Funktionell Verännerungen, verbonne mat gastrointestinal TRACT organogenesis während metamorphosis am Atlantik halibut (Hippoglossus hippoglossus)

Funktionell Verännerungen, verbonne mat gastrointestinal TRACT organogenesis während metamorphosis am Atlantik halibut (Hippoglossus hippoglossus VerfÜgung) VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Flatfish metamorphosis ass en Hormon reegelen Post-embryonal Entwécklungsphase event datt eng vun de grousse Madeleine an eng asymmetric jonk transforméiert . An altricial-gastric teleost Fësch, dat vun de Mo. Plaz no der gezu vun éischt erofzesetzen hëlt, a während metamorphosis dramatesch molekulare an morphological Modifikatioune vun der gastrointestinal (GI-) TRACT geschéien. Hei presentéieren mir déi funktionell ontogeny vun den Entwécklungslänner gi-TRACT aus engem integrative Perspektiv vun der pleuronectiforme Atlantik halibut, a Test d'Hypothes, datt déi verschidde Funktiounen vun der teleost Mo. entwéckelen synchronously während metamorphosis. VerfÜgung Resultater VerfÜgung gezu vun gastric Funktioun war mat e puer Approche (Präparaten, biochemical, molekulare an VIVO VerfÜgung Observatioune) alles. An VIVO VerfÜgung pH Analyse am gi-TRACT lumen kombinéiert mat grouss Hinnen alleguer (qPCR) vun α an β subunits vun der gastric Proton Pompel (H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase VerfÜgung) an pepsinogen A2 VerfÜgung uginn dass gastric proteolytic Muecht an den Héichpunkt vun metamorphosis etabléiert ass. Ët Heefegkeet vun ghrelin VerfÜgung, engem putative orexigenic sécher Protein an den Entwécklungslänner Mo. produzéiert, soll (p &Si besteet; 0,05) mat der Entstehung vun gastric proteolytic Aktivitéit, suggeréiert, dass d'Roll vun de Mo. zu Hausaufgabe Regulatioun existeiert zäitgläich mat der Grënnung vun proteolytic Funktioun . A 3D Modeller Serie vun der gi-TRACT Entwécklung uginn engem funktionell pyloric sphincter virum éischte erofzesetzen. Observatioune vun z'iesse Larven an VIVO VerfÜgung confirméiert datt Mo. pompelt Funktioun virun metamorphosis gegrënnt gouf, a war also onofhängeg vun dëser Manifestatioun. Mechanesch Ënnerdeelunge vun Liewensmëttel an Transport vun chyme duerch d'gi-TRACT war zu VIVO VerfÜgung an Schoss aus phasic an propagating contractions etabléierten gutt virun metamorphosis observéiert. D'Zuel vun contractions am midgut ofgeholl um metamorphic ukomm synchronously mat Opstelle vum proteolytic Muecht a seng fräi peristaltic Aktivitéit de Moo. Putative osmoregulatory Kompetenz vun der gi-TRACT, opgrond vun Heefegkeet vun Na VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α VerfÜgung gët, war schonn op der gezu etabléierten vun exogenous Blummen- a war onverännert vun metamorphosis. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung déi funktionell Spezialiséierung vun de gi-TRACT war net exklusiv zu metamorphosis, a seng osmoregulatory Muecht a pompelt Funktioun huet ier éischt erofzesetzen etabléiert. Trotzdeem, coincided Seier Produktioun an der proteolytic Kapazitéite vun de Mo mat metamorphic ukomm, a markéiert och d'gezu vun der Bedeelegung vun de Mo. zu Hausaufgabe Regulatioun via ghrelin. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Atlantik halibut Gastric Proton Pompel Gastrointestinal TRACT Ghrelin Motility Na + /K + - ATPase Pepsinogen Ontogeny pH Mo. Background VerfÜgung Den Duden gastrointestinal (GI-) TRACT Wirklechkeet an erofzesetzen Strategien tëscht verschiddene liewenswichteg a Liewensmëttel Ressourcen Adaptatiounen larval an erwuessener Phasen grondsätzlech [1]. D'Post-embryonal maturation vun der digestive System ass e Schlëssel Event am Liewen Geschicht vun vertebrates an essentiel fir Iwwerliewensfro. Schild Hormon (TH) gefuerene metamorphosis spillt eng wichteg Roll an der funktionell maturation vun der gi-TRACT an zu hir Wirklechkeet un déi Erwuesse Form formen [2, 3]. Remodelling vun der gi-TRACT vum Madeleine fir erwuesse gouf zu Xenopus VerfÜgung extensiv studéiert [2, 4]. An dëser Gebeitechnik, ass den Daarm ënner dem Afloss vun THs aus engem laange coiled Rouer an engem Komplex Uergel mat engem aneren ënnerscheet Mo a kleng Daarm transforméiert [5, 6]. Heibäi handelt epithelial an mesenchymal Prolifératioun, glat Muskel thickening an der Opstellung vu intestinal klappt. Puer Studien hunn der bewosst Mechanismen responsabel fir dës Remodeling an Amphibien beschriwwen [7, 8], ass nach wéineg iwwert hiren Impakt op Otemschwieregkeeten Funktioun vun vertebrates bekannt, besonnesch déi verschidde Funktiounen am Mo. integréiert. Eng markant Fonktioun vun Wierbeldéieren metamorphosis VerfÜgung ass de organogenesis vun de Moo. Am Ufank Entwécklungsstand vum Fësch a anurans ass de Mo. dacks feelen an en Deel vun hirer Funktioun vum Daarm kann duerchgefouert ginn. Den Haaptgrond Rollen vun de Wierbeldéieren Mo si Stockage vun ingested Liewensmëttel, secretion vun Salz- Seier (HCl) an pepsinogen, an mechanech Decompte an Vermëschung vu Liewensmëttel mat gastric secretions [1, 9]. Sou, an Larve vun altricial-gastric Aarten, wéi den Atlantik halibut, d'Feele vun enger Mo Limite d'Fähegkeet Nahrungszousaz FAQ fir erbléckt wann exogenous erofzesetzen Ausgangspunkt ass [10-14]. Dëst ass ee vun de Grënn, firwat déi Etuden vun gi-TRACT Entwécklung während metamorphosis op Mo. Entwécklung do hunn an d'Opkommen vun gastric Glands wéi en adequate Luucht vun engem voll entwéckelt Mo [15, 16] betruecht. Mä, huet et méi kloer, dass de histological Identifikatioun vun gastric Glands weg net, datt de Mo voll funktionell ass. Dofir, ass de Mo. d'proteolytic Funktioun beschte vun pepsin Aktivitéit uginn [11, 17] an pepsinogen VerfÜgung Inhalt [18]. Fir besser d'Effizienz vun digestive Veraarbechtung verstoen während Fësch ontogeny, e puer Studien Verglach Ausdrock Profiler vun pepsinogen VerfÜgung an der gastric Proton Pompel (H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung +
-ATPase VerfÜgung), an der HCl secreting oxynticopeptic Zellen en der [19-22]. Murray et al. [23] hu Histologie an pepsinogen VerfÜgung ët Analyse benotzt der ontogeny vun de Mo am Atlantik halibut ze studéieren an ze weisen dass de Optrëtt um 66 Deeg Post-hatching (dph) vun gastric Glands vrun Ausdrock vun pepsinogens A1 VerfÜgung an A2 VerfÜgung gët bei 80 dph. Allerdéngs huet den Impakt vun metamorphosis op aner wichteg Fonctioun vun de Mo. oder gi-TRACT Entwécklung am allgemengen Stil vun flatfish präsentéieren ginn. VerfÜgung Nieft Seier Produktioun an proteolysis de Wierbeldéieren Mo och pompelt Funktiounen huet. No Nossallergie, liwwert de Mo. Geschäfter an predigests Iessen, dann d'chyme zu der midgut fir weider unzereegen an nächster Nährwert Tellur [9]. De Stockage Funktioun vun de Mo. verdriwwen jonk an erwuessener Fësch aus der Nout ze permanent wéi d'stomachless larval Etappen fidderen. Grënnung vun de Mo wéi enger pompelt verlaangt funktionell sphincters (esophagus an pylorus) a gutt entwéckelt Mä a glat Muskel Schichten. Déi mechanesch Vermëschung an Transport vu Liewensmëttel duerch d'gi-TRACT ass déi spezifësch motility Musteren erreecht a vun peristalsis mat der Verëffentlechung vun digestive Enzymen bruecht. Dëse Prozess spillt eng zentral Roll am effikass Agrarliewensmëttelindustrie (kuckt review, [24]), obwuel