modificaciones funcionales asociados con la organogénesis tracto gastrointestinal durante la metamorfosis en el fletán (Hippoglossus hippoglossus)

modificaciones funcionales asociados con la organogénesis tracto gastrointestinal durante la metamorfosis en el fletán (Hippoglossus hippoglossus
)
Resumen Antecedentes

peces planos es la metamorfosis una hormona caso del desarrollo post-embrionario regulado que transforma una larva simétrica a una asimétrica juvenil. En los peces teleósteos altricial-gástrica, la diferenciación del estómago tiene lugar después de la aparición de la primera alimentación, y durante la metamorfosis modificaciones moleculares y morfológicas dramáticas del tracto gastrointestinal se presentan (GI). Aquí presentamos la ontogenia funcional del tracto gastrointestinal en desarrollo desde una perspectiva integradora en el fletán pleuronectiforme, y poner a prueba la hipótesis de que las múltiples funciones del estómago teleósteos se desarrollan de forma sincronizada durante la metamorfosis.
Resultados
El inicio de la función gástrica se determinó con varios enfoques (anatómicos, bioquímicos, moleculares e in vivo
observaciones). En vivo
análisis de pH en el lumen del tracto gastrointestinal en combinación con PCR cuantitativa (qPCR) de α y ß subunidades de la bomba de protones gástrica (H
+
/K
+ -ATPasa

