modificações funcionais associadas organogênese trato gastrointestinal durante a metamorfose em alabote do Atlântico (Hippoglossus hippoglossus)

modificações funcionais associadas organogênese trato gastrointestinal durante a metamorfose em alabote do Atlântico (Hippoglossus hippoglossus
) da arte abstracta
Fundo
metamorfose Flatfish é um hormônio regulado pós-embrionário evento de desenvolvimento que transforma a larva simétrica em um juvenil assimétrica . Em peixes teleósteos altricial-gástrica, a diferenciação do estômago ocorre após o início da primeira alimentação, e durante a metamorfose dramáticas modificações moleculares e morfológicas do gastrointestinal ocorrer (GI) trato. Aqui nós apresentamos a ontogenia funcional do tracto gastrointestinal em desenvolvimento a partir de uma perspectiva integradora na alabote do Atlântico pleuronectiforme, e testar a hipótese de que as múltiplas funções do estômago teleósteos desenvolver de forma síncrona durante a metamorfose.
Resultados
início da função gástrica foi determinada com várias abordagens (anatômica, bioquímicas, moleculares e in vivo
observações). In vivo
análise de pH no lúmen do tracto gastrointestinal combinados com PCR quantitativa (qPCR) de α e beta sub-unidades da bomba de protões gástrica (H
+
/K
+
-ATPase
) e A2 pepsinogen
indicou que a capacidade proteolítica gástrica é estabelecida durante o clímax da metamorfose. Transcrição da abundância de grelina
, uma molécula de sinalização orexígeno putativo produzido no estômago em desenvolvimento, correlacionados (p < 0,05) com o surgimento de actividade proteolítica gástrica, sugerindo que o papel do estômago na regulação do apetite ocorre simultaneamente com o estabelecimento da função proteolítica . Uma série de modelos 3D do desenvolvimento GI-trato indicou um esfíncter pilórico funcionais antes da primeira mamada. Observações de larvas alimentadas in vivo
confirmou que função de reservatório de estômago foi estabelecida antes de metamorfose, e foi, portanto, independente deste evento. avaria mecânica de alimentação e transporte do quimo através do tracto gastrointestinal foi observada in vivo
e resultou de contrações fásicas e propagam bem estabelecidos antes de metamorfose. O número de contrações no intestino médio diminuiu em clímax metamórfica de forma síncrona com o estabelecimento da capacidade proteolítica do estômago e sua maior atividade peristáltica. competência osmorregulatório putativa do tracto gastrointestinal, inferida pela abundância de Na
+
/K
+
-ATPase α
transcrições, foi já estabelecido no início da alimentação exógena e foi não modificada pela metamorfose.
Conclusões
a especialização funcional do tracto gastrointestinal não era exclusivo de metamorfose, e sua função de capacidade e reservatório osmorregulatório foram estabelecidos antes da primeira mamada. No entanto, a produção de ácido e da capacidade proteolítica do estômago coincidiu com clímax metamórfica, e também marcou o início do envolvimento do estômago na regulação do apetite através de grelina.
Palavras-chave
Alabote do Atlântico bomba de protões gástrica trato gastrointestinal grelina Motilidade Na + /K + - ATPase Pepsinogen ontogenia pH do estômago fundo
As estratégias gastrointestinais divergente (GI) morfologia do aparelho e alimentação entre as fases de larva e adultos são adaptações fundamentalmente diferentes habitats e recursos alimentares [1]. A maturação pós-embrionário do sistema digestivo é um evento chave na história de vida dos vertebrados e essencial para a sobrevivência. metamorfose da hormona da tiróide (TH) impulsionado desempenha um papel crucial na maturação funcional do tracto gastrointestinal e na formação da sua morfologia para a forma adulta [2, 3]. Remodelação do tracto gastrointestinal de larva a adulto tem sido extensivamente estudada em Xenopus
[2, 4]. Neste organismo, o intestino é transformada sob a influência de THs de um longo tubo enrolado em um órgão complexo com um estômago e intestino delgado diferenciada [5, 6]. Isto envolve a proliferação epitelial e mesenquimal, espessamento do músculo liso e a formação de dobras intestinais. Vários estudos têm descrito os mecanismos celulares responsáveis ​​por esta remodelação em anfíbios [7, 8], mas pouco se sabe sobre o seu impacto sobre a função do tecido em vertebrados, especialmente as múltiplas funções integradas no estômago.
Uma característica marcante da metamorfose de vertebrados é a organogénese do estômago. Nas fases iniciais do desenvolvimento de peixes e anurans o estômago está frequentemente ausente e parte da sua função pode ser levada a cabo pelo intestino. As principais funções do estômago vertebrados são o armazenamento de alimentos ingeridos, a secreção de ácido clorídrico (HCl) e pepsinogen e avaria mecânica e mistura de alimentos com secreções gástricas [1, 9]. Assim, em larvas de espécies altriciais-gástrico, tais como o alabote do Atlântico, a ausência de um estômago limita a capacidade de digerir a proteína dietética quando a alimentação é iniciada exógeno [10-14]. Esta é uma das razões pelas quais a maioria dos estudos sobre o desenvolvimento tracto gastrointestinal durante a metamorfose têm-se centrado no desenvolvimento de estômago e considerar o aparecimento de glândulas gástricas como um indicador adequado de um estômago totalmente desenvolvido [15, 16]. No entanto, tornou-se claro que a identificação histológica de glândulas gástricas não indica que o estômago é totalmente funcional. Por isso, a função proteolítica do estômago é melhor indicado pela actividade da pepsina [11, 17] e pepsinogen
conteúdo [18]. Para entender melhor a eficiência do processamento digestivo durante a ontogenia dos peixes, vários estudos compararam os perfis de expressão de pepsinogen
ea bomba de protões gástrica (H
+
/K
+