ganz puer Studien hunn gi-TRACT Bewegungen an Fësch Larven cibléiert. De Virdeel vun benotzt Fësch Larven, wéi Atlantik halibut, ass hir OPTIC Transparenz datt bis metamorphosis haten ass. Dëst erméiglecht direkt visuell Observatioun vun der gi-TRACT a seng motility Musteren an liewen Déieren. Pittman et al. [25] gemellt peristaltic contractions am Atlantik halibut Larven an der anterior Daarm um 35 dph. An jonk Atlantik halibut gi-TRACT souwuel anterograde (propagating am firwat Richtung) an wuël (am Elysée Richtung propagating) Kontraktioun Wellen sech beschriwwen [26], an identesch Musteren sech och an embryonal an Larve vun der stomachless zebrafish (Danio rerio observéiert VerfÜgung) [27]. VerfÜgung de Mo liicht souwuel an der Regulatioun vun Hausaufgabe an unzereegen Équipe entsteet. Ghrelin ass e Beispill vun enger Hormon dat haaptsächlech am Mo. produzéiert gëtt an Akten als stimulator vun Haaptmoolzecht [28, 29]. An Mamendéieren, huet ghrelin och gastric Seier secretion an motility ze stimuléieren [30, 31] ugeholl gouf. D'Funktioun vun ghrelin zu Fësch Larven ass nach schlecht beschriwwen, mee et as eng Luucht vun der Mo. d'Bedeelegung vun Hausaufgabe Reglement gouf an den Entwécklungslänner Fësch [32] proposéiert. Am Atlantik halibut, ghrelin VerfÜgung Gentherapie Ausdrock Erhéijunge während der Héichpunkt vun metamorphosis, Wale mat Mo. Entwécklung [33]. Ghrelin ass räich an den Entwécklungslänner gastric Glands an e puer osmoregulatory Stoffer. Ausserdeem, seng Co-Ausdrock mat Na VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase VerfÜgung mobiliséiert engem putative Roll an hydromineral Gläichgewiicht [34]. Nach, d'Roll vun ghrelin zu Hausaufgabe Regulatioun, motility an osmoregulation ass onbekannt, souwéi sengem Link zu der proteolytic a pompelt Funktioun vun de Mo am Atlantik halibut während metamorphosis. VerfÜgung Dës Etude Ziel den Impakt vun der agastric- ze etabléieren gastric Iwwergank op der funktionell Roll vun der Post-embryonal gi-TRACT Remodeling dass während metamorphosis am Atlantik halibut, engem flatfish Arten vun héich kommerziellen Interessi fir d'Northern europäesch an North American aquaculture Industrie existeiert. Fir d'Ännerungen am gi-TRACT Entwécklung Plang a Bosnien Evenementer verbonne TH-Undriff metamorphosis gebaut mir eng Serie vun 3D Modeller vun der morphological a raimlech Organisatioun vun der digestive Uergelen zu Vertrieder Entwécklungsstand. Mir getest der Hypothes, datt d'Entwécklung vun der Pluralitéit Mo. Funktiounen ass Synchron- an um metamorphosis fir seng kierperlecht Ausgesin verbonnen. D'proteolytic Funktioun vun de Mo studéiert war mat an VIVO VerfÜgung pH Analysë mat Ausdrock Profiler vun der spezifesch Gentherapie lues H kombinéiert VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α VerfÜgung an β subunit VerfÜgung an pepsinogen A2 VerfÜgung benotzt grouss Hinnen alleguer (qPCR). Mo. llt an pompelt Funktioun sech duerch zu VIVO VerfÜgung visuellen Studie vun der transparent Larven um prometamorphosis an Héichpunkt vun metamorphosis évaluéieren. D'putative Roll vun engem voll funktionell Mo vun Hausaufgabe Regulatioun gouf duerch Miessunge ghrelin VerfÜgung ët Iwwerfloss évaluéieren. D'Opstelle vun gi-TRACT motility Musteren während Entwécklung alles war duerch an VIVO VerfÜgung Observatiounen an d'Bedeelegung vun der gi-TRACT zu osmoregulation gouf duerch Miessunge vun der Heefegkeet vu Na évaluéieren VerfÜgung + VerfÜgung /K
