Inaktivointi Bacillus cereus kasvullisen solut mahahapon sapen aikana in vitro maha transit

inaktivointi Bacillus cereus
kasvullisia soluja mahahapon sapen aikana in vitro
ruoansulatuskanavan kauttakulku
tiivistelmä
tausta
elintarvikeperäinen taudinaiheuttaja Bacillus cereus
voi aiheuttaa diarrheal ruokamyrkytysten esittämällä enterotoksigeenisistä ohutsuolessa. Edellytyksenä ripulitaudin on siis selviytyminen aikana ruoansulatuskanavan läpikulun. Tool Menetelmät
Kasvullinen soluja 3 eri B. cereus
kantoja viljeltiin todellinen koostuvien elintarvikkeiden matriisi, lasagne verde, ja niiden selviytyminen myöhempien simulointi maha kulku arvioitiin käyttäen in vitro
kokeet simuloivat kauttakulkua ihmisen ylemmässä ruoansulatuskanavassa (suusta ohutsuolessa).
tulokset
o eloonjäämistä kasvullisia soluja havaittiin huolimatta korkeasta inokulaattitasot of 7,0 8.0 log CFU /g ja on erilaisia ​​mahdollisesti suojaavia elintarvikkeita komponentteja. Merkittäviä jakeet (n. 10% kulutetusta inokulaatin) B. cereus
kasvullisia soluja selvisi mahalaukun passage, mutta ne myöhemmin inaktivoitiin sappi altistuminen heikosti happamassa suolistossa väliaineessa (pH 5,0). Sen sijaan pieni määrä itiöitä läsnä (jopa 4,0 log itiötä /g) osoittivat hyviä eloonjäämistä ja pysyi elinkelpoinen itiöt koko maha kulkua simulaation.
Päätelmä
Vegetative solut inaktivoituvat mahahapon sappi aikana ruoansulatuskanavan läpikulun , kun taas itiöt ovat kestäviä ja hengissä. Näin ollen, fysiologinen muoto (vegetative solujen tai itiöiden) ja B. cereus
kulutetaan määrittää myöhemmin maha selviytymisen ja siten infektoiva annos, jonka odotetaan olevan paljon pienempi itiöitä kuin kasvullisia soluja. Mitään merkittäviä eroja maha selviytymisen kyky löydettiin kesken eri kantojen. Kuitenkin huomattava rasitus vaihtelu havaittiin itiömuodostuman suuntaus aikana kasvun Laboratoriokasvatusliuokseen ja ruokaa, joka on merkittäviä vaikutuksia maha selviytymisen mahdollisuudet eri B. cereus
kantoja.
Avainsanat
Bacillus cereus
Bile In vitro
simulointi Mahalaukun passage Background
B. cereus
voi aiheuttaa oksenteluepisodeja ja diarrheal ja ruokamyrkytysten tuottamalla vast. emetic (kereulidi) ja diarrheal toksiinien (ei-hemolyyttinen enterotoksiinin (Nhe), hemolyslinille BL (Hbl), Sytotoksiini K (CytK), jne.) [1]. Toisin kuin erittäin vakaa toksiini kereulidi, enterotoksiineja jakautuvat helposti hapolla ja ruoansulatusentsyymien (proteaaseja) ja siten muotoon enterotoksigeenisistä ruoka ei säily myrkyllisyytensä aikana ruoansulatuskanavan läpikulun [2]. Siksi edellytyksenä diarrheal ruokamyrkytys on -enterotoksiini tuotantoaan B. cereus
ohutsuolessa, niin maha selviytymisen vegetatiivisen B. cereus
tutkittiin. Se oli aiemmin osoitettu, että n. 10% kasvullisen solut selvisivät mahalaukun passage [3]. Seuraavaksi elossa bakteerit kohtaavat sapen ontelon pohjukaissuolen, proksimaalisen osan ohutsuolessa.