-ATPase), localizado nas células secretoras oxynticopeptic HCl [19-22]. Murray et ai. [23] usaram histologia e pepsinogen
análise de transcrição para estudar a ontogenia do estômago em alabote do Atlântico e mostrou que a aparência em 66 dias pós-eclosão (DPH) de glândulas gástricas expressão de pepsinogênios A1 e A2
precederam
transcrições a 80 DPH. No entanto, o impacto da metamorfose em outras funções importantes do desenvolvimento estômago ou tracto gastrointestinal, em geral, tem sido largamente ignorada em peixes chatos.
Para além da produção de ácido e proteólise do estômago vertebrados também tem funções de reservatório. Após a ingestão, a lojas de estômago e predigests comida, em seguida, entrega o quimo para o intestino para a digestão e subsequente absorção de nutrientes [9]. A função de armazenamento do estômago alivia juvenil e adulta peixe da necessidade de alimentar constantemente como os estágios larvais stomachless. Estabelecimento do estômago como um reservatório requer esfíncteres funcionais (esôfago e piloro) e neural bem desenvolvido e camadas musculares lisas. A mistura mecânica e transporte de alimentos através do tracto gastrointestinal é conseguido por padrões de motilidade específicos e combinando o peristaltismo com a liberação de enzimas digestivas. Este processo desempenha um papel central no processamento de alimentos eficaz (ver revisão, [24]), embora muito poucos estudos têm como alvo os movimentos tracto gastrointestinal em larvas de peixes. A vantagem da utilização de larvas de peixes, tais como o alabote do Atlântico, é a sua transparência óptica, que é mantida até a metamorfose. Isto permite observações visuais diretos do tracto gastrointestinal e seus padrões de motilidade em animais vivos. Pittman et ai. [25] relataram contrações peristálticas em larvas de alabote do Atlântico, no intestino anterior a 35 DPH. No juvenil Alabote do Atlântico GI-trato tanto anterógrada (propagação na direção anal) e retrógrada (propagação na direção oral) ondas de contração foram descritos [26], e padrões idênticos foram também observadas em embriões e larvas de peixe-zebra stomachless (Danio rerio
) [27].
o estômago produz hormônios envolvidos tanto na regulação do apetite e digestão. A grelina é um exemplo de uma hormona que é produzida principalmente no estômago e actua como um estimulador de ingestão de alimentos [28, 29]. Nos mamíferos, a grelina também tem sido sugerida para estimular a secreção ácida gástrica e motilidade [30, 31]. A função da grelina em larvas de peixes ainda é pouco descrita, mas tem sido proposta como um indicador do envolvimento do estômago na regulação do apetite no desenvolvimento de peixe [32]. Em alabote do Atlântico, a grelina
de expressão de genes aumenta durante o clímax da metamorfose, coincidindo com o desenvolvimento do estômago [33]. A grelina é abundante nas glândulas gástricas em desenvolvimento e vários tecidos osmorregulatórios. Além disso, a sua co-expressão com Na
+
/K
+
-ATPase
sugere um papel putativo em equilíbrio hidromineral [34]. No entanto, o papel da grelina na regulação do apetite, motilidade e osmorregulação é desconhecida, bem como sua ligação com a função proteolítica e do reservatório do estômago em alabote do Atlântico durante a metamorfose.
Este estudo visa estabelecer o impacto da agastric- gástrica sobre o papel funcional da remodelação tracto gastrointestinal pós-embrionário que ocorre durante a metamorfose em alabote do Atlântico, uma espécie de peixes chatos de elevado interesse comercial para o Norte da indústria europeia e norte-americana aquicultura. Para mapear as mudanças no desenvolvimento GI-trato e estabelecer eventos ligados à metamorfose TH-driven construiu-se uma série de modelos 3D da organização morfológica e espacial dos órgãos digestivos em estágios de desenvolvimento representativas. Testamos a hipótese de que o desenvolvimento das várias funções do estômago é síncrono e ligada à sua aparência física na metamorfose. A função proteolítica do estômago foi estudada usando in vivo
pH analisa combinados com perfis de marcadores de genes específicos H expressão
+
/K
+
-ATPase α Comprar e β subunidade Comprar e A2 pepsinogen
usando PCR quantitativo (qPCR). enchimento estômago e função de reservatório foram avaliadas por in vivo
estudos visuais das larvas transparente em prometamorphosis e clímax da metamorfose. O suposto papel de um estômago totalmente funcional na regulação do apetite foi avaliada medindo a grelina
abundância transcrição. O estabelecimento de padrões de motilidade GI-trato durante o desenvolvimento foi determinada por in vivo
observações e o envolvimento do tracto gastrointestinal em osmoregulação foi avaliada medindo a abundância de Na
+
/K
+
-ATPase α
subunidade transcrições.

