Toiminnalliset muutokset liittyvät ruoansulatuskanavaan organogeneesin aikana muodonmuutoksen ruijanpallas (Hippoglossus hippoglossus)

Toiminnalliset muutokset liittyvät ruoansulatuskanavaan organogeneesin aikana muodonmuutoksen ruijanpallas (Hippoglossus hippoglossus
) B Abstract
tausta
Kampelakalat metamorfoosi on hormoni säännelty jälkeinen alkion kehitykseen tapahtuma, joka muuntaa symmetrinen toukka osaksi epäsymmetrinen nuorten. In altricial mahalaukun teleost kala, erilaistuminen vatsan tapahtuu alkamisen jälkeen ensimmäisen ruokinta, ja aikana muodonmuutoksen dramaattinen molekyyli- ja morfologiset muutokset maha (GI-) suolikanavan esiintyä. Tässä esittelemme toiminnalliset ontogeny kehittyvien GI-suolikanavan integroiva näkökulma pleuronectiforme ruijanpallas, ja testata hypoteesia, että useita toimintoja teleost mahan kehittää synkronoidusti aikana muodonmuutoksen.
Tulokset
alkaminen mahalaukun toiminto määritettiin useita lähestymistapoja (anatomiset, biokemialliset, molekyyli- ja in vivo
havaintoja). In vivo
pH analyysi ruoansulatuskanava lumenin yhdistettynä kvantitatiivinen PCR (qPCR) ja α ja p-alayksiköiden mahalaukun protonipumpun (H
+ Twitter /K
+
-ATPaasin
) ja pepsinogeeni A2
osoitti, että mahalaukun proteolyyttinen kapasiteetti on perustettu aikana huipentuma muodonmuutoksen. Transcript runsaasti greliini
, otaksuttu orexigenic signalointi molekyyli tuotetaan kehittyvässä vatsassa, korreloi (p < 0,05) syntymistä mahalaukun proteolyyttisen aktiivisuuden, mikä viittaa siihen, että mahan rooli ruokahalun säätelyyn tapahtuu samanaikaisesti perustamisen proteolyyttisen toiminnan . 3D-mallit sarjassa ruoansulatuskanava kehitys osoitti toiminnallinen mahaportin sulkijalihaksen ennen ensimmäistä ruokintaa. Havainnot syötetyn toukkien vivo
vahvistanut, että vatsan säiliö toiminta on tapahtunut ennen muodonmuutoksen, ja oli siten riippumaton tämän tapahtuman. Mechanical erittely ruoan ja kuljetus chyme kautta ruoansulatuskanava havaittiin in vivo
ja johtui phasic ja lisäys supistukset todettu ennen kuin muodonmuutoksen. Supistusten lukumäärä keskisuolen väheni metamorfisissa kliimaksi synkronisesti perustamisen mahan proteolyyttinen kapasiteettia ja sen lisääntynyt peristalttinen aktiivisuus. Otaksuttu osmoregulatory toimivalta GI-suolikanavan, päätellä runsaasti Na
+ Twitter /K
+
-ATPaasi α
selostukset, oli jo alkaessa eksogeenista ruokinta ja oli muunneltua mukaan muodonmuutoksen.
Johtopäätökset
toiminnallinen erikoistuminen ruoansulatuskanava ei yksinomaan muodonmuutoksen, ja sen osmoregulatory kapasiteetti ja säiliön toiminta vahvistettiin ennen ensimmäistä ruokintaa. Siitä huolimatta, hapon tuotantoa ja proteolyyttinen kapasiteettia vatsaan samaan aikaan metamorfisten huippunsa, ja myös merkitty puhkeamista mahan osallistumiseen ruokahalun säätelyyn kautta greliinin.
