PLoS ONE: Forhøyede Interleukin-32 Expression er assosiert med Helicobacter pylori-Related Gastritis

Abstract

Bakgrunn

Interleukin-32 (IL-32) er en nylig oppdaget proinflammatorisk cytokin involvert i betennelses sykdommer. Vi undersøkte uttrykk for IL-32 og dens Reguleringen i den inflammatoriske respons hos pasienter med Helicobacter pylori product: ( H. Pylori
) infeksjon.

Design og metoder

IL-32 mRNA og protein uttrykk i mage vev ble oppdaget av kvantitativ real-time PCR og immunhistokjemi. Reguleringen av IL-32 i human gastrisk epitel cellelinje AGS ble undersøkt ved forskjellige cytokin stimulering og forskjellig H. pylori
belastning infeksjon.

Resultater

Gastric IL-32 mRNA og protein uttrykk ble forhøyet hos pasienter med H. pylori
infeksjon og positivt korrelert med gastritt. I H. pylori
-infected pasienter, mRNA nivået av IL-32 ble også korrelert med den av proinflammatoriske cytokiner IL-1 p og TNF-a. In vitro
IL-1β og TNF-α kunne oppregulerer IL-32-mRNA og proteinnivå i AGS-celler, som var avhengig av NF-kB signalvei. Reguleringen av IL-32-ekspresjon i respons til H. pylori
-infection kunne bli svekket ved hjelp av nøytraliserende antistoffer for å blokkere IL-1β og TNF-α. Videre H. pylori
-infected AGS celler også indusert IL-32 mRNA og protein uttrykk, som var avhengig av CagA.

Konklusjoner

IL-32 nivå er forhøyet hos pasienter med H . pylori
infeksjon og dens ekspresjon er regulert av proinflammatoriske stimuli, noe som tyder på at IL-32 kan spille en rolle i patogenesen av H. pylori
-relaterte gastritt

Citation. Peng L-s, Zhuang Y, Li W-h, Zhou Y-y, Wang T-t, Chen N et al. (2014) Forhøyet Interleukin-32 Expression er assosiert med Helicobacter pylori
-relaterte gastritt. PLoS ONE 9 (3): e88270. doi: 10,1371 /journal.pone.0088270

Redaktør: Ivo G. Boneca, Institut Pasteur Paris, Frankrike

mottatt: 24. august 2013, Godkjent: 08.01.2014; Publisert: 14 mars 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra Medical Science Youth Training Prosjekt kinesiske Folkets frigjøringshær (13QNP108) og National Basic Research Program of China (973 Program, nr 2009CB522606). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

Helicobacter pylori product: ( H. pylori
) er en Gram-negative, mikroaerofile bakterien som koloniserer magen på ca 50% av befolkningen over hele verden. Den vedvarende infeksjon av H. pylori
forårsaker kroniske og vedvarende gastritt og øker risikoen for magesår og magekreft.

H. pylori
-infected mageslimhinnen har vært preget av infiltrasjon av immunceller og produksjon av inflammatoriske faktorer. Th1 og Th2 respons er rapportert å mekle immunrespons til H. pylori
, og Th1-respons er antatt å være dominerende [1]. Da induksjon av Th17 respons i H. pylori
-infected magen er bekreftet [2]. Foruten Th1, Th2 og Th17 celler, regulatoriske T-celler (tregs) spiller også en viktig rolle i H. pylori
-relaterte gastritt [3]. I mellomtiden, proinflammtory cytokiner som IL-1β, TNF-α og IL-6 er også vist å være forhøyet i H. pylori
-infected magen [4], og disse cytokinene kan påvirke T-celle immunrespons i inflammatoriske lidelser, noe som tyder på at inflammatoriske faktorer kan være avgjørende i H. pylori
-relaterte mage betennelse. Men den nøyaktige mekanisme for prosessen ikke har blitt fullstendig klarlagt.