+ VerfÜgung -ATPase α VerfÜgung subunit gët. VerfÜgung Resultater VerfÜgung 3D Rekonstruktioun vun digestive Organer VerfÜgung 3D Modeller vun der Wirklechkeet vun der digestive System während Entwécklung vun enger Serie opgebaut goufen vun histological Sektiounen. Lag a Gréisst vun der gi-TRACT an hir jeeweileg Organer, wéi Liewer, endocrine an exocrine Bauchspaicheldrüs, an gallbladder, sech vun der Bühn 3 (virun éischt erofzesetzen) observéiert bis d'Post-metamorphic Etapp 10 (Dorënner 1). Figur 1 Ontogeny vun der digestive Uergelen zu Atlantik halibut Larven. Hëllef Imaris Software 3D Modeller goufen aus Serien histological Rubriken rekonstruéiert. D'digestive Uergel aus dräi Engelen gewisen; lénks, riets an däischtere Säit. Feiler VerfÜgung der anterior Richtung unzeginn (Mond). Orange VerfÜgung baussenzege futti vun gi-TRACT, rout VerfÜgung Liewer, gréng VerfÜgung gallbladder, mauve VerfÜgung Bauchspaicheldrüs, rosa VerfÜgung islet vun Langerhans, giel VerfÜgung Eegiel-Referendum um nationale. Duerchsichteg Faarf ass fir exocrine Bauchspaicheldrüs (violett VerfÜgung) zu Bestellung benotzt Schëff vun Langerhans (rosa VerfÜgung) an gallbladder (gréng VerfÜgung) ze weisen. VerfÜgung Déi gi-TRACT ëmfaasst eng schmuel foregut (esophagus a kritt Mo. /Mo), midgut, an engem kuerzen hindgut (rectum) (Dorënner 2). D'anterior Regioun vun der midgut, just no der pyloric sphincter (PS), war zu Duerchmiesser grouss, i.e. méi voluminous, am Verglach zu de Rescht vun der midgut. Dës Fonktioun war während gi-TRACT ontogeny (Rockhal 1 an 2) haten. Béid PS (deen der kritt Mo aus der anterior midgut trennt) an ileorectal sphincter (déi midgut an hindgut trennt) sech aus Etapp identifizéiert 3 un (Rockhal 1 an 2). Pyloric caeca gouf evident wéi erméiglechen vun de meeschte anterior Deel vun der midgut um Etapp 6 (Rockhal 1 an 2). De Mo war gutt-ënnerscheet 10 at Etapp an der gastric Glands sech siichtbar op histological Rubriken (Zousätzleche Fichier 1). D'luminal Volume vum gi-TRACT während Entwécklung fräi, besonnesch vun den zwou leschten Etappen analyséiert (Etappen 9A an 10) (Well 3, Table 1 an Weider Fichier 2). De Mo Volumen aus 9A zu 10 fräi vun 415 bis 4933 nl, respektiv a gehéiert zu engem 11 fantastesch increment (Table 1). Figur 2 Ontogeny vun kritt Mo. (transparent Liicht blo) an gi-TRACT lumen (blo) am Atlantik halibut Larven. Hëllef Imaris Software 3D Modeller goufen aus Serien histological Rubriken rekonstruéiert. Gi-TRACT lumen ass vun der zentrale Layer (denen lumen) vun der gi-TRACT vertrueden. Déi gi-TRACT ass aus dräi Engelen gesinn; lénks, riets, an däischtere Säit. Feiler VerfÜgung der anterior Richtung unzeginn (Mond). Pfeil Kapp VerfÜgung Punkt ze Positioun vun sphincters (rout: pyloric sphincter; schwaarz: ileorectal sphincter). St VerfÜgung kritt Mo /Mo, mg VerfÜgung midgut, hg VerfÜgung hindgut. VerfÜgung 3 standardiséierte Volumen Erhéijung vun digestive Organer tëscht Etapp Dorënner (S) 3 bis 10 vum Atlantik halibut. De Volume Erhéijung war normalized de globale heeschen vun Volumen Erhéijung tëscht Etappen fir all Otemschwieregkeeten (fir detailléiert Erklärung, gesinn Weider Fichier 2). VerfÜgung Table 1 gi-TRACT Uergel Volumen (NL) an Fläch (10 6 μm 2)
Etapp 3
Etapp 4
Etapp 5
Etapp 6
Etapp 9A
Etapp 10
VerfÜgung gi-TRACT baussenzege Layer (NL) VerfÜgung 157,42 VerfÜgung 261,03 VerfÜgung 490,65 VerfÜgung 1038,48 VerfÜgung 2670,15 VerfÜgung 12855,10 VerfÜgung gi-TRACT baussenzege Layer (106 μm2)
3,59 VerfÜgung 5,12 VerfÜgung 6,74 VerfÜgung 10,07 VerfÜgung 20,53 VerfÜgung 63,38 VerfÜgung gi-TRACT zentrale Layer (NL) VerfÜgung 78,40 VerfÜgung 136,84 VerfÜgung 266,55 VerfÜgung 525,89