Avainsanat
ruijanpallas Mahalaukun protonipumpun ruuansulatuskanavan greliini- Liikkuvuus Na + /K + - ATPaasi pepsinogeeni ontogeny pH Vatsa Taustaa
eriävät ruoansulatuskanavan (GI-) suolikanavan morfologia ja Ravinnonkäyttökokeiden välillä toukkien ja aikuisten vaiheet ovat muutokset luonteeltaan erilaisia ​​luontotyyppejä ja ravintoa [1]. Jälkeinen alkion kypsymistä ruoansulatuskanavan on keskeinen tapahtuma elämässä historiassa selkärankaisten ja välttämättömiä hengissä. Kilpirauhashormonin (TH) ajetaan muodonmuutos on keskeinen rooli toiminnallisen kypsymisen GI-suolikanavan ja muokkaamisessa sen morfologia aikuisten muotoon [2, 3]. Remodelling GI-suolikanavan toukka aikuiseksi on tutkittu laajalti Xenopus
[2, 4]. Tässä organismi, suoli muuttuu vaikutuksen alaisena THS pitkällä kietoutunut putki monimutkainen elin on vaihtelevia mahalaukun ja ohutsuolen [5, 6]. Tämä edellyttää epiteelin ja mesenkymaaliset leviäminen, sileän lihaksen paksuuntuminen ja muodostumista suoliston taittuu. Useat tutkimukset ovat kuvanneet solumekanismeja vastuussa remodeling sammakkoeläinten [7, 8], mutta vähän tiedetään niiden vaikutuksesta kudoksen toiminto selkärankaisilla, erityisesti monikäyttöisyyden integroitu vatsassa.
Silmiinpistävä piirre selkärankaisten muodonmuutoksen on organogeneesin vatsaan. Alkuvuodesta kehitysvaiheet kalat ja sammakkoeläimet mahassa on usein poissa ja osa sen toiminta voidaan suorittaa suolistossa. Tärkeimmät roolit selkärankaisten vatsa ovat varastointi nautitaan ruokaa, eritystä suolahappoa (HCl) ja pepsinogeeni, ja mekaaninen hajoaminen ja sekoittaminen ruokaa mahahapon eritystä [1, 9]. Siten toukkien altricial-mahalaukun lajeja, kuten ruijanpallas, puuttuminen vatsa rajoittaa kyky sulattaa proteiinirajoitukseen kun eksogeeninen ruokinta aloitetaan [10-14]. Tämä on yksi syy, miksi useimmat tutkimukset ruoansulatuskanava kehitys aikana muodonmuutoksen ovat keskittyneet vatsaan kehitykseen ja pitävät ulkonäkö maharauhanen sopivana indikaattorina täysin kehittynyt vatsa [15, 16]. On kuitenkin tullut selväksi, että histologinen tunnistaminen maharauhanen ei osoita, että vatsa on täysin toimiva. Näin ollen mahan proteolyyttinen toiminto on parhaiten esitetty pepsiiniaktiivisuutta [11, 17] ja pepsinogeeni
sisältö [18]. Jotta ymmärtää paremmin tehokkuuden ruoansulatuskanavan käsittelyn aikana kala ontogeny, useissa tutkimuksissa verrattiin ekspressioprofiilit pepsinogeeni
ja mahalaukun protonipumpun (H
+ Twitter /K
+
-ATPaasia
), lokalisoitu HCl erittävät oxynticopeptic soluissa [19-22]. Murray et ai. [23] ovat käyttäneet histologian ja pepsinogeeni
transkriptio analyysi tutkia ontogeny mahan vuonna ruijanpallas ja osoitti, että ulkonäkö 66 päivän kuluttua kuoriutumisesta (DPH) of maharauhanen edeltää ilmaus pepsinogeenia A1
ja A2
selostukset 80 DPH. Kuitenkin vaikutus metamorfoosi muihin tärkeisiin toimintoihin mahalaukun tai GI-suolikanavan kehitystä yleensä on pääosin huomiotta kampelaa.
Lisäksi hapon tuotantoa ja proteolyysin selkärankaisten mahassa myös säiliö toimintoja. Nauttimisen jälkeen, mahan kaupat ja predigests ruokaa ja luovuttaa chyme on keskisuolen edelleen ruoansulatusta ja myöhemmät ravinteiden imeytymistä [9]. Varastointi vatsan toimintaan lievittää nuorten ja aikuisten kalojen tarpeesta jatkuvasti ruokkia kuten stomachless toukkavaiheet. Perustaminen vatsaan varastona edellyttää toimivia sphincters (ruokatorvi ja mahaportin) ja hyvin kehittynyt hermo ja sileän lihaksen kerroksia. Mekaaniset sekoittaminen ja kuljetus, elintarvikkeiden kautta ruoansulatuskanava saavutetaan tietty liikkuvuus kuviot ja sovittamalla peristaltiikkaa vapauttaa ruoansulatusentsyymien. Tämä prosessi on keskeinen rooli tehokkaan elintarvikkeiden jalostus (katso tarkastelu, [24]), vaikka hyvin harvat tutkimukset ovat suunnattu GI-suolikanavan liikkeitä kalan toukat. Etu käyttää kalojen toukkia, kuten ruijanpallas, on niiden optiikka avoimuutta, joka on voimassa, kunnes muodonmuutoksen. Tämä mahdollistaa suoran visuaalisen havaintoja ruoansulatuskanava ja sen liikkuvuuden malleja eläviä eläimiä. Pittman et ai. [25] raportoitu peristalttinen supistukset Ruijanpallas toukkia, etummaisessa suolistossa 35 DPH. Nuorilla ruijanpallas GI-suolikanavan sekä anterogradista (lisäys peräaukon suuntaan) ja taaksepäin (lisäys suun suuntaan) supistuminen aallot kuvattiin [26], ja identtinen kuvioita havaittiin myös alkioiden ja toukkia stomachless zebrafish (Danio rerio
) [27].