IL-32 er et nylig identifisert proinflammatorisk cytokin som produseres av immunceller (NK-celler, T-celler, monocytter) og ikke-immunceller (endotelceller , epitelceller) [5] - [7]. Det ble opprinnelig klonet som et gen indusert av IL-2 og NK-heter 4, men dens funksjon var ukjent før 2005 [5], [8]. Det er seks spleisevarianter inkludert IL-32α, β, γ, δ, ε og ζ, og ulike roller er potensielt spilt av sine forskjellige isoformer. Imidlertid har en spesifikk reseptor for IL-32 ikke er blitt oppdaget, men nøytrofile proteinase 3 binder seg til IL-32 med en høy affinitet [9]. IL-32 spiller en viktig rolle i forskjellige inflammatoriske lidelser og dens ekspresjon er vist å korrelere med graden av sykdommer i revmatoid artritt, Crohns sykdom og atopisk dermatitt [10] - [12]. Videre IL-32 hadde blitt antydet i enkelte smittsomme sykdommer som H. pylori-infeksjon
[13] - [16]. Men sammenhengen mellom IL-32 uttrykk og H. pylori
indusert gastritt og dens nøyaktige Reguleringen herunder om auto- /paracrine effekter på ekspresjon av IL-32 kan være involvert i prosessen var fortsatt ukjent.

I denne studien, vi har oppdaget IL -32 uttrykk i biopsiprøver fra pasienter med H. pylori-infeksjon
og analyseres forholdet mellom gastrisk IL-32 nivå og alvorlighetsgraden av slimhinnebetennelse. Deretter utforsket vi virkningen av proinflammatoriske stimuli og H. pylori
infeksjon på IL-32 uttrykk i humane mage epithelia cellelinjer. Våre resultater viste at IL-32 kan være involvert i patogenesen av H. pylori
-relaterte gastritt.

Materialer og metoder

Etikk erklæringen

Menneskelige mageslimhinne biopsier ble samlet av rutine endoskopi på Xinqiao Hospital of the Third Military Medical University . Blod ble hentet fra samme fag som gjennomgikk endoskopi for H. pylori
serologi test. Studien ble godkjent av etikkomiteen av Xinqiao Hospital, Third Military Medical University. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra hvert fag

Fag

Gastric vev og blod ble samlet inn fra 54 pasienter. (Mannlige /kvinnelige = 27/27, gjennomsnittsalder 47 ± 1,2 år) med H. pylori
infeksjon som gjennomgikk endoskopi på Xinqiao Hospital of the Third Military Medical University. H. pylori
infeksjon ble bekreftet av raske Urease test, serologi test, ^{13C-urea pusteprøve og histologi. Pasientene ble klassifisert som H. pylori
positiv hvis to av de fire prøvene var positive. Normale mage vev fra 47 pasienter (mann /kvinne = 23/24, gjennomsnittsalder 47 ± 1,3 år). Som hadde negative resultater for alle fire testene ble inkludert som kontroller}

Snitt og histologi Assessment

Snitt ble tatt fra fagene på hvert endoskopi. En ble umiddelbart frosset i flytende nitrogen og lagret ved -80 ° C for RNA-ekstraksjon. Resten av biopsiprøver ble fiksert i formalin og innstøpt i parafin. Haematoxylin-eosin (H & E) farget seksjoner ble undersøkt av to erfarne histopathologist. Den histologiske alvorlighetsgraden av gastritt ble gradert fra normal til alvorlig basert på tettheten av infiltrerende mononukleære og polymorphnuclear celler i henhold til etablerte kriterier [17], [18].

Cell Culture

mage epitel linje AGS (ATCC, American Type Culture Collection) ble dyrket ved 37 ° C og 5% CO _{2 i Hams F12 (Hyclone, Logan, UT, USA), som inneholdt 10% føtalt kalveserum (FCS). AGS Cellene ble sådd ut i seks-brønns plater ved en tetthet på 1 x 10 ^{6 celler /brønn og stimulert med 10 ng /ml TNF-α eller /og 10 ng /ml IL-1β (Peprotech, Rocky Hill, NJ , USA); Cellene ble samlet opp ved indikerte tider for analyse av IL-32 mRNA og protein ekspresjon. For signalveien hemming analysen, NF-kB inhibitor (BAY 11-7082), MEK1 /2-hemmer (U0126), p38 /MAPK-hemmer (SB203580), JNK inhibitor (SP600125), JAK inhibitor jeg (alle på 10 mikrometer og alle fra Calbiochem, San Diego, CA, USA) eller kjøretøyet DMSO (Sigma, St. Louis, MO, USA) ble lagt til i cellekultur en time før cytokin stimulering.}}