Bile koostuu pääasiassa sappihappojen (noin 72% lipidien kokonaismäärästä), lisäksi fosfolipidejä (n. 24% ) ja kolesterolia (n. 4%) [4]. Ihmisillä näitä sappihappojen koostuu pääasiassa koolihapon (50% ja 80%) ja kenodeoksikoolihappo (20% ja 50%) [5, 6]. Ne syntetisoidaan maksassa kolesterolista ja konjugoitu glysiini (n. 75%) tai tauriinia (n. 25%), joissa konjugaatio suhde riippuen ruokavaliossa muiden tekijöiden [6, 7]. Eritystä sappeen laukaisee rasvaa ja hapon vapautuminen mahasta pohjukaissuoleen, mikä johtaa 7-15 mM sappihappojen ohutsuolesta aterian jälkeen, joka vastaa 5-10 g härän /L [7-10]. Dekonjugoituu sappinesteen alkuperäiskansat suolistobakteerien pääasiassa esiintyy sykkyräsuoli, jossa n. 95% sappihappojen reabsorboituu, joista n. 15% on konjugoitumattoman [7, 10]. Sekä konjugoidun ja konjugoimattoman sappihappoja imeytyy passiivisen diffuusion pitkin koko suolistossa, mutta tämä prosessi on tehokkaampi konjugoimattomaan sappihappoja. Lisäksi erityinen aktiivinen liikennejärjestelmiä ovat läsnä sykkyräsuoli, jotka ovat tehokkaampia otossa konjugoitujen sappihappojen. Sen jälkeen, kun imeytyminen suolistosta, sappihapot kuljetetaan maksan kautta veri, reconjugated ja erittävät uudelleen sappeen virtsarakon. Tämä kierrätyksen sappihappojen kutsutaan enterohepaattiseen kiertoon.
Fysiologinen rooli sappihappojen on lisätä liukoisuutta ruokavalion rasvan ja helpottaa sen hajoamista ja imeytymistä. Koska niiden puhdistavien ominaisuuksien sappihapot myös muuttaa solukalvojen ja näin on sytotoksisia ja bakterisidinen vaikutus, havaittavissa lisääntynyt solukalvon liikkuvuus ja läpäisevyyttä [11-14]. Riippuen sapen pitoisuus, häiriöitä solukalvon eheyden tapahtuu lähes välittömästi, mikä aiheuttaa solujen vuotaminen ja kuoleman, tai hitaammin ja hienovaraisesti muuttamalla kalvon läpäisevyyttä ja juoksevuus, aktiivisuus kriittisten proteiinien solukalvon ja kalvon hydrofobisuus [15 ]. Lisäksi tuhoutuminen bakteerien solukalvon eheyden, sapen indusoi myös DNA-vaurioita, denaturaatio ja virhelaskostuminen proteiinien, jotka johtavat kuolemaan bakteerien [16].
Gram-positiiviset bakteerit ovat yleensä herkkiä sappi kuin Gram negatiiviset bakteerit, mutta sappi toleranssi hyvin Kantakohtainen, niin yleistetty lausumia lajeja eivät ole mahdollisia [17-19]. Huolimatta bakterisidinen vaikutuksia sappi, jotkut mikro-organismit ovat kehittäneet sappi vastus indusoimalla sapen metaboloivia entsyymejä ja liikennejärjestelmiä tai muuttamalla kalvon läpäisevyyttä, juoksevat tai maksutta. Jotkut enteerisen taudinaiheuttajat voivat jopa riippuvat sapen isäntänä signaali virulenssin sääntelyä. Esimerkiksi Salmonella enterica serovar Typhimurium hallussaan monien lääkkeiden ulosvirtauspumppuna AcrAB varten sapen poistamiseen ja liikenteen ulkokalvon [20]. Lisäksi hyökkäys isännän epiteelisoluihin tätä bakteeria on aiheuttamien lasketaan sappi pitoisuuksia, niin sen jälkeen kauttakulkumatka sykkyräsuoli tai osaksi limakerroksessa [21].
Yhteistyössä ruoan nauttimisella on tärkeä tekijä antibakteerinen aktiivisuus sapen suolistossa. Bile inaktivointi bakteerit vaikuttavat oleva ruoka osia, jotka voidaan luoda suojaava mikroympäristöjen tai sidonta sappeen. Esimerkiksi suurin sappi pitoisuus siedetty B. cereus
aikana kasvu suoliston väliaineessa oli 3 g /l sian sappea kun hernekeitto täydennettiin, kun taas vain 0,9 g /l ja 0,6 g /l sappi siedettiin läsnäollessa maidon ja puuttuminen ruoka, vastaavasti [22]. Myös Lactobacillus curvatus, kun läsnä on ruokamatriisiin, nimittäin liha, kasvatti sapen sietokyvyn ja myöhemmin sen maha säilymisen [23]. Samoin sappi toleranssi Bifidobacterium breve parannettiin soijaproteiinia [24].
Tässä tutkimuksessa maha selviytyminen vegetatiivisen B. cereus
solut tutkittiin ja liittyy bakterisidisen roolia sappeen. B. cereus
ymppi kasvatettiin komposiitti ruokamatriisin lasagne verdeä ennen in vitro
simulointi maha-kanavan sisältävän kaikki mahdolliset suojaavat vaikutukset ruuan maha selviytymisen B. cereus
.