mahassa tuottaa hormoneja osallistuvat sekä ruokahalun säätelyssä ja ruoansulatusta. Greliini on esimerkki hormoni, joka tuotetaan pääasiassa mahassa ja toimii stimulaattori ravinnonoton [28, 29]. Nisäkkäillä, greliini on ehdotettu myös edistää mahahapon eritystä ja liikkuvuus [30, 31]. Toiminto greliinin kalan toukkien on edelleen huonosti kuvattu, mutta se on ehdotettu indikaattorina mahan osallistumista ruokahalun säätelyyn kehittyvissä kala [32]. Vuonna ruijanpallas, greliini
geenien ilmentyminen lisääntyy aikana kliimaksi muodonmuutoksen, jolloin myös vatsa kehittämiseen [33]. Greliini on runsaasti kehittyvässä maharauhanen ja useita osmoregulatory kudoksissa. Lisäksi sen koekspressoimalla Na
+ Twitter /K
+
-ATPaasi
viittaa otaksuttu rooli hydromineraalilaitoksissa tasapainossa [34]. Silti rooli greliinin ruokahalun säätelyyn, liikkuvuuteen ja osmoregulation on tuntematon, samoin kuin sen linkin proteolyyttisen ja säiliö vatsan toimintaan vuonna ruijanpallas aikana muodonmuutoksen.
Tutkimus pyrkii luomaan vaikutuksen agastric- mahalaukun siirtyminen on toiminnallista roolia jälkeisen alkion ruoansulatuskanava remodeling, joka tapahtuu muodonmuutoksen ruijanpallas, joka on kampela lajien korkea kaupallinen etu, että Pohjois-Euroopan ja Pohjois-Amerikan vesiviljelyelinkeinojen. Kartoittamaan muutokset ruoansulatuskanava kehitystä ja luoda tapahtumia liittyy TH-odotuksiin muodonmuutoksen rakensimme sarjan 3D-malleja morfologisten ja tilan järjestämisestä ruuansulatuselimille edustavissa kehitysvaiheissa. Testasimme hypoteesia, että kehitys useita mahan toiminnot on synkronoitu ja liittyvät sen fyysinen ulkonäkö muodonmuutoksen. Proteolyyttisen toiminnan mahan tutkittiin käyttäen in vivo
pH analyysit yhdistettynä ekspression profiileja spesifisen geenin markkereita H
+
/K
+
-ATPaasin α
ja β-alayksikköä
ja pepsinogeeni A2
käyttämällä kvantitatiivista PCR (qPCR). Vatsa täyttö ja säiliö toiminta arvioitiin in vivo
visuaalinen tutkimuksia läpinäkyvän toukkien prometamorphosis ja huipentuma muodonmuutoksen. N oletettu rooli täysin toimiva vatsaan ruokahalun säätelyyn arvioitiin mittaamalla greliinin
transkriptio runsautta. Perustaminen GI-suolikanavan motiliteettia kuviot kehityksen aikana määritettiin in vivo
havaintoja ja osallistumista GI-suolikanavan in osmoregulation arvioitiin mittaamalla runsaasti Na
+ Twitter /K
+
-ATPaasi α
alayksikköä selostukset.