resultados da reconstrução 3D dos órgãos digestivos
modelos 3D da morfologia do sistema digestivo durante o desenvolvimento foram reconstruídos a partir de uma série de cortes histológicos. Localização e tamanho do tracto gastrointestinal e seus órgãos associados, tais como fígado, pâncreas endócrino e exócrino, e da vesícula biliar, foram observadas a partir da fase 3 (antes da primeira alimentação) até o pós-metamórfica estágio 10 (Figura 1). Figura 1 ontogenia dos órgãos digestivos em larvas de alabote do Atlântico. modelos 3D foram reconstruídas a partir de cortes histológicos de série usando software Imaris. Os órgãos digestivos são mostrados a partir de três ângulos; esquerda, direita e do lado dorsal. Setas
indicam a direção anterior (boca). Laranja
camada externa do tracto gastrointestinal,
fígado vermelho, verde
vesícula biliar, roxo
pâncreas,
rosa ilhotas de Langerhans,
amarelo do saco vitelino. cor transparente é usado para pâncreas exócrino (roxo
), a fim de mostrar ilhotas de Langerhans (rosa
) e da vesícula biliar (verde
).
O GI-trato inclui um foregut estreita (esôfago e presuntivo estômago /barriga), intestino, ea uma curta intestino grosso (reto) (Figura 2). A região anterior do intestino médio, apenas após o esfincter pilórico (PS), foi maior em diâmetro, isto é, mais volumoso, em comparação com o resto do intestino médio. Esta característica foi mantida durante a ontogenia tracto gastrointestinal (Figuras 1 e 2). Ambos PS (que separa o estômago presuntivo do intestino anterior) e esfíncter ileorectal (que separa intestino médio e intestino posterior) foram identificados a partir da fase 3 e seguintes (Figuras 1 e 2). cego pilórico tornou-se evidente como projeções da parte mais anterior do intestino médio na fase 6 (Figuras 1 e 2). O estômago foi bem diferenciado na fase 10 e as glândulas gástricas eram visíveis nos cortes histológicos (arquivo adicional 1). O volume luminal do tracto gastrointestinal aumentada durante o desenvolvimento, particularmente nas duas últimas etapas analisadas (estágios 9A e 10) (Figura 3, Tabela 1 e arquivo adicionais 2). O volume do estômago de 9A a 10 aumentou 415-4933 nl, respectivamente, correspondendo a um incremento de 11 vezes (Quadro 1). Figura 2 ontogenia de estômago presuntivo (luz azul transparente) e lumen GI-trato (azul) em larvas de alabote do Atlântico. modelos 3D foram reconstruídas a partir de cortes histológicos de série usando software Imaris. lúmen do tracto GI é representada por a camada interna (virada para o lúmen) do tracto gastrointestinal. O tracto gastrointestinal é visto a partir de três ângulos; esquerda, direita, e do lado dorsal. Setas
indicam a direção anterior (boca). Arrow cabeças
ponto para a posição de esfíncteres (vermelho: esfíncter pilórico; preto: esfíncter ileorectal). st
presuntivo estômago /estômago, intestino mg
, hg
hindgut.
Figura 3 aumento de volume padronizada dos órgãos digestivos entre fase (S) 3 a 10 de alabote do Atlântico. O aumento de volume foi normalizado para a média global de aumento de volume entre as fases para cada tecido (para uma explicação detalhada, consulte arquivo adicionais 2). O volume
Tabela 1 GI-trato órgão (nl) e área de superfície (10 6 mm 2)
Fase 3
Stage 4
Stage 5
Stage 6
Stage 9A
Stage 10

