Inaktivácia Bacillus cereus vegetatívnych buniek žalúdočnej kyseliny a žlče počas in vitro tráviacom transit

inaktiváciu Bacillus cereus
vegetatívnych buniek žalúdočnej kyseliny a žlče počas in vitro
gastrointestinálneho tranzitu
abstraktné
pozadia
alimentárnou patogén Bacillus cereus
môže viesť k otrave hnačkové produkciou enterotoxínov v tenkom čreve. Predpokladom pre hnačkových ochorení je teda prežitie v zažívacom priechodu.
Metódy
vegetatívny bunky 3 rôznych B. cereus
kmene boli kultivované v potravinovej matrice v reálnom kompozitu, lasagne verde, a ich prežitie počas následného simuláciu gastrointestinálne pasáž bola hodnotená za použitia in vitro
experimenty simulujúce prejazd hornej časti ľudského tráviaceho traktu (od úst k tenkého čreva).
Výsledky
žiadne pozorované prežitie vegetatívnych buniek, a to napriek vysokým úrovniam inokula 7,0 až 8,0 log KTJ /g a prítomnosť rôznych potenciálne ochranných zložiek potravy. Významné frakcie (cca. 10% spotrebovanej inokula) z B. cereus
vegetatívnych buniek prežiť žalúdočnej priechod, ale boli následne inaktivovaná vystavením žlčové v slabo kyslom intestinálnom médiu (pH 5,0). Na rozdiel od toho nízky počet spór prítomných (až do 4,0 log spor /g) vykazovala vynikajúce prežitie a zostali životaschopné spóry v celom zažívacom priechod simulácie.
Záver
vegetatívny bunky sú inaktivuje pôsobením žalúdočnej kyseliny a žlče pri priechode gastrointestinálnom , zatiaľ čo spóry sú odolné a prežiť. Z tohto dôvodu je fyziologická forma (vegetatívny bunky alebo spory) z B. cereus
spotrebovanú určuje následný gastrointestinálne prežitie, a tým aj infekčná dávka, ktorá by mala byť oveľa nižšia ako pre spóry vegetatívnych buniek. Žiadne významné rozdiely v tráviacom schopnosti prežitia bol nájdený medzi jednotlivými kmeňmi. Avšak, značná variabilita kmeňa bol pozorovaný u sporulácia tendenciu počas rastu v laboratórnej strednej a potravín, ktorá má významné dôsledky pre gastrointestinálne prežitie potenciálu kmeňov rôznymi B. cereus
.
Kľúčové
Bacillus cereus
bile In vitro
simulácie gastrointestinálne pasáž pozadia
B. cereus
môže spôsobiť dávidlo a hnačkových a otravu jedlom produkciou resp. dávivý (cereulide) a hnačkové toxíny (non-hemolytická enterotoxínu (NHE), hemolysinu BL (HBL), cytotoxin K (CytK), atď.) [1]. Na rozdiel od veľmi stabilný toxín cereulide, enterotoxíny ľahko degradované kyseliny a tráviacich enzýmov (proteázy), a tým aj vopred vytvorené enterotoxíny v potravinách nie je zachovať ich toxicita počas gastrointestinálne pasáže [2]. Preto je predpokladom pre hnačkových otravy jedlom je enterotoxínu výroby B. cereus
v tenkom čreve, takže bol skúmaný gastrointestinálne prežitie vegetatívneho B. cereus
. Už skôr bolo ukázané, že cca. 10% z vegetatívnych buniek prežila žalúdočné pasáž [3]. Ďalšie, prežívajúce baktérie sú konfrontované s žlče v lumen dvanástnika, proximálnej časti tenkého čreva.
