Funkčné zmeny spojené s organogenézy gastrointestinálneho traktu počas metamorfózy v grónskeho (Hippoglossus Hippoglossus)

funkčné úpravy spojené s organogenézy gastrointestinálneho traktu počas metamorfózy v grónskeho (Hippoglossus hippoglossus
)
abstraktné
pozadia
platesotvaré premena je hormón regulovaný post-embryonálne vývojové udalosť, ktorá transformuje symetrický larva do asymetrického mladistvého. V altriciální žalúdočné teleost rýb, diferenciácia žalúdka prebieha po začiatku prvého kŕmenie, a počas metamorfózy dramatické molekulárnej a morfologické zmeny gastrointestinálneho (ohromných) traktu dochádza. Tu predstavujeme funkčné ontogenézy rozvojovom gastrointestinálneho traktu z integratívna perspektívu v pleuronectiforme platesy a testovať hypotézu, že viacnásobné funkcie teleost žalúdka rozvíjať synchrónne počas metamorfózy.
Výsledky
Nástup žalúdočné funkcie bola stanovená s niekoľkými prístupov (anatomické, biochemických, molekulárnych a in vivo
pozorovanie). In vivo
analýze pH v lumen gastrointestinálneho traktu v kombinácii s kvantitatívnej PCR (qPCR) alfa a beta podjednotky žalúdočné protónovej pumpy (H
+
/K
+ -ATPázu
) a pepsinogénu A2
naznačil, že žalúdočné proteolytický kapacita je stanovená pri vyvrcholení metamorfózy. Prepis hojnosť ghrelinu
domnelým orexigenic signálne molekuly produkované v rozvojovom žalúdku, korelovaná (p menšie ako 0,05) sa vznikom žalúdočného proteolytické aktivity, čo naznačuje, že úloha žalúdok v regulácii chuti prebieha súčasne so vznikom proteolytického funkcie , 3D modely rad vývoja v GI-trakte je uvedené funkčné pyloru zvierača pred prvým kŕmenia. Pozorovanie po jedle lariev in vivo
potvrdila, že funkcia žalúdka nádrž bola založená pred metamorfózou, a bol tak nezávislá na tejto udalosti. Mechanické rozpis potravín a dopravu tráveniny cez zažívací trakt sa pozorovala in vivo stroje a výsledkom fázovým a šíriacich sa kontrakcií boli zistené ešte pred premenou. Počet kontrakcií v midgut znížil na metamorfickým vyvrcholenie synchrónne so zriadením proteolytickým kapacity žalúdka a jej zvýšenej peristaltické aktivite. Domnelý osmoregulatory kompetencie gastrointestinálneho traktu, vyvodiť množstvo sodíka
+
/K
+ -ATPázu
α
prepisy, bola už stanovená na začiatku exogénne kŕmenie a bol nemodifikovanej o premenou.
závery
funkčné špecializáciu gastrointestinálneho traktu nebol exkluzívne k metamorfóze a jeho osmoregulatory kapacita a nádrž funkcie boli založené pred prvým kŕmenia. Avšak, kyselina výroba a proteolytické kapacita žalúdka sa zhodoval s metamorfných vyvrcholenie, a tiež označil nástup zapojenie žalúdka je v regulácii chuti do jedla cez ghrelinu.
Kľúčové
platesy žalúdočnej protónovej pumpy Tráviaci trakt ghrelinu Pohyblivosť Na + /K + - ATPázy pepsinogénu ontogenézy pH žalúdka pozadí
divergentná gastrointestinálneho traktu morfológia (ohromných) a kŕmenie stratégií medzi lariev a dospelých fázy sú úpravy zásadne líšia stanovište a zdroje potravín [1]. Post-embryonálny zrenie tráviaceho systému je kľúčovou udalosťou v histórii života stavovcov a nevyhnutné pre prežitie. Hormónu štítnej žľazy (TH) poháňaný premena hrá kľúčovú úlohu vo funkčnom dozrievania gastrointestinálneho traktu a pri formovaní morfológia do formulára pre dospelých [2, 3]. Remodelácie GI-traktu z larvy do dospelého bol skúmaný na Xenopus
[2, 4]. V tomto organizme, čreva je transformovaný pod vplyvom tis z dlhej trubky stočené do komplexného orgánu s diferencovaným žalúdka a tenkého čreva [5, 6]. To zahŕňa epiteliálne a mezenchýme proliferácie hladkého svalstva, zhrubnutie a vzniku črevných záhybov. Niekoľko štúdií opísalo bunkové mechanizmy zodpovedné za toto remodelácia u obojživelníkov [7, 8], ale málo je známe o ich vplyve na funkciu tkaniva u stavovcov, najmä viac funkcií integrovaných do brucha.