Infeksjon av AGS Celler med H. pylori

H. pylori
11637-stamme og dens isogene CagA-negativ mutant stamme (CagA ^{--stamme) ble dyrket på hjerne-hjerte-infusjons plater inneholdende 10% kaninblod ved 37 ° C under mikroaerofile betingelser (5% O _{2 , 10% CO 2, 85% N 2). H. pylori
ble vasket av kulturplater med PBS og sentrifugert ved 2500 x g i 5 min, før de ble resuspendert i PBS for tetthet kvantifisering optisk ved 600 nm (1 OD 600 = 1 x 10 9 H. pylori Twitter /ml). En multiplisitet for infeksjon (MOI) på 1, 10 og 100 ble anvendt for å infisere celler AGS. For nøytraliseringsanalyser, nøytraliserende antistoffer mot TNF-α (NTNF-α, 1 ug /ml, Biolegend) eller IL-1β (NIL-1β, 1 ug /ml, eBioscience) ble tilsatt i den coculture systemet.}}

RNA Isolation og kvantitativ real-time PCR

RNA ble ekstrahert fra biopsiprøver eller celler ved TRIzol reagent® (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) og revers-transkribert til cDNA ved hjelp ReverTra Ace (Toyobo, Osaka, Japan). Kvantitativ real-time PCR ble utført av iQ5 Detection System (Bio-Rad, USA). PCR-primere ble utformet for å krysse en exon-intron grense og anvendes for å detektere mRNA-ekspresjon av IL-32, TNF-α, IL-1β og β-aktin og deres sekvenser er som følger: IL-32, fremover, 5 ' -ACGACTTCAAAGAGGGCTACC-3 '; omvendt, 5'-GCCTCGGCACCGTAATCCAT-3 '; TNF-α, fremover, 5'-TCTCTAATCAGCCCTCTGGC-3 '; omvendt, 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3 '; IL-1β, fremover, 5'-GTTCTTTGAAGCTGATGGCC-3 '; omvendt, 5'-GTGGTCGGAGATTCGTAGCT-3 '; β-aktin, fremover, 5'-TTCCTTCCTGGGCATGGAGTCC-3 '; omvendt, 5'-TGGCGTACAGGTCTTTGCGG-3 '. β-aktin ble benyttet som en intern kontroll. Den relative genekspresjon ble beregnet som ganger endring av ΔΔCt metoden.

Immunohistochemistry

Førti parafininnstøpte prøvene ble kuttet i 5-mikrometer seksjoner. Etter å ha blitt deparaffinized og hydratisert, ble delene i citrat-buffer (pH = 6,0) underkastes varme-induserte antigen gjenfinning i en mikrobølgeovn og behandlet med 3% hydrogenperoksyd. Etter inkubasjon med kanin-anti-humant IL-32 (Abcam, MA, USA) over natten ved 4 ° C, Objektglassene ble behandlet med pepperrot-peroksidase-konjugert sekundært anti-kanin-antistoff (Zhongshan Golden Bridge Biotech., Beijing, Kina) etterfulgt av substrat 3,3'-diaminobenzidin tetrahydroklorid (DAB). Isotypematchende antistoff ble anvendt som negativ kontroll. Bilder ble kjøpt på et mikroskop utstyrt med et digitalt kamera Nikon Eclipse 80i (Tokyo, Japan). For semi-kvantitativ analyse av immunhistokjemi ble hver seksjon valgt for å evaluere IL-32 farging i mage vev og ble gradert som følger: 0 poeng, ingen uttrykk; scorer ett, lav uttrykk; scorer to, middels uttrykk; Resultat: 3, høy ekspresjon.

Western Blot

Celler ble vasket i iskald PBS og deretter avbrutt i lyseringsbuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 2,5 mM natriumpyrofosfat, 1 mM glycerofosfat, 1 mM Na3VO4, 1 ug /ml leupeptin og protease-inhibitor). Proteinkonsentrasjonen ble målt med et BCA proteinanalysesett (BOOSTER, Wuhan, Kina). Cellelysater ble separert ved 12% SDS-PAGE og overført til en membran polyvinylidendifluorid. Membranene ble blokkert i 1 time med 3% bovint serumalbumin i Tris-bufret saltvann-Tween ved romtemperatur og deretter inkubert over natten ved 4 ° C med kanin-anti-humant IL-32 (Abcam, MA, USA) eller mus anti human β-aktin ((Tianjin Sungene Biotech Co Ltd, Kina). Pepperrot peroksydase-konjugert sekundært antistoff ble anvendt i henhold til produsentens instructures. proteinene av interesse ble visualisert ved hjelp av Supersignal® West Dura Varighet substrat-reagens (Thermo, IL , USA).

