PLoS ONE: Повышенные интерлейкин-32 экспрессия связана с Helicobacter Pylori Связанного Гастрит

Абстрактный

Фон
<р> интерлейкина-32 (IL-32) является недавно обнаруженный провоспалительный цитокин участвует в воспалительных заболеваниях. Мы исследовали экспрессию IL-32 и его механизм регулирования в воспалительной реакции у больных с хеликобактерной
( H. Пилори
) инфекция.

Дизайн и методы
<р> IL-32 мРНК и экспрессию белка в желудочных тканях определяли с помощью количественного ПЦР реального времени и иммуногистохимии. Регулирование IL-32 в эпителии желудка клеточной линии человеческого AGS был исследован различной стимуляции цитокинами и по-разному H. Штамм Pylori
инфекции.

Результаты
<р> Желудочный IL-32 мРНК и экспрессию белка был повышен у пациентов с H. пилори
инфекции и положительно коррелирует с гастритом. В H. пилори
-infected пациентов, уровень мРНК IL-32 была также коррелируют с этим провоспалительных цитокинов IL-1 и TNF-alpha. В пробирке
IL-1β и TNF-α может апрегулируются IL-32 мРНК и уровня белка в клетках AGS, который зависит от сигнального пути NF-kB. Регулирование IL-32 экспрессии в ответ на H. Pylori
-infection может быть ослаблена с помощью нейтрализующих антител блокировать IL-1 и TNF-alpha. Кроме того, H. Pylori
-infected AGS клетки также индуцированные IL-32 мРНК и экспрессию белка, который зависит от CagA.

Выводы
<р> IL-32 уровень повышен у больных с H , пилори
инфекции и его экспрессия регулируется провоспалительными стимулами, предполагая, что IL-32 может играть определенную роль в патогенезе H. пилори
гастрит
о связанных <р> Образец цитирования:. Пэн L-s, Чжуан Y, Li W-ч, Чжоу У-у, Ван Т-т, Чэнь N и др. (2014) Повышенные интерлейкин-32 Выражение связано с хеликобактерной
Гастрит о связанных. PLoS ONE 9 (3): e88270. DOI: 10.1371 /journal.pone.0088270
<р> Редактор: Иво Г. Boneca, Институт Пастера, Париж, Франция
<р> Поступило: 24 августа 2013 года; Принято: 8 января 2014 года; Опубликовано 14 марта 2014
<р> Copyright: © 2014 Пэн и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа была поддержана грантами молодежи учебного проекта медицинских наук Китайской Народной освободительной армии (13QNP108) и Национальной базовой программы научных исследований Китая (973 программы, No. 2009CB522606). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение

хеликобактерной
( H. пилори
) представляет собой грамотрицательные, микроаэрофильный бактерия, которая колонизирует желудок около 50% населения во всем мире. Упорное инфекция H. пилори
вызывает хронический и постоянный гастрит и повышает риск развития язвенной болезни и рака желудка.

