Ploche ONE: Zvýšené interleukín-32 expresie je spojená s Helicobacter pylori v súvislosti s Gastritis

abstraktné

Pozadie

interleukínu-32 (IL-32) je nedávno objavený prozápalový cytokín zapojený do zápalovej ochorenia. Sledovali sme expresiu IL-32 a jej regulácie mechanizmu zápalové reakcie pacientov s Helicobacter pylori
( H. pylori
) infekcie.

Dizajn a metódy

IL-32 mRNA a expresie proteínu v žalúdočných tkanivách bol detekovaný kvantitatívnej real-time PCR a imunohistochémia. Regulácia IL-32 na ľudský žalúdočné epitel bunková línia AGS bola skúmaná rôznymi stimuláciou cytokíny a rôzne H. pylori
kmeň infekcie.

Výsledky

žalúdočné IL-32 mRNA a expresie proteínu boli zvýšené u pacientov s H. pylori
infekcie a pozitívne koreluje s gastritídou. V H. Pylori
-infected pacientov, hladina mRNA IL-32 bol tiež v korelácii s tým prozápalových cytokínov IL-1 a TNF-alfa. In vitro
IL-1β a TNF-α by upregulate IL-32 mRNA a proteínové úrovni v AGS buniek, ktoré bolo závislé na signálne dráhy NF-kB. Regulácia IL-32 expresie v reakcii na H. pylori
-infection by mohlo oslabiť s použitím neutralizačné protilátky blokovať IL-1 a TNF-a. Okrem toho H. pylori
-infected AGS bunky tiež indukovaná IL-32 mRNA a expresiu proteínu, ktorý bol závislý na ČAGA.

Závery

IL-32 hladina je zvýšená u pacientov s H , pylori
infekcie a jeho expresie je regulovaná protizápalovými podnetmi, čo naznačuje, že IL-32 môže hrať úlohu v patogenéze H. pylori
by preto gastritídu

Citácia :. Peng L-s, Zhuang Y, Li W-h, Zhou Y-Y, Wang T-t, Chen N, et al. (2014) Zvýšené interleukín-32 expresie je spojená s Helicobacter pylori
spojené so štúdiom gastritídou. PLoS ONE 9 (3): e88270. doi: 10,1371 /journal.pone.0088270

Editor: Ivo G. Boneca, Inštitút Pasteur Paríž, Francúzsko

prijatá: 24. augusta 2013; Prijaté: 08.01.2014; Uverejnené: 14.března 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bol podporený dotácií z Medical Science mládeže vzdelávací projekt v Čínskej ľudovej oslobodeneckej armády (13QNP108) a Národná základného výskumu programu Číny (973 Program, č 2009CB522606). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Helicobacter pylori
( H. pylori
) je gram-negatívna, mikroaerofilní baktérie, ktorá kolonizuje žalúdok asi 50% populácie po celom svete. Pretrvávajúce infekcie H. pylori
spôsobuje chronický a pretrvávajúci gastritídu a zvyšuje riziko žalúdočného vredu a rakoviny žalúdka.

H. pylori
-infected žalúdočnej sliznice bola charakterizovaná infiltráciou imunitných buniek a produkciou zápalových faktorov. Th1 a Th2 reakcie sú hlásené sprostredkovať imunitnú odpoveď na H. pylori stroje a Th1 odpoveď je považovaná za prevládajúci [1]. Potom indukcie Th17 odpovede na H. pylori
-infected žalúdok je potvrdená [2]. Okrem Th1, Th2 a Th17 buniek, regulačné T bunky (Treg) tiež hrať dôležitú úlohu v H. pylori
by preto gastritídu [3]. Medzitým bolo tiež preukázané proinflammtory cytokíny, ako IL-1, TNF-a a IL-6, ktoré majú byť zvýšené v H. pylori
-infected žalúdok [4], a tieto cytokíny môžu ovplyvniť T bunkovú imunitnú odpoveď u zápalových ochorení, čo naznačuje, že zápalové faktory môžu byť rozhodujúce pri H. pylori
by preto žalúdka zápal. Presný mechanizmus tohto procesu nie je celkom objasnený.

IL-32 je novo označené prozápalový cytokín produkovaný bunkami imunitného systému (NK bunky, T-buniek, monocytov) a non-bunky imunitného systému (endoteliálne bunky , epitelové bunky), [5] - [7]. Pôvodne bol klonovaný ako gén vyvolanej IL-2 a NK-4 s názvom, ale jeho funkcia bola neznáma až do roku 2005 [5], [8]. Existuje šesť varianty zostrihu, vrátane IL-32α, β, γ, δ, ε a ζ, a rozmanité úlohy sú potenciálne hrajú svojimi rôznymi izoforiem. Avšak, konkrétne receptor pre IL-32 nebol objavený, keď neutrofilov proteináza 3 viaže sa k IL-32 s vysokou afinitou [9]. IL-32 hrá dôležitú úlohu v rôznych zápalových ochorení a jeho expresie koreluje so závažnosťou ochorenia u reumatoidnej artritídy, Crohnovej choroby a atopickej dermatitídy [10] - [12]. Okrem toho IL-32 boli predpokladané v niektorých infekčných ochorení, vrátane H. pylori
infekcie [13] - [16]. Avšak, vzťah medzi IL-32 expresie a H. pylori
indukovaná gastritída a jeho presnej regulácie mechanizmus, vrátane toho, či auto- /parakrinný účinky na expresiu IL-32 môže byť zapojený do procesu bolo zatiaľ nie je známy.

V tejto štúdii sme zistili, IL -32 výraz v biopsiou od pacientov s H. pylori
infekcie a analyzovaný vzťah medzi žalúdočné IL-32 úrovne a závažnosti zápalu sliznice. Následne sme skúmali vplyv zápalových stimulov a H. pylori
infekcie na IL-32 expresie v ľudských bunkových línií epitelu žalúdka. Naše výsledky ukazujú, že IL-32 by mohol byť zapojený do patogenézy H. pylori
by preto gastritídu.

materiáloch a metódach

Ethics Prehlásenie

ľudských slizníc biopsie žalúdka boli zhromažďované rutinné endoskopia na Xinqiao nemocnicu tretieho Vojenskej lekárskej univerzity , Krv bola získaná od rovnakého subjektu, ktorí podstúpili endoskopiu za H. pylori
sérologických testov. Štúdia bola schválená etickou komisiou o Xinqiao nemocnice, tretí Vojenskej lekárskej univerzity. Písomný informovaný súhlas bol získaný od každého subjektu

Predmety

žalúdočné tkaniva a krvi boli odobraté od 54 pacientov. (Muži /ženy = 27/27; priemerný vek 47 ± 1,2 rokov) s H. pylori
infekciu, ktorí podstúpili endoskopiu na Xinqiao nemocnicu tretieho Vojenskej lekárskej univerzity. H. pylori
infekcia bola potvrdená rapid-ureázou testu, sérologie test ^{13C-močovina testovací dych a histológie. Pacienti boli klasifikovaní ako H. pylori
pozitívne, ak dva zo štyroch testov boli pozitívne. Normálny žalúdočné tkaniva zo 47 subjektov (muži /ženy = 23/24; priemerný vek 47 ± 1,3 rokov)., Ktorí mali negatívne výsledky všetkých štyroch testoch bolo zapísané ako ovládacie prvky}

biopsie a histológie posúdenie

Biopsie boli odobraté z predmetov v každom endoskopii. Jeden bol okamžite zmrazí v kvapalnom dusíku a skladované pri -80 ° C na extrakciu RNA. Zvyšok biopsiou boli fixované v formalínu a vložené do parafínu. Hematoxylin eozín (H &E) zafarbené rezy boli skúmané dvoma skúsenými histopathologist. Histologický závažnosť žalúdka bola odstupňovaná od normálu až ťažké založené na hustote infiltrujúcich mononukleárny a polymorphnuclear buniek podľa stanovených kritérií [17], [18].

bunkovej kultúre

žalúdočné epiteliálne línie AGS (ATCC, American Type Culture Collection) sa kultivovali pri teplote 37 ° C a 5% CO _{2 v Ham F12 (Hyclone, Logan, UT, USA), ktorý obsahuje 10% fetálne teľacie sérum (FCS). AGS Bunky boli nasadené na šiestich-jamkové doštičky v hustote 1 x 10 ^{6 buniek /jamka a stimulovanej s 10 ng /ml TNF-a a /alebo 10 ng /ml IL-1 (PeproTech, Rocky Hill, NJ , USA); Bunky boli zbierané v uvedených časoch pre analýzu IL-32 mRNA a proteínovej expresie. Pre signálne dráhy testu inhibícia, inhibítor NF-kB (BAY 11-7082), MEK1 /2 inhibítora (U0126), P38 /MAPK inhibítor (SB203580), inhibítora JNK (SP600125), AKO Inhibitor I (všetky pri 10 uM a všetkých Calbiochem, San Diego, CA, USA) alebo DMSO vozidla (Sigma, Saint Louis, MO, USA) boli pridané do bunkovej kultúry 1 hodinu pred stimuláciou cytokíny.}}

Infekcia buniek s AGS H. pylori

H. pylori
11637 kmeň a jeho isogenní ČAGA-negatívne mutantný kmeň (ČAGA ^{- kmeň) boli pestované na mozog-Heart Infusion doštičiek obsahujúcich 10% králičie krvi pri teplote 37 ° C za mikroaerofilní podmienok (5% O _{2 10% CO 2, 85% N 2). H. pylori
sa premyje z kultivačnej dosky s PBS a centrifugovány pri 2500 x g počas 5 minút, pred tým, než boli resuspendované v PBS na optickej hustoty kvantifikáciu pri 600 nm (1 OD 600 = 1 x 10 9 H. pylori
/ml). Multiplicitě infekcie (MOI) po 1, 10, a 100 bol použitý pre infikovanie buniek AGS. Pre stanovenie neutralizačných protilátok, neutralizujúcich protilátok proti TNF-a (nTNF-a, 1 ug /ml, BioLegend) alebo IL-1 (NIL-1β, 1 ug /ml, eBioscience) bol pridaný do kultivácie systému.}}

Izolácia RNA a kvantitatívne Real-time PCR

RNA bola extrahovaná z biopsiou alebo buniek TRIzolu reagent® (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) a reverznej transkripcii do cDNA s použitím ReverTra ACE (Toyobo, Osaka, Japonsko). Kvantitatívny real-time PCR bola vykonaná pomocou detekčného systému iQ5 (Bio-Rad, USA). PCR priméry boli navrhnuté tak, aby prejsť hranice exón-intronom a použité na detekciu expresie mRNA IL-32, TNF-α, IL-1β a β-aktínu a ich sekvencie sú nasledujúce: IL-32, dopredu, 5 ' -ACGACTTCAAAGAGGGCTACC-3 '; zvrátiť, 5'-GCCTCGGCACCGTAATCCAT-3 '; TNF-α, dopredu, 5'-TCTCTAATCAGCCCTCTGGC-3 '; zvrátiť, 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3 '; IL-1β, vpred, 5'-GTTCTTTGAAGCTGATGGCC-3 '; zvrátiť, 5'-GTGGTCGGAGATTCGTAGCT-3 '; β-aktínu, dopredu, 5'-TTCCTTCCTGGGCATGGAGTCC-3 '; zvrátiť, 5'-TGGCGTACAGGTCTTTGCGG-3 '. β-aktínu bol použitý ako vnútorná kontrola. Relatívna expresia génu bola vypočítaná ako násobok zmeny metódou ΔΔCt.

Imunohistochémia

O štyridsať parafínových vzorky boli narezané na 5 um sekcií. Potom, čo bol zbavené parafínu a hydratovanú, úseky v citrátovom pufri (pH = 6,0) sa podrobí tepelne indukované sprístupnenie antigénu v mikrovlnnej rúre a zmieša s 3% peroxidu vodíka. Po inkubácii s králičie anti-ľudský IL-32 (abca, MA, USA) cez noc pri 4 ° C boli rezy reagovať s chrenovou peroxidázou konjugovanou sekundárnou anti-králičie protilátkou (Zhongshan Golden Bridge Biotech., Peking, Čína) a následne substrátom 3,3'-Diaminobenzidine Tetrahydrochloride (DAB). Izotyp zodpovedajúcim protilátka bola použitá ako negatívna kontrola. Snímky boli nadobudnuté na mikroskope vybavenom digitálnym fotoaparátom Nikon Eclipse 80i (Tokyo, Japonsko). Pre semi-kvantitatívnu analýzu imunohistochémia, každá sekcia bola vybraná na posúdenie, IL-32 imunologické v žalúdočnej tkanive a bola odstupňovaná nasledovne: skóre 0, žiadny výraz; skóre 1, nízku expresiu; skóre 2, sprostredkujúci výraz; skóre 3, vysokú expresiu.

Western Blot

Bunky boli premyté v ľadovo chladnom PBS a potom rozrušené v lyzačním pufri (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 2,5 mM pyrofosfát sodný, 1 mM glycerofosfát, 1 mM Na3VO4, 1 ug /ml leupeptinu a inhibítor proteázy). Koncentrácia proteínu bola meraná pomocou testu BCA proteín kit (boster, Wuhan, Čína). Fragmenty buniek boli separované pomocou 12% SDS-PAGE a prenesené na polyvinylidendifluoridovou membránu. Membrány boli blokované po dobu 1 hodiny s 3% hovädzím sérovým albumínom v Tris-pufrovanom fyziologickom roztoku Tween pri izbovej teplote a potom sa inkubujú cez noc pri 4 ° C s králičie anti-ľudský IL-32 (abca, MA, USA) alebo myšou anti- ľudský β-aktínu ((Tianjin Sungene Biotech Co., Ltd, Čína). chrenovou peroxidázou konjugovanou sekundárnou protilátka bola použitá v súlade s instructures výrobcu. proteíny boli vizualizované záujmu, za použitia Supersignal® West Dura Dĺžka substrátu činidlo (Thermo, IL , USA).

štatistická analýza

Všetky výsledky boli zhrnuté ako priemer ± štandardná chyba priemeru (SEM), a štatistická analýza bola vykonaná s použitím GraphPad Prism Software 5.0. rozdiely medzi dvoma . skupiny boli analyzované pomocou Mann-Whitney U test a viac skupín boli analyzované pomocou jednocestnej analýzy variance (ANOVA) Keď boli zistené rozdiely, Spearmanův korelačný bol použitý pre hodnotenie stupňa asociácie medzi premennými P <. 0,05 bola považovaná štatisticky významný.

Výsledky

Zvýšené IL-32 mRNA úrovni detekovaná u pacientov s H. pylori
Infekcia

Ak chcete študovať, či IL-32 sa podieľa na patogenéze H. pylori
indukované gastritídu, najprv stanovená expresie IL-32 mRNA v žalúdočných biopsií od pacientov s a bez H. pylori
infekciu. Ako je znázornené na Obr. 1A, IL-32 expresie bola významne vyššia u H. pylori
-pozitívny vzorky, ako vo H. Pylori
negatívnych vzoriek (P 0,001). Posúdiť, či je expresia IL-32 bola v súvislosti so stupňom zápalu u H. pylori
-infected žalúdočných vzoriek, sme rozdelili vzoriek do normálnych a mierne, stredne ťažké a ťažké gastritídy skupín na základe posúdenia histológia, ako je popísané v časti Materiály a metódy. Výsledky ukázali, že hladiny IL-32 mRNA H. Pylori
-pozitívnych vzorky boli pozitívne korelácii so stupňom žalúdočné zápalom (obr. 1B). Okrem toho úroveň IL-32 mRNA tiež vykázali pozitívnu koreláciu s TNF-a a IL-1β hladiny mRNA (Obr. 1C).

Zvýšená IL-32 Protein Expression u pacientov s H. pylori
Infekcia

Ak chcete zobraziť IL-32 expresie v žalúdočných biopsií, imunohistochemické farbenie IL-32 bola vykonaná na parafínových tkanív. Ako je znázornené na Obr. 2B, niektoré z IL-32 na produkciu buniek boli detekované v H. pylori
negatívnych žalúdočné tkaniva, zatiaľ čo v H. Pylori
-pozitívnych žalúdočné tkaniva sme pozorovali, že IL-32 expresie proteínu bola významne zvýšená (obr. 2C). Okrem toho, semi-kvantitatívne zhodnotenie IL-32 imunoreaktivity potvrdené, že expresia IL-32 v žalúdočnej tkanive H. pylori
-infected pacienti na úrovni proteínov bolo taktiež signifikantne vyššia v porovnaní s tými v H. pylori
negatívnych žalúdočné tkaniva a v miernom žalúdku.

IL-32 mRNA a proteínovej úrovni bola stimulovaná TNF-a a IL-1β

Pretože sme našli pozitívny vzťah medzi IL -32 mRNA a stupeň zápalu žalúdočnej v žalúdočných tkanivách a korelácia medzi IL-32 mRNA a IL-1 a TNF-α mRNA, regulácia prozápalových cytokínov na IL-32 mRNA bola skúmaná v bunkách AGS. Ako je znázornené na Obr. 3A, po ošetrení cytokíny po dobu 24 hodín, IL-32 na úrovni mRNA bola významne up-regulovaná: 5,0 ± 0,5-krát pomocou TNF-a, 6,9 ± 0,5 krát od IL-1, a 11,2 ± 1,4 krát od IL-1 a TNF-α. Tento účinok bol úplne závislé na NF-kB signálne dráhy ako predbežnej úpravy s NF-kB inhibítor BAY 11-7082, ale nie JNK, p38 /MAPK, signalizačné inhibítory MEK1 /2 alebo AKO /STAT inhibuje indukciu IL-32 mRNA po stimulácii TNF-a alebo IL-1 (obr. 3C). Okrem toho, Western blot potvrdilo, že hladina IL-32 proteín bol tiež indukované TNF-a a /alebo IL-1β stimulácia, ktorá závisí na NF-kB signálne dráhy (obr. 3B a D). Ďalej sme študovali, či TNF-α alebo IL-1β bola zapojená do H. pylori
indukovaná upregulaci IL-32 expresie. AGS bunky boli infikované H. pylori stroje a súčasne reagovať s neutralizačné protilátky na blokovanie TNF-a alebo IL-1. Ako je znázornené na Obr. 3E, H
. pylori
indukovaná IL-32 expresie proteínu bola významne znížila o použití uvedených protilátok cytokíny-blokátory.

H. pylori
indukovaná IL-32 Vyjadrenie

Ak chcete ďalej skúmať priamy účinok H. pylori
na expresiu IL-32 v žalúdočných epiteliálnych bunkách, AGS boli bunky infikované H. pylori
pri MOI 1, 10 a 100. Ako je znázornené na Obr. Hladiny 4A a B, IL-32 mRNA a proteín bol po H zvyšuje. pylori
infekcie spôsobom závislým od dávky. Ďalej sme analyzovali, či H. pylori
kmeň rozdiely by prispelo k rôznym expresie IL-32. Bunky boli infikované H. pylori 11637
kmeň a ČAGA ^{- kmeň. Aj keď ČAGA - kmeň infekcie mierne zvýšil expresiu IL-32 v bunkách AGS, indukcia IL-32 mRNA a na úrovni proteínu ČAGA - kmeň infekcia bola významne nižšia ako tá, H. pylori 11637
kmeň infekcii (obr. 4C a D).}

Diskusia

V tejto štúdii sme zistili, že žalúdočné IL-32 bola významne zvýšená u pacientov s H , pylori
infekcie u oboch mRNA a nízka hladina bielkovín. Zvýšené hladiny IL-32 mRNA korelovala so závažnosťou žalúdočné zápalu. Okrem toho hladiny IL-32 mRNA bola tiež v korelácii s TNF-a a IL-1β hladiny mRNA v H. pylori-
pozitívny biopsiou žalúdka, a to buď z dvoch cytokínov by mohol upregulate IL-32 mRNA a proteínovej úrovni. Ďalej sme zistili, že H. pylori
infekcie žalúdočných epiteliálnych bunkových línií tiež indukovaná IL-32 mRNA a expresiu proteínu. Tieto výsledky ukazujú, že IL-32 je pravdepodobne podieľa na žalúdočné zápalu u pacientov s H. pylori
infekcie.

IL-32 bol v poslednej dobe opísaný ako proinflammtory faktor podieľa na mnohých zápalových chorôb, ako je chronická rinosinusitída, podmienka väčšinou spôsobená grampozitívnym baktériám infekciou [19], [20]. Zvýšené IL-32 sa potom uvedená v HCV a HBV infikovaných pečene a koreluje so závažnosťou zápalu pečene a pečeňové fibrózy [15], [21]. V tejto štúdii sme ukázali, že IL-32 na úrovni mRNA bola významne zvýšená u pacientov s H. pylori
infekcie, a vysoká korelácia medzi IL-32 mRNA a žalúdočné zápalu bolo tiež pozorované, čo naznačuje, že IL-32 môže hrať dôležitú úlohu v H. pylori-
infikovaný žalúdok. Okrem toho, imunohistochemické vyšetrenie sa používa na zistenie zdroja IL-32, a výsledky ukázali, že IL-32 bol exprimovaný v žalúdočných epiteliálnych bunkách a jeho vysoko expresie bola pozorovaná v H. pylori-
pozitívny žalúdočné tkaniva. Vzhľadom k tomu, IL-32 bolo zistené, že indukuje produkciu IL-8 v žalúdočnej epitelových buniek a inhibuje proangiogenic vylučovanie faktora VEGF bronchiálnych epitelových buniek [16], [22], a tiež pozorované hladiny IL-32 mRNA v pozitívnej korelácii s IL-8 expresiu (dáta nie sú ukázaná). Je logické, že IL-32 vplyv na funkciu žalúdočných epiteliálnych buniek v H. pylori-
infikovaný žalúdok.

Klasický žalúdočnej zápal s H. pylori
infekcie by mohla byť ovplyvnená infiltrujúcich imunitných buniek a zápalové cytokíny, neskôr môžu zahŕňať nedávno zistili, IL-32 [19] - [22]. V našej štúdii sme zistili, že in vitro TNF-α a /alebo IL-1β stimulované AGS bunky upregulate IL-32 mRNA a expresie proteínu, ktorý podporoval pozitívny vzťah medzi IL-32 a TNF-a a IL-1β in vivo , Avšak, Th17 cytokínov (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 cytokínov IL-4, Treg cytokín TGF-β1 a Th1 cytokínov IFN-y všetko sa nepodarilo indukovať IL-32 mRNA a expresie proteínu v našom systéme, aj keď všetky relevantné imunitný typy buniek a cytokínov boli hlásené infiltrovať H. pylori-
infikovaný žalúdok (pozri obrázok S1). Tieto výsledky naznačujú, že IL-32 je produkovaný pravdepodobne pred infiltráciou týchto buniek, ktorý je podporovaný správe, že IL-32 indukuje dozrievanie dendritických buniek a podporuje Th1 a Th17 polarizácie [23]. Navyše, indukcia IL-32 mRNA a proteín TNF-a alebo IL-1 bola blokovaná inhibítorom NF-kB BY 11-7082, čo znamená, že molekulárne mechanizmus Základom tohto procesu je pravdepodobné, že NF-kB závislý. Je zaujímavé, že použitie neutralizačných protilátok blokovať TNF-a alebo IL-1 súbežne s H. pylori
infekcie, sme pozorovali, že hladina IL-32 proteín bol výrazne znížila. Z tohto dôvodu, je uvedené, že naše výsledky epiteliálne cytokínov (TNF-α a IL-1β) reakcia na H. pylori
infekcie boli dôležité pre reguláciu IL-32 expresie.

Naše výsledky tiež ukázali, že IL-32 mRNA a proteín hladiny boli v spôsobom závislým od dávky zvyšuje po H. pylori
infekcie, čo naznačuje, že účinok H. pylori
infekcie na IL32 prejavu je priamo fyziologický. Okrem toho ČAGA mutácie v H. pylori
môže významne oslabiť expresiu IL-32 v bunkách AGS, čo ukazuje, že H. pylori
indukovaná IL-32 up-regulácia bola závislá na ČAGA. H. pylori
vyjadriť veľa proteínov s cieľom uľahčiť jej patogenézy [24]. UreB je tiež dôležitým virulencie proteín pre kolonizáciu H. pylori stroje a sprostredkoval H. pylori
indukovaná porucha žalúdočnej bariéry [25], [26]. Zistili sme, že UreB mutácie tiež oslabený H. pylori
indukovaná IL-32 mRNA (pozri obrázok S2). Z tohto dôvodu, IL-32 expresie bola riadená prevažne translokáciu ČAGA do epitelových buniek a ďalšie proteíny virulencie môže tiež mať vplyv na patogénnu reakciu H. pylori
žalúdočné epitelové bunky.

Na záver, naše dáta preukázala, že IL-32 expresie bola zvýšená u pacientov s H. pylori
infekcie a korelovala so závažnosťou žalúdočné zápalu. Regulácia IL-32 expresie v reakcii na H. pylori
infekcie závisí od rôznych vzájomne sa ovplyvňujúcich faktorov. Tieto údaje spoločne ukazujú, že IL-32 môže hrať dôležitú úlohu v patogenéze gastritídy spôsobenej H. pylori
infekciu.

Podporné informácie
Obrázok S1.
AGS bunky boli vrúbľovať do šiestich jamkami v hustote 1 x 10 ^{6 buniek /jamka a stimulovanej s 10 ng /ml Th17 cytokínov (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 cytokíny IL-4, Treg cytokín TGF-β1 a Th1 cytokínov IFN-γ po dobu 24 hodín, a bunky boli zbierané pre analýzu IL-32 mRNA a proteínovej expresie. Dáta sú priemer ± SEM z troch samostatných experimentov a bolo preukázané, jeden zástupca škvrna
doi :. 10.1371 /journal.pone.0088270.s001
(TIF)
Obrázok S2.
H. pylori
kmeň 26695 boli pestované na mozog-Heart Infusion doštičiek obsahujúcich 10% králičie krvi pri teplote 37 ° C za mikroaerofilní podmienok (5% O _{2, 10% CO 2, 85% N 2 ), a jeho isogenní ureáza podjednotka B-negatívne mutantný kmeň (UreB - kmeň) sa pripraví podobným spôsobom ako bolo opísané skôr [27]. Multiplicitě infekcie (MOI) 100 bol použitý pre infikovanie AGS a GES-1 buniek. Bunky boli zbierané pre analýzu expresie IL-32 mRNA. Dáta sú priemer ± SEM z troch oddelených pokusov. * P Hotel &0,05; ** P Hotel < 0,01; *** P Hotel < 0,001
doi :. 10,1371 /journal.pone.0088270.s002
(TIF)}}

• Ploche ONE: atrofickú gastritídou: S tým súvisí aj faktor pre osteoporózy u starších žien
• Ploche patogény: Caveolin-1 Chráni B6129 myší proti Helicobacter pylori gastritídou