Rysom stavovcov metamorfózy je organogenézy žalúdka. V počiatočných fázach života rýb a anurans žalúdok je často chýba a časť jeho funkcia môže byť vykonaná v čreve. Hlavné úlohy stavovcov žalúdka sú skladovanie prehltnuté potravy, sekrécie kyseliny chlorovodíkovej (HCl) a pepsinogén, a mechanické poruchy a miešanie potravín s žalúdočných štiav [1, 9]. Teda v larvami altriciální žalúdočnej druhov, ako je napríklad platesy, absencia žalúdka obmedzuje schopnosť tráviť diétne proteín, keď je začaté exogénny podávanie [10-14]. To je jeden z dôvodov, prečo väčšina štúdií vývoja GI-traktu počas metamorfózy sa zamerali na vývoj žalúdka a považujú vzhľad žalúdočných žliaz ako adekvátnu ukazovateľ plne rozvinutého žalúdka [15, 16]. Avšak, je zrejmé, že histologický identifikácia žalúdočných žliaz neznamená, že žalúdok je plne funkčný. Z tohto dôvodu, proteolytické funkcie Žaludková najlepšie indikovaný aktivitu pepsínu [11, 17] a obsah pepsinogén
[18]. Pre lepšie pochopenie efektívnosti tráviaceho spracovanie rýb v priebehu ontogenézy, niekoľko štúdií v porovnaní profilov expresie pepsinogénu stroje a žalúdočné protónovej pumpy (H
+
/K
+
-ATPázu
), lokalizovaný v HCl, vylučujúcich oxynticopeptic buniek [19-22]. Murray et al. [23] používajú histológiu a pepsinogénu
analýzu transkriptov na štúdium ontogenézy žalúdka v platesy a ukázal, že vzhľad na 66 dní po vyliahnutí (DPH) žalúdočných žliaz predchádza expresiu pepsinogens A1 a A2

prepisy pri 80 DPH. Vplyv metamorfózy na ďalších dôležitých funkcií žalúdka alebo GI-traktu rozvoj všeobecne veľmi bola prehliadaná v platýza.
Okrem výroby kyseliny a proteolýze stavovec žalúdok má tiež nádržky funkcie. Po požití, žalúdka, obchody a predigests potraviny, potom prináša tráveniny do čreva, k ďalšiemu trávenie a následné vstrebávanie živín [9]. Funkcia ukladania žalúdka zmierňuje nedospelých a dospelých rýb z nutnosti neustále kŕmiť ako stomachless larválne štádiá. Zriadenie žalúdka ako rezervoáru vyžaduje funkčné zvieračov (pažeráka a vrátnika) a dobre vyvinuté nervovej a svalovej vrstvy hladké. Mechanické miešanie a transport potravín prostredníctvom gastrointestinálneho traktu sa dosiahne špecifickosť motility a zodpovedajúce peristaltiku s vydaním tráviacich enzýmov. Tento proces zohráva ústrednú úlohu v efektívne spracovanie potravín (pozri prehľad, [24]), aj keď len veľmi málo štúdií cielené GI traktu pohyby vo lariev hmyzu. Výhodou použitia larvy rýb, ako je napríklad platesy, je ich optická transparentnosť, ktorá sa udržiava až do premeny. To umožňuje priame vizuálne pozorovanie GI-traktu a jeho pohyblivosti vzory v živých zvieratách. Pittman a spol. [25] popísali peristaltické kontrakcie v Atlantic lariev halibuta, v prednej čreve pri 35 DPH. V juvenilná platesa gastrointestinálneho traktu ako anterograde (rozmnožovacom v análny smere) a retrográdna (rozmnožovacom v ústnej smere) boli popísané kontrakcie vlny [26], a identické vzory boli pozorované aj u embryí a lariev na stomachless Danio pruhované (Danio rerio
) [27].