tulokset
3D jälleenrakentamiseen ruuansulatuselimille
3D-malleja morfologian ruoansulatuskanavan kehityksen aikana rekonstruoitiin sarjasta histologisia kohdat. Sijainti ja koko ruoansulatuskanava ja siihen liittyvät elimet, kuten maksan, hormonaaliset ja haimassa, ja sappirakon, havaittiin vaiheesta 3 (ennen ensimmäistä ruokinta), kunnes jälkeisessä metamorphic vaiheessa 10 (kuvio 1). Kuvio 1 ontogeny ruoansulatuskanavan elinten ruijanpallas toukkia. 3D-malleja olivat rekonstruoida sarja histologisten kohdat käyttäen Imaris ohjelmistoa. Ruuansulatuselimille näkyvät kolmiulotteisena; vasemmalle, oikealle ja selkäpuolelta. Nuolet
osoittavat etummaisessa suunnassa (suu). Orange
ulkokerros GI-suolikanavan, punainen
maksa, vihreä
sappirakko, violetti
haima, vaaleanpunainen
Langerhansin saareke, keltainen
ruskuaispussista. Läpinäkyvä väri käytetään haimassa (violetti
), jotta voidaan osoittaa Langerhansin saarekkeiden (vaaleanpunainen
) ja sappirakon (vihreä
).
Ruoansulatuskanava käsittää kapean foregut (ruokatorvi ja oletettujen vatsa /vatsa), suolen keskialueen, ja lyhyt hindgut (peräsuoli) (kuva 2). Etuosan alue keskisuolen, juuri sen jälkeen, mahanportin sulkijalihaksen (PS), oli suurempi halkaisija, ts runsaampi verrattuna muuhun keskisuolen. Tämä ominaisuus säilyi ruoansulatuskanava ontogeny (kuviot 1 ja 2). Sekä PS (joka erottaa oletetun mahassa anterior keskisuolen) ja ileorectal sulkijalihaksen (joka erottaa keskisuolen ja hindgut) tunnistettiin vaiheessa 3 lähtien (kuviot 1 ja 2). Mahanportin umpisuolet ilmeni, kuten ennusteet kaikkein etuosan keskisuolen vaiheessa 6 (kuviot 1 ja 2). Vatsa on hyvin erilaistunut vaiheessa 10 ja maharauhanen näkyivät histologisia osat (Additional tiedosto 1). Luminaaliselle tilavuus ruoansulatuskanava kasvoi kehityksen aikana, erityisesti kahden viimeisen vaiheen analysoitu (vaiheet 9A ja 10) (kuvio 3, taulukko 1 ja Additional tiedosto 2). Mahan tilavuus 9A 10 kasvoi 415-4933 nl, vastaavasti, ja vastasi 11-kertainen lisäys (taulukko 1). Kuvio 2 ontogeny oletetun mahaan (läpinäkyvä vaaleansininen) ja GI-suolikanavan luumeniin (sininen) in ruijanpallas toukkia. 3D-malleja olivat rekonstruoida sarja histologisten kohdat käyttäen Imaris ohjelmistoa. GI-suolikanavan luumeniin edustaa sisäkerroksen (päin ontelon) GI-suolikanavan. GI-suolikanavan nähdään kolmesta suunnasta; vasemmalle, oikealle, ja selkäpuolelta. Nuolet
osoittavat etummaisessa suunnassa (suu). Arrow päät
pisteen asentoon ja sphincters (punainen: mahaportin sulkijalihaksen, musta: ileorectal sulkijalihaksen). st
oletetut vatsaan /vatsa, mg
keskisuolen, hg
hindgut.
Kuvio 3 Standardoitu määrän lisäys ruuansulatuselimille välisen vaihe (S) 3 -10 ruijanpallaksen. Volyymin kasvu oli normalisoitu yleinen keskimääräinen tilavuuden kasvu vaiheiden välillä kunkin kudoksen (tarkemmat selitykset löytyvät kohdasta Muut tiedosto 2).
Taulukko 1 GI-suolikanavan elin tilavuus (nl) ja pinta-ala (10 6 pm 2)
Vaihe 3
Vaihe 4
Vaihe 5
Vaihe 6
Stage 9A
Stage 10

GI-suolikanavan ulkokerros (nl)
157,42
261,03
490,65
1038,48
2670,15
12855,10
ruoansulatuskanava ulkokerros (106 μm2)
3,59
5,12
6,74
10,07
20.53
63.38
ruoansulatuskanava sisäkerros (nl) B 78.40
136,84
266,55
525,89
1034,10
6451,16
ruoansulatuskanava sisäkerros (106 μm2) B 2,83
4,73
9.60
16.34
50.45
54.76
GI-suolikanavan kudos volumea (nl)
79.02
124,19
224,10
512,59
1636,05
6403,94
Maksa (nl) B 35.24
48.82
98.18
225,23
928,25
4232,77
haima (nl) B 13.79
21.42
37.91
109,08
471,25
463,79
Langerhansin saarekkeiden (nl)
0,50
0,46
0,57
1,05
5,33
11,73
Oletettu mahaan (nl) B 15.51
27.29
32.06
84.09
414,54
4932,67
arvot laskettiin 3D-malleja käyttäen Imaris MeasurementsPro.