Materiaalit ja menetelmät
B. cereus
kantoja, viljely ja luettelointi
B. cereus
kannat ATCC 14579, NVH 1230-88 ja FF 73 (taulukko 1) viljeltiin ja sen jälkeen jatkoviljeltiin 10 ml tryptoni-soija-Broth (TSB, Oxoid) 24 tunnin ajan 30 ° C: ssa. Sentrifugoinnin ja suspendoimalla uudelleen 1 ml: Fysiologinen peptonivettä Suolaliuos (PPS, 8,5 g /l NaCl (Fluka) ja 1 g /l neutraloitua bakteriologisia peptonia (Oxoid)), 830 ui alakulttuurin ympättiin 83 g lasagne verde (ostettu paikallisessa supermarketissa) in mahapusseissa ja inkuboitiin 24 tuntia 22 ° C: ssa. Retail lasagne verde ostettiin paikallisessa supermarketissa, joka sisälsi keskimäärin 4,7 log pmy /g koko bakteerien (keskihajonta 1,3 log CFU /g, analyysi 11 eri tuotteita aikana 6 kuukauden jaksolla) ja ≤ 2,0 log pmy /g B . cereus
. Keskimääräinen pH Tämän ruokatuotteen oli 5,52 (keskihajonta ± 0,06) .table 1 Simulaatio ruuansulatuskanavan passage suoritettiin kolmella eri B. cereus kannat: tyyppi kanta B. cereus ATCC 14579, kliininen isolaatti B. cereus NVH 1230 -88 alkaen ripulinen ruokamyrkytys puhkeaminen ja ruoka eristää B. cereus FF 73 asianomaisilta elintarvikematriisin eli lasagne verde
B. cereus -kannan
alkuperä
Mininal kasvu lämpötila ( ° C)
Hbl tuotanto
NheI tuotanto
ATCC114579
tyyppikannoista
> 10
+
+
NVH2 1230 -88
kliininen (ihmisen ulosteesta) B 8
+ -
FF3 73
ruoka (lasagne verde)
10
+
+
1ATCC = American Type Culture Collection, USA; 2NVH = Norja School of Veterinary Science, Oslo, Norja; 3FF = Flanders 'Food Collection, Belgia.
Kantatilastoissa ja B. cereus
määrä määritettiin maljaamalla sopivia laimennoksia in PPS tryptoni-soija-agar (TSA) ja Mannitoli-Kananmunan keltuainen-polymyksiini B agar (MYP vastaavasti. itiö pitoisuudet määritettiin maljaamalla lämmityksen jälkeen 80 ° C: ssa 10 min.
vitro
simulointi ruoansulatuskanavan läpikulun
dynaaminen maha simulointi koe käsitti viisi vaihetta: 1) suun, 2) mahassa, 3) pohjukaissuolen, 4), dialyysi ja 5) sykkyräsuoli [25]. Lyhyesti, lasagne verde sisälsi B. cereus
ymppi (83 g) sekoitettiin syljen väliainetta (56 ml, pH 6,5, 37 ° C) stomaching 1 min (Stomacher Lab Blender 400, Seward) ja inkuboitiin 10 min ennen siirtoa vatsaan astiaan. Mahalaukun pH laski 5,0-3,0 ensimmäisten 90 min ja 2,0 viimeisten 90 min lisätään jatkuvasti happoa (0,28 M HCI). Mahalaukun tyhjenemistä aloitettiin 30 min sen jälkeen, kun alusta mahalaukun vaiheen 5 jakeet epäjatkuvalla pumppauksen siten, että n. 25% mahalaukun sisällön poistettiin 1 h, 50% 2 tunnin kuluttua ja 75% 3 tunnin kuluttua. Murto mahalaukun tyhjenemistä johti 150 min päällekkäisyyttä mahan ja pohjukaissuolen vaiheen, jossa B. cereus
inokulaatti jaettu alapopulaatioiden tehtiin erilaisia ​​inkubointiaikojen mahassa vaiheessa (min. 30 min, max . 180 min) ja pohjukaissuolen vaihe (min. 10 min, maks. 160 min). Suoliston Alus oli anaerobiset (huuhdeltiin typpikaasulla), ja se sisälsi suoliston väliainetta, jossa oli 10,0 g /l sappeen (häränsappea, Difco) ja pH pH säädetään automaattisesti pH-ohjain (FerMac 260, Electrolab) pysyy pH: ssa 5,0 aikana Ensimmäiset 45 minuuttia ja pH: ssa 6,0 viimeisten 115 min. Ja lopussa pohjukaissuolen vaiheen, koko mahan sisältö siirretään ja sapen pitoisuus laskettiin laimentamalla 5 g /l. Seuraavan vaiheen aikana, ≥ 90% tästä sapen poistettiin dialyysillä ja kilpaile ihmisten suolistobakteerien simuloitiin lopullisessa ileum vaiheessa. Kuitenkin poistamisen jälkeen B. cereus
kasvullisia soluja, maha-koe lopetettiin, jolloin kokeet, joka koostuu kolmen ensimmäisen vaiheen vain. Kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena eri B. cereus
siirrosten eri päivinä.