žalúdok produkuje hormóny podieľať na regulácii chuti do jedla a trávenie. Ghrelin je príklad hormón, ktorý je produkovaný predovšetkým v žalúdku a pôsobí ako stimulátor príjmu potravy [28, 29]. U cicavcov, ghrelin Bolo tiež navrhnuté pre stimuláciu sekrécie žalúdočnej kyseliny a motilitu [30, 31]. Funkciou ghrelinu v lariev hmyzu je stále nedostatočne popísaná, ale to bolo navrhnuté ako indikátor zapojenia žalúdka je v regulácii chuti do jedla pri vývoji rýb [32]. V platesy, ghrelin
génovej expresie sa zvyšuje pri vyvrcholení metamorfózy, súčasne s rozvojom žalúdka [33]. Ghrelin je hojný v rozvojových žalúdočných žliaz a niekoľko osmoregulatory tkanív. Ďalej, jeho ko-expresiu s Na
+
/K
+ -ATPázu
naznačuje možný podiel v balneologických rovnováhe [34]. Zatiaľ, role ghrelinu v regulácii chuti do jedla, pohyblivosť a osmoregulace nie je známy, rovnako ako jeho väzba na proteolytické a zásobné funkciu žalúdka platesy počas metamorfózy.
Cieľom tejto štúdie je stanoviť vplyv agastric- žalúdočné prechod na funkčné úlohu remodelácie post-embryonálnom GI-traktu, ku ktorému dochádza počas metamorfózy v platesy, len platýz druhy vysokou obchodný význam pre severnej Európy a severnej Ameriky odvetvia akvakultúry. Zmapovať zmeny vo vývoji GI-traktu a vytvoriť udalosti spojené s TH-driven metamorfózy sme skonštruovali sériu 3D modelov morfologickú a priestorové usporiadanie tráviaceho ústrojenstva v reprezentatívnych vývojových štádiách. Testovali sme hypotézu, že vývoj rôznych funkcií žalúdka je synchrónne a je spojená s jeho fyzický vzhľad na premeny. Proteolytickou funkciou žalúdka bola študovaná za použitia in vivo
pH analýzy v kombinácii s profilmi expresie konkrétneho génu markerov H
+
/K
+ -ATPázu
α stroje a β podjednotky stroje a pepsinogénu A2
pomocou kvantitatívnej PCR (qPCR). Žalúdok náplň a funkcie nádrže boli hodnotené pomocou vizuálnych štúdií in vivo
transparentného lariev na prometamorphosis a vyvrcholenie metamorfózy. Predpokladaný Úloha plne funkčné žalúdka v regulácii chuti do jedla bola hodnotená meraním ghrelin
transkriptov hojnosti. Zriadenie GI-traktu motility vzorov v priebehu vývoja bola stanovená in vivo
pozorovanie a zapojenie gastrointestinálneho traktu v osmoregulation bola hodnotená meraním hojnosť Na
+
/K
+ -ATPázu
α
podjednotky prepisy.
Výsledky
3D rekonštrukcie tráviaceho ústrojenstva
3D modely morfológia tráviacej sústavy počas vývoja boli rekonštruované z radu histologické rezy. Umiestnenie a veľkosť GI-traktu, a príslušné orgány, ako sú pečeň, endokrinné a exokrinné pankreasu, a žlčníka, boli pozorované zo stupňa 3 (pred prvým kŕmenie) až do post-metamorfická fázy 10 (obrázok 1). Obrázok 1 ontogenézy z tráviaceho ústrojenstva v Atlantic lariev halibuta. 3D modely boli rekonštruované zo sériových histologických rezov s použitím softvéru Imaris. Tráviaceho ústrojenstva sú zobrazené z troch uhlov; vľavo, vpravo a chrbtovej strane. Šípky označujú
prednú časť (ústia). Orange
vonkajšia vrstva gastrointestinálneho traktu, červené
pečene, žlčníka, zeleným
fialovej
slinivky brušnej, ružová
Langerhansových ostrovčekov, žlté
žĺtku ulici. Transparentná farba sa používa na vonkajšie sekrécie pankreasu (fialová
) s cieľom preukázať Langerhansove ostrovčeky (ružová
) a žlčníka (zelená
).