1034,10 VerfÜgung 6451,16 VerfÜgung gi-TRACT zentrale Layer (106 μm2) VerfÜgung 2,83 VerfÜgung 4,73 VerfÜgung 9,60 VerfÜgung 16,34 VerfÜgung 50,45 VerfÜgung 54,76 VerfÜgung gi-TRACT Otemschwieregkeeten volumea (NL) VerfÜgung 79,02 VerfÜgung 124,19 VerfÜgung 224,10 VerfÜgung 512,59 VerfÜgung 1636,05 VerfÜgung 6403,94 VerfÜgung Liewer (NL) VerfÜgung 35,24 VerfÜgung 48,82 VerfÜgung 98,18 VerfÜgung 225,23 VerfÜgung 928,25 VerfÜgung 4232,77 VerfÜgung Lëtzebuergesch (NL) VerfÜgung 13,79 VerfÜgung 21,42 VerfÜgung 37,91 VerfÜgung 109,08 VerfÜgung 471,25 VerfÜgung 463,79 VerfÜgung Schëff vun Langerhans (NL)
0,50 VerfÜgung 0,46 VerfÜgung 0,57 VerfÜgung 1.05 VerfÜgung 5,33 VerfÜgung 11,73 VerfÜgung kritt Mo. (NL) VerfÜgung 15,51 VerfÜgung 27,29 VerfÜgung 32,06 VerfÜgung 84,09 VerfÜgung 414,54 VerfÜgung 4932,67 VerfÜgung d'Wäerter sech aus dem 3D Modeller benotzt Imaris MeasurementsPro berechent VerfÜgung aGI-TRACT Otemschwieregkeeten Volumen = gi-TRACT baussenzege Layer -.. gi-TRACT zentrale futti d'Liewer VerfÜgung war ënner de Miessstatiounen foregut an anterior zu der eropklamme Glück vun der midgut (dorënner 1) a sengem Volumen während Entwécklung (dorënner 3 an Table 1) stänneg fräi. D'exocrine Bauchspaicheldrüs war tëscht dem kritt Mo an der anterior Deel vun der midgut um Etapp 3 an ass ëmgi dëser midgut Géigend uechter ontogeny (Dorënner 1) observéiert. An der endocrine Bauchspaicheldrüs, war eng kloer distinguishable islet vun Langerhans observéiert no der gallbladder um Etapp 3 (Dorënner 1). Am Géigesaz zu den aneren digestive Organer, war d'increment am normalized Volume vun endocrine an exocrine Bauchspaicheldrüs héich an negativ, respektiv, tëscht Etappen 9A an 10 (Dorënner 3 an Table 1). D'Eegiel-Referendum um nationale, hir ënner gi-TRACT um Etapp 3, ofgeholl Gréisst no der Initiatioun vun exogenous erofzesetzen an engem klenge vestige blouf niewt der Liewer um Etapp 4 (6 Deeg éischt erofzesetzen Post, dpff). D'gallbladder war op der rietser Säit tëscht exocrine Bauchspaicheldrüs an der Liewer observéiert, an haten dës Positioun zu all Entwécklungsstand analyséiert (Dorënner 1). D'pancreatic duct an der Bile duct nieft all aner an der lumen um Steiren Fliger vun der anterior midgut opgemaach, just no der PS (Donnéeën net gewisen). VerfÜgung Biologie an phylogenetic characterization vun pepsinogen A2, ghrelin, gastric Proton Pompel subunits an Na + /K + -ATPase subunit α VerfÜgung Déi komplett coding Haaptrei (Disken) vun halibut pepsinogen A2 VerfÜgung Atlantik gouf 1128 BP a war bis GenBank ënner Bäitrëtt kee proposéiert. KF184647 (Zousätzleche Fichier 3: C). D'Aminosaier (AA) Haaptrei vun pepsinogen ass relativ gutt-conserved ënnert teleost Fësch an, wéi erwaart, méi dicht wéini aner Wierbeldéieren pepsinogens Verglach. Zum Beispill, halibut pepsinogen A2 gedeelt respektiv 88% an 64% AA Haaptrei Identitéit mam Wanter hun Bekannter (Pseudopleuronectes americanus VerfÜgung) pepsinogen A Form IIb an IIa, awer nëmmen 52% an 48% Identitéit mat homologues aus Xenopus laevis VerfÜgung an Mënsch, bzw. (Donnéeën net gewisen). VerfÜgung D'cDNA Fragmenter vum Atlantik halibut H gekloonten VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α subunit VerfÜgung ( 911 BP) an Na VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α subunit VerfÜgung (714 BP) huet an GenBank mat dem Bäitrëtt Zuelen KF184648 an KF184650 Substanzen, bzw. (Zousätzleche Fichier 3: B, D). D'Disken fir H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase β subunit VerfÜgung vun 874 BP huet kee mat de Bäitrëtt zu GenBank gekloonten a proposéiert. KF184649 (Zousätzleche Fichier 3: A). Phylogenetic Analyse vun der α subunit vun der gastric Proton Pompel an Na + /K + - ATPase, an Wierbeldéieren homologues (Zousätzleche Fichier 