Bile toleranssi B. cereus
B. cereus
-kannan NVH 1230-88 viljeltiin ja myöhemmin niitä siirrostetaan 10 ml: ssa TSB 24 tuntia 30 ° C: ssa. Sitten 100 ui alakulttuurin ympättiin lasi putkiin, jotka sisälsivät 9,9 ml TSB ja inkuboitiin 37 ° C: ssa. PH TSB oli joko neutraali (pH = 7,2) tai happamia (pH = 5,0), ja johon on lisätty vaihtelevia sappi pitoisuuksia, jolloin lopulliset pitoisuudet 0,0 (TSB-ohjattu), 1,0, 5,0 ja 10,0 g /l härän (Difco ). Selviytyminen vegetatiivinen B. cereus
solut arvioitiin maljaamalla sopiva diltutions in PPS TSA.
Toksiinia tuottava
tuotanto enterotoksiineja Nhel ja Hbl määritettiin analysoimalla 1 ml näytettä suodatuksen jälkeen (0,2 pm ruisku suodattimet, Whatman) ja Duopath® cereus enterotoksiineja (Merck) mukaan valmistajan ohjeiden.
tulokset
kasvu B. cereus
vuonna lasagne verde
lasagne verde ympättiin n . 6,0 pmy /g B. cereus
ja inkuboitiin 24 tuntia 22 ° C: ssa, jolloin saadaan erittäin keskittynyt inokulaatin vegetatiivisen B. cereus
soluja kasvatettiin koostuvien elintarvikkeiden matriisi ruuan mikrobiston simuloidaan varastointi saastuneen lasagne at huonelämpötila. Tämä johti lasagne verde sisältävän n. 8,5 log CFU /g yhteensä bakteerit, jotka B. cereus
muodostuu 7,0-8,0 CFU /g, riippuen kannasta (taulukko 2). B. cereus
NVH 1230-88 näyttivät vakaata itiöiden pitoisuus 3,5 log itiötä /g, peräisin TSB inokulaatin. Sen sijaan, lisää itiöiden muodostuminen oli ilmeistä, n. 4.0 log itiötä /g 4,5 log itiötä /g 30 h B. cereus
FF 73. Merkillistä, B. cereus
ATCC 14579 ei tuottanut yhtään itiötä 30 h inkuboinnin vain hyvin vähän ( 3,0 itiötä /g) havaittiin vain 1 3 rinnakkaisten laukkuja. Inokulaation jälkeen ja inkuboinnin lasagne verde oli siten erittäin saastunut B. cereus
kasvullisia soluja (7,0-8,0 log CFU /g) kiinteän kasvuvaiheessa ja pieniä määriä B. cereus
itiöitä (jopa 4,0 log itiötä /g) .table 2 kasvu kolmesta eri B. cereus kantojen ruokamatriisin ennen simulointi ruoansulatuskanavan kulkua; keskiarvot itsenäisen kokeen kolmena ilmaistuna log CFU /g ± keskihajonta esitetään
B. cereus -kannan
Aika (h)
0

22
24
26
28
30
B. cereus
ATCC14579
kokonaislukumäärä
5,8 ± 0,1
8,3 ± 0,6
8,4 ± 0,3
8,8 ± 0,2
8,8 ± 0,3
8,9 ± 0,2
Yhteensä B. cereus
5,7 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,7 ± 0,3
7,2 ± 0,3
7,0 ± 0,2
B. cereus
itiöt
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
2,3 ± 0,6
B. cereus
NVH 1230-88
kokonaislukumäärä
5,9 ± 0,1
8,2 ± 0,2
8,4 ± 0,1
8,9 ± 0,0
8,9 ± 0,1
8,8 ± 0,2
Yhteensä B. cereus
6,2 ± 0,3
7,9 ± 0,2
8,2 ± 0,1
8,5 ± 0,2
8,3 ± 0,3
7,9 ± 0,1
B. cereus
itiöt
3,5 ± 0,6
3,5 ± 0,2
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
B. cereus
FF 73
kokonaislukumäärä
5,7 ± 0,1
8,5 ± 0,1
8,7 ± 0,1
9,0 ± 0,0
9,0 ± 0,3
8,9 ± 0,3
Yhteensä B. cereus
5,7 ± 0,1
8,1 ± 0,2
8,0 ± 0,1