Gastrointestinálneho traktu zahŕňa úzku foregut (pažerák a presumptive žalúdok /brucho), črevá a krátky tráviaci trakt (konečník) (obrázok 2). Predné oblasť čreva, tesne po pyloru zvierača (PS), bol väčší v priemere, tj. Objemnejšie, v porovnaní so zvyškom strednom čreve. Táto funkcia bola udržiavaná v priebehu ontogenézy GI-traktu (obrázky 1 a 2). Ako PS (ktorý oddeľuje pravdepodobnú žalúdok z predného čreva) a ileorectal zvierač (ktorá oddeľuje čreva a zadného čreva) bola zistená zo stupňa 3 a ďalších (obrázky 1 a 2). Pyloru slepého čreva sa ukázalo ako výstupky z najviac prednej časti čreva, na stupne 6 (obrázky 1 a 2). Žalúdok bol dobre diferencovaný v štádiu 10 a boli viditeľné na histologických rezoch (ďalší súbor 1) žalúdočné žľazy. Objem Luminale GI-traktu, zvýšené v priebehu vývoja, najmä v posledných dvoch fázach analyzovaných (etapy 9A a 10) (obrázok 3, tabuľka 1 a ďalší súbor 2). Objem žalúdka od 9A až 10 sa zvýšila z 415 na 4933 nl, v tomto poradí, a zodpovedal na 11 násobný prírastok (Tabuľka 1). Obrázok 2 ontogenézy podozrivé žalúdka (transparentná svetlo modrá) a lumen GI-traktu (modré) Atlantic lariev halibuta. 3D modely boli rekonštruované zo sériových histologických rezov s použitím softvéru Imaris. lumen GI-traktu je reprezentovaný vnútornou vrstvou (privrátenej k lumen) z gastrointestinálneho traktu. GI traktu je vidieť z troch uhlov; vľavo, vpravo, a chrbtová strana. Šípky označujú
prednú časť (ústia). Hlaviček šípok
prejdite na pozíciu zvieračov (červená: pyloric zvierača; čierna: ileorectal zvierač). ST
predpokladaný žalúdka /brucha, mg
čreva, hg
zadné tráviaci trakt.
Obrázok 3 Štandardizovaný Nárast objemu tráviaceho ústrojenstva medzi etape (S) 3 až 10 platesy. Nárast objemu je normalizované k celkovému priemeru zvýšenie hlasitosti medzi fázou pre každého tkaniva (bližšie vysvetlenie pozri ďalší súbor 2). Objem
Tabuľka 1 GI traktu varhany (nl) a povrch (10 6 um 2)
Fáza 3
Fáza 4
Fáza 5
etapa 6
Stage 9A
Stage 10

GI traktu vonkajšia vrstva (nl)
157,42
261,03
490,65
1038,48
2670,15
12855,10
GI traktu vonkajšia vrstva (106 μm2)
3,59 5,12
6,74
10,07
20,53
63,38
GI traktu vnútorná vrstva (NL)
78,40
136,84
266,55
525,89
1034,10
6451,16
GI traktu vnútorná vrstva (106 μm2)
2,83
4,73
9,60
16,34
50,45
54,76
tkanivo GI traktu volumea (nl)
79,02
124,19
224,10
512,59
1636,05
6403,94
pečene (NL)
35.24
48,82
98,18
225,23
928,25
4232,77
Pankreas (NL)
13,79
21,42
37,91
109,08
471,25
463,79
Langerhansových ostrovčekov (NL)
0,50 0,46
0,57
1,05
5,33
11,73
Predpokladaný žalúdok (NL)
15,51
27,29
32,06
84,09
414,54
4932,67
hodnoty boli vypočítané z 3D modelov s využitím Imaris MeasurementsPro
AGI traktu objem tkaniva = GI traktu vonkajšia vrstva - .. GI traktu vnútorná vrstva