GI-trato camada externa (nl)
157,42
261,03
490,65
1.038,48
2.670,15
12.855,10
camada exterior tracto gastrointestinal (106 um2)
camada interna 3,59
5,12
6,74
10,07
20,53
63,38
tracto gastrointestinal (nl)
78,40
136,84
266,55
525,89
1.034,10
6.451,16
GI-trato camada interna (106 um2)
2,83
4,73
9,60
16,34
50,45
54,76
tecido tracto gastrointestinal volumea (nl)
79,02
124,19
224,10
512,59
1.636,05
6.403,94
fígado (nl)
35,24
48,82
98,18
225,23
928,25
4.232,77
Pâncreas (nl)
13,79
21,42
37,91
109,08
471,25
463,79
ilhotas de Langerhans (nl)
0,50
0,46
0,57
1,05
5,33
11,73
estômago presuntivo (nl)
15,51
27,29
32.06
84,09
414,54
4.932,67
os valores foram calculados a partir dos modelos 3D usando Imaris MeasurementsPro
volume de tecido AGI-trato = GI-trato camada exterior -.. camada interna GI-trato
o fígado foi posicionado sob a intestino anterior e anterior ao circuito ascendente do intestino (Figura 1) e o seu volume aumentado constantemente durante o desenvolvimento (Figura 3 e Tabela 1). Observou-se o pâncreas exócrino entre o estômago presuntivo e a parte anterior do intestino médio na fase 3 e rodeado nesta área do intestino médio ao longo da ontogenia (Figura 1). No pâncreas endócrino, uma ilhota de Langerhans claramente distinguível foi observada perto da vesícula biliar no estádio 3 (Figura 1). Em contraste com os outros órgãos digestivos, o incremento do volume normalizado de endócrina e exócrina do pâncreas foi baixa e negativa, respectivamente, entre as fases 9A e 10 (Figura 3 e Tabela 1). O saco vitelino, posicionada sob o tracto gastrointestinal no estágio 3, diminuíram de tamanho após o início da alimentação exógena e um pequeno vestígio permaneceu além do fígado no estágio 4 (6 dias após a primeira alimentação, dpff). A vesícula biliar foi observada no lado da mão direita entre o pâncreas exócrino e o fígado, e mantida nesta posição em todos os estádios de desenvolvimento analisados ​​(Figura 1). O ducto pancreático e do ducto biliar aberto ao lado do outro no lúmen no plano mediano do intestino anterior, logo após a PS (dados não mostrados).
Clonagem e caracterização filogenética de pepsinogénio A2, grelina, da bomba de protões gástrica subunidades e Na + /K + -ATPase subunidade α
a sequência de codificação completa (CDS) de alabote do Atlântico pepsinogen A2
era 1128 pb e foi submetido a GenBank sob o nº de acesso. KF184647 (arquivo adicionais 3: C). A sequência de aminoácidos (AA) de pepsinogénio é relativamente bem conservado entre os peixes teleósteos e, como esperado, mais variável, quando em comparação com outros pepsinogênios vertebrados. Por exemplo, alabote pepsinogen A2 compartilhada, respectivamente, 88 64% identidade de sequência de AA% e com solha de inverno (Pseudopleuronectes americanus
) pepsinogen Uma forma IIb e IIa, mas apenas 52% e 48% de identidade com homólogos de Xenopus laevis Comprar e humana, respectivamente (dados não mostrados).
Os fragmentos de cDNA clonados para alabote do Atlântico H
+
/K
+
-ATPase α subunidade
( 911 pb) e na
+
/K
+
-ATPase α subunidade
(714 pb) foram depositados no GenBank com os números de acesso KF184648 e KF184650, respectivamente (arquivo adicionais 3: B, D). Os CDS para H
+
/K
+
-ATPase β subunidade
de 874 bp foi clonado e submetido ao GenBank com a adesão não. KF184649 (arquivo adicionais 3: A). A análise filogenética da subunidade α da bomba gástrica de protões e Na + /K + - ATPase, e homólogos de vertebrados (arquivo adicional 4) gerou dois clados principais, um deles correspondendo a H + /K + - ATPase e outro para na + /K + - ATPase. A análise filogenética da subunidade β (arquivo adicionais 5) gerado uma árvore com dois clados principais que compartilham a mesma topologia geral como o phylotree para a subunidade α com o H + /K + - ATPase e Na + /K + - ATPase agrupados de forma independente
alabote do Atlântico H + /K + -. ATPase α subunidade agrupado mais estreitamente com homólogos teleósteos, com o qual compartilhados 94% identidade de sequência de AA, e aumentou para 98% de identidade com solha inverno e bacalhau do Atlântico (Gadus morhua
). identidade Lower sequência de AA (72%) foi encontrada quando Alabote do Atlântico H + /K + - ATPase α subunidade foi comparada com a Atlantic halibut Na + /K + - ATPase α subunidade (70 %) e outros homólogos de vertebrados (72%). The Atlantic halibut Na + /K + - ATPase subunidade α agrupado com uma eelpout Antarctic (Pachycara brachycephalum
) homólogo (98%) e compartilhou aproximadamente 88% de identidade de AA com outros homólogos de genes teleósteos. H + /K + - ATPase subunidade β agrupado conforme o esperado dentro do clade teleósteos (identidade global de cerca de 80%) e partilhada bastante baixa identidade com o seu homólogo humano (50%). Alabote do Atlântico H + /K + - subunidade β ATPase não compartilham mais de 39% identidade de sequência de AA com a Atlantic halibut Na + /K + -. ATPase β subunidade
padrão de expressão ontogenética e análise de correlação
Os perfis de expressão do desenvolvimento da pepsinogen A2
, H
+
/K
+
-ATPase α Comprar e β subunidades
, na
+
/K
+
-ATPase α subunidade Comprar e grelina
foram analisadas por qPCR no tracto gastrointestinal de larvas de alabote do Atlântico indivíduo (Figura 4). A expressão gênica de ambas as subunidades da bomba de protões gástricas foram significativamente (p < 0,05; ajustado R 2: 0,773) correlacionaram (Figura 5) e tinham padrões de expressão paralelas, com uma acentuada e significativa (p < 0,05) aumento na estágios de pós-metamórficos clímax e em (Figura 4). Pepsinogênio A2
foi significativamente (p < 0,05) com o perfil de expressão das α bomba de protões gástrica (ajustado R 2: 0,9738) e β (ajustado R 2: 0,7963) subunidades (Figura 5 ). A significativa (p < 0,05) aumento durante o estágio de 8 foi observado para pepsinogen A2
e sua expressão atingiu o pico na fase pós-metamórfica. A grelina
mRNA transcrito abundância aumentada gradualmente e de forma significativa (p < 0,05) durante o proclimax /clímax da metamorfose, e atingiu um máximo na fase pós-metamórfica (Figura 4). Além disso, a grelina transcrição abundância e atividade proteolítica durante a ontogenia tracto gastrointestinal foram significativamente correlacionados (p < 0,05; ajustado R 2: 0,9342, 0,8852, 0,9252 para pepsinogen A2, α da bomba de protões gástricas e subunidades p, respectivamente; veja a Figura 5). Expressão de Na
+
/K
+
-ATPase α subunidade
mRNA foi detectada em todos os estágios de desenvolvimento, com significativamente (P < 0,05) mais transcrições na fase 5. a Figura 4 a média de padrões de expressão normalizada dos transcritos de mRNA indicadas de larvas indivíduo (estágio 5-10). Resultados para pepsinogen A2
precursor, gástrica H
+
/K +

-ATPase subunidade α Comprar e β
, Na
+
/K

+ -ATPase subunidade α
e grelina
transcritos de ARNm estão apresentados como média ± EPM da expressão normalizada (usando o eEF1A1 gene de referência). Os valores médios com letras diferentes são significativamente diferentes (One Way ANOVA, p < 0,05).
Figura 5 regressões lineares estimados a partir de análises de correlação entre os marcadores de genes específicos de estômago durante Atlântico ontogenia alabote. Modelos de regressão linear foram ajustados para log-transformada valores de expressão médios (MNE) do A) gástrica H
+
/K +

-ATPase α subunidade Comprar e subunidade β
; B) pepsinogen A2 Comprar e H
+
/K +

-ATPase β subunidade
(quadrados pretos e linha sólida), bem como H
+
/K +

-ATPase subunidade α
(pontos cinzentos e linha pontilhada); C) grelina Comprar e H
+
/K +

-ATPase subunidade β
(quadrados pretos e linha sólida), H
+
/K
+
-ATPase α subunidade
(pontos cinzentos e linha tracejada), bem como pepsinogênio A2
(triângulos cinza claro e linha pontilhada). Todas as correlações são significativas (p < 0,05). A média log-transformada de EMN por etapa (5 a 10) foi feita a partir de seis indivíduos.
Estimativa de pH no lúmen do estômago e a detecção da produção de ácido
A avaliação do pH no lúmen do estômago e do intestino médio /intestino posterior durante o desenvolvimento pós-embrionário foi baseada na cor observada após a injecção de soluções de indicador de pH (Figura 6 e Tabela 2). O pH no intestino médio /intestino grosso permaneceu alcalino (acima de pH 8) em todas as fases de desenvolvimento analisados ​​(estádio de 5 a 9B). O estômago presuntivo também tinha um pH alcalino com valores acima de 7.5 até o estágio foi observada 8. acidificação Gradual nas fases correspondentes ao clímax da metamorfose. Transição de uma alcalina a um pH ácido no lúmen do estômago foi evidente em 9A fase, quando o sol
CPR injetado permaneceu roxo, mas o sol
MCP deu uma coloração amarela (pH 6,5 - 7,5). O lúmen do estômago estava claramente na gama ácida (pH < 3,5) na fase 9B, como revelado pela cor amarelo no estômago, após a administração de ambas as soluções BPB e RCP. Figura 6 mudanças de pH no tracto gastrointestinal de larvas de alabote do Atlântico durante o desenvolvimento. Painel A: resultados de soluções indicadoras de pH para alimentação por tubos em larva de premetamorphosis (estágio 5) ao clímax metamorfose (9A e 9B fase). pH sol
MCP continha 0,1% de M-Cresol roxo, sol
CPR consistia em 0,1% chlorphenol Vermelho e pH sol
BPB tinha 1% de azul de bromofenol. st: estômago estômago /presuntivo; mg: intestino médio; hg: hindgut. Barra de escala = 0,5 mm. Painel B: padrões imersos em água e fotografados com a condição de luz semelhante como larvas sob o microscópio de dissecação
Tabela 2 mudanças de pH no tracto gastrointestinal de larvas de alabote do Atlântico, em diferentes estágios de desenvolvimento
Stage
. estômago
intestino médio /intestino posterior
5 Restaurant > 7,5 Art > 8,0
6 Art > 7,5 Art > 8,0
7
> 7,5 Art > 8,0
8 Restaurant > 7,5 Art > 8,0
9A
6,5-7,5 Art > 8,0
9B
< 3,5 Art > 6,5
os valores de pH apresentados são baseados em observações visuais de alterações de cor após a administração de soluções indicadoras de três pH
Análise da motilidade GI-trato foram observadas contrações propagação
espontânea. no tracto gastrointestinal em prometamorphosis (fase 6; 25 dpff) e clímax da metamorfose (estágio 9A /B; 49 dpff) (Figura 7). Devido à variação individual considerável, número e freqüência das contrações não puderam ser agrupados e são apresentados para cada indivíduo analisado (Tabela 3 e arquivo adicionais 6). Foram observados dois tipos de contrações na região do intestino médio 1 (mg1; após o PS, descendente parte do ciclo) e 2 (Mg2): fásicas e propagação das ondas (arquivo adicional 7). As contrações propagação observados em Mg2 eram ondas retrógradas que se originaram na área "A
" e mudou-se para a boca. No entanto, em mg1 mais das contracções de propagação originaram apenas sob o PS e foram ondas anterógradas que movidos numa direcção Anal. Motilidade actividade em ambas as regiões do intestino médio foi detectado na fase 6 com uma frequência que varia 0,31-3,77 min -1, dependendo do indivíduo e do tipo de contracção. Na etapa 9, relativamente poucos contracções espontâneas de curta duração foram observadas no intestino médio. Durante o clímax da metamorfose, contrações no estômago foram registrados em todos os indivíduos, em contraste com a fase 6, quando a motilidade no estômago presuntivo foi observada apenas em uma larva. A contração rectal (ou reflexo de defecação) era uma mistura de contrações retrovírus e anterógradas e foram observados em ambas as etapas 6 e 9 com frequências semelhantes na maioria dos indivíduos analisados. Figura motilidade 7 tracto gastrointestinal em larvas de alabote do Atlântico na fase 6 e 9. retrógrada e movimentos onda anterógrada (propagando contrações) são indicados por uma linha tracejada. Estas ondas ocorrer a partir da área A para B; e de esfíncter pilórico (representado por duas setas vermelhas *) para a área B e vice-versa
. A e B representam as principais áreas onde ocorrem contrações fásicas. st: estômago estômago /presuntivo; mg1: região do intestino médio 1; Mg2: região do intestino médio 2; hg: hindgut; r: área retal. Barra de escala = 1 milímetro
Tabela 3 GI-trato padrões de motilidade -. quantificação
estômago
intestino 1
intestino médio 2
intestino posterior

área retal
Propagação
Phasic
Propagação
Phasic
Larva
n
Frequência (min-1)
n
Frequência (min-1)
n
Frequência (min-1 )
n
Frequência (min-1)
n
Frequência (min-1)
n

Frequência (min-1)
n
Frequência (min-1)
Stage 6
1
-
-
14
2.31
50
1.69
57
1.84
79
3.54
13
1.46
161
5.24
2
-
-
26
1.81
-
-
95
3.77
12
0.44
15
0.54
3
0.22
3
17
0.56
5
0.31
4
0.24
28
1.66
77
3.01
-
-
96
3.22
4*
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
43
2.25
25
1.69
fase 9
1
11
2.37
-
-
-
-
-
-
-
-
1
-
11
1.44
2
10
0.90
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
11
0.41
3
4
0.44
-
-
-
-
9
3.83
-
-
-
-
13
0.46
4
4
0.56
-
-
3
1.13
-
-
-
-
12
1.12
24
0.81
Propagação e fásicas contrações são indicados para as regiões do intestino médio 1 e midgut 2. A frequência é o número de contracções registadas (n) per min.
* Não possível quantificar contrações onda fásicas e propagação. Os segmentos tracto gastrointestinal afetados foram constantemente (tônica) contraída durante todo o período de observação (ver arquivo adicionais 7).
Discussão Online em todas as espécies altricial-gástrica, o GI-trato sofre remodelação dramática durante a metamorfose TH-driven . As mudanças GI-trato de uma forma tubular simples em uma estrutura dobrada mais complexa. Ao mesmo tempo que o estômago se torna um compartimento distinto e continua a adquirir as suas múltiplas funções através de metamorfose. Há surpreendentemente poucos estudos que examinam e integrando as alterações anatômicas e funcionais no tracto gastrointestinal associada a esse evento-driven TH. Em anfíbios, como Xenopus
, é bem estabelecido que HTs induzir GI-trato remodelação levando ao encurtamento intestinal eo desenvolvimento de criptas e vilosidades [35-37].

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