H. Pylori
-infected слизистая оболочка желудка характеризуется инфильтрацией иммунных клеток и продукции воспалительных факторов. Th1 и Th2 ответа сообщается посредничать иммунный ответ на H. пилори
и Th1 ответ считается преобладающим [1]. Тогда индукция ответа Th17 в H. Pylori
-infected желудка подтверждается [2]. Кроме того, Th1, Th2 и Th17 клетки, регуляторные Т-клетки (Tregs) также играют важную роль в H. пилори
гастрит о связанных [3]. В то же время, proinflammtory цитокины, такие как IL-1, TNF-a и IL-6, также было показано, чтобы быть повышен в H. Pylori
-infected желудка [4], и эти цитокины могут повлиять на иммунный ответ Т-клеток в воспалительных заболеваний, предполагая, что воспалительные факторы могут иметь решающее значение в H. Pylori
воспаление желудка о связанных. Тем не менее, точный механизм этого процесса еще не полностью выяснены.
<Р> IL-32 представляет собой недавно идентифицированный провоспалительных цитокин, продуцируемый иммунными клетками (клетки NK, Т-клетки, моноциты) и неиммунных клеток (эндотелиальные клетки , эпителиальные клетки) [5] - [7]. Первоначально он был клонирован в качестве гена, индуцированной IL-2 и под названием НК-4, но его функция была неизвестна до 2005 года [5], [8]. Есть шесть вариантов сплайсинга, включая IL-32α, β, γ, δ, ε и ζ, а также различные роли потенциально играет его различных изоформ. Тем не менее, специфический рецептор для IL-32 не был обнаружен, хотя нейтрофильный протеиназы 3 связывается с IL-32 с высокой аффинностью [9]. IL-32 играет важную роль в различных воспалительных заболеваний, и его экспрессия коррелирует с тяжестью заболеваний при ревматоидном артрите, болезни и атопический дерматит Крона [10] - [12]. Кроме того, IL-32 были подразумеваемые в некоторых инфекционных заболеваний, в том числе H. Pylori
инфекции [13] - [16]. Тем не менее, связь между IL-32 и выражения H. Pylori
индуцированная гастрит и точный механизм регулирования в том числе, был ли автоморфизмы /паракринные эффекты на экспрессию IL-32 могут быть вовлечены в процесс, остаются неизвестными.
<р> В настоящем исследовании мы обнаружили IL -32 экспрессия в образцах биопсии у пациентов с H. пилори
инфекции и проанализировали взаимосвязь между желудочной ИЛ-32 уровня и тяжести воспаления слизистой оболочки. Впоследствии, мы исследовали влияние провоспалительных стимулов и H. пилори
инфекции на IL-32 экспрессии в эпителии желудка клеточных линий человека. Наши результаты показали, что IL-32 может участвовать в патогенезе H. Pylori
гастрит о связанных.

Материалы и методы

Заявление по этике
<р> человека слизистой оболочки желудка биопсии были собраны рутинной эндоскопии в Xinqiao больницы третьего военного медицинского университета , Кровь была получена из того же субъекта, который подвергся эндоскопии для H. пилори
серологический тест. Исследование было одобрено Комитетом по этике Xinqiao больницы третьего военного медицинского университета им. Письменное информированное согласие было получено от каждого субъекта

Субъекты
<р> Желудочный ткани и крови были собраны из 54 пациентов. (Мужчины /женщины = 27/27; средний возраст 47 ± 1,2 лет) с H. пилори
инфекции, которые подверглись эндоскопии в Xinqiao больницы третьего военного медицинского университета. H. Pylori
инфекция была подтверждена с помощью теста быстрого уреазного, серологические, ^{13С-мочевиной испытания дыхания и гистологии. Пациенты были классифицированы как H. пилори
положительным, если два из четырех тестов были положительными. Нормальные ткани желудка из 47 субъектов (мужчины /женщины = 23/24; средний возраст 47 ± 1,3 лет). Которые имели отрицательные результаты для всех четырех тестов были включены в качестве контрольных}

биоптатах и ​​гистологии оценка
<р> биоптаты были взяты из предметов в каждой эндоскопии. Один из них был немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° С для экстракции РНК. Остальные биопсии фиксировали в формалине и заливали в парафин. Гематоксилином-эозином (H &Amp; E) окрашивали срезы исследовали два опытных histopathologist. Гистологическое тяжесть гастрита оценивалась от нормального до тяжелой на основе плотности инфильтрации одноядерные и polymorphnuclear клеток в соответствии с установленными критериями [17], [18].

Cell Culture

желудочном эпителиальный линия АГС (АТСС, Американская коллекция типовых культур) культивируют при температуре 37 ° с и 5% СО <суб> 2 в F12 Хэма (Hyclone, Логан, Юта, США), который содержал 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). AGS Клетки высевали в шесть-луночные планшеты при плотности 1 × 10 ^{6 клеток /лунку и стимулированные 10 нг /мл TNF-a или /и 10 нг /мл IL-1 β (Peprotech, Rocky Hill, NJ , США); Клетки собирали в указанные моменты времени для анализа IL-32 мРНК и экспрессию белка. Для пути анализа ингибирования сигнала, ингибитор NF-kB (BAY 11-7082), ингибитор MEK1 /2 (U0126), р38 /ингибитор МАРК (SB203580), ингибитор JNK (SP600125), JAK ингибитор I (все по 10 мкМ и все от Calbiochem, Сан-Диего, Калифорния, США) или ДМСО-носителя (Sigma, Сент-Луис, штат Миссури, США) были добавлены к клеточной культуре 1 час до цитокиновой стимуляции.}