pečeň bola umiestnená v rámci foregut a predné na vzostupnej slučke čreva, (obrázok 1) a jej objem neustále zvyšuje v priebehu vývoja (obrázok 3 a tabuľku 1). Exokrinné pankreas bol pozorovaný medzi podozrivé žalúdka a prednej časti čreva, v stupni 3 a je obklopený tejto oblasti čreva v priebehu ontogenézy (obrázok 1). V endokrinné pankreasu, jasne rozlíšiteľné Langerhansových ostrovčekov bola pozorovaná v blízkosti žlčníka v štádiu 3 (obrázok 1). Na rozdiel od ostatných tráviacich orgánov, prírastok v normalizovanej objeme endokrinné a exokrinné pankreasu bola nízka a záporná, medzi stupňami 9A a 10 (obrázok 3 a tabuľku 1). Žĺtkový váček-, ktorý je umiestnený pod GI-traktu, vo fáze 3, v zmenšenej veľkosti po začatí podávania exogénneho a malý pozostatok zostal mimo pečeň v stupni 4 (6 dní po prvej kŕmenie, dpff). Žlčníka bol pozorovaný na pravej strane medzi exokrinné pankreasu a pečeň, a udržiava túto pozíciu vo všetkých vývojových štádiách analyzovaných (obrázok 1). Pankreatického vývodu a žlčových ciest otvorený vedľa seba do dutiny na strednej rovine predného čreva, tesne po PS (dáta nie sú uvedené).
Klonovanie a charakterizáciu fylogeneticky pepsinogénu A2, ghrelin, žalúdočné protónovej pumpy podjednotky a na + /k + -ATPázu podjednotku α
kompletné kódujúce sekvencie (CDS) Atlantic halibut pepsinogén A2
bol 1128 bp a bol predložený na GenBank pod prístupovým žiadnu. KF184647 (Ďalší súbor 3: C). Aminokyselina (AA) sekvencie pepsinogénu je relatívne dobre konzervovaný medzi teleost rýb a, ako sa očakávalo, variabilnejšie v porovnaní s inými stavovcov pepsinogens. Napríklad, halibut pepsinogénu A2, respektíve zdieľa 88% a 64% AA sekvenčné identitu so zimnou platýz (Pseudopleuronectes americanus
) pepsinogénu formulári IIb a IIa, ale len 52% a 48% identitu s homológov z Xenopus laevis
a človek, respektíve (dáta nie sú uvedené).
cDNA fragmenty klonované za halibuta H
+
/k
+ -ATPázu
α podjednotky
( 911 bp) a na
+
/k
+ -ATPázu
α podjednotku
(714 bp) boli uložené v GenBank s číslami KF184648 a KF184650, respektíve (Ďalší súbor 3: B, D). CDS pre H
+
/K
+ -ATPázu
β podjednotku
o 874 bp bol klonovaný a predložený GenBank s pristúpením žiadnu. KF184649 (Ďalší súbor 3: A). Fylogeneticky analýza podjednotky žalúdočnej protónovej pumpy a Na + /K + - ATPázy, a stavovcov homológov (ďalší súbor 4) generované dve hlavné clades, jeden zodpovedajúce H + /K + - ATPázy a druhý na + /k + - ATPázy. Fylogeneticky analýza beta podjednotky (ďalší súbor 5) generovaný strom s dvoma hlavnými clades, ktoré zdieľali rovnakú všeobecnú topológiu ako phylotree pre podjednotky s H + /K + - ATPázy a Na + /K + - ATPázy zoskupený nezávisle
platesy H + /K +. - ATPázy α podjednotky zoskupený najtesnejšie s kostnatých homológy, s ktorým to rozdelilo 94% AA sekvenčné identitu, a zvýšil na 98% identitou so zimnou platesy malej a tresky (Gadus morhua
). Bolo zistené, nižšia AA sekvenčné identitu (72%), keď platesa H + /K + - ATPázy α podjednotky bola v porovnaní s platesy Na + /K + - ATPázy α podjednotky (70 %), a do iných stavovcov náprotivkami (72%). The Atlantic halibut Na + /K + - ATPázy podjednotky zoskupený s Antarktídy sliznáče (Pachycara brachycephalum