AGI-suolikanavan kudoksen tilavuus = ruoansulatuskanava ulkokerros - ruoansulatuskanava sisäkerroksen.
maksassa oli alle sijoitetut foregut ja anteriorisesti nouseva silmukka keskisuolen (kuvio 1), ja sen tilavuus kasvoi tasaisesti kehityksen aikana (kuvio 3 ja taulukko 1). Haimassa havaittiin välillä oletettujen mahassa ja etuosan keskisuolen vaiheessa 3 ja sitä ympäröivät tällä keskisuolen alalla koko ontogeny (kuvio 1). Vuonna haiman, joka on selvästi erotettavissa Langerhansin saareke havaittiin lähellä sappirakon vaiheessa 3 (kuvio 1). Toisin kuin muut ruoansulatuskanavan elimissä, lisäys on normalisoitu tilavuus hormonaalisten ja haimassa oli alhainen, ja negatiivinen, vastaavasti, ja vaiheiden välissä 9A ja 10 (kuvio 3 ja taulukko 1). Ruskuaispussista, alle asetetaan ruoansulatuskanava vaiheessa 3, koko pieneni aloittamisen jälkeen eksogeenisen ruokinta ja pieni jäänne jäi lisäksi maksan vaiheessa 4 (6 päivän kuluttua ensimmäisen ruokinta, dpff). Sappirakko havaittiin oikealla puolella välillä haimassa ja maksassa, ja ylläpitää tämä asema kaikissa kehitysvaiheissa analysoitu (kuvio 1). Haiman kanava ja sappitiehyen avataan vierekkäin onteloon on keskitasoon etuosan keskisuolen, vain sen jälkeen, kun PS-(tuloksia ei ole esitetty).
Kloonaus ja fylogeneettiset karakterisointi pepsinogeeni A2, greliini, mahan protonipumpun alayksiköt ja Na + /K + -ATPaasi-alayksikköä α
täydellinen koodaussekvenssi (CDS) ruijanpallaksen pepsinogeeni A2
oli 1128 bp ja toimitettiin GenBank alle liittymistä ei. KF184647 (Additional tiedosto 3: C). Aminohappo (AA) sekvenssi pepsinogeeni on suhteellisen hyvin konservoitunut teleost kalaa ja, kuten odotettua, vaihtelee enemmän verrattuna muihin selkärankaisten pepsinogeenia. Esimerkiksi ruijanpallas pepsinogeeni A2 jaettu vastaavasti 88% ja 64% AA identtisyys talven kampela (Pseudopleuronectes americanus
) Pepsinogeeni Muoto II b ja II a, mutta vain 52% ja 48% identiteetti homologeja Xenopus laevis
ja ihmisen, vastaavasti (tuloksia ei ole esitetty).
cDNA-fragmentit kloonataan ruijanpallaksen H
+ Twitter /K
+
-ATPaasi α-alayksikköä
( 911 emäsparia) ja Na
+ Twitter /K
+
-ATPaasi α-alayksikköä
(714 emäsparia) talletettiin GenBank liittymisen numerot KF184648 ja KF184650, vastaavasti (Additional tiedosto 3: B, D). CDS H
+ Twitter /K
+
-ATPaasi β-alayksikköä
874 emäsparin kloonattiin ja toimitettiin GenBank liittymisen ilman. KF184649 (Additional tiedosto 3: A). Fylogeneettistä analyysi α alayksikköön mahalaukun protonipumpun ja Na + /K + - ATPaasi, ja selkärankaisten homologit (Additional tiedosto 4) syntyy kaksi suurta clades, yksi H vastaava + /K + - ATPaasi ja toinen Na + /K + - ATPaasi. Fylogeneettistä analyysi β-alayksikön (Additional tiedosto 5) tuotti puun kaksi suurta clades että oli sama yleinen topologia kuin phylotree varten α-alayksikköä kanssa H + /K + - ATPaasi ja Na + /K + - ATPaasi ryhmittyneet itsenäisesti.
ruijanpallas H + /K + - ATPaasi α-alayksikköä ryhmittyneet läheisimmin kanssa teleost homologeja, joiden kanssa se yhteinen 94% AA identtisyys, ja nousi 98% identiteetti talven kampelaa ja turska (Gadus morhua
). Alempi AA identtisyys (72%) havaittiin, kun ruijanpallas H + /K + - ATPaasi α-alayksikköä verrattiin ruijanpallas Na + /K + - ATPaasi α-alayksikköä (70 %) ja muiden selkärankaisten kollegansa (72%). Ruijanpallas Na + /K + - ATPaasi α-alayksikköä ryhmittyneet kanssa Etelämantereen kivinilkka (Pachycara brachycephalum
) homologin (98%) ja jakoi noin 88% AA identiteetti muiden teleost geenin homologit. H + /K + - ATPaasi β-alayksikköä ryhmittyneet odotetusti sisällä teleost haaran (yleinen identiteetti noin 80%) ja jaettu melko alhainen identiteettiä sen ihmisen homologin (50%). Ruijanpallas H + /K + - ATPaasi β-alayksikköä ei jakaa enintään 39% AA identtisyys ruijanpallas Na + /K + - ATPaasi β-alayksikköä.
Ontogenetic ilmentymiskuvio ja korrelaatioanalyysiä
kehitykseen ekspressioprofiilit pepsinogeeni A2
, H
+ Twitter /K
+
-ATPaasin α
ja β-alayksiköt
, Na
+ Twitter /K
+
-ATPaasi α-alayksikköä
ja greliinin
analysoitiin qPCR GI-suolikanavan yksittäisten ruijanpallas toukkia (kuva 4). Geeniekspressiota Molempien mahalaukun protonipumpun alayksiköt olivat merkitsevästi (p < 0,05; säätää R 2: 0,773) korreloivat (kuva 5) ja oli yhdensuuntainen ekspressiokuvioiden, terävällä ja merkittävä (p < 0,05) nousu huippunsa ja jälkeisessä metamorfinen vaiheissa (kuva 4). Pepsinogeeneistä A2
oli merkitsevästi (p < 0,05) korreloi ilmentymisprofiilin mahalaukun protonipumpun α (oikaistu R 2: 0,9738) ja β (oikaistu R 2: 0,7963) alayksiköstä (Kuva 5 ). Merkittävä (p < 0,05) lisäystä aikana vaiheessa 8 havaittiin pepsinogeeni A2
ja sen ilmentyminen oli huipussaan jälkeisessä metamorphic vaiheessa. Greliini
mRNA transkriptin runsaus kasvoi vähitellen ja merkittävästi (p < 0,05) aikana proclimax /kliimaksi muodonmuutoksen, ja saavuttanut enintään jälkeisessä metamorphic vaiheessa (kuva 4). Lisäksi greliini transkriptio runsaus ja proteolyyttisen aktiivisuuden aikana ruoansulatuskanava ontogeny merkittävästi korreloivat (p < 0,05; säätää R 2: 0,9342, 0,8852, 0,9252 pepsinogeeni A2, mahalaukun protonipumpun α ja p-alayksikköjä; katso kuva 5). Expression of Na
+ Twitter /K
+
-ATPaasi α-alayksikköä
mRNA havaittiin kaikissa kehitysvaiheissa, joissa merkitsevästi (p < 0,05) enemmän selostukset vaiheessa 5. Kuva 4 keskimääräinen normalisoitu ekspressiomalleja osoitetun mRNA-transkriptien yksittäisten toukat (vaihe 5-10). Tulokset pepsinogeeni A2
esiaste, mahan H
+ Twitter /K
+
-ATPaasi alayksikköä α
ja β
, Na
+ Twitter /K
+
-ATPaasin alayksikön α
ja greliini
mRNA-transkriptien on esitetty keskiarvona ± SEM normalisoidun ilmaisun (käyttäen viite-geenin eEF1A1). Keskiarvot eri kirjaimet ovat merkittävästi erilaiset (One Way ANOVA, p < 0,05).
Kuva 5 regressoitava lineaarisesti arviointiin korrelaatio analyysit välillä mahaspesifiset geenimerkkejä aikana ruijanpallas ontogeny. Lineaarinen regressio mallien sovitettiin log-transformoituja keskiarvo ilmaisu arvot (MNE) A) mahalaukun H
+ Twitter /K
+
-ATPaasi α-alayksikköä
ja β-alayksikön
; B) pepsinogeeni A2
ja H
+ Twitter /K
+
-ATPaasi β-alayksikköä
(musta neliö ja yhtenäinen viiva) sekä H
+
/K
+
-ATPaasi α-alayksikköä
(harmaa pisteitä ja katkoviiva); C) greliini
ja H
+ Twitter /K
+
-ATPaasi β-alayksikköä
(musta neliö ja yhtenäinen viiva), H
+ Twitter /K
+
-ATPaasi α-alayksikköä
(harmaa pisteitä ja katkoviiva) sekä pepsinogeeni A2
(vaaleanharmaa kolmiot ja pisteviiva). Kaikki korrelaatiot ovat merkittävät (p < 0,05). Log-transformoituja keskiarvo MNE vaihetta kohti (5 stä 10: een) otettiin kuusi henkilöä.
Arvio pH ontelon mahan ja havaitseminen hapon tuotannon
pH arviointivirhettä mahalaukun ja keskisuolen /hindgut jälkeisessä alkionkehityksen perustui havaittu värin injektion jälkeen pH indikaattoriliuoksia (kuvio 6 ja taulukko 2). PH keskisuolen /hindgut pysyi emäksinen (pH on yli 8) kaikissa kehitysvaiheissa analysoitu (vaihe 5 9B). Oletetut vatsa oli myös emäksinen pH-arvoilla yli 7,5 kunnes vaiheessa 8. Asteittainen happamoitumista havaittiin vaiheissa vastaa huipentuma muodonmuutoksen. Siirtymistä emäksinen ja hapan pH mahassa ontelon näkyi vaiheessa 9A, kun injektoidaan sol
CPR pysyi violetti, mutta soolin
MCP saatiin keltainen väri (pH 6,5 - 7,5). Ontelon vatsa oli selvästi happamalla alueella (pH < 3,5) ensimmäisessä vaiheessa 9B, joka käy ilmi keltainen väri vatsassa annon jälkeen sekä CPR ja BPB ratkaisuja. Kuva 6 pH: n muutoksia GI-suolikanavan ruijanpallaksen toukkia kehityksen aikana. Paneeli A: tulokset putkiruokinta pH indikaattoriliuoksia osaksi toukka alkaen premetamorphosis (vaihe 5) huippunsa muodonmuutoksen (vaihe 9A ja 9B). pH sol
MCP sisälsi 0,1% M-kresoli violetti, sol
CPR koostui 0,1% Chlorphenol Red ja pH sol
BPB oli 1% bromofenolisinistä. st: vatsa /oletetuilla vatsaa mg: keskisuolen; Hg: hindgut. Asteikko bar = 0,5 mm. Paneeli B: standardit upotetaan veteen ja valokuvattiin vastaavien valaistusolosuhteissa kuin toukat alla preparointimikroskooppia.
Taulukko 2 pH: n muutoksia GI-suolikanavan ruijanpallaksen toukat eri kehitysvaiheissa
Stage
vatsa
keskisuolen /Hindgut
5
> 7,5
> 8,0
6
> 7,5
> 8,0
7
> 7,5
> 8,0
8
> 7,5
> 8,0
9A
6,5-7,5
> 8,0
9B
< 3,5
> 6,5
Esitetyt pH-arvot perustuvat silmämääräiset havainnot väri muuttuu annon jälkeen kolmen pH indikaattoriliuoksia.
analyysi GI-suolikanavan motiliteettia
Spontaani lisäys supistukset havaittiin GI-suolikanavan at prometamorphosis (vaiheessa 6; 25 dpff) ja huipentuma muodonmuutoksen (vaihe 9A /B; 49 dpff) (kuva 7). Johtuen huomattavaa yksilöllistä vaihtelua, lukumäärä ja supistukset ei voitu ryhmitellä ja on esitetty kunkin yksittäisen analysoitu (taulukko 3 ja Additional tiedosto 6). Kahdenlaisia ​​supistuksia havaittiin keskisuolen alueella 1 (MG1, kun PS, laskeva osa loop) ja 2 (Mg2): phasic ja lisäys- aallot (Additional tiedosto 7). Etenevän supistuksia havaitut Mg2 olivat taaksepäin aaltoja, jotka ovat peräisin alueella "
" ja siirtynyt kohti suuta. Kuitenkin MG1 useimmissa etenevän supistusten alkunsa vajaat PS ja olivat anterogradista aaltoja, jotka siirretään anaali suuntaan. Liikkuvuus aktiivisuutta sekä suolen keskialueen alueilla havaittiin vaiheessa 6, jonka taajuus vaihtelee 0,31-3,77 min -1, riippuen yksilön ja tyyppi supistuminen. Vaiheessa 9, suhteellisen harvat spontaaneja supistuksia lyhytkestoisia havaittiin keskisuolen. Aikana kliimaksi muodonmuutoksen, supistukset mahassa oli rekisteröity kaikille yksilöille, toisin kuin vaiheessa 6, kun potevilla oletetuilla mahassa havaittiin ainoastaan ​​yksi toukka. Peräsuolen supistuminen (tai ulostaminen refleksi) oli sekoitus retro- ja anterogradista supistuksia ja havaittiin molemmissa vaiheissa 6 ja 9 kanssa samanlainen taajuuksilla useimmissa yksilöiden analysoitu. Kuva 7 GI-suolikanavan motiliteetin ruijanpallas toukat vaiheessa 6 ja 9. Retrograde ja anterogradista aallon liikkeet (lisäys supistukset) on merkitty katkoviivalla. Nämä aallot esiintyä alue A: sta B; ja mahaportin sulkijalihaksen (edustaa kaksi punaiset nuolet *) ja alue B ja päinvastoin
. A ja B ovat tärkeimmät alueet, joilla phasic supistuksia esiintyy. st: vatsa /oletetuilla vatsaa MG1: keskisuolen alueella 1; Mg2: keskisuolen alue 2; Hg: hindgut; r: peräsuolen alueella. Asteikko bar = 1 mm.
Taulukko 3 GI-suolikanavan motiliteettia kuvioita - kvantifiointiin
Vatsa
keskisuolen 1
keskisuolen 2
Hindgut

rektaalialueelta
lisäysaineistoa
phasic
lisäysaineistoa
phasic
Larva
n
Frequency (min-1)
n
Frequency (min-1)
n
Frequency (min-1 )
n
Frequency (min-1)
n
Frequency (min-1)
n

Taajuus (min-1)
n
Frequency (min-1)
Vaihe 6
1
-
-
14
2.31
50
1.69
57
1.84
79
3.54
13
1.46
161
5.24
2
-
-
26
1.81
-
-
95
3.77
12
0.44
15
0.54
3
0.22
3
17
0.56
5
0.31
4
0.24
28
1.66
77
3.01
-
-
96
3.22
4*
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
43
2.25
25
1.69
vaihe 9
1
11
2.37
-
-
-
-
-
-
-
-
1
-
11
1.44
2
10
0.90
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
11
0.41
3
4
0.44
-
-
-
-
9
3.83
-
-
-
-
13
0.46
4
4
0.56
-
-
3
1.13
-
-
-
-
12
1.12
24
0.81
Lisäys- ja phasic supistukset ilmoitettu keskisuolen 1 ja keskisuolen 2 alueilla. Taajuus on supistusten lukumäärä rekisteröity (n) per min.
* Ei mahdollista mitata phasic ja etenevän aallon supistuksia. Kyseisen GI-suolikanavan segmentit olivat jatkuvasti (tonic) supistui koko tarkkailujakson aikana (ks Additional tiedosto 7).
Keskustelu
Kaikissa altricial-mahalaukun lajeja, GI-suolikanavan läpi dramaattisen remontin aikana TH-odotuksiin muodonmuutoksen . GI-suolikanavan muuttuu yksinkertaisen putken muotoinen osaksi monimutkaisempi taitettu rakenne. Samalla vatsassa tulee erillinen lokero ja edelleen hankkia useita toimintoja läpi muodonmuutoksen. On yllättävän harvat tutkimukset, joissa tutkitaan ja integrointi anatomiset ja toiminnalliset muutokset ruoansulatuskanava liittyvät tähän TH-ajettu tapahtuma. Sammakkoeläinten kuten Xenopus
, se on vakiintunut, että THS indusoivat GI-suolikanavan remodeling johtaa suoliston lyhenemistä ja kehittäminen kryptissa ja villi [35-37]. [25].

• Suhde H.pylori-infektion ja kliinis-ja ennusteen mahasyövän
• Korrelaatio HER-2 /neu (erbB-2) ilmentymisen taso ja terapeuttisen vaikutuksen yhdistelmän hoidon HERCEPTIN ja kemoterapeuttisten aineiden mahasyövän solulinjoissa