Bile sa skladá hlavne z žlčových kyselín (približne 72% z celkového množstva lipidov), okrem fosfolipidov (cca. 24% ) a cholesterol (cca. 4%) [4]. U ľudí, žlčové kyseliny sa skladajú predovšetkým z kyseliny cholánovej (medzi 50% a 80%) a kyseliny chenodeoxycholovej (medzi 20% a 50%) [5, 6]. Sú syntetizované v pečeni z cholesterolu a konjugované s glycínom (cca. 75%), alebo taurín (cca. 25%), s pomerom konjugácia v závislosti na diéte okrem iných faktorov [6, 7]. Sekrécia žlče sa spúšťa uvoľňovanie tukov a kyseliny zo žalúdka do duodena, čo má za následok 7 až 15 mM soli žlčových kyselín v tenkom čreve po jedle, čo zodpovedá 5 do 10 g /l Oxgall [7-10]. Dekonjugácii žlčových kyselín podľa pôvodných črevných baktérií sa vyskytuje hlavne v distálnom ileu, kde cca. 95% žlčových kyselín sa vstrebáva, z toho cca. 15% je nekonjugovaný [7, 10]. Obe konjugovaného a nekonjugovaného žlčové kyseliny sú absorbované pasívne difúziou pozdĺž celého čreva, ale tento proces je účinnejší pre nekonjugovaných žlčových kyselín. Okrem toho, špecifické aktívne dopravné systémy sú prítomné v distálnom ileu, ktoré sú účinnejšie v vychytávania konjugovanými žlčových kyselín. Po absorpcii z čriev, žlčových kyselín sú transportované do pečene prostredníctvom krvi, reconjugated a znova vylučujú do žlče močového mechúra. Tento proces recyklácie žlčových kyselín sa nazýva enterohepatálnej cirkulácie.
Fyziologickú rolu žlčových kyselín je pre zvýšenie rozpustnosti tukov v potrave a uľahčujú jeho degradácii a absorpciu. Vzhľadom na ich vlastnostiam detergentov, žlčové kyseliny tiež zmeniť bunkovej membrány, a tak majú cytotoxické a baktericídne účinky, znateľné zvýšením tekutosti membrány a priepustnosti [11-14]. V závislosti od koncentrácie žlče, narušenie integrity bunkovej membrány dôjde takmer okamžite, čo spôsobuje presakovanie a bunkovú smrť, alebo viac pomaly a jemne zmenou permeability membrány a plynulosť, činnosť kritických proteínov v bunkovej membráne a membrána hydrofobicity [15 ]. Okrem zničenie baktérií integrity bunkovej membrány, žlč tiež indukuje poškodenie DNA, denaturácia a misfolding proteínov, čo vedie k smrti baktérie [16].
Gram-pozitívne baktérie majú tendenciu byť viac citlivé na žlč, ako Gram negatívne baktérie, ale tolerancia žlčových je veľmi podľa kmeňa špecifický, takže zovšeobecnené závierka za druhy nie sú možné [17 až 19]. Napriek baktericídne účinky žlče, niektoré mikroorganizmy vyvinuli rezistenciu žlče indukciou žlče metabolizujúcich enzýmov a dopravných systémov alebo zmenou priepustnosti membrány, plynulosť alebo poplatok. Niektoré črevných patogénov dokonca môže závisieť na žlče ako hostiteľská signál pre reguláciu virulencie. Napríklad Salmonella typhimurium enterica sérovar má nešpecifické efluxnej pumpy AcrAB pre odstránenie žlčových ciest a dopravy cez vonkajšej membrány [20]. Okrem toho, invázia epiteliálnych buniek hostiteľa touto baktériou je vyvolaná zníženým koncentrácia v žlči, takže po prechode do distálneho ilea, alebo do vrstvy slizu [21].
Co-jedle je dôležitým faktorom v antibakteriálne aktivita žlče v črevách. Žlč inaktivácia baktérií je ovplyvnená prítomnosťou zložky potravy, ktoré môžu vytvárať ochranné mikroprostredie alebo viaže žlčové. Napríklad maximálna koncentrácia žlčových tolerované B. cereus
počas rastu v črevnom médiu bola 3 g /l prasacej žlč, kedy bola doplnená hrachová polievka, zatiaľ čo iba 0,9 g /l a 0,6 g /l žlče boli tolerované v prítomnosti mlieka a absencii potravy, respektíve [22]. Aj pre Lactobacillus curvatus, prítomnosť potravinárske matrice, a to mäso, zvýšil toleranciu žlče a následne jeho gastrointestinálne prežitie [23]. Podobne, tolerancia žlč Bifidobacterium breve bola zvýšená sójové proteíny [24].