) homológov (98%) a zdieľané približne 88% AA identitu s ostatnými teleost génových homológov. H + /K + - ATPázy beta podjednotku zoskupený podľa očakávaní v rámci teleost kladiem (celkové identity asi 80%) a zdieľané pomerne nízku identitu s ľudským homolog (50%). Platesa H + /K + - ATPázy β podjednotka nezdieľal viac ako 39% AA sekvenčné identitu s platesy Na + /K + -. ATPázy β podjednotky
ontogenetický výrazom vzor a korelačný analýza
vývojových expresných profilov pepsinogénu A2
H
+
/K
+ -ATPázu
α
a β podjednotky online na
+
/k
+ -ATPázu
α podjednotky stroje a ghrelinu
boli analyzované qPCR v GI-trakte individuálneho Atlantického lariev halibuta (Obrázok 4). Gen expresie oboch žalúdočné podjednotiek protónovej pumpy významne (p menšie ako 0,05, upraví R 2: 0,773) v korelácii (obrázok 5) a paralelne v expresné vzorce, s ostrým a významný (p menšie ako 0,05) zvýšenie pri Climax a vo fázach post-metamorfované (obrázok 4). Pepsinogén A2
bolo významne (p menšie ako 0,05) v korelácii s profilom expresie žalúdočných alfa protónovej pumpy (upravené R 2: 0.9738) a beta (upravená R 2: 0,7963) podjednotiek (obrázok 5 ). Významné (p menšie ako 0,05) zvýšenie v priebehu stupňa 8 bol pozorovaný pepsinogén A2 stroje a jeho expresie dosiahla najvyššie hodnoty vo fáze post-metamorfných. Ghrelin
mRNA transkript množstvo postupne a výrazne zvýšil (p menšie ako 0,05) v priebehu proclimax /vyvrcholenie metamorfózy, a dosiahla maxima v etape po metamorfózy (Obrázok 4). Okrem toho, ghrelin prepis početnosť a proteolytické aktivita v priebehu ontogenézy GI-traktu bol významne korelovali (p menšie ako 0,05, upraví R 2: 0,9342, 0,8852, 0,9252 pre pepsinogénu A2, žalúdočných alfa protónovej pumpy a beta podjednotky, v uvedenom poradí; viď obrázok 5). Expresia Na
+
/K
+ -ATPázu
α podjednotky
mRNA bola detekovaná vo všetkých vývojových fázach, pričom štatisticky významne (P 0,05) viac prepisy v prvom stupni 5. Obrázok 4 Stredná normalizovanej expresné vzory označených mRNA transkriptov jednotlivých lariev (stupeň 5-10). Výsledky pre pepsinogénu A2
prekurzor, žalúdočné H +
/K +
-ATPázu podjednotky alfa stroje a beta
, Na
+
/K
+ -ATPázu
podjednotku α stroje a ghrelin
mRNA transkripty sú uvedené ako stredná hodnota ± SEM normalizovaného výrazu (za použitia génu eEF1A1 referenčnej). Priemernej hodnoty s rôznymi písmenami sú významne odlišné (Jednosmerný ANOVA, p menšie ako 0,05).
Obrázok 5 lineárna regresia z odhadovaných korelačný analýzy medzi žalúdočné špecifických génových markerov počas halibuta svetlého ontogenézy. Lineárne regresné modely boli osadené na log-transformovanej priemernej expresné hodnoty (MNE) z A) žalúdočnej H +
/K
+ -ATPázu
α podjednotku stroje a β podjednotky
; B) pepsinogénu A2 stroje a H +
/K
+ -ATPázu
β podjednotku
(čierne štvorčeky a plná čiara), rovnako ako H +
/K +
-ATPázu α podjednotku
(šedé bodky a prerušovaná čiara); C) ghrelin stroje a H +
/K
+ -ATPázu
β podjednotku
(čierne štvorčeky a plná čiara), H
+
/K
+ -ATPázu
α podjednotka
(šedé bodky a prerušovaná čiara), rovnako ako pepsinogén A2
(svetlosivá trojuholníky a prerušovaná čiara). Všetky korelácie sú významné (p menšie ako 0,05). Stredná log-transformovanej z MNE na stupeň (5 až 10) odfotil zo šiestich jedincov.