4) entsteet zwee gréisser clades, een entspriechende H + /K + - ATPase an der aner ze Na + /K + - ATPase. Phylogenetic Analyse vun de β subunit (Zousätzleche Fichier 5) entsteet e Bam mat zwéi grousse clades datt d'selwecht allgemeng topology wéi d'phylotree fir d'α subunit mat der H + /K gedeelt + - ATPase an Na + /K + - ATPase Strooss onofhängeg VerfÜgung Atlantik halibut H + /K + -. ATPase α subunit stäerkste enk mat teleost homologues Strooss, mat deem hien 94% AA Haaptrei Identitéit gedeelt, a fräi zu 98% Identitéit mam Wanter hun Bekannter a Atlantik Bacalhau (Gadus morhua VerfÜgung). Ënneschten AA Haaptrei Identitéit (72%) war fonnt wou Atlantik halibut H + /K + - ATPase α subunit zu Atlantik halibut Na Verglach war + /K + - ATPase α subunit (70. %) an zu aner Wierbeldéieren garantéieren (72%). D'Atlantik halibut Na + /K + - ATPase α subunit mat enger Antarktis eelpout Strooss (Pachycara brachycephalum VerfÜgung) homologue (98%) a gemeinsame ongeféier 88% AA Identitéit mat anere teleost Gentherapie homologues. H + /K + - ATPase β subunit Strooss als bannent de teleost clade (globale Identitéit iwwer 80%) a gemeinsame éischter niddereg Identitéit mat senge mënschleche homologue (50%) erwaart. Atlantik halibut H + /K + - ATPase β subunit net méi wéi 39% AA Haaptrei Identitéit mat den Atlantik halibut Na deelen + /K + -. ATPase β subunit VerfÜgung Ontogenetic Ausdrock Muster an Korrelatioun Analyse VerfÜgung D'Entwécklungsphase Ausdrock Profiler vun pepsinogen A2 VerfÜgung, H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α VerfÜgung an β subunits VerfÜgung, Na VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α subunit VerfÜgung an ghrelin VerfÜgung vun qPCR am gi-TRACT analyséiert goufen vun eenzelne Atlantik halibut Larven (Dorënner 4). Der Gentherapie Ausdrock vu béiden gastric Proton Pompel subunits mein (p &Si besteet; 0,05; seng R 2: 0.773) soll (Dorënner 5) an déi parallel Ausdrock Musteren, mat engem schaarfe a wesentleche (p &Si besteet; 0,05) Erhéijung um ukomm an am Post-metamorphic Etappen (Dorënner 4). Pepsinogen A2 VerfÜgung war vill (p &Si besteet; 0,05) soll mat dem Ausdrock Profil vun der gastric Proton Pompel α (seng R 2: 0.9738) an β (seng R 2: 0.7963) subunits (Dorënner 5 ). Eng bedeitend (p &Si besteet; 0,05) Erhéijung während Etapp 8 war fir pepsinogen A2 VerfÜgung observéiert a sengem Ausdrock hiren Héichpunkt an der Post-metamorphic Etapp. Ghrelin VerfÜgung mRNA ët Iwwerfloss sech lues a lues an däitlech (p &Si besteet; 0,05) während de proclimax /ukomm vun metamorphosis, an dunn e Maximum vun der Post-metamorphic Etapp (Dorënner 4). Desweideren, ghrelin ët Iwwerfloss an proteolytic Aktivitéit während gi-TRACT ontogeny mein soll (p &Si besteet; 0,05; seng R 2: 0,9342, 0,8852, 0,9252 fir pepsinogen A2, gastric Proton Pompel α an β subunits, bzw.; gesinn Dorënner 5). Ausdrock vun Na VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α subunit VerfÜgung mRNA zu all Entwécklungsstand nogewise gouf, mat vill (p &Si besteet; 0,05) méi gët op der Bühn 5. Dorënner 4 Mëttler normalized Ausdrock Musteren vun der uginn mRNA gët vun eenzelne Larven (Etapp 5-10). Resultater fir pepsinogen A2 VerfÜgung Virreideroll, gastric H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase subunit α VerfÜgung an β VerfÜgung, Na VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase subunit α VerfÜgung an ghrelin VerfÜgung mRNA gët wéi heeschen ± Sem vun der normalized Ausdrock gewisen ginn (d'Referenz Gentherapie eEF1A1 benotzt). Mengen Wäerter mat verschidden Bréiwer gi vill verschidden (One Way ANOVA, p &Si besteet; 0,05). VerfÜgung 5 Linearschrëft regressions geschate Figur vum Korrelatioun Analysë tëscht Mo. spezifesch Gentherapie lues am Atlantik halibut ontogeny. Linearschrëft Réckgang Modeller goufen Lahure aloggen-transforméiert mengen Ausdrock Wäerter (MNE) vun A) gastric H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α subunit VerfÜgung an β subunit VerfÜgung; B) pepsinogen A2 VerfÜgung an H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase β subunit VerfÜgung (schwaarz Felder a staark Linn) souwéi H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase α subunit VerfÜgung (gro dots a prompt Linn); C) ghrelin VerfÜgung an H VerfÜgung + VerfÜgung /K VerfÜgung + VerfÜgung -ATPase β subunit VerfÜgung (schwaarz Felder a staark Linn), H VerfÜgung + VerfÜgung /K
+ VerfÜgung -ATPase α subunit VerfÜgung (gro dots a prompt Linn) souwéi pepsinogen A2 VerfÜgung (hell gro triangles agekreest Linn). All kennenzeléieren si bedeitend (p &Si besteet; 0,05). D'Logbuch-transforméiert heeschen vun MNE pro Etapp (5 to10) aus sechs Persounen geholl huet. VerfÜgung Estimatioun vun pH am lumen vun Mo. an erkennen Seier Produktioun VerfÜgung de pH Foussgänger an der lumen vun de Mo a midgut /hindgut am Post-embryonal Entwécklung op der Faarf no der Sprëtz vun pH Luucht Léisungen (Dorënner 6 a Table 2) observéiert war baséiert. D'pH am midgut /hindgut blouf alkaline (virun pH 8) an all de Entwécklungsstand analyséiert (Etapp 5 bis 9B). Déi kritt Mo. haten och eng alkaline pH mat Wäerter virun 7.5 bis Etapp 8. lues a sauer an den Etappe observéiert gouf de Héichpunkt vun metamorphosis entspriechend. Transitioun vun engem alkaline bis en dono pH am Mo. lumen war evident um Etapp 9A, wann der heijen Sol VerfÜgung CPR mauve bleift awer de Sol VerfÜgung mCP huet eng giel Faarf (pH6.5 - 7.5). D'lumen vun de Mo. war haut eenzegaarteg an der dono Gamme (pH &Si besteet; 3,5) op Etapp 9B, wéi déi giel Faarw am Mo. folgenden Administratioun vu béiden CPR an BPB Léisungen verroden. Figur 6 pH Ännerungen am gi-TRACT vum Atlantik halibut Larven während Entwécklung. Panel A: Resultater vun pH Luucht Léisungen Rouer erofzesetzen an Madeleine vu premetamorphosis (Etapp 5) metamorphosis (Etapp 9A an 9B) zu sengem Héichpunkt ukomm. pH Sol VerfÜgung mCP enthale 0,1% M-Cresol violett, Sol VerfÜgung CPR bestoung vun 0,1% Chlorphenol Red an pH Sol VerfÜgung BPB 1% vun Bromophenol blo haten. St: Mo /kritt Mo.; mg: midgut; hg: hindgut. Skala Bar = 0,5 mm. Panel B: Standarden zu Waasser Beweegung a mat ähnlechen Luucht Konditioun als Larven ënnert der dissecting microscope fotografeschen VerfÜgung Table 2 pH Ännerungen am gi-TRACT vum Atlantik halibut Larven bei verschiddene Entwécklungsstand VerfÜgung Etapp
. Mo.
Midgut /Hindgut
5 zur VerfÜgung > 7.5 VerfÜgung > 8.0 VerfÜgung 6 VerfÜgung > 7.5 VerfÜgung > 8.0 VerfÜgung 7
> 7.5 VerfÜgung > 8.0 VerfÜgung 8 VerfÜgung > 7.5 VerfÜgung > 8.0 VerfÜgung 9A VerfÜgung 6.5 - 7.5 VerfÜgung > 8.0 VerfÜgung 9B VerfÜgung &si besteet; 3,5 VerfÜgung > 6.5 VerfÜgung d'virgestallt pH Wäerter baséieren op visuellen Observatioune vun Faarf Ännerungen no der Administratioun vun dräi pH Luucht Léisungen VerfÜgung Analys vun gi-TRACT motility VerfÜgung SPONTAN propagating contractions waren observéiert. am gi-TRACT um prometamorphosis (Stuf 6; 25 dpff) an Héichpunkt vun metamorphosis (Etapp 9A /B; 49 dpff) (Dorënner 7). Wéinst bedeitend eenzelne Variant, Nummer an Heefegkeet vun contractions net gruppéiert ginn hätt a si fir all eenzel analyséiert (Table 3 an Weider Fichier 6) virgestallt. Zwou Zorte vun contractions waren an der midgut Regioun 1 observéiert (mg1; no de PS, Deel vun der Schläif eroffällt) an 