Statistical Analysis

Alle resultater ble oppsummert som gjennomsnitt ± standard feil av gjennomsnittet (SEM), og statistisk analyse ble utført ved hjelp av GraphPad Prism 5.0 Software. forskjellene mellom to . grupper ble analysert av Mann-Whitney U test og flere grupper ble analysert av en enveis variansanalyse (ANOVA) Når avvikene ble oppdaget, ble Spearman korrelasjon brukt til å vurdere graden av sammenheng mellom variablene P. < 0,05 ble ansett statistisk signifikant.

Resultater

Forhøyet IL-32 mRNA nivå oppdaget hos pasienter med H. pylori
Infeksjon

For å undersøke om IL-32 er involvert i patogenesen av H. pylori
indusert gastritt, vi først bestemt IL-32 mRNA uttrykk i mage biopsiprøver fra pasienter med og uten H. pylori
infeksjon. Som vist på fig. 1A, IL-32 uttrykk var betydelig høyere i H. pylori
-positive prøvene enn i H. pylori
-negative prøver (P < 0,001). For å vurdere om uttrykket av IL-32 var knyttet til graden av betennelse i H. pylori
-infected mageprøver, fordelt vi prøvene i normale og milde, moderate og alvorlige gastritt grupper basert på histologisk vurdering som beskrevet i materialer og metoder. Resultatene viste at IL-32 mRNA-nivåer i H. pylori
-positive prøver ble positivt korrelert med graden av gastrisk inflammasjon (Fig. 1B). Videre nivået av IL-32 mRNA viste også en positiv sammenheng med TNF-α og IL-1β mRNA nivåer (Fig. 1C).

Økt IL-32 Protein Expression i Pasienter med H. pylori
Infeksjon

For å visualisere IL-32 uttrykk i mage biopsiprøver, ble immunhistokjemisk farging av IL-32 utført på parafininnstøpte vev. Som vist på fig. 2B, noen av IL-32-produserende celler ble oppdaget i H. pylori
-negative mage vev, mens i H. pylori
-positive mage vev, observerte vi at IL-32 protein uttrykk var betydelig (Fig. 2C) økt. I tillegg, semikvantitativ evaluering av IL-32 immunoreaktivitet bekreftet at ekspresjon av IL-32 i gastrisk vev av H. pylori
-infected pasienter på proteinnivå ble også betydelig økt sammenlignet med dem i H. pylori
-negative mage vev og i mild gastritt.

IL-32 mRNA og proteinnivå ble oppregulert av TNF-α og IL-1β

Fordi vi har funnet en positiv sammenheng mellom IL -32 mRNA-nivåer og graden av gastrisk inflammasjon i mage vev og korrelasjon mellom IL-32 mRNA og IL-1β og TNF-α mRNA, ble reguleringen av proinflammatoriske cytokiner på IL-32-mRNA-ekspresjon undersøkt i AGS-celler. Som vist på fig. 3A, etter å ha blitt behandlet med cytokiner i 24 timer, IL-32-mRNA-nivået ble signifikant oppregulert: 5,0 ± 0,5 ganger av TNF-α, 6,9 ± 0,5 ganger av IL-1β, og 11,2 ± 1,4 ganger av IL-1β og TNF-α. Denne effekten var helt avhengig av NF-kB signalveien som forbehandling med NF-kB-inhibitor BAY 11-7082, men ikke JNK, p38 /MAPK, MEK1 /2 eller JAK /STAT signale inhibitorer hemmet induksjon av IL-32 mRNA etter stimulering av TNF-α eller IL-1β (fig. 3C). Videre bekreftet Western blot at IL-32-protein nivået ble også indusert av TNF-α og /eller IL-1β stimulering som var avhengig av NF-kB signalveien (fig. 3B og D). Vi neste undersøkt om TNF-α eller IL-1β var involvert i H. pylori
indusert oppregulering av IL-32 uttrykk. AGS celler ble infisert med H. pylori
og samtidig behandlet med nøytraliserende antistoffer for å blokkere TNF-α eller IL-1β. Som vist på fig. 3E, H
. pylori
indusert IL-32 protein uttrykk ble betydelig redusert ved hjelp indikert cytokiner-blokkerende antistoffer.