) y A2 pepsinógeno
indicó que se establece la capacidad proteolítica gástrica durante el clímax de la metamorfosis. la abundancia de transcripción de la grelina
, una molécula de señalización orexigenic putativo producido en el estómago en desarrollo, correlacionado (p < 0,05) con la aparición de la actividad proteolítica gástrica, lo que sugiere que la función del estómago en la regulación del apetito se produce simultáneamente con el establecimiento de la función proteolítica . Una serie de modelos 3D del desarrollo del tracto GI indicó un esfínter pilórico funcional antes de la primera alimentación. Las observaciones de las larvas alimentadas in vivo confirmaron que
función de reservorio del estómago se estableció antes de la metamorfosis, por lo que sería independiente de este evento. Se observó una avería mecánica de los alimentos y el transporte de quimo a través del tracto gastrointestinal in vivo
y el resultado de las contracciones fásicas y se propagan establecidos mucho antes de la metamorfosis. El número de contracciones en el intestino medio disminuyó en el clímax metamórfico sincrónicamente con el establecimiento de la capacidad proteolítica del estómago y su aumento de la actividad peristáltica. Putativa competencia osmoregulatoria del tracto gastrointestinal, inferida por la abundancia de Na
+
/K
+ -ATPasa
α
transcripciones, se estableció ya en el inicio de la alimentación exógena y fue modificada por metamorfosis.
Conclusiones Francia el especialización funcional del tracto gastrointestinal no era exclusivo de la metamorfosis, y su función de capacidad y el depósito osmoregulatoria se establecieron antes de la primera alimentación. No obstante, la producción de ácido y la capacidad proteolítica del estómago coincidieron con el clímax metamórfico, y también marcó el inicio de la participación del estómago en la regulación del apetito a través de la grelina.
Palabras clave
Fletán la bomba de protones gástrica del tracto gastrointestinal grelina Motilidad Na + /K + - ATPasa Pepsinogen La ontogenia pH del estómago fondo
Las estrategias gastrointestinales divergente (GI) del tracto morfología y alimentación entre fases de larvas y adultos son fundamentalmente adaptaciones a diferentes hábitats y recursos alimenticios [1]. La maduración post-embrionario del sistema digestivo es un acontecimiento clave en la historia de vida de los vertebrados y esencial para la supervivencia. la metamorfosis de la hormona tiroidea (TH) impulsado juega un papel crucial en la maduración funcional del tracto gastrointestinal y en la conformación de su morfología a la forma adulta [2, 3]. Remodelación del tracto gastrointestinal de larva a adulto ha sido ampliamente estudiado en Xenopus
[2, 4]. En este organismo, el intestino se transforma bajo la influencia de los hospitales centrales de un tubo largo en espiral en un órgano complejo con el estómago y el intestino delgado diferenciada [5, 6]. Esto implica la proliferación epitelial y mesenquimal, engrosamiento del músculo liso y la formación de pliegues intestinales. Varios estudios han descrito los mecanismos celulares responsables de esta remodelación en anfibios [7, 8], sin embargo, poco se sabe sobre su impacto en la función de los tejidos en los vertebrados, especialmente a las múltiples funciones integradas en el estómago.
Una característica notable de la metamorfosis de los vertebrados es la organogénesis del estómago. En las etapas tempranas del desarrollo de peces y anuros el estómago es a menudo ausente y parte de su función puede llevarse a cabo por el intestino. Las principales funciones del estómago son vertebrados de almacenamiento de alimento ingerido, la secreción de ácido clorhídrico (HCl) y pepsinógeno, y avería mecánica y mezcla de los alimentos con las secreciones gástricas [1, 9]. Por lo tanto, en las larvas de las especies altricial-gástrico, tales como el fletán, la ausencia de un estómago limita la capacidad de digerir proteínas de la dieta cuando se inicia la alimentación exógena [10-14]. Esta es una de las razones por la mayoría de los estudios de desarrollo del tracto GI durante la metamorfosis se han centrado en el desarrollo de estómago y considerar la aparición de glándulas gástricas como un indicador adecuado de un estómago completamente desarrollado [15, 16]. Sin embargo, ha quedado claro que la identificación histológica de las glándulas gástricas no indica que el estómago es completamente funcional. Por lo tanto, la función proteolítica del estómago es el más indicado por actividad de la pepsina [11, 17] y pepsinógeno
contenido [18]. Para entender mejor la eficiencia de procesamiento digestivo durante la ontogenia de los peces, varios estudios compararon los perfiles de expresión de pepsinógeno
y la bomba de protones gástrica (H
+
/K
+
-ATPasa
), localizada en las células secretoras de oxynticopeptic HCl [19-22]. Murray et al. [23] han utilizado la histología y pepsinógeno
transcripción análisis para estudiar la ontogenia del estómago en el fletán y mostró que la aparición a los 66 días después de la eclosión (DPH) de las glándulas gástricas expresión de pepsinógenos A1 y A2
precedido
transcripciones a 80 DPH. Sin embargo, el impacto de la metamorfosis en otras funciones importantes del desarrollo estómago o el tracto gastrointestinal, en general, en gran medida ha sido pasado por alto en peces planos.
Además de la producción de ácido del estómago y la proteólisis de la vertebrados también tiene funciones de reservorio. Después de la ingestión, el estómago almacena los alimentos y predigests, a continuación, entrega el quimo en el intestino medio de la digestión y posterior absorción de nutrientes [9]. La función de almacenamiento del estómago alivia juveniles y adultos de la necesidad de alimentar constantemente al igual que los estadios larvarios stomachless. Establecimiento del estómago como un reservorio requiere esfínteres funcionales (esófago y el píloro) y neuronal bien desarrollada y las capas de músculo liso. La mezcla mecánica y el transporte de alimentos a través del tracto gastrointestinal se consigue mediante patrones de motilidad específicos y haciendo coincidir el peristaltismo con la liberación de enzimas digestivas. Este proceso juega un papel central en la elaboración de alimentos efectiva (ver opinión, [24]), aunque muy pocos estudios se han centrado en los movimientos del tracto digestivo de las larvas de peces. La ventaja de utilizar las larvas de peces, tales como fletán, es su transparencia óptica que se mantiene hasta la metamorfosis. Esto permite que las observaciones visuales directas del tracto gastrointestinal y sus patrones de motilidad en los animales vivos. Pittman et al. [25] informó de las contracciones peristálticas en larvas de fletán, en el intestino anterior a 35 DPH. En juvenil halibut tracto GI tanto anterógrada del Atlántico (que se propaga en la dirección anal) y retrógrada (que se propaga en la dirección oral) se describe ondas de contracción [26], y patrones idénticos, también se observaron en los embriones y larvas de pez cebra stomachless (Danio rerio
) [27]. México la estómago produce hormonas que intervienen tanto en la regulación del apetito y la digestión. La grelina es un ejemplo de una hormona que se produce principalmente en el estómago y actúa como un estimulador de la ingesta de alimentos [28, 29]. En los mamíferos, la grelina también se ha sugerido para estimular la secreción de ácido gástrico y la motilidad [30, 31]. La función de la grelina en larvas de peces aún es poco descrito, pero se ha propuesto como un indicador de la participación del estómago en la regulación del apetito en el desarrollo de los peces [32]. En fletán, la grelina
expresión génica aumenta durante el clímax de la metamorfosis, coincidiendo con el desarrollo de estómago [33]. La grelina es abundante en las glándulas gástricas en desarrollo y varios tejidos osmoregulatorias. Además, su co-expresión con Na
+
/K
+ -ATPasa

sugiere un posible papel en equilibrio hidromineral [34]. Sin embargo, el papel de la grelina en la regulación del apetito, la motilidad y la osmorregulación es desconocida, así como su vinculación con la función proteolítica y el depósito del estómago en el fletán durante la metamorfosis.
Este estudio tiene por objeto establecer el impacto de la agastric- transición gástrica en el papel funcional de la remodelación del tracto GI post-embrionario que se produce durante la metamorfosis en el fletán, una especie de peces planos de gran interés comercial para la industria de la acuicultura de Europa y América del Norte del Norte. Para correlacionar los cambios en el desarrollo del tracto gastrointestinal y establecer eventos vinculados a la metamorfosis TH-driven se construyó una serie de modelos en 3D de la organización morfológica y espacial de los órganos digestivos en las etapas de desarrollo representativos. Pusimos a prueba la hipótesis de que el desarrollo de las múltiples funciones del estómago es sincrónico y vinculado a su apariencia física en la metamorfosis. La función proteolítica del estómago se estudió in vivo usando
pH análisis combinado con los perfiles de expresión de los marcadores de genes específicos de H
+
/K
+ -ATPasa
α y β subunidad
Opiniones y pepsinógeno A2
mediante PCR cuantitativa (qPCR). llenado del estómago y la función de reservorio fueron evaluados por los estudios visuales en vivo
de las larvas transparentes en prometamorphosis y el clímax de la metamorfosis. El papel putativo de un estómago completamente funcional en la regulación del apetito se evaluó mediante la medición de la grelina
la abundancia de transcripción. El establecimiento de patrones de motilidad del tracto GI-durante el desarrollo se determinó in vivo
observaciones y la implicación del tracto gastrointestinal en la osmorregulación se evaluó midiendo la abundancia de Na
+
/K
+ -ATPasa
α
subunidad transcripciones.
resultados reconstrucción 3D de los órganos digestivos y modelos en 3D de la morfología del sistema digestivo durante el desarrollo fueron reconstruidos a partir de una serie de secciones histológicas. Ubicación y el tamaño del tracto gastrointestinal y sus órganos asociados, tales como el hígado, el páncreas endocrino y exocrino, y la vesícula biliar, se observaron desde la etapa 3 (antes de la primera alimentación) hasta que la fase de post-metamórficas 10 (Figura 1). Figura 1 La ontogenia de los órganos digestivos en larvas de fletán. modelos 3D fueron reconstruidos a partir de secciones histológicas de serie utilizando el software Imaris. Los órganos digestivos se muestran desde tres ángulos; izquierda, derecha y parte dorsal.
Flechas indican la dirección anterior (boca). Naranja
capa externa del tracto GI, España hígado rojo, verde
vesícula biliar, páncreas
púrpura, rosa
islotes pancreáticos, amarillo
de saco vitelino. color transparente se utiliza para el páncreas exocrino (púrpura
) con el fin de mostrar islotes de Langerhans (rosa
) y la vesícula biliar (verde
). México La tracto gastrointestinal incluye un intestino anterior estrecha (esófago y presuntiva estómago /estómago), intestino medio, y un corto intestino grueso (recto) (Figura 2). La región anterior del intestino medio, justo después del esfínter pilórico (PS), era más grande en diámetro, es decir, más voluminoso, en comparación con el resto del intestino medio. Esta característica se mantuvo durante tracto GI ontogenia (Figuras 1 y 2). Tanto PS (que separa el estómago presuntivo del intestino medio anterior) y del esfínter ileorrectal (que separa el intestino medio y el intestino posterior) se identificaron de la etapa 3 en adelante (figuras 1 y 2). apéndice pilórico se hizo evidente que las proyecciones de la parte más anterior del intestino medio en la etapa 6 (Figuras 1 y 2). El estómago fue bien diferenciado en la etapa 10 y las glándulas gástricas eran visibles en los cortes histológicos (archivo adicional 1). El volumen luminal del tracto gastrointestinal aumentado durante el desarrollo, sobre todo en las dos últimas etapas analizadas (estadios de 9A y 10) (Figura 3, Tabla 1 y la disposición 2). El volumen del estómago a partir de 9A a 10 aumentó desde 415 hasta 4.933 nl, respectivamente, y correspondía a un 11 incremento de veces (Tabla 1). Figura 2 La ontogenia del estómago presuntiva (azul claro transparente) y el lumen del tracto gastrointestinal (azul) en larvas de fletán. modelos 3D fueron reconstruidos a partir de secciones histológicas de serie utilizando el software Imaris. lumen del tracto GI está representada por la capa interna (dirigida a la luz) del tracto gastrointestinal. El tracto gastrointestinal se ve desde tres ángulos; izquierda, derecha, y el lado dorsal.
Flechas indican la dirección anterior (boca). Puntas de flecha
punto a la posición de los esfínteres (rojo: esfínter pilórico; negro: esfínter ileorrectal). st
presuntiva estómago /estómago, intestino medio
mg, hg
intestino posterior.
Figura 3 aumento de volumen estándar de los órganos digestivos entre la etapa (S) del 3 al 10 de fletán. El aumento de volumen se normalizó a la media global de aumento de volumen entre las etapas para cada tejido (para una explicación detallada, véase la disposición 2). Volumen sobre Table 1 tracto gastrointestinal órgano (NL) y la superficie (10 m 2 6)
Etapa 3 Etapa 4

Etapa 5 Etapa 6

Etapa 9A
Etapa 10

tracto GI-capa exterior (nl)
157.42
261,03 490,65

1.038,48 2.670,15

12.855,10
-tracto GI capa exterior (106 μm2)
capa interna
3,59 5,12 6,74

10,07
20.53 63.38

tracto gastrointestinal (nl)
78.40
136.84 266.55

525,89
1.034,10 6.451,16

capa interior del tracto GI-(106 μm2)
2,83 4,73

9.60
16.34
50.45 54.76

tejido del tracto gastrointestinal Volumea (nl)
79.02
124.19 224.10

512,59
1.636,05 6.403,94

hígado (nl)
35.24 48.82

98.18
225.23 928.25

4.232,77
páncreas (nl)
13.79 21.42

37.91
109.08 471.25

463,79
islotes de Langerhans (nl)
0,50
0,46 0,57

1.05 5.33

11,73
estómago presuntiva (nl)
15.51 27.29

32.06 84.09

414,54 4.932,67

los valores se calcularon a partir de los modelos 3D usando Imaris MeasurementsPro
volumen de tejido AGI-= tracto GI del tracto capa externa -.. capa interior del tracto GI-comentario el hígado se encuentra debajo del intestino anterior y anterior al bucle ascendente del intestino medio (Figura 1) y su volumen aumentó de forma constante durante el desarrollo (Figura 3 y Tabla 1). Se observó el páncreas exocrino entre el estómago de presunción y la parte anterior del intestino medio en la etapa 3 y rodeado esta zona del intestino medio a lo largo de la ontogenia (Figura 1). En el páncreas endocrino, se observó un islote de Langerhans claramente distinguible cerca de la vesícula biliar en la etapa 3 (Figura 1). En contraste con los otros órganos digestivos, el incremento en el volumen normalizado de endocrina y exocrina del páncreas fue baja y negativo, respectivamente, entre las etapas 9A y 10 (Figura 3 y Tabla 1). El saco vitelino, colocado debajo del tracto GI en la etapa 3, la disminución de tamaño después de la iniciación de la alimentación exógena y un pequeño vestigio mantuvo además el hígado en la etapa 4 (6 días después de la primera alimentación, dpff). Se observó la vesícula biliar en el lado derecho entre el páncreas exocrino y el hígado, y se mantiene esta posición en todas las etapas de desarrollo analizados (Figura 1). El conducto pancreático y el conducto biliar abierto junto a la otra en el lumen en el plano medio del intestino medio anterior, justo después de la PS (datos no mostrados).
Clonación y caracterización filogenética de pepsinógeno A2, la grelina, la bomba de protones gástrica subunidades y Na + /K + -ATPasa subunidad α comentario El secuencia de codificación completa (CDS) de fletán pepsinógeno A2
fue 1128 pb y se presentó al GenBank con el nº de acceso. KF184647 (archivo adicional 3: C). La secuencia de aminoácidos (AA) de pepsinógeno está relativamente bien conservada entre los peces teleósteos y, como se esperaba, más variable en comparación con otros pepsinógenos vertebrados. Por ejemplo, el fletán pepsinógeno A2 comparte respectivamente el 88% y el 64% de identidad de secuencia de AA con lenguado de invierno (Pseudopleuronectes americanus
) pepsinógeno Una forma IIb y IIa, pero sólo el 52% y el 48% de identidad con homólogos de Xenopus laevis y
humana, respectivamente (datos no mostrados). Empresas El fragmentos de ADNc clonados para fletán H
+
/K
+ -ATPasa
α subunidad gratis ( 911 pb) y Na
+
/K
+ -ATPasa
α subunidad gratis (714 pb) fueron depositados en GenBank con el KF184648 números de acceso y KF184650, respectivamente (archivo adicional 3: B, D). Los CDS de H
+
/K
+ -ATPasa
β subunidad Red de 874 pb se clonó y se presentó a GenBank con el nº de acceso. KF184649 (archivo adicional 3: A). El análisis filogenético de la subunidad α de la bomba gástrica de protones y Na + /K + - ATPasa, y homólogos de vertebrados (archivo adicional 4) genera dos grandes clados, uno correspondiente a H + /K + - ATPasa y el otro a Na + /K + - ATPasa. El análisis filogenético de la subunidad β (archivo adicional 5) genera un árbol con dos grandes clados que compartían la misma topología general que el phylotree para la subunidad α con el H + /K + - ATPasa y Na + /K + - ATPasa agrupado de forma independiente
fletán H + /K + -. ATPasa subunidad α agrupado más de cerca con los homólogos de teleósteos, con los que comparte el 94% de identidad de secuencia de AA, y aumentó a 98% de identidad con el lenguado de invierno y el bacalao del Atlántico (Gadus morhua
). Se encontró menor identidad secuencia de AA (72%) cuando Fletán H + /K + - ATPasa α subunidad se comparó con Fletán Na + /K + - ATPasa α subunidad (70 %) y con otros homólogos de vertebrados (72%). El Fletán Na + /K + - ATPasa subunidad α agrupado con un eelpout Antártico (pachycara brachycephalum
) homólogo (98%) y se comparte aproximadamente el 88% de identidad de AA con otros genes homólogos teleósteos. H + /K + - ATPasa subunidad β agrupado como se esperaba en el clado teleósteos (identidad global alrededor del 80%) y compartido más bien baja de identidad con su homólogo humano (50%). Fletán H + /K + - ATPasa subunidad β no ha dado más de un 39% de identidad de secuencia de AA con el fletán atlántico Na + /K + -. ATPasa subunidad β
patrón de expresión ontogénica y análisis de correlación Francia El desarrollo perfiles de expresión de pepsinógeno A2
, H
+
/K
+ -ATPasa
α Opiniones y β subunidades
, Na
+
/K
+ -ATPasa
α subunidad
y la grelina
fueron analizados por qPCR en el tracto gastrointestinal de las larvas de fletán individuo (Figura 4). La expresión de los genes de ambas subunidades de la bomba de protones gástrica fueron significativamente (p < 0,05; ajustado R 2: 0,773) se correlacionaron (Figura 5) y tenía una expresión paralela, con una fuerte y significativa (p < 0,05) incremento en el etapas post-metamórficas clímax y en la (Figura 4). Pepsinógeno A2
fue significativamente (p < 0,05) en correlación con el perfil de expresión de los gástricas α la bomba de protones (R 2 ajustado: 0,9738) y β (ajustado R 2: 0,7963) subunidades (Figura 5 ). Una significativa (p < 0,05) incremento durante la etapa 8 se observó para el pepsinógeno A2
y su expresión alcanzó su punto máximo en la etapa post-metamórficas. La grelina
la abundancia de transcripción de ARNm aumentó gradualmente y de manera significativa (p < 0,05) durante el proclimax /clímax de la metamorfosis, y alcanzó un máximo en la etapa post-metamórficas (Figura 4). Por otra parte, la grelina abundancia de transcripción y actividad proteolítica durante la ontogenia del tracto GI se correlacionaron significativamente (p < 0,05; ajustado R 2: 0,9342, 0,8852, 0,9252 para pepsinógeno A2, gástricos α la bomba de protones y las subunidades beta, respectivamente; véase la figura 5). La expresión de Na
+
/K
+ -ATPasa
α subunidad
se detectó ARNm en todas las etapas de desarrollo, con un número significativamente (p < 0,05) más transcripciones en la etapa 5. la Figura 4 la media de los patrones de expresión normalizada de las transcripciones de ARNm indicadas de larvas individuales (etapa 5-10). Resultados para pepsinógeno A2
precursor, gástrico H +

/K
+ -ATPasa
subunidad α y β

, Na +

/K
+ -ATPasa
subunidad α y la grelina

transcritos de ARNm se muestran como media ± SEM de la expresión normalizada (utilizando el gen eEF1A1 referencia). Los valores medios con letras diferentes son significativamente diferentes (One Way ANOVA, p < 0,05).
Figura 5 regresiones lineales estimadas a partir de los análisis de correlación entre los marcadores de genes específicos de estómago durante la ontogenia de fletán. Modelos de regresión lineal se ajustaron a log-transformado los valores de expresión de medias (EMN) de A) gástrica H +

/K
+ -ATPasa
α subunidad β subunidad Opiniones y
; B) pepsinógeno A2
y H +

/K
+ -ATPasa
β subunidad gratis (cuadrados negros y línea continua), así como H +

/K +

-ATPasa α subunidad
(puntos grises y línea discontinua); C) grelina
y H +

/K
+ -ATPasa
β subunidad gratis (cuadrados negros y línea continua), H +

/K
+ -ATPasa
α subunidad gratis (puntos grises y línea discontinua), así como pepsinógeno A2 gratis (triángulos de color gris claro y la línea de puntos). Todas las correlaciones son significativas (p < 0,05). La media log-transformado de MNE por etapa (5 a 10) fue tomada de seis individuos.
Estimación de pH en el lumen del estómago y la detección de la producción de ácido
La evaluación de pH en el lumen del estómago y del intestino medio /intestino posterior durante el desarrollo post-embrionario se basó en el color observado después de la inyección de las soluciones indicadoras de pH (Figura 6 y Tabla 2). El pH en el intestino medio /intestino posterior se mantuvo alcalina (por encima de pH 8) en todas las etapas de desarrollo analizados (etapa 5 a 9B). El estómago de presunción también tenía un pH alcalino con valores por encima de 7.5 hasta la etapa 8. Se observó acidificación gradual en las etapas correspondientes a la culminación de la metamorfosis. La transición de un alcalino a un pH ácido en el lumen del estómago fue evidente en 9A etapa, cuando el sol
RCP inyectada permaneció púrpura pero el sol
mCP dio una coloración amarilla (pH 6,5 - 7,5). El lumen del estómago era claramente en el intervalo ácido (pH < 3,5) en la etapa 9B, como se revela por el color amarillo en el estómago después de la administración de ambas soluciones BPB CPR y. Figura 6 cambios de pH en el tracto gastrointestinal de las larvas de fletán durante el desarrollo. Panel A: resultados de las soluciones indicadoras de pH alimentación por sonda en la larva de premetamorphosis (fase 5) para llegar al clímax metamorfosis (9A y 9B etapa). pH sol
mCP contenía 0,1% de m-cresol púrpura, sol
RCP consistió en 0,1% chlorphenol Roja y pH sol
BPB tenía el 1% de azul de bromofenol. st: dolor estomacal /estómago presunto; mg: intestino medio; hg: intestino posterior. Barra de escala = 0,5 mm. Panel B: normas sumergidas en agua y se fotografiaron con la condición de luz similar a las larvas bajo el microscopio de disección sobre Table 2 cambios de pH en el tracto gastrointestinal de las larvas de fletán en las distintas fases de la etapa

. Estómago
intestino medio /Intestino posterior
5 Hotel > 7,5 Hotel > 8,0 página 6 Hotel > 7,5 Hotel > 8,0 página 7
> 7,5 Hotel > 8,0 página 8 Hotel > 7,5 Hotel > 8,0
9A
6.5 a 7.5 Hotel > 8,0
9B
< 3,5 Hotel > 6,5
los valores de pH que se presentan se basan en observaciones visuales de los cambios de color después de la administración de las soluciones indicadoras de pH tres
Análisis de la motilidad-tracto gastrointestinal se observaron contracciones espontáneas que se propagan
. en el tracto gastrointestinal en prometamorphosis (etapa 6; 25 dpff) y el clímax de la metamorfosis (etapa 9A /B; 49 dpff) (Figura 7). Debido a considerable variación individual, número y frecuencia de las contracciones no podían ser agrupados y se presentan para cada individuo analizado (Tabla 3 y archivo adicional 6). Se observaron dos tipos de contracciones en la región del intestino medio 1 (MG1, después de que el PS, descendiendo parte del bucle) y 2 (Mg 2): fásica y la propagación de las ondas (archivo adicional 7). Las contracciones que se propagan observados en Mg2 eran olas retrógradas que se originaron en el área "A
" y se dirigió hacia la boca. Sin embargo, en la mayoría de MG1 las contracciones que se propagan originó justo debajo de la PS y eran ondas anterógrada que se movían en una dirección anal. Se detectó actividad de la motilidad en ambas regiones del intestino medio en la etapa 6 con una frecuencia que va desde 0,31 hasta 3,77 min -1, dependiendo del individuo y el tipo de contracción. En la etapa 9, se observaron relativamente pocas contracciones espontáneas de corta duración en el intestino medio. Durante el clímax de la metamorfosis, las contracciones en el estómago se registraron en todos los individuos, a diferencia de la etapa 6, cuando la motilidad en el estómago de presunción sólo se observó en una larva. La contracción rectal (o reflejo de la defecación) era una mezcla de las contracciones retrovirus y anterógrada y no se observaron en ambas etapas 6 y 9 con frecuencias similares en la mayoría de los individuos analizados. Figura 7 la motilidad del tracto gastrointestinal en las larvas de fletán en la etapa 6 y 9. retrógrada y anterógrada (movimientos de onda que se propagan las contracciones) se indica mediante una línea discontinua. Estas ondas se producen en la superficie A a B; y desde esfínter pilórico (representado por dos flechas rojas *) para la zona B y viceversa
. A y B representan las principales áreas en las que se producen contracciones fásicas. st: dolor estomacal /estómago presunto; MG1: región del intestino medio 1; Mg 2: región del intestino medio 2; hg: intestino grueso; r: área rectal. Barra de escala = 1 mm sobre Table 3 patrones de motilidad del tracto GI--. cuantificación
estómago intestino medio
1
intestino medio 2
Intestino posterior

área rectal
plantones
fásica
plantones
fásica
Larva
n
Frecuencia (min-1)
n
Frecuencia (min-1)
n
Frecuencia (min-1 )
n
Frecuencia (min-1)
n
Frecuencia (min-1)
n

Frecuencia (min-1)
n
Frecuencia (min-1) Etapa 6

1
-
-
14
2.31
50
1.69
57
1.84
79
3.54
13
1.46
161
5.24
2
-
-
26
1.81
-
-
95
3.77
12
0.44
15
0.54
3
0.22
3
17
0.56
5
0.31
4
0.24
28
1.66
77
3.01
-
-
96
3.22
4*
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
43
2.25
25
1.69
etapa 9
1
11
2.37
-
-
-
-
-
-
-
-
1
-
11
1.44
2
10
0.90
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
11
0.41
3
4
0.44
-
-
-
-
9
3.83
-
-
-
-
13
0.46
4
4
0.56
-
-
3
1.13
-
-
-
-
12
1.12
24
0.81
De reproducción y las contracciones fásicas se indican para las regiones del intestino medio y el intestino medio 1 2. La frecuencia es el número de contracciones registradas (n) por minuto.
* No es posible cuantificar las contracciones fásicas de onda y se propagan. Los segmentos del tracto digestivo afectados fueron constantemente (tónica) se contrajo durante todo el período de observación (véase la disposición 7).
Discusión En todas las especies altriciales-gástrica, el tracto gastrointestinal se remodela dramática durante la metamorfosis impulsado por TH . Los cambios en el tracto gastrointestinal de una forma tubular simple en una estructura plegada más complejo. Al mismo tiempo, el estómago se convierte en un compartimiento distinto y continúa para adquirir sus múltiples funciones a través de la metamorfosis. Hay sorprendentemente pocos estudios que examinan y la integración de los cambios anatómicos y funcionales en el tracto gastrointestinal asociado con este evento TH-conducido. En los anfibios tales como Xenopus
, está bien establecido que las HT inducen tracto gastrointestinal remodelación que conduce a un acortamiento intestinal y el desarrollo de las criptas y vellosidades [35-37]. Murray et al. [64]. [25].

• Relación entre la infección por H. pylori y las características clinicopatológicas y el pronóstico del cáncer gástrico
• Correlación entre HER-2 /neu (-2 erbB) nivel de expresión y el efecto terapéutico de tratamiento de combinación con HERCEPTIN® y agentes quimioterapéuticos en gástrico Correlación lines