement physiologique. En outre, les mutations de CagA dans H. pylori
pourrait affaiblir de manière significative l'expression de l'IL-32 dans les cellules AGS, indiquant que H. induite par l'IL-32 surexpression de pylori était dépendante de CagA. H. pylori
exprimer de nombreuses protéines pour faciliter sa pathogenèse [24]. UreB est également une protéine de virulence importante pour la colonisation de H. pylori
et médiée H. dysfonction induite par pylori de barrière gastrique [25], [26]. Nous avons constaté que des mutations UreB également atténuées H. pylori
induite par l'IL-32 expression de l'ARNm (voir Figure S2). Par conséquent, l'IL-32 expression est principalement régulée par la translocation de CagA dans des cellules epitheliales et d'autres protéines de virulence peuvent également influer sur la réponse pathogène H. pylori
aux cellules épithéliales gastriques.

En conclusion, nos données ont démontré que l'IL-32 expression a été élevée chez les patients avec H.
pylori infection et en corrélation avec la gravité de l'inflammation gastrique. La régulation de l'IL-32 expression en réponse à H. pylori de l'infection dépend de différents facteurs qui interagissent entre eux. Ces données suggèrent que l'ensemble de l'IL-32 peut jouer un rôle important dans la pathogenèse de la gastrite provoquée par H. pylori
infection.

Informations complémentaires
Figure S1.
cellules AGS ont été ensemencées dans des plaques à six puits à une densité de 1 x 10 ^{6 cellules /puits et stimulées avec 10 ng /ml Th17 cytokines (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 des cytokines IL-4, Treg cytokines TGF-β1 et des cytokines Th1 l'IFN-γ pendant 24 heures, et les cellules ont été recueillies pour l'analyse de l'IL-32 de l'ARNm et l'expression de la protéine. Les données sont la moyenne ± SEM de trois expériences distinctes et un blot représentatif a été montré
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088270.s001
(TIF)
Figure S2.
H. pylori de la souche 26695 ont été cultivées sur des plaques d'infusion cerveau-coeur contenant 10% de sang de lapin à 37 ° C dans des conditions microaérophiles (5% d'O _{2, 10% de CO 2, 85% N 2 ), et son isogénique sous-unité d'uréase B négatif souche mutante (UreB - souche) a été obtenu comme décrit précédemment [27]. Une multiplicité d'infection (MOI) de 100 a été utilisé pour infecter des cellules AGS et Ges-1. Les cellules ont été recueillies pour l'analyse de l'IL-32 expression de l'ARNm. Les données sont la moyenne ± SEM de trois expériences distinctes. * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
< 0,001
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088270.s002
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