Odhad pH v lumen žalúdka a detekciu výroby kyseliny
Posúdenie pH v lumen žalúdka a čreva /tráviaci trakt počas post-embryonálneho vývoja bola založená na farbe pozorované po injekcii riešení indikátora pH (obrázok 6 a tabuľka 2). Hodnota pH v strednom čreve /hindgut zostala alkalické (pH vyššom ako 8), vo všetkých vývojových štádiách analyzovaných (stupeň 5 až 9B). Pravdepodobná žalúdok tiež mala alkalické pH s hodnotami nad 7,5 až stupeň 8. Postupné okysľovania bola pozorovaná v stupňoch, ktoré zodpovedajú vrcholu metamorfózy. Prechod z alkalické do kyslé pH v žalúdku lumen bol zjavný v prvom stupni 9A, keď je injekčne sol
CPR zostal fialovej, ale sol
MCP sa získa žlté sfarbenie (pH 6,5 - 7,5). Lumen žalúdka je jednoznačne v kyslom (pH nižšie, 3,5) v prvom stupni 9B, ako sa zistilo pomocou žltej farby v žalúdku po podaní ako KPR a riešenie BPB. Obrázok 6 zmeny pH v GI-trakte Atlantiku lariev halibuta v priebehu vývoja. Panel A: Výsledky plniacej trubici riešenie pH indikátor do larvy z premetamorphosis (štádium 5) k vyvrcholeniu metamorfózy (štádium 9A a 9B). pH sol
MCP obsahoval 0,1% metakrezol fialová, sol
CPR pozostávala z 0,1% Chlorphenol Red a pH solu
BPB mal 1% brómfenolovej modrí. st: žalúdok /predpokladaný žalúdka; mg: midgut; hg: tráviaci trakt. Mierka = 0,5 mm. Panel B: Normy ponorený do vody a fotografoval s podobnou svetelných podmienok ako larvy pod mikroskopu
Tabuľka 2 zmeny pH v GI-trakte Atlantiku lariev halibuta v rôznych vývojových štádiách
Stage
. žalúdok
midgut /hindgut
5 Hotel > 7,5 Hotel > 8,0
6 Hotel > 7,5 Hotel > 8,0
7
> 7,5 Hotel > 8,0
8 Hotel > 7,5 Hotel > 8,0
9A
6,5 - 7,5 Hotel > 8,0
9B
< 3,5 Hotel > 6,5
uvedených hodnotách pH je založená na vizuálnom pozorovaní farebných zmien po podaní roztokov indikačných tri pH
Analýza motility GI-traktu bol pozorovaný
Spontánny kontrakcie rozmnožovacie. v GI-trakte, vo prometamorphosis (stupňa 6; 25 dpff) a vrcholom metamorfózy (štádium 9A /B, 49 dpff) (Obrázok 7). Vzhľadom na značnú odchýlkou, počet a frekvencia kontrakcií nemôže byť zoskupené a sú uvedené pre každú jednotlivú analyzované (tabuľka 3 a ďalší súbor 6). Dva typy kontrakcií boli pozorované v strednom čreve oblasť 1 (MG1, po PS, klesajúca časť slučky) a 2 (MG2): fázovým a šírenie vlny (ďalší súbor 7). V šíriaci kontrakcie pozorované v Mg2 boli retrográdna vlny, ktoré vznikli v oblasti "A
" a pohyboval smerom k ústiu. Avšak, v MG1 väčšina z šíriacich sa kontrakcií vznikol tesne pod PS a boli anterograde vlny, ktoré sa pohybovali v análnom smere. Pohyblivosť bola zistená aktivita v oboch oblastiach čreva v stupni 6, s frekvenciou v rozmedzí od 0,31 do 3,77 min -1, v závislosti na jedincovi a type kontrakcie. V kroku 9, pomerne málo spontánny kontrakcie krátku dobu boli pozorované v strednom čreve. Pri vrchole