V tejto štúdii, gastrointestinálne prežitie vegetatívneho B. cereus
buniek bola skúmaná a je spojená s baktericídne role žlče. B. cereus
očkovacej látky sa kultivuje v zloženom potravinovej matrice lasagne verde pred in vitro
simulácie v gastrointestinálneho priechodu, aby zahŕňala prípadné ochranný účinok potravinárskych častíc na gastrointestinálne prežitie B. cereus
.
materiály a metódy
B. cereus
kmeňov, kultiváciu a stanovenie
B. cereus
kmene ATCC 14579, NVH 1230-88 a FF 73 (tabuľka 1) boli kultivované a následne subkultivovať v 10 ml tryptón Soya Broth (TSB, Oxoid) počas 24 hodín pri teplote 30 ° C. Po centrifugácii a resuspendovaného v 1 ml roztoku Physiological Peptón Salt (PPS, 8,5 g /l NaCl (Fluka) a 1 g /l neutralizovaný bakteriologického peptónu (Oxoid)), 830 ul subkultúry sa naočkuje na 83 g lasagne verde (zakúpený v supermarketu) v miešačke sáčkov a inkubujú po dobu 24 hodín pri teplote 22 ° C. Retail lasagne verde bol zakúpený v miestnom supermarkete, ktorý obsahoval v priemere o 4,7 log CFU /g celkom baktérie (štandardná odchýlka 1,3 log KTJ /g, analýza z 11 rôznych výrobkov v priebehu 6 mesiacov) a ≤ log 2,0 CFU /g B . cereus
. Priemerná hodnota pH tohto potravinárskeho produktu bola 5,52 (štandardná odchýlka ± 0,06) .Table 1 simulácie gastrointestinálneho priechodu sa vykonáva pomocou troch rôznych kmeňov B. cereus: typ kmeňa B. cereus ATCC 14579, klinický izolát B. cereus NVH 1230 -88 z hnačkové vypuknutia otravy jedlom a jedlo izoláte B. cereus FF 73 z príslušného potravinovej matrice, a síce lasagne verde
B. cereus kmeň
Origin
Mininal teploty rastu ( ° C)
HBL výroba
výroby NHE
ATCC114579
typ kmeňa Hotel > 10
+
+
NVH2 1230 -88
klinickej (ľudské výkaly)
8
+ -
FF3 73
potraviny (lasagne verde)
10
+
+
1ATCC = American Type Culture Collection, USA; 2NVH = Norwegian School of Veterinary Science, Oslo, Nórsko; 3FF = Flámska Food Collection, Belgicko.
Celkový počet a B. cereus
počet bol stanovený nanesením vhodných roztokov v PPS na tryptón Soya Agar (TSA) a agaru Manitol-Vaječný žĺtok-polymyxínu B (MYP ,., v uvedenom poradí koncentrácia spor bola stanovená nanesením po zahriatí na 80 ° C počas 10 minút
In vitro
simulácie gastrointestinálneho priechodu
dynamický gastrointestinálneho simulačného experimentu zahŕňala päť fáz: 1), ústa, 2) žalúdok, 3) duodenum, 4), dialýza a 5) ileum [25]. Stručne povedané, lasagne zelená obsahujúce B. cereus