H. pylori
indusert IL-32 Expression

For ytterligere å studere den direkte effekten av H. pylori
på uttrykk for IL-32 i mage epitelceller ble AGS celler infisert med H. pylori
ved en MOI på 1, 10 og 100. Som vist på fig. nivåer 4A og B, IL-32 mRNA og protein ble økt etter H. pylori
infeksjon i en doseavhengig måte. Vi neste analysert enten H. pylori
belastningsskader forskjeller vil bidra til forskjellig uttrykk av IL-32. Celler ble infisert med H. pylori 11637
belastning og CagA ^{- belastning. Selv om CagA - påkjenning infeksjon noe økt ekspresjon av IL-32 i AGS-celler, induksjon av IL-32-mRNA og proteinnivå ved CagA - påkjenning infeksjon var signifikant lavere enn ved H. pylori 11637
belastning infeksjon (fig. 4C og D).}

Diskusjoner

I denne studien, observerte vi at mage IL-32 ble signifikant forhøyet hos pasienter med H . pylori
infeksjon både mRNA og proteinnivåer. Den økte IL-32-mRNA-nivået korrelerer med graden av gastrisk inflammasjon. I tillegg ble IL-32 mRNA-nivåer korrelerte også med TNF-α og IL-1β mRNA-nivåer i H. pylori-
positive gastrisk biopsiprøver, og en av de to cytokiner kan oppregulerer IL-32-mRNA og proteinnivå. Videre fant vi at H. pylori
infeksjon av mage epiteliale cellelinjer også indusert IL-32 mRNA og protein uttrykk. Disse resultatene indikerer at IL-32 er sannsynligvis involvert i gastrisk inflammasjon fra pasienter med H. pylori
infeksjon.

IL-32 ble nylig beskrevet som en proinflammtory faktor involvert i en rekke inflammatoriske sykdommer slik som kronisk rhinosinusitis, en tilstand for det meste forårsaket av grampositive bakterier infeksjon [19], [20]. Forhøyet IL-32 ble deretter rapportert i HCV og HBV-infisert lever og å korrelere med graden av hepatisk inflammasjon og leverfibrose [15], [21]. I denne studien viste vi at IL-32 mRNA nivået ble signifikant forhøyet hos pasienter med H. pylori
infeksjon, og en høy korrelasjon mellom IL-32-mRNA og gastrisk inflammasjon ble også observert, noe som tyder på at IL-32 kan spille en viktig rolle i H. pylori-
smittet magen. I tillegg ble immunohistokjemi anvendt for å detektere kilde for IL-32, og resultatene viste at IL-32 ble uttrykt i mage-epitelceller og dens høyt ekspresjon ble observert i H. pylori-
positive mage vev. Ettersom IL-32 ble funnet å indusere produksjonen av IL-8 i gastriske epitel-celler og inhiberte proangiogenic faktoren VEGF-sekresjon med bronkiale epitelceller [16], [22], og vi også observert IL-32-mRNA-nivået ble positivt korrelert med IL-8-ekspresjon (data ikke vist). Det er rimelig at IL-32 påvirker funksjonen av gastriske epitel-celler i H. pylori-
smittet magen.