Заражение AGS клеток с ЧАС. пилори

H. пилори
11637 штамма и его изогенная CagA-отрицательный мутантный штамм (CagA ^{- штамм) выращивали на сердечно-мозговой инфузионных пластины, содержащие 10% крови кролика при 37 ° С в условиях микроаэрофилии (5% O <суб> 2 , 10% CO <югу> 2, 85% N <югу> 2). H. пилори
смывали культуральные планшеты с PBS и центрифугировали при 2500 х г в течение 5 мин, перед тем, как снова суспендируют в PBS для количественного определения оптической плотности при 600 нм (1 OD <суб> 600 = 1 × 10 9 H. пилори
/мл). Множественность инфекции (MOI) 1, 10 и 100 использовали для инфицирования клеток AGS. Для нейтрализации анализов, нейтрализующие антитела против TNF-alpha (nTNF-альфа, 1 мкг /мл, BioLegend) или IL-1 β (1 β нильпотока, 1 мкг /мл, eBioscience) добавляли в системе сокультивирования.
<Н3> Выделение РНК и количественный ПЦР в реальном времени
<р> РНК экстрагировали из образцов биопсии или клеток с помощью TRIzol reagent® (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) и обратной транскрипции в кДНК с использованием ReverTra Ace (Тоёбо, Осака, Япония). Количественная ПЦР в реальном времени осуществляли с помощью системы iQ5 обнаружения (Bio-Rad, США). ПЦР-праймеры были разработаны, чтобы пересечь границу экзон-интрон и используется для обнаружения экспрессии мРНК IL-32, TNF-α, IL-1β и β-актина и их последовательности следующим образом: IL-32, вперед, 5 ' -ACGACTTCAAAGAGGGCTACC-3 '; обратный, 5'-GCCTCGGCACCGTAATCCAT-3 '; TNF-α, вперед, 5'-TCTCTAATCAGCCCTCTGGC-3 '; реверс, 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3 '; IL-1β, вперед, 5'-GTTCTTTGAAGCTGATGGCC-3 '; реверс, 5'-GTGGTCGGAGATTCGTAGCT-3 '; β-актина, вперед, 5'-TTCCTTCCTGGGCATGGAGTCC-3 '; реверс, 5'-TGGCGTACAGGTCTTTGCGG-3 '. β-актин был использован в качестве внутреннего контроля. Выражение относительный ген рассчитывали как кратном изменения методом ΔΔCt.}

Иммуногистохимия
<р> Сорок парафином образцы разрезали на 5 мкм секций. После того, как депарафинировали и увлажненной, секции в цитратном буфере (рН = 6,0), подвергали тепловому индуцированный извлечение антигена в микроволновой печи и обрабатывают 3% раствором перекиси водорода. После инкубации с кроличьей анти-человеческий IL-32 (Abcam, штат Массачусетс, США) в течение ночи при 4 ° С, предметные стекла обрабатывали конъюгированного с пероксидазой хрена вторичного антителам кролика (Zhongshan Золотой мост Biotech., Пекин, Китай), а затем субстрат 3,3'-диаминобензидин тетрагидрохлорид (ДАБ). Изотип соответствует антитела, использовали в качестве отрицательного контроля. Изображения были получены на микроскопе, снабженном цифровой камерой Nikon Eclipse 80i (Токио, Япония). Для полуколичественного анализа иммуногистохимии, каждая секция была выбрана для оценки IL-32 иммунное окрашивание в тканях желудка и оценивали следующим образом: оценка 0, то выражение; 1 балл, низкий уровень экспрессии; оценка 2, промежуточное выражение; балл 3, высокий уровень экспрессии.

вестерн-блот
<р> Клетки промывали в охлажденном льдом PBS и затем разрушают в буфере для лизиса (20 мМ Трис, рН 7,5, 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ EGTA, 1% Тритон Х-100, 2,5 мМ пирофосфат натрия, 1 мМ глицерофосфата, 1 мМ Na3VO4, 1 мкг /мл лейпептина и ингибитор протеазы). Концентрацию белка измеряли с помощью набора для анализа BCA белка (boster, Ухань, Китай). Клеточные лизаты были разделены на 12% SDS-PAGE и переносили на поливинилидендифторидную мембрану. Мембраны блокировали в течение 1 ч с 3% бычьего сывороточного альбумина в Трис-солевом буферном-Tween при комнатной температуре, а затем инкубировали в течение ночи при 4 ° С с кроличьим анти-человеческий ИЛ-32 (Abcam, штат Массачусетс, США) или анти- мыши человеческого β-актина ((Tianjin Sungene Biotech Co., Ltd, Китай). конъюгированного с пероксидазой хрена вторичного антитела использовали в соответствии с instructures изготовителя. Нужные белки визуализировали с использованием реагента субстрата Продолжительность Supersignal® West Dura (Thermo, IL , США).

Статистический анализ
<р> Все результаты были обобщены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего (SEM), и статистический анализ проводили с использованием GraphPad Prism 5.0 программного обеспечения. различия между двумя . группы были проанализированы с помощью тестовых и множественных групп Манна-Уитни U анализировали с помощью однофакторного анализа дисперсии (ANOVA) с Когда были обнаружены отклонения, корреляции Спирмена был использован для оценки степени ассоциации между переменными P ≪. 0,05 рассматривалось статистически значимыми.

Результаты

Повышенные IL-32 мРНК Уровень Обнаружен у пациентов с H. Pylori
Заражение
<р> Для того, чтобы изучить вопрос о том IL-32 участвует в патогенезе H. пилори
индуцированных гастрит, мы сначала определили экспрессию мРНК IL-32 в образцах биопсии желудка от субъектов с и без H. пилори
инфекции. Как показано на рис. 1A, IL-32 экспрессия была значительно выше в H. пилори
-положительным образцов, чем в H. Pylori
-отрицательные образцов (P &л; 0,001). Для того, чтобы оценить ли экспрессия IL-32 связан со степенью воспалительного процесса в H. Pylori
-infected образцы желудка, мы разделили образцы на нормальную и легкой, средней и тяжелой групп гастрита на основе оценки гистологии, как описано в материалах и методах. Результаты показали, что уровни IL-32 мРНК в H. пилори
-положительные образцы были положительно коррелирует со степенью воспаления желудка (рис. 1, б). Кроме того, уровень IL-32 мРНК также показали положительную корреляцию с TNF-alpha и уровней IL-1β мРНК (рис. 1C).

Увеличение IL-32 Экспрессия белка у пациентов с H. Pylori
Заражение
<р> Для визуализации IL-32 экспрессию в образцах биопсии желудка, иммуногистохимическое окрашивание IL-32 проводили на парафиновых срезах тканей. Как показано на рис. 2B, некоторые из IL-32-продуцирующие клетки были обнаружены в H. Pylori
-отрицательные желудка ткани, в то время как в H. Pylori
-положительные желудка ткани, мы наблюдали, что экспрессия белка IL-32 была значительно увеличена (рис. 2в). Кроме того, полуколичественный оценка ИЛ-32 иммунореактивности подтвердили, что экспрессия IL-32 в желудочном тканях H. Pylori
-infected пациентов на уровне белка также значительно увеличился по сравнению с теми, в H. пилори
-отрицательные желудка ткани и в мягкой гастрита.

IL-32 мРНК и уровня белка были активируемых TNF-alpha и IL-1β
<р> Потому что мы нашли положительную взаимосвязь между IL -32 уровни мРНК и степень воспаления желудка в желудочном тканях и корреляции между IL-32 мРНК и IL-1 и TNF-α мРНК, регуляция провоспалительных цитокинов на экспрессию мРНК IL-32 был исследован в AGS клетках. Как показано на рис. 3А, после обработки цитокинами в течение 24 ч, ИЛ-32 уровень мРНК значительно повышающей регуляции: 5,0 ± 0,5 раза по TNF-alpha, 6,9 ± 0,5 раза по IL-1, и 11,2 ± 1,4 раза по IL-1 β и TNF-α. Этот эффект был полностью зависит от NF-kB сигнального пути в качестве предварительной обработки с NF-kB ингибитором BAY 11-7082, но не JNK, р38 /МАРК, ингибиторы сигнализации MEK1 /2 или JAK /STAT ингибирует индукцию IL-32 мРНК после стимуляции с помощью TNF-alpha или IL-1 (фиг. 3C). Кроме того, Вестерн-блот подтвердил, что IL-32 уровень белка также индуцированный TNF-alpha и /или IL-1β стимуляции, который зависит от NF-kB сигнального пути (рис. 3В и D). Далее мы изучали, был ли вовлечен TNF-α или IL-1β в H. пилори
-индуцированное повышающую регуляцию экспрессии IL-32. клетки AGS были заражены H. пилори
и одновременно обрабатывают нейтрализующих антител блокировать TNF-alpha или IL-1. Как показано на рис. 3E, H
. Pylori
индуцированная экспрессия белка IL-32 было значительно снижено с помощью указанных цитокинов блокирующих антител.

H. Pylori
индуцированную IL-32 Выражение

Для дальнейшего изучения прямого действия H. пилори
на экспрессию IL-32 в эпителиальных клеток желудка, AGS клетки инфицировали H. пилори
при MOI 1, 10 и 100. Как показано на рис. Уровни 4A и B, IL-32 мРНК и белок были увеличены после H. пилори
инфекции в зависимости от дозы образом. Далее мы проанализировали ли H. Pylori
различия деформации будет способствовать различным экспрессии IL-32. Клетки инфицировали H. пилори 11637
процедить и CagA ^{- деформация. Хотя CagA - штамм инфекции слегка повышал экспрессию IL-32 в клетках AGS, индукция IL-32 мРНК и уровень белка CagA - штамм инфекции был значительно ниже, чем на H. пилори 11637
штамм инфекции (рис. 4C и D).}

Обсуждение
<р> В настоящем исследовании мы наблюдали, что желудочный IL-32 была значительно выше у пациентов с H , пилори
инфекции на обоих мРНК и уровня белка. Повышенный уровень мРНК IL-32 коррелирует с тяжестью воспаления желудка. Кроме того, уровни IL-32 мРНК также коррелируют с TNF-a и уровни IL-1β мРНК в H. pylori-
положительных образцов желудочной биопсии, и любой из этих двух цитокинов может апрегулируются ИЛ-32 мРНК и уровень белка. Кроме того, мы обнаружили, что H. Pylori
инфекция желудка эпителиальных клеточных линий также индуцируется IL-32 мРНК и экспрессию белка. Эти результаты указывают на то, что IL-32, вероятно, участвует в воспалительных процессах желудка у пациентов с H. Pylori
инфекция.
<р> ИЛ-32 был недавно описан как proinflammtory фактор, участвующий во многих воспалительных заболеваний, таких как хронический риносинусит, состояние основном вызвано грамположительных бактерий инфекции [19], [20]. Повышенные ИЛ-32 был затем сообщили в HCV и HBV-инфицированных печени и коррелирует с тяжестью печеночной воспаления и фиброза печени [15], [21]. В этом исследовании мы показали, что IL-32 уровень мРНК значительно повышен у пациентов с H. пилори
инфекции, а также наблюдалась высокая корреляция между IL-32 мРНК и воспаление желудка, предполагая, что IL-32 может играть важную роль в H. pylori-
заражена желудка. Кроме того, использовали иммуногистохимический метод используется для обнаружения источника IL-32, и результаты показали, что IL-32 была выражена в эпителиальных клеток желудка и его высоко экспрессия наблюдалась в H. pylori-
желудочной ткани. Так как IL-32 было обнаружено, индуцируют выработку IL-8 в желудочных эпителиальных клеток и ингибирует секрецию проангиогенные фактора VEGF путем бронхиальных эпителиальных клеток [16], [22], и мы также наблюдали ИЛ-32 уровень мРНК положительно коррелирует с ИЛ-8 выражение (данные не показаны). Вполне естественно, что IL-32 влияет на функцию эпителиальных клеток желудка в H. pylori-
заражена желудка.
<р> Классический воспаление желудка с H. Pylori
инфекция может быть подвержено влиянию инфильтрации иммунных клеток и воспалительных цитокинов, позже может включать в себя недавно обнаруженный IL-32 [19] - [22]. В нашем исследовании мы обнаружили, что в пробирке TNF-α и /или IL-1β стимулировали клетки AGS к апрегулируются IL-32 мРНК и экспрессию белка, который поддерживал положительную связь между IL-32 и TNF-alpha и IL-1β в естественных условиях , Тем не менее, Th17 цитокин (IL-17A, IL-17F, ИЛ-6), Th2 цитокина ИЛ-4, Tregs цитокина TGF-β1 и Th1-цитокина IFN-gamma все не способны индуцировать IL-32 мРНК и экспрессию белка в нашей системе, хотя все соответствующие иммунные типы клеток и цитокинов были сообщены внедриться H. pylori-
заражена желудка (рис S1). Эти результаты свидетельствуют о том, что IL-32, скорее всего, производится перед инфильтрацией этих клеток, что подтверждается в докладе, что IL-32 индуцирует созревание дендритных клеток и способствует поляризации Th1 и Th17 [23]. Кроме того, индукция IL-32 мРНК и белок с помощью TNF-alpha или IL-1 был блокирован ингибитором NF-kB BY 11-7082, указывая, что молекулярный механизм, лежащий в основе этого процесса, скорее всего, NF-kB зависимой. Интересно, что с помощью нейтрализующих антител блокировать TNF-alpha или IL-1 параллельно с H. Pylori
инфекции, мы наблюдали, что IL-32 уровень белка было значительно снижено. Таким образом, наши результаты показали, что эпителиальные цитокины (TNF-α и IL-1β) реакция на H. Pylori
инфекции были важны для регуляции IL-32 выражения.
<р> Наши результаты также показали, что IL-32 мРНК и белка уровня были увеличены в зависимости от дозы, следуя H. пилори
инфекции, предполагая, что эффект от H. Pylori
инфекции на экспрессию IL32 непосредственно физиологическое. Кроме того, CagA мутации в H. пилори
может значительно ослабить экспрессию IL-32 в клетках AGS, указывая, что H. Pylori
индуцированную IL-32 повышающей регуляцией зависит от CagA. H. пилори
выразить много белков, чтобы облегчить ее патогенеза [24]. UreB также является важным белок вирулентности для колонизации H. пилори
и опосредованного H. Pylori
индуцированная дисфункция барьера желудка [25], [26]. Мы обнаружили, что мутации UreB также ослабляется H. пилори
-индуцированное IL-32 экспрессию мРНК (рис S2). Таким образом, IL-32 экспрессия преимущественно регулируется транслокации CagA в эпителиальные клетки и другие белки вирулентности могут также влиять на патогенную реакцию H. пилори
к эпителиальных клеток желудка.
<р> В заключение, наши данные показали, что IL-32 экспрессия была повышена у пациентов с H. пилори
инфекции и коррелирует с тяжестью воспаления желудка. Регулирование IL-32 экспрессии в ответ на H. Pylori
инфекции зависит от различных факторов, взаимодействующими. Эти данные позволяют предположить, что вместе IL-32 может играть важную роль в патогенезе гастрита, вызванного H. пилори
инфекции.

Поддержка информации Рисунок S1 изображения.
AGS клетки высевали в шесть-луночные планшеты при плотности 1 × 10 ^{6 клеток /лунку и стимулированные 10 нг /мл Th17 цитокинов (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 цитокина ИЛ-4, Tregs цитокина TGF-β1 и Th1-цитокина IFN-γ в течение 24 часов, и клетки собирали для анализа IL-32 мРНК и экспрессию белка. Данные представляют собой среднее ± SEM из трех отдельных экспериментов и один представитель блот показал
DOI:. 10.1371 /journal.pone.0088270.s001
(TIF) Рисунок S2
.
H. пилори
штамм 26695 выращивали на сердечно-мозговой инфузионных пластины, содержащие 10% крови кролика при 37 ° С в условиях микроаэрофилии (5% O <суб> 2, 10% СО <суб> 2, 85% N <суб> 2 ), а его изогенная Уреазный субъединица B-отрицательный мутантный штамм (UreB - штамм) был получен как и ранее описано [27]. Множественностью заражения (MOI) 100 использовали для заражения AGS и ГЭС-1 клеток. Клетки собирали для анализа экспрессии мРНК IL-32. Данные представляют собой среднее ± SEM из трех отдельных экспериментов. * P
&л; 0,05; ** P
&л; 0,01; *** P
&л; 0,001
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0088270.s002
(TIF)}

• PLoS ONE: атрофический гастрит: Связанный с этим фактор остеопороза у пожилых Women
• PLoS Возбудители: Кавеолин-1 защищает мышей от B6129 хеликобактерной Gastritis