8,3 ± 0,1
8,2 ± 0,1
8,3 ± 0,2
B. cereus
itiöt
3,8 ± 0,2
3,9 ± 0,4
3,9 ± 0,4
4,0 ± 0,5
4,0 ± 0,3
4,5 ± 0,1
o tuotannon enterotoksiineja havaittiin in lasagne verde kuluttua 24 h B. cereus
ATCC 14579 ja B. cereus
NVH 1230-88, kun taas Nhel oli satunnaisesti havaittu (1 out of 3 toistoa), kun kyseessä on B. cereus
FF 73. Tämä johtui todennäköisesti happamuuden 5.5 lasagne verde ja melko matala inkubaatiolämpötila 22 ° C, jotka eivät ole optimaalisia enterotoksiinin tuotantoon [1]. Kuitenkin, muotoon enterotoksigeenisistä ruoka eivät ole vastuussa diarrheal ruokamyrkytys, koska ne ovat nopeasti heikkene ruoansulatuskanavan läpikulun [2].
In vitro
simulointi ruuansulatuskanavan kulkua B. cereus
vegetative soluja
Euroopan lasagne verde saastuttamia 7,0-8,0 log CFU /ml B. cereus
kasvullisia soluja paikallaan kasvuvaiheessa alistettiin in vitro
simulointi ruoansulatuskanavan passage (kuvio 1). Survival B. cereus
(< 1 log: n lasku) oli havaittu suun vaiheen ja ensimmäisen 30 min mahan vaiheessa, kun mahan pH oli välillä 5,0 ja 4,0. Sen jälkeen, kun mahan pH laski alle 4,0, kasvullista solut inaktivoituu nopeasti vatsassa vaiheessa havaittavissa niin nopeaan laskuun koko B. cereus
laskee samankaltaisiin arvoihin B. cereus
itiöiden määrää pitkäaikaisesti mahalaukun alukset. B. cereus
kokonais- ja itiöiden määrä aikana pohjukaissuolessa vaiheessa jäi n. 1,0 log pmy /ml B. cereus
ATCC 14579, n. 2,5 log pmy /ml B. cereus
NVH 1230-88 ja noin. 3.5 log pmy /ml B. cereus
FF 73. Mielenkiintoista, itiöiden laskee B. cereus
NVH 1230-88 laski mahan vaiheen viimeisen tunnin aikana ja useimmat hapan pH. Koska koko B. cereus
määrä ei muuttunut, tämä osoittaa aloittamisesta itiöiden itämisen. B. cereus
ATCC 14579 näytti epäjohdonmukainen itiöiden tuotantoa, mikä johtaa ilman itiöiden kahden ensimmäisen simulaatiot ja hyvin vähän (hieman yli määritysrajan 1,0 itiötä /ml) kahden viimeisen kokeita. Kuvio 1 inaktivointi vegetatiivisten solujen aikana dynaamisen in vitro simulointi ruoansulatuskanavan läpikulun B. cereus ATCC 14579 (1), B. cereus
NVH 1230-88 (2) ja B. cereus
FF 73 (3); B. cereus
yhteensä (a) ja itiöiden (b) lukumäärät selvitettiin maljaamalla MYP sekä ilman lämpökäsittelyä (10 min 80 ° C), vastaavasti, lasagne verde (□), suun vaihe (◊), mahan vaihe (Δ) ja pohjukaissuolen vaihe (○); keskiarvot ja keskihajonta rinnakkaisessa kokeessa eri päivinä on esitetty.
ei havaitsemistesteillä enterotoksiineja Nhel ja Hbl tehtiin, koska kasvua ei havaittu missään maha vaiheissa, mikä on edellytys enterotoksiinin tuotantoon [1 ].
Bile toleranssi B. cereus
kasvu ja eloonjääminen B. cereus
NVH 1230-88 määritettiin, kun läsnä oli vaihtelevia sapen pitoisuuksia (kuvio 2). Optimiolosuhteissa, eli neutraali TSB kanssa pH 7,2, vaikutus sapen oli pitoisuudesta riippuvainen. Pienin pