PLoS ONE: Verhoogde Interleukine-32 Expression wordt geassocieerd met Helicobacter pylori-gerelateerde Gastritis

De abstracte

Achtergrond

interleukine-32 (IL-32) is een recent ontdekte pro-inflammatoire cytokine die betrokken zijn bij inflammatoire ziekten. We onderzochten de expressie van IL-32 en regulatiemechanisme in de ontstekingsreactie van patiënten met Helicobacter pylori
( H. Pylori
) infectie.

Ontwerp en methoden

IL-32 mRNA en eiwitexpressie in gastrische weefsels werd gedetecteerd door kwantitatieve real-time PCR en immunohistochemie. De regulering van IL-32 in de menselijke maag epitheel cellijn AGS werd onderzocht door verschillende cytokine stimulatie en verschillende H. pylori
stam infectie.

Resultaten

Gastric IL-32 mRNA en eiwit expressie waren verhoogd bij patiënten met een H. pylori
infectie en positief gecorreleerd met gastritis. In H.
pylori geïnfecteerde patiënten, het mRNA-niveau van IL-32 werd ook gecorreleerd met die van pro-inflammatoire cytokines IL-1β en TNF-α. In vitro
IL-1β en TNF-α kan upregulate IL-32 mRNA en eiwit niveau AGS cellen, die afhankelijk NF-kB signaalroute was. De regulatie van IL-32 expressie in reactie op H. pylori
-infection kan worden verzwakt door neutraliserende antilichamen tegen IL-1β en TNF-α blokkeren. Bovendien, H. pylori
geïnfecteerde cellen AGS ook geïnduceerd IL-32 mRNA en eiwit expressie, die afhankelijk zijn van CagA was.

Conclusies

IL-32 niveau is verhoogd bij patiënten met een H .
pylori infectie en de expressie ervan wordt geregeld door pro-inflammatoire stimuli, wat suggereert dat IL-32 een rol kan spelen bij de pathogenese van H. pylori gastritis
-gerelateerde

Citation:. Peng L-s, Zhuang Y, Li W-h, Zhou Y-y, Wang T-t, N Chen, et al. (2014) Verhoogde Interleukine-32 Expression wordt geassocieerd met Helicobacter pylori
gerelateerde gastritis. PLoS ONE 9 (3): e88270. doi: 10.1371 /journal.pone.0088270

Editor: Ivo G. Boneca, Institut Pasteur in Parijs, Frankrijk

Ontvangen: 24 augustus 2013; Aanvaard: 8 januari 2014; Gepubliceerd: 14 maart 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Dit werk werd ondersteund door subsidies van de medische wetenschap Jeugd Opleiding Project van de Chinese People's Liberation Army (13QNP108) en de Nationale Basic Research Program van China (973 Program, No. 2009CB522606). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Helicobacter pylori
( H. pylori
) is een Gram-negatieve, microaerophilic bacterie die de maag van ongeveer 50% van de wereldbevolking koloniseert. De aanhoudende infectie van H. pylori
veroorzaakt chronische en hardnekkige gastritis en verhoogt het risico van maagzweer en maagkanker.

H.
pylori geïnfecteerde maagslijmvlies wordt gekenmerkt door de infiltratie van immune cellen en de productie van inflammatoire factoren. Th1 en Th2 respons naar verluidt immuunrespons op H mediëren. pylori
en Th1 respons wordt verondersteld te overheersen [1]. Dan inductie van Th17 response in H. pylori
geïnfecteerde maag wordt bevestigd [2]. Naast Th1, Th2 en Th17 cellen, regulatoire T-cellen (Tregs) een belangrijke rol in de H spelen ook. pylori
gerelateerde gastritis [3]. Ondertussen proinflammtory cytokines zoals IL-1β, TNF-α en IL-6 bleken ook worden verhoogd in H.
pylori geïnfecteerde maag [4], en deze cytokines kunnen T-cel immuunrespons bij ontstekingsaandoeningen beïnvloeden, wat suggereert dat ontstekingsfactoren cruciaal H kan zijn. pylori
gerelateerde maagontsteking. De exacte mechanisme van de werkwijze is niet volledig opgehelderd.

IL-32 is een onlangs geïdentificeerde proinflammatoire cytokine geproduceerd door immuuncellen (NK-cellen, T-cellen, monocyten) en niet-immuuncellen (endotheelcellen , epitheelcellen) [5] - [7]. Het was oorspronkelijk gekloond als een gen geïnduceerd door IL-2 en NK-4 genoemd, maar de functie ervan is onbekend tot 2005 [5], [8]. Er zijn zes splice-varianten waaronder IL-32α, β, γ, δ, ε en ζ en diverse rollen potentieel gespeeld door de verschillende isovormen. Echter een specifieke receptor voor IL-32 niet ontdekt, hoewel neutrofielen proteïnase 3 aan IL-32 bindt met een hoge affiniteit [9]. IL-32 speelt een belangrijke rol bij diverse ontstekingsziekten en de expressie correleert met de ernst van ziekten in reumatoïde artritis, ziekte van Crohn en atopische dermatitis [10] - [12]. Bovendien was IL-32 geïmpliceerd in sommige infectieziekten zoals H. pylori
infectie [13] - [16]. Echter, de associatie tussen IL-32 expressie en H. pylori
geïnduceerde gastritis en de precieze regelgeving mechanisme inclusief of auto- /paracriene effecten op de expressie van IL-32 kan worden betrokken bij het proces was nog steeds onbekend.

In de huidige studie hebben we geconstateerd IL -32 expressie in biopten van patiënten met H. pylori
infectie en de relatie tussen de maag-IL-32-niveau en de ernst van de ontsteking van de slijmvliezen geanalyseerd. Vervolgens onderzochten we de invloed van pro-inflammatoire stimuli en H. pylori
infectie op IL-32 expressie in menselijke maag epitheel cellijnen. Onze resultaten laten zien dat IL-32 betrokken kan zijn bij de pathogenese van H. pylori
gerelateerde gastritis.

Verklaring Ethiek Materialen en methoden

Human maagslijmvlies biopten werden verzameld door routine endoscopie op het Xinqiao Ziekenhuis van de Derde Militaire Medische Universiteit . Bloed werd verkregen uit hetzelfde onderwerp die endoscopie voor H onderging. pylori
serologie-test. De studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van Xinqiao Ziekenhuis, Derde Militaire Medische Universiteit. Schriftelijke toestemming is verkregen van elk onderwerp

Onderwerpen

Maag weefsel en bloed werden verzameld van 54 patiënten. (Man /vrouw = 27/27, de gemiddelde leeftijd 47 ± 1,2 jaar) met H. pylori
infectie die endoscopie ondergaan op het Xinqiao Ziekenhuis van de Derde Militaire Medische Universiteit. H. pylori
besmetting werd bevestigd door de snelle urease test, serologische test, ^{13C-ureum ademtest en histologie. Patiënten geclassificeerd als H. pylori
positief als twee van de vier tests positief waren. Normaal maag weefsel van 47 patiënten (man /vrouw = 23/24, de gemiddelde leeftijd 47 ± 1,3 jaar). Deze had een negatief resultaat voor alle vier tests werden ingeschreven als controles}

biopten en histologie Assessment

Biopsiemonsters werden uit de vakken op elke endoscopie. Een werd onmiddellijk bevroren in vloeibare stikstof en bewaard bij -80 ° C voor RNA-extractie. De rest van biopten werden gefixeerd in formaline en ingebed in paraffine. Haematoxyline- eosine (H &E) gekleurde secties werden onderzocht door twee ervaren histopathologist. De histologische ernst van gastritis gerangschikt van normaal tot ernstig basis van de dichtheid van infiltrerende mononucleaire cellen en polymorphnuclear volgens de vastgestelde criteria [17], [18].

Celkweek

De gastric epitheliale lijn AGS (ATCC, American Type Culture Collection) werd gekweekt bij 37 ° C en 5% CO _{2 in Ham's F12 (Hyclone, Logan, UT, USA), dat 10% foetaal kalfserum bevat (FCS). AGS Cellen werden gezaaid in platen met zes putjes bij een dichtheid van 1 x 10 ^{6 cellen /well en gestimuleerd met 10 ng /ml TNF-α en /of 10 ng /ml IL-1β (PeproTech, Rocky Hill, NJ , VERENIGDE STATEN VAN AMERIKA); cellen werden verzameld bij bepaalde tijden voor analyse van IL-32 mRNA en eiwitexpressie. Voor de signaalroute remmingstest, NF-KB-remmer (BAY 11-7082), MEK1 /2 remmer (U0126), p38 /MAPK-remmer (SB203580), JNK inhibitor (SP600125), JAK remmer I (allemaal op 10 pM en al van Calbiochem, San Diego, CA, USA) of vehikel DMSO (Sigma, St. Louis, MO, USA) werden 1 uur voor cytokinestimulatie toegevoegd aan de celkweek.}}

AGS Infectie van cellen met H. pylori

H. pylori
11637 stam en de isogene CagA-negatieve mutant stam (CagA ^{- stam) werd gekweekt op hersen-hart infusie platen die 10% konijnenbloed bij 37 ° C onder microaërofiele omstandigheden (5% O _{2 , 10% CO 2, 85% N 2). H. pylori
weggewassen de kweekplaten met PBS en gecentrifugeerd bij 2500 xg gedurende 5 minuten alvorens deze opnieuw gesuspendeerd in PBS voor optische dichtheid bij 600 nm gekwantificeerd (1 OD 600 = 1 x 10 9 H. pylori
/ml). Een veelvoud van infectie (MOI) van 1, 10 en 100 werd gebruikt voor het infecteren van cellen AGS. Voor neutralisatie assays, neutraliserende antilichamen tegen TNF-α (nTNF-α, 1 ug /ml, Biolegend) of IL-1β (NIL-1β, 1 ug /ml, eBioscience) in het gemengde cultuursysteem werd toegevoegd.}}

RNA isolatie en kwantitatieve real-time PCR

RNA werd geëxtraheerd uit biopsie monsters of cellen door TRIzol reagent® (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) en reverse-getranscribeerd in cDNA met behulp van ReverTra Ace (TOYOBO, Osaka, Japan). Kwantitatieve real-time PCR werd uitgevoerd door het IQ5 Detection System (Bio-Rad, USA) uitgevoerd. De PCR primers werden ontworpen om een ​​exon-intron grens en gebruikt om de mRNA expressie van IL-32 te detecteren, TNF-α, IL-1β en β-actine en de sequenties zijn als volgt: IL-32, voorwaarts 5' -ACGACTTCAAAGAGGGCTACC-3 '; omgekeerd, 5'-GCCTCGGCACCGTAATCCAT-3 '; TNF-α, forward, 5'- TCTCTAATCAGCCCTCTGGC-3 '; omgekeerd, 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3 '; IL-1β, forward, 5'- GTTCTTTGAAGCTGATGGCC-3 '; omgekeerd, 5'-GTGGTCGGAGATTCGTAGCT-3 '; β-actine, forward, 5'- TTCCTTCCTGGGCATGGAGTCC-3 '; omgekeerd, 5'-TGGCGTACAGGTCTTTGCGG-3 '. β-actine werd gebruikt als een interne controle. De relatieve genexpressie werd berekend als voudige verandering door de ΔΔCt methode.

Immunohistochemie

Forty-paraffine ingebedde monsters werden in 5-um secties gesneden. Na gedeparaffiniseerd en gehydrateerd, werden de secties in citraatbuffer (pH = 6,0) onderworpen aan warmte geïnduceerde antigen retrieval in een magnetron en behandeld met 3% waterstofperoxide. Na incubatie met konijn anti-humaan IL-32 (Abcam, MA, USA) gedurende de nacht bij 4 ° C, schijfjes werden behandeld met mierikswortel peroxidase-geconjugeerd secundair anti-konijn antilichaam (Zhongshan Golden Bridge Biotech., Beijing, China) gevolgd door substraat 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB). Gematcht isotype antilichaam werd gebruikt als negatieve controle. Beelden werden op een microscoopglaasje met een digitale camera Nikon Eclipse 80i (Tokyo, Japan) verkregen. Voor semi-kwantitatieve analyse van immunohistochemie werd elke sectie gekozen gaan IL-32 immunokleuring van de gastrische weefsels en is ingedeeld als volgt: score 0, geen expressie; score 1, lage expressie; score 2, intermediate meningsuiting; score 3, hoge expressie.

Western Blot

De cellen werden gewassen in ijskoude PBS en vervolgens verstoord lysisbuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 2,5 mM natriumpyrofosfaat, 1 mM glycerofosfaat, 1 mM Na3VO4, 1 ug /ml leupeptine en proteaseremmers). De eiwitconcentratie werd gemeten met een BCA proteïne testkit (Boster, Wuhan, China). Cellysaten werden gescheiden door 12% SDS-PAGE en overgebracht naar een polyvinylideendifluoridemembraan. De membranen werden geblokkeerd gedurende 1 uur met 3% runderserumalbumine in Tris-gebufferde zoutoplossing-Tween bij kamertemperatuur en vervolgens gedurende de nacht geïncubeerd bij 4 ° C met konijn anti-humaan IL-32 (Abcam, MA, USA) of anti-muis humane β-actine ((Tianjin Sungene Biotech Co., Ltd., China). Mierikswortel peroxidase-geconjugeerd secundair antilichaam werd gebruikt volgens instructures de fabrikant. de eiwitten van belang werden gevisualiseerd door Supersignal® West Dura Duur substraatreagens (Thermo, IL , USA).

statistische analyse

Alle resultaten werden samengevat als gemiddelde ± standaardfout van het gemiddelde (SEM) en statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van GraphPad Prism 5.0 software. de verschillen tussen twee . groepen werden geanalyseerd met de Mann-Whitney U test en meerdere groepen werden geanalyseerd door one-way analyse van variantie (ANOVA) Wanneer afwijkingen gedetecteerd, Spearman's correlatie werd gebruikt om de mate van associatie tussen variabelen P <evalueren;. 0,05 werd beschouwd statistisch significant.

Resultaten

Verhoogde IL-32 mRNA Level gedetecteerd bij patiënten met H. pylori
Infection

Om te onderzoeken of IL-32 is betrokken bij de pathogenese van H. pylori
geïnduceerde gastritis, we eerst bepaald de IL-32 mRNA expressie in de maag biopten van patiënten met en zonder H. pylori
infectie. Zoals getoond in Fig. 1A, werd IL-32 expressie significant hoger in H. pylori
-positieve monsters dan in H. pylori
-negatieve monsters (P < 0,001). Te beoordelen of de expressie van IL-32 is gerelateerd aan de mate van ontsteking in H.
pylori geïnfecteerde monsters maag, we de monsters onderverdeeld in normale en milde, matige en ernstige gastritis groepen op basis van histologische evaluatie zoals beschreven in Materialen en Werkwijzen. De resultaten toonden aan dat IL-32 mRNA niveaus in H.
pylori-positieve monsters waren positief gecorreleerd met de mate van maagontsteking (fig. 1B). Bovendien is het niveau van IL-32 mRNA bleek ook een positieve correlatie met TNF-α en IL-1β mRNA (Fig. 1C).

Verhoogde IL-32 eiwitexpressie bij patiënten met H. pylori
Infection

Om te visualiseren IL-32 expressie in de maag biopten, immunohistochemische kleuring van IL-32 werd uitgevoerd op in paraffine ingebedde weefsels. Zoals getoond in Fig. 2B, een paar van IL-32-cellen werden gedetecteerd in H. pylori
-negatieve maag weefsels, terwijl in H. pylori
-positieve maag weefsels, zagen we dat IL-32 eiwit expressie significant verhoogd (Fig. 2C). Bovendien, de semi-kwantitatieve evaluatie van IL-32 immunoreactiviteit bevestigd dat de expressie van IL-32 in gastrische weefsels van H. pylori
geïnfecteerde patiënten met een eiwit niveau werd ook aanzienlijk toegenomen in vergelijking met die in de H. pylori
-negatieve maag weefsels en in milde gastritis.

IL-32 mRNA en Protein Level werden opgereguleerd door TNF-α en IL-1β

Omdat we een positieve relatie tussen IL gevonden -32 mRNA niveaus en de mate van maagontsteking gastrische weefsels en correlatie tussen IL-32 mRNA en IL-1β en TNF-α mRNA, de regulering van ontstekingsbevorderende cytokines op IL-32 mRNA expressie werd onderzocht in AGS cellen. Zoals getoond in Fig. 3A, na behandeling met cytokines gedurende 24 uur, IL-32 mRNA-niveau was significant opgereguleerd: 5,0 ± 0,5-voudig door TNF-α, 6,9 ± 0,5-voudig door IL-1β, en 11,2 ± 1,4-voudig door IL-1β en TNF-α. Dit effect was volledig afhankelijk van NF-kB signaling pathway als voorbehandeling met NF-KB-remmer BAY 11-7082, maar niet JNK, p38 /MAPK, MEK1 /2 of JAK /STAT signalering remmers remde de inductie van IL-32 mRNA na stimulatie door TNF-α of IL-1β (fig. 3C). Bovendien Western blot bevestigde dat IL-32 eiwitniveau ook werd geïnduceerd door TNF-α en /of IL-1β stimulatie die afhankelijk NF-kB signaling pathway (fig. 3B en D). We vervolgens onderzocht of TNF-α of IL-1β was bij H. pylori
geïnduceerde opregulatie van IL-32 expressie. AGS-cellen werden geïnfecteerd met H. pylori Kopen en gelijktijdig behandeld met neutraliserende antilichamen tegen TNF-α of IL-1β blokkeren. Zoals getoond in Fig. 3E, H
. pylori
geïnduceerde IL-32 eiwit expressie was significant afgenomen met behulp aangegeven cytokines-blokkerende antilichamen.

H. pylori
geïnduceerde IL-32 Expression

Om de rechtstreekse werking van H verdere studie. pylori
de expressie van IL-32 in maagepitheelcellen werden AGS cellen geïnfecteerd met H.
pylori bij een MOI van 1, 10 en 100. Zoals getoond in Fig. 4A en B, IL-32 mRNA en eiwitniveaus werden verhoogd na H.
pylori infectie in een dosis-afhankelijke wijze. We volgende onderzocht of H. pylori
stamverschillen bijdraagt ​​aan verschillende expressie van IL-32. Cellen werden geïnfecteerd met H. pylori 11637
stam en CagA ^{- stam. Hoewel CagA - stam infectie enigszins verhoogde expressie van IL-32 in AGS cellen, de inductie van IL-32 mRNA en eiwit niveau CagA - stam infectie was significant lager dan die van H. pylori 11637
stam infectie (Fig. 4C en D).}

Discussie

In de huidige studie hebben we geconstateerd dat de maag-IL-32 was significant verhoogd bij patiënten met een H .
pylori infectie zowel mRNA en eiwitniveaus. De verhoogde IL-32 mRNA-niveau gecorreleerd met de ernst van maagontsteking. Bovendien werden IL-32 mRNA niveaus ook gecorreleerd met TNF-α en IL-1β mRNA in H. pylori
positieve gastrische biopten, en een van de twee cytokinen kan de IL-32 mRNA en eiwitniveau opwaarts reguleren. Verder vonden we dat H. pylori
infectie van de maag epitheliale cellijnen ook geïnduceerd IL-32 mRNA en eiwit expressie. Deze resultaten geven aan dat IL-32 waarschijnlijk betrokken bij maagontsteking van patiënten met H.
pylori infectie.

IL-32 werd onlangs beschreven als een proinflammtory factor betrokken bij vele ontstekingsziekten zoals chronische rhinosinusitis, een aandoening meestal veroorzaakt door grampositieve bacteriële infectie [19], [20]. Verhoogde IL-32 werd vervolgens gerapporteerd in HCV en HBV-geïnfecteerde lever en correleren met de ernst van leverontsteking en leverfibrose [15], [21]. In deze studie hebben we aangetoond dat IL-32 mRNA-niveau was significant verhoogd bij patiënten met H.
pylori infectie, en een hoge correlatie tussen IL-32 mRNA en maagontsteking werd ook waargenomen, wat suggereert dat IL-32 een belangrijke rol spelen bij H. pylori
besmet zijn maag. Bovendien, werd immunohistochemie gebruikt om de bron van IL-32 en de resultaten detecteren toonden dat IL-32 werd tot expressie gebracht in maagepitheelcellen en zijn hoogst expressie werd waargenomen in H. pylori
positieve maag weefsels. Omdat IL-32 bleek de productie van IL-8 in maagepitheelcellen induceren en remde de pro-angiogene factor VEGF secretie van bronchiale epitheelcellen [16], [22], en men ook vastgesteld dat IL-32 mRNA-niveau positief gecorreleerd aan IL-8 expressie (gegevens niet getoond). Het is redelijk dat IL-32 beïnvloeden de functie van maag epitheelcellen in H. pylori
besmet zijn maag.

De klassieke maagontsteking met H.
pylori infectie kan worden beïnvloed door infiltrerende immuuncellen en inflammatoire cytokines, het later kunnen de recent ontdekte IL-32 [19] - [22]. In onze studie hebben we vastgesteld dat in vitro TNF-α en /of IL-1β gestimuleerde AGS cellen reguleert IL-32 mRNA en eiwitexpressie die een positief verband tussen IL-32 en TNF-α en IL-1β in vivo ondersteund . Echter, Th17 cytokine (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 cytokine IL-4, Tregs cytokine TGF-β1 en Th1 cytokine IFN-y alle niet IL-32 mRNA en eiwitexpressie induceren in ons systeem, alhoewel relevante immune celsoorten en cytokinen gemeld te infiltreren H. pylori
besmet maag (zie figuur S1). Deze resultaten suggereerden dat IL-32 waarschijnlijk is voordat de infiltratie van deze cellen, die wordt gesteund door het bericht dat IL-32 induceert rijping van dendritische cellen en bevordert de Th1 en Th17 polarisatie [23]. Bovendien is de inductie van IL-32 mRNA en eiwit van TNF-α of IL-1β werd geblokkeerd door NF-KB-remmer DOOR 11-7082, wat aangeeft dat het moleculaire mechanisme achter dit proces waarschijnlijk NF-KB afhankelijke. Interessant behulp neutraliserende antilichamen tegen TNF-α of IL-1β parallel aan H blokkeren. pylori
infectie, zagen we dat IL-32 eiwit niveau dat aanzienlijk werd verlaagd. Daarom onze resultaten aan dat epitheel cytokinen (TNF-α en IL-1β) reactie op H.
pylori infectie waren bij de regeling van IL-32 expressie.

De resultaten toonden ook aan dat de IL-32 mRNA en eiwit niveau verhoogd in een dosis-afhankelijke wijze na H.
pylori infectie, wat suggereert dat het effect van H. pylori
infectie op IL32 meningsuiting is rechtstreeks fysiologische. Bovendien CagA mutaties in H. pylori
aanzienlijk kunnen verzwakken de expressie van IL-32 in AGS cellen, wat aangeeft dat H. pylori
geïnduceerde IL-32 opregulatie was afhankelijk van CagA. H. pylori
uiten veel eiwitten zijn pathogenese [24] te vergemakkelijken. UreB is ook een belangrijke virulentie-eiwit voor de kolonisatie van H. pylori Kopen en bemiddelde H.
pylori geïnduceerde disfunctie van maag barrière [25], [26]. We vonden dat UreB mutaties ook verzwakt H. pylori
geïnduceerde IL-32 mRNA expressie (zie Figuur S2). Daarom werd IL-32 expressie voornamelijk gereguleerd door de translocatie van CagA in epitheelcellen en andere virulentie eiwitten kunnen ook invloed op de pathogene reactie van H. pylori Belgique Om maagepitheelcellen.

Concluderend onze data zien dat IL-32 expressie is verhoogd in patiënten met H.
pylori infectie en gecorreleerd met de ernst van maagontsteking. De regulatie van IL-32 expressie in reactie op H. pylori
infectie hangt af van verschillende op elkaar inwerkende factoren. Deze gegevens suggereren tezamen dat IL-32 een belangrijke rol kan spelen bij de pathogenese van gastritis veroorzaakt door H. pylori
infectie.

Ondersteunende informatie
Figuur S1.
AGS cellen werden gezaaid in platen met zes putjes bij een dichtheid van 1 x 10 ^{6 cellen /well en gestimuleerd met 10 ng /ml Th17 cytokine (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 cytokine IL-4, Tregs cytokine TGF-β1 en Th1 cytokine IFN-γ gedurende 24 uur, en cellen werden verzameld voor analyse van IL-32 mRNA en eiwitexpressie. Gegevens zijn gemiddelde ± SEM van drie afzonderlijke experimenten en één vertegenwoordiger vlek werd aangetoond
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088270.s001
(TIF)
Figuur S2.
H.
pylori stam 26695 werd gekweekt op hersen-hart infusie platen die 10% konijnenbloed bij 37 ° C onder microaërofiele omstandigheden (5% O _{2, 10% CO 2, 85% N 2 ) en de isogene urease subunit B-negatieve mutant stam (UreB - stam) werd verkregen zoals eerder is beschreven [27]. Een veelvoud van infectie (MOI) van 100 werd gebruikt voor het infecteren AGS en GES-1 cellen. Cellen werden verzameld voor analyse van IL-32 mRNA expressie. Gegevens zijn gemiddelde ± SEM van drie afzonderlijke experimenten. * P Restaurant < 0,05; ** P Restaurant < 0,01; *** P Restaurant < 0,001
doi:. 10.1371 /journal.pone.0088270.s002
(TIF)}}

• PLoS ONE: atrofische gastritis: Een Verwante voor osteoporose in Bejaarden
• PLoS Pathogens: Caveolin-1 beschermt B6129 muizen tegen Helicobacter pylori Gastritis