2 (mg2): phasic an propagating Wellen (Zousätzleche Fichier 7). D'propagating zu mg2 observéiert contractions sech wuël Wellen datt am Beräich "A VerfÜgung" entstanen an geplënnert fir de Mond. Mä, déi vun der propagating contractions zu mg1 entstanen just ënnert der PS an huet anterograde Wellen déi vun engem firwat Richtung geplënnert. Motility Aktivitéit zu souwuel midgut Regiounen op der Bühn 6 mat enger Frequenz vun 0,31 bis 3,77 min rangéiert nogewise gouf -1, jee op d'individuell a Typ vun Kontraktioun. Op der Bühn 9, relativ wéineg spontan contractions vun kuerzer Dauer waren an der midgut observéiert. Während den Héichpunkt vun metamorphosis, contractions am Mo. sech zu all Persounen registréiert, am Géigesaz 6 bis Etapp wou motility am kritt Mo. nëmmen an eng Madeleine observéiert gouf. D'rectal Kontraktioun (oder defecation Reflex) war eng Mëschung vun retro- an anterograde contractions a sech an zwou Etappen 6 a 9 mat ähnlechen Ofstänn am meeschte vun de analyséiert Persounen observéiert. Figur 7 gi-TRACT motility am Atlantik halibut Larven um Etapp 6 a 9. wuël an anterograde Schwéngung Bewegungen (propagating contractions) sinn vun engem stoung Linn uginn. Dës Wellen geschéien vum Beräich A bis B; an aus pyloric sphincter (vertrueden duerch zwou rout Feiler *) ze Géigend B a vice-versa VerfÜgung. A a B vertrieden der Haaptrei Beräicher wou phasic contractions geschéien. St: Mo /kritt Mo.; mg1: midgut Regioun 1; mg2: midgut Regioun 2; hg: hindgut; r: rectal Beräich. Skala Bar = 1 mm VerfÜgung Table 3 gi-TRACT motility Musteren -. Quantification
Mo.
Midgut 1
Midgut 2
Hindgut
zu Rectal Géigend
Propagating
Phasic
Propagating
Phasic
Madeleine
n
Heefegkeet (min-1)
n
Heefegkeet (min-1)
n Heefegkeet
(min-1 )
n
Heefegkeet (min-1)
n
Heefegkeet (min-1)
n VerfÜgung
Heefegkeet (min-1)
n
Heefegkeet (min-1)
Etapp 6
1
-
-
14
2.31
50
1.69
57
1.84
79
3.54
13
1.46
161
5.24
2
-
-
26
1.81
-
-
95
3.77
12
0.44
15
0.54
3
0.22
3
17
0.56
5
0.31
4
0.24
28
1.66
77
3.01
-
-
96
3.22
4*
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
43
2.25
25
1.69
Etapp 9
1
11
2.37
-
-
-
-
-
-
-
-
1
-
11
1.44
2
10
0.90
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
11
0.41
3
4
0.44
-
-
-
-
9
3.83
-
-
-
-
13
0.46
4
4
0.56
-
-
3
1.13
-
-
-
-
12
1.12
24
0.81
Propagating an phasic contractions sinn fir midgut 1 an midgut 2 Regiounen dohinnergestallt. Frequenz ass d'Zuel vun contractions enregistréiert (n) pro min. VerfÜgung * Net méiglech phasic an propagating Schwéngung contractions zu ofgedonkelt. Déi betraffe gi-TRACT Segmenter goufen permanent (Tonic) während dem ganzen Observatiounszäitraum Optrag ginn (kuckt Weider Fichier 7). VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung An all altricial-gastric Aarten, déi gi-TRACT awer dramatesch Remodeling während TH-Undriff metamorphosis . Déi gi-TRACT Ännerungen aus engem einfachen Bléien Form an engem méi komplex Triichter Struktur. Gläichzäiteg gëtt de Mo e z'ënnerscheedde unzekräizen an weiderhi Funktiounen duerch metamorphosis ze gewannen. Et sinn iwwerraschend puer Studien waat an integréiert d'Präparaten a funktionell Ännerungen am gi-TRACT mat dësem TH-Undriff Event verbonnen. An Amphibien wéi Xenopus VerfÜgung, ass et gutt etabléiert, datt THs zu intestinal shortening an der Entwécklung vun crypts an villi Remodeling Virwaat [35-37] gi-TRACT induce. [25].

• Relatioun tëscht H.Pylori Wonn an clinicopathological Fonctiounen an hätt vun gastric cancer
• Korrelatioun tëschent KLENGE-2 /neu (erbB-2) Ausdrock Niveau an therapeutesch Wierkung vun geschéckt Behandlung mat HERCEPTIN an chemotherapeutic Agenten gastric Kriibs Zell lines