Den klassiske mage betennelse med H. pylori
infeksjon kan bli påvirket ved infiltrering av immun-celler og inflammatoriske cytokiner, det senere kan omfatte nylig oppdaget IL-32 [19] - [22]. I vår studie fant vi at in vitro TNF-α og /eller IL-1β stimulert AGS celler til å oppregulere IL-32 mRNA og protein uttrykk, som støttet en positiv sammenheng mellom IL-32 og TNF-α og IL-1β in vivo . Imidlertid Th17 cytokin (IL-17A IL-17F, IL-6), Th2 cytokin IL-4, Tregs cytokinet TGF-β1 og Th1 cytokin IFN-y alt ikke klarte å indusere IL-32 mRNA og protein ekspresjon i vårt system, selv om alle relevante immuncelletyper og cytokiner ble rapportert å infiltrere H. pylori-
smittet magen (se figur S1). Disse resultatene antydet at IL-32 er sannsynligvis produsert før infiltrasjon av disse cellene, som er støttet av den rapport som IL-32 induserer dendrittiske cellemodning og fremmer Th1 og Th17 polarisasjon [23]. Dessuten ble induksjon av IL-32 mRNA og protein av TNF-α eller IL-1β blokkert av NF-kB-inhibitor BY 11-7082, noe som indikerer at den molekylære mekanismen bak denne fremgangsmåte er sannsynligvis NF-kB avhengig. Interessant, ved bruk av nøytraliserende antistoffer for å blokkere TNF-α eller IL-1β parallelt med H. pylori
infeksjon, observerte vi at IL-32-protein nivået ble betydelig redusert. Derfor, indikerte resultatene at epitel-cytokiner (TNF-α og IL-1β) som reaksjon på H. pylori-infeksjon
var viktig for regulering av IL-32 ekspresjon.

Våre resultater viste også at IL-32-mRNA og proteinnivå ble øket på en doseavhengig måte etter H. pylori
infeksjon, noe som tyder på at effekten av H. pylori
infeksjon på IL32 uttrykk er direkte fysiologisk. I tillegg CagA mutasjoner i H. pylori
kunne gi en betydelig svekke ekspresjon av IL-32 i AGS celler, noe som indikerer at H. pylori
indusert IL-32 oppregulering var avhengig CagA. H. pylori
uttrykke mange proteiner for å kunne lette patogenesen [24]. UreB er også en viktig protein virulens for koloniseringen av H. pylori Hotell og formidlet H. pylori
indusert dysfunksjon av mage barriere [25], [26]. Vi fant ut at UreB mutasjoner også dempes H. pylori
indusert IL-32 mRNA-ekspresjon (se fig S2). Derfor IL-32 uttrykk ble hovedsakelig regulert av translokasjon av CagA i epitelceller og andre virulens proteiner kan også påvirke sykdomsfremkallende responsen H. pylori anbefale til mage epitelceller.

I konklusjonen, våre data har vist at IL-32 uttrykk ble forhøyet hos pasienter med H. pylori-infeksjon
og korreleres med graden av gastrisk inflammasjon. Reguleringen av IL-32-ekspresjon i respons til H. pylori
infeksjon avhenger av forskjellige samhandlende faktorer. Disse data sammen tyder på at IL-32 kan spille en viktig rolle i patogenesen av gastritt forårsaket av H. pylori
infeksjon.

Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
AGS-celler ble sådd ut i seks-brønns plater ved en tetthet på 1 x 10 ^{6 celler /brønn og stimulert med 10 ng /ml Th17 cytokin (IL-17A IL-17F, IL-6), Th2 cytokin IL-4, ble Tregs cytokinet TGF-β1 og Th1 cytokin IFN-γ i 24 timer, og cellene oppsamlet for analyse av IL-32 mRNA og protein ekspresjon. Dataene er gjennomsnitt ± SEM av tre separate eksperimenter og en representant blot ble vist
doi:. 10,1371 /journal.pone.0088270.s001 plakater (TIF)
Figur S2.
H. pylori
stamme 26695 ble dyrket på hjerne-hjerte-infusjons plater inneholdende 10% kaninblod ved 37 ° C under mikroaerofile betingelser (5% O _{2, 10% CO 2, 85% N 2 ), og dens isogene Urease subenhet B-negativ mutant stamme (UreB --stamme) ble oppnådd som tidligere beskrevet [27]. En multiplisitet for infeksjon (MOI) på 100 ble brukt for å infisere AGS og GES-1 celler. Celler ble samlet for analyse av IL-32 mRNA-ekspresjon. Dataene er gjennomsnitt ± SEM fra tre separate eksperimenter. * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
< 0,001
doi:. 10,1371 /journal.pone.0088270.s002 plakater (TIF)}}

• PLoS ONE: atrofisk gastritt: En beslektet faktor for osteoporose hos eldre kvinner
• PLoS Pathogens: Caveolin-1 Beskytter B6129 Mus mot Helicobacter pylori gastritt