inokula (83 g) sa zmieša s slín médiom (56 ml, pH 6,5, 37 ° C) po dobu 1 min stomaching (miešačke Lab Blender 400, Seward) a inkubované po dobu 10 minút pred prenosom do žalúdka nádoby. Žalúdočné pH sa znížila z 5,0 na 3,0 v priebehu prvých 90 minút a na 2,0 v priebehu posledných 90 min kontinuálne pridá kyselina (0,28 M HCl). Vyprázdňovanie žalúdka sa začalo 30 minút po začiatku žalúdočnej fázy v 5 frakciách diskontinuálnej čerpanie takým spôsobom, že cca. 25% z obsahu žalúdka bolo odstránené po 1 hodine, 50% po 2 hodinách a 75% po 3 hodinách. Frakčnej vyprázdňovanie žalúdka za následok 150 min prekrývania medzi žalúdka a dvanástnika fázy, v ktorej bol B. cereus
inokula rozdelená na subpopuláciách, ktoré boli vystavené rôznym rôznych dobách inkubácie v žalúdku fáze (min. 30 min, max . 180 min) a dvanástnika fázy (min. 10 min, max. 160 min). Črevné nádoba bola anaeróbne (prepláchne dusíkom) a obsahoval črevnej médium s 10,0 g /l žlče (Oxgall, DIFC) a pH Hodnota pH sa nastaví automaticky pomocou regulátora pH (FerMac 260, Electrolab) zostať pri pH 5,0 v priebehu najprv 45 min a pri pH 6,0 v priebehu posledného 115 min. A koniec duodena fázy, kompletné žalúdočné obsahy boli presunuté a koncentrácie žlče bola znížená o riedenie, 5 g /l. V ďalšej fáze, ≥ 90% z tohto žlče sa odstráni dialýzou a súťaží s ľudskou črevné baktérie sa simuloval v priebehu záverečnej fázy ilea. Avšak, po odstránení B. cereus
vegetatívnych buniek, gastrointestinálne experiment bol zastavený, čo má za následok pokusoch sa skladajú z prvé tri fázy. Pokusy boli vykonané v troch vyhotoveniach s rôznou B. cereus
vakcíny v rôznych dňoch.
Tolerancia Bile B. cereus
B. cereus
kmeňa NVH 1230-1288 bol kultivovaný a následne do subkultúr v 10 ml TSB po dobu 24 hodín pri teplote 30 ° C. Potom 100 ul subkultúry sa naočkuje do sklenených skúmaviek obsahujúcich 9,9 ml TSB a inkubované pri 37 ° C. Hodnota pH TSB bol buď neutrálny (pH = 7,2), alebo kyslé (pH = 5,0) a doplnenom rôznymi koncentráciami žlče, čo má za následok konečnej koncentrácie 0,0 (kontrola TSB), 1,0, 5,0 a 10,0 g /l oxgall (DIFC ). Prežitie vegetatívneho B. cereus
buniek bola hodnotená nanesením vhodných diltutions v PPS na TSA.
Produkciu toxínov
Výroba Enterotoxins NHE a HBL bola stanovená na základe analýzy 1 ml vzoriek po filtrácii (0,2 um injekčné striekačky filtre, Whatman) s Duopath® cereus enterotoxínov (Merck) v súlade s pokynmi výrobcu.
výsledky
Rast B. cereus
v lasagne verde
The lasagne verde bol naočkovaný cca , 6,0 CFU /g B. cereus stroje a inkubované po dobu 24 hodín pri teplote 22 ° C, čím sa získa vysoko koncentrované inokulum vegetatívneho B. cereus
buniek pestovaných v zloženom potravinovej matrice s potravinami mikroflóry napodobením skladovanie kontaminovanej lasagne na izbová teplota. To malo za následok lasagne verde s obsahom cca. 8,5 log CFU /g celkom baktérie, z ktorých B. cereus
predstavované 7,0 do 8,0 CFU /g, v závislosti od kmeňa (tabuľka 2). B. cereus
NVH 1230-88 vykazoval stabilnú koncentráciu spór 3,5 spór log /g, pochádzajúce z TSB inokula. Na rozdiel od toho ďalšie sporulácia bol zjavný od cca. 4.0 spor log /g do 4,5 log spór /g po 30 hodín pre B. cereus
FF 73. Pozoruhodné je, B. cereus
ATCC 14579 nepriniesli žiadne spory po 30 hodinách inkubácie, sa len veľmi nízkych číslach ( 3.0 spor /g) pozorovaná iba 1 z 3 opakovania tašky. Po očkovaní a inkubácii sa lasagne zelená sa tak vysoko kontaminovaný B. cereus
vegetatívnych buniek (7,0 až 8,0 log CFU /g) v stacionárnej rastovej fáze a nízkym množstvom B. cereus
spórami (až do 4,0 log spor /g) .Table 2 Rast troch rôznych kmeňov B. cereus v potravinárskom matrici pred simulácie gastrointestinálneho priechodu; Priemerné hodnoty nezávislých experimentov v troch vyhotoveniach vyjadrených v log CFU /g ± štandardná odchýlka sú prezentované
B. cereus kmeň
čas (h)
0

22
24
26
28
30
B. cereus ATCC14579
celkového počtu
5,8 ± 0,1
8,3 ± 0,6
8,4 ± 0,3
8,8 ± 0,2
8,8 ± 0,3
8,9 ± 0,2
Celkom B. cereus
5,7 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,7 ± 0,3
7,2 ± 0,3
7,0 ± 0,2
B. Cereus
spóry Hotel < 2,0 ± 0,0 Hotel < 2,0 ± 0,0 Hotel < 2,0 ± 0,0 Hotel < 2,0 ± 0,0 Hotel < 2,0 ± 0,0
2,3 ± 0,6
B. cereus
NVH 1230-88
celkového počtu
5,9 ± 0,1
8,2 ± 0,2
8,4 ± 0,1
8,9 ± 0,0
8,9 ± 0,1
8,8 ± 0,2
Total B. cereus
6,2 ± 0,3
7,9 ± 0,2
8,2 ± 0,1
8,5 ± 0,2
8,3 ± 0,3
7,9 ± 0,1
B. Cereus
spóry
3,5 ± 0,6
3,5 ± 0,2
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
B. cereus
FF 73
celkového počtu
5,7 ± 0,1
8,5 ± 0,1
8,7 ± 0,1
9,0 ± 0,0
9,0 ± 0,3
8,9 ± 0,3
celková B. cereus
5,7 ± 0,1
8,1 ± 0,2
8,0 ± 0,1
8,3 ± 0,1
8,2 ± 0,1
8,3 ± 0,2
B. Cereus
spóry
3,8 ± 0,2
3,9 ± 0,4
3,9 ± 0,4
4,0 ± 0,5
4,0 ± 0,3
4,5 ± 0,1
Nebol zistený žiadny produkcie enterotoxínov v lasagne verde po 24 hodinách B. cereus
ATCC 14579 a B. cereus
NVH 1230-88, zatiaľ čo NHE bola zistená sporadicky (v 1 z 3 opakovania) v prípade B. cereus
FF 73. To bolo pravdepodobne v dôsledku kyslého pH 5.5 lasagne Verde a pomerne nízkej inkubačnej teplote 22 ° C, ktoré nie sú optimálne pre produkciu enterotoxínu [1]. Avšak, vopred vytvorené enterotoxíny v potravinách nie sú zodpovední za hnačkových otravu jedlom, pretože sa rýchlo degradovaný počas gastrointestinálne pasáže [2].
In vitro
simulácie gastrointestinálneho priechodu B. cereus
vegetatívnych buniek
The lasagne zelená kontaminovaný 7,0 až 8,0 log CFU /ml B. cereus
vegetatívnych buniek v stacionárnej fáze rastu bola podrobená simuláciu in vitro
gastrointestinálneho priechodu (obrázok 1). Prežitie B. cereus
(menej ako 1 log zníženie) bol pozorovaný v priebehu ústí fázy a prvý 30 min žalúdka fázy, kedy sa žalúdočné pH medzi 5,0 a 4,0. Potom, keď sa žalúdočné pH zníži pod 4,0, vegetatívny bunky boli rýchlo inaktivuje v žalúdku fáze, zrejmý ako rýchly pokles celkového počtu B. cereus
k podobným hodnotám B. cereus
spor v počte žalúdočné nádoby. B. cereus
celkových počtov a spor v priebehu dvanástnika fázy zostal cca. 1,0 log CFU /ml pre B. cereus
ATCC 14579, cca. 2,5 log CFU /ml pre B. cereus
NVH 1230-88 a cca. 3,5 log CFU /ml pre B. cereus
FF 73. Zaujímavé je, že spor počty B. cereus
NVH 1230-88 znížila počas žalúdočné fázy počas poslednej hodiny a najviac kyslého pH. Vzhľadom k tomu, celkový počet B. cereus
nezmenila, znamená to, že začatie klíčenie spor. B. cereus
ATCC 14579 vykazovali nekonzistentné produkciu spor, čo má za následok absenciu spor v priebehu prvých dvoch simulácií a veľmi nízky počet (mierne nad detekčným limitom 1,0 spor /ml) v priebehu posledných dvoch experimentov. Obrázok 1 Inaktivácia vegetatívnych buniek v priebehu dynamickej in vitro simulácie gastrointestinálneho priechodu s B. cereus ATCC 14579 (1), B. cereus
NVH 1230-88 (2), a B. cereus
FF 73 (3); B. cereus
celkové (a) a (b) spor počty boli stanovené nanesením na MYP bez a s tepelným spracovaním (10 min pri 80 ° C), v tomto poradí, v lasagne Verde (□), fáza ústia (◊), žalúdok fáza (Δ) a dvanástnika fáza (○); sú uvedené priemerné hodnoty a štandardná odchýlka troje experimentov v rôznych dňoch.
Bez detekcie testy pre Enterotoxins NHE a HBL boli vykonané, pretože žiadny rast bol v priebehu niektorého z tráviaceho fáz, ktoré je nevyhnutným predpokladom pre výrobu enterotoxín [1 pozorované ].
Bile tolerancie B. cereus
rastu a prežitie B. cereus
NVH 1230-88 bola stanovená v prítomnosti rôznych koncentrácií žlče (obrázok 2). Za optimálnych podmienok, tj neutrálne TSB s pH 7,2, účinok žlči bola závislá na koncentrácii. Najnižšia koncentrácia 1,0 g /l Oxgall malo za následok zníženie populácie pribl. 30% v porovnaní s kontrolou (TSB bez žlče) v čase 0 hodín. Okrem toho, po 1 hodine sa počet zárodkov sa redukuje cca. 40% v porovnaní s koncentráciou v TSB s 1,0 g /l pri teplote 0 Oxgall hodín. Avšak, po obnovení 2 h a následok zostávajúcich buniek bol pozorovaný, pretože B. cereus
koncentráciu bol podobný tomu z 0 hodín a nakoniec po 3 hodinách, populácia sa zvyšuje s cca. 1 log v porovnaní s tým sa pri teplote 0 hodín. Avšak, prítomnosť 5,0 g /l Oxgall vyvolané trvalý pokles na 4,1 log CFU /ml v priemere (inaktivácia 88% z vegetatívnych buniek) a že z 10,0 g /l Oxgall na 3,9 log CFU /ml (inaktivácia 94 %). Obrázok 2 Prežitie B. cereus NVH 1230-1288 v tryptón Soya Broth (TSB) pri teplote 37 ° C, s pH 7,2 (A) a pH 5,0 (B) s rôznou žlčové koncentrácie (Oxgall, DIFC): 0,0 g /l (biela ), 1,0 g /l (svetlo šedá), 5,0 g /l (tmavo šedá) a 10,0 g /l (čierna).
V TSB pri kyslom pH 5,0, cca. 99% z B. cereus
inokula bola okamžite inaktivovaná vystavením žlče, bez ohľadu na koncentráciu žlče, čo má za následok konštantný celkovej B. cereus
počtov cca. 3,0 log CFU /ml. B. cereus
inokula obsahovala medzi 0,1 a 0,2% spór, takže konštantné počty spor bola získaná v priebehu experimentu: 2,6 (± 0,2) log spor /ml, na začiatku a na 2,5 (± 0,3) log spor /ml u koniec. S ohľadom na tento spor populácie do úvahy, vegetatívny bunky stále tvoria väčšinu (cca. 60%) v 1% žlčových odolného B. cereus
.
Diskusia
prežitie vegetatívnych buniek počas žalúdočnej pasáž bola podobná ako v predošlých štúdiách so zemiakovou kašou média [3]. Počas týchto experimentov, cca. 10% z vegetatívnych buniek prežiť žalúdočnej pasáž, väčšina z nich v prvom žalúdku frakcie pri pH žalúdka, bolo medzi 5,0 a 4,0. Tieto bunky boli prenesené do živej črevnej nádoby a tým aj medzi 5,5 a 6,5 ​​log CFU /ml B. cereus
očakávali v črevnej nádobe. Avšak, oveľa nižšie počty, ktoré sa priblížilo B. cereus
spor sa počíta, boli získané v priebehu fázy duodena. To znamená, že vegetatívny bunky, ktoré prežili žalúdočné priechod boli inaktivované v črevnom prostredí. Dávkové inkubácie experimenty v TSB a rôzne koncentrácie žlče ukázala, že väčšina (99,1%) z vegetatívnych buniek bol inaktivovaný bezprostredne po expozícii žlče pri pH 5,0, bez ohľadu na koncentráciu žlče v rozmedzí od 1,0 do 10,0 g /l Oxgall. Záverom možno povedať, vegetatívny B. cereus
buniek, ktoré prežili žalúdočné priechod boli odstránené v priebehu následnej duodéna fáze sú baktericídne účinok žlče.
Baktericídny účinok na vegetatívne žlče B. cereus
buniek bola závislá na pH. Pri pH 7,0, inaktivácia bola v korelácii s koncentráciou žlče, a najnižšia koncentrácia žlče (1 g /l), aj nechá prežitie a rast. Naproti tomu, pri pH 5,0, instant inaktivácia väčšiny (nad 99%) došlo k vegetatívny bunky, nezávislý od koncentrácie žlče (v rozmedzí od 1,0 do 10,0 g /l). Podobne ako u našich výsledkov, deaktivácia Listeria monocytogenes podľa žlčových kyselín bol tiež silne zvýšil pri kyslom pH 5,5 [26]. Inaktivácia baktérií žlče je podobný tomu, ktorý organickými kyselinami, ktoré sú mimoriadne efektívnym pri nízkom pH. Disociačná konštanta kyseliny logaritmické (pKa) nekonjugovaného žlčových kyselín je približne 5,1, ale konjugácie s glycínom znižuje pKa cca. 3.7 [27]. Konjugácia s taurínom vedie k ešte nižšej pKa cca. 1.5 [28]. V dôsledku toho, že väčšina konjugovaných žlčových kyselín disociuje a ionizuje u väčšiny fyziologických a črevných hodnotách pH, ​​a to 95,24% pri pH 5,0 a 99,95% pri pH 7,0 pre glycoconjugated žlčových kyselín. Iba organizovaným formy žlčových kyselín môžu pasívne cez bunkovú membránu, zatiaľ čo disociované a ionizovanej konjugovanej žlčové kyseliny vyžadujú špecifické aktívne dopravné systémy [29]. Výsledkom je, že 4,67% z konjugovaných žlčových kyselín môže vstúpiť do B. cereus
buniek na pH 5,0, na rozdiel od iba 0,03% pri pH 7,0. Okrem toho je vnútorný pH životaschopné B. cereus
buniek vždy leží medzi 6,0 a 7,5, v závislosti od vonkajších podmienok pH a kultúry [30]. Po nedisociovanej žlčové kyseliny sa rozptyľuje do B. cereus
buniek, z ktorých väčšina (99,50 až 99,98%) dochádza k intracelulárnej disociácii, čo má za následok smrteľný vnútornej okysľovaniu.
Bolo oznámené, že určité zložky potravín zvýšila žlč tolerancia B. cereus
vegetatívnych buniek črevnej médiu s pH 6,5 [22]. Avšak, zložené potraviny matrice lasagne zelená ani zmiernenie nepriaznivých účinkov žlče v B. cereus
počas pokusov pri pH 5,0. Je možné, že účinky typu potraviny sú pozorované len pri viacerých optimálne pH pre túto alimentárnych patogénu, kedy sa očakáva, že výraznejšie rozdiely medzi ošetreniami.
Na rozdiel od vegetatívny bunky, B. cereus
spór nebola inaktivovaná žlče , aj keď to nie je klíčiť v črevnom prostredí s obsahom 5 až 10 g /l Oxgall. To sa zhoduje s pripomienkami dynamickej simulácie gastrointestinálneho priechodu spór [25], kde Spory boli nedotknuté počas úst, žalúdka a dvanástnika fáze a len začali klíčenie počas dialýzy, keď sa koncentrácia žlčových spustené z 5,0 g /l Oxgall na < 0,5 g /l a tí šarže inkubácie pokusoch [31], kde výtrusy vyklíčených priebehu 2 hodín v črevnom simulácia médiu obsahujúcom 1,0 g /l žlč. Ďalšie štúdie tiež uvádzajú, že spory boli schopné klíčiť a množiť sa v simulovanej črevnej tekutine obsahujúce žlče (1,5 g Oxgall /l) [32], a že odpor žlč z B. cereus
spór bola vyššia ako vegetatívnych buniek [33 ]. Záverom možno konštatovať, vysoké koncentrácie žlčových kyselín (≥ 5 g /l Oxgall) neumožňujú spor klíčenie, zatiaľ čo nízke koncentrácie žlčových kyselín (menej ako 5 g /l). Indukujú klíčenie a rozrastanie
Vedľa jeho významu v trávení živín a vstrebávanie, žlči je tiež dôležitým antimikrobiálne zlúčeninu v čreve [7]. Abnormálne nízke hladiny črevnej žlčových kyselín môže nastať u ľudí s žlčových ciest alebo pečene abnormality alebo nedostatky v enterohepatálnej cirkulácii, čo môže viesť k tým ľuďom, obzvlášť vnímavé k hnačke kvôli zvýšenej prežitie požití a črevných baktérií. Okrem toho, žlčové kyseliny sú endogénne laxatíva, takže malabsorpcia žlčových kyselín z tenkého čreva, čo vedie k zvýšeniu hladiny žlčových v terminálnom tenkom čreve a tračníku, môže tiež mať za následok hnačku [34].
Záver
B. Cereus
vegetatívny bunky boli schopné prežiť gastrointestinálne priechod ako je simulovaná in vitro
experimentu, a to napriek vysokej koncentrácii inokula 7,0 až 8,0 log CFU /ml a kultiváciu inokula v kompozitný potravinársky matrice lasagne verde. Väčšina z vegetatívnych buniek bol inaktivovaný pôsobením žalúdočnej kyseliny, a prežívajúce bunky boli následne inaktivovaná žlče počas duodena fázy. Naproti tomu, B. cereus
spóry prežil simulácie gastrointestinálneho priechodu a zostal spóry v nepriaznivých podmienkach pre klíčenie (a následok). Preto je infekčná dávka pre B. cereus
pravdepodobne mení v závislosti na fyziologickej formy požitý nižšia spór vysoko odolné. Aj keď je gastrointestinálne prežitia bola podobná pre rôzne kmene, ich sporulácia tendenciu značne meniť, čo má významný vplyv na prežitie gastrointestinálne potenciálu a tým aj infekčná dávka rôznych kmeňov B. cereus
.
Vyhlásenia
autorov pôvodné predloženej súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodných predložených súborov pre obrázky. "Pôvodný súbor pre Obrázok 1 13099_2012_68_MOESM2_ESM.pdf autorského 13099_2012_68_MOESM1_ESM.pdf autorov pôvodného súboru na obrázku 2 konkurenčnými záujmu
My všetci autori vyhlásiť, že nemáme konkurenčné záujmy. Podieľanie sa
autori '
SC, MU a TVdW navrhol experimenty; SC a SH vykonal experimentálne práce a spracované výsledky; SC napísal rukopis podporovaný MU, NB a TVdW. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Pretrvávajúce nízka expresia v hZip1 mucinózní karcinómy vaječníkov, hrubého čreva, žalúdka a pľúc
• Exsanguinating horného GI krvácaním z dôvodu neobvyklej arteriovenózne malformácie (AVM) žalúdka a sleziny: kazuistika