metamorfózy, kontrakcie v žalúdku boli zaznamenané u všetkých jedincov, na rozdiel od stupňa 6, keď pohyblivosť pri predpokladanej žalúdka bol pozorovaný len v jednom larva. Rektálna kontrakcie (alebo defekácie reflex) bola zmes retro- a anterográdnu kontrakcií a boli pozorované v oboch stupňoch 6 a 9 s podobnými frekvenciami vo väčšine jedincov analyzované. Obrázok 7 pohyblivosť GI traktu v Atlantic lariev halibuta vo fáze 6 a 9. retrográdna a anterográdnu pohyby vĺn (šíriacich sa kontrakcií) sú označené prerušovanou čiarou. Tieto vlny sa vyskytujú z časti A do B; az pyloric zvierača (reprezentovaná dvoma červenými šípkami *) do oblasti B a naopak
. A a B predstavujú hlavné oblasti, v ktorých sa vyskytujú fázovým kontrakcie. st: žalúdok /predpokladaný žalúdka; MG1: midgut región 1; Mg 2: midgut región 2; hg: tráviaci trakt; r: rektálna oblasti. Mierka = 1 mm
Tabuľka 3 GI-traktu motility vzory. - Kvantifikácia
Žalúdok
midgut 1x
midgut 2
hindgut

oblasti konečníka
Sadbový
fázovým
Sadbový
fázovým
Larva
n
frekvencie (min-1)
n
frekvencie (min-1)
n
frekvencie (min-1 )
n
frekvencie (min-1)
n
frekvencie (min-1)
n

frekvencie (min-1)
n
frekvencie (min-1)
Fáza 6
1
-
-
14
2.31
50
1.69
57
1.84
79
3.54
13
1.46
161
5.24
2
-
-
26
1.81
-
-
95
3.77
12
0.44
15
0.54
3
0.22
3
17
0.56
5
0.31
4
0.24
28
1.66
77
3.01
-
-
96
3.22
4*
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
43
2.25
25
1.69
fáza 9
1
11
2.37
-
-
-
-
-
-
-
-
1
-
11
1.44
2
10
0.90
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
11
0.41
3
4
0.44
-
-
-
-
9
3.83
-
-
-
-
13
0.46
4
4
0.56
-
-
3
1.13
-
-
-
-
12
1.12
24
0.81
Rozmnožovacie a fázovým sťahy sú uvedené pre regióny midgut 1 a 2 čreva. Frekvencia je počet sťahov registrovaných (n) za minútu.
* Nie je možné vyčísliť fázovým a rozmnožovacie vlna kontrakcie. Dotknuté GI traktu segmenty boli neustále (tonic) zmluvne počas celého sledovaného obdobia (pozri ďalší súbor 7).
Diskusia
Vo všetkých altriciální žalúdočné druhu, GI traktu podrobil dramatické prestavby počas TH-poháňaného metamorfózy , Zmeny sú GI-traktu z jednoduchého tvaru rúrky do zložitejšieho zložené štruktúry. V rovnakom čase v žalúdku sa stáva zreteľným priestor a pokračuje nadobudnúť viac funkcií prostredníctvom premenou. Existuje prekvapivo málo štúdie skúmajúce a integrujú anatomické a funkčné zmeny v GI-trakte spojené s týmto TH-riadený akcie. V obojživelníkov, napríklad Xenopus
, je dobre známe, že indukujú THs GI trakt remodeláciu čo vedie k skráteniu črevnej a rozvoja krýpt a klkov [35-37]. [25].

• Vzťah medzi H. pylori infekcie a klinicko-funkcií a prognózu rakoviny žalúdka
• Korelácia medzi HER-2 /neu (ErbB-2), hladina expresie a terapeutický účinok kombinovanej liečby Herceptinom a chemoterapeutických činidiel v nádorových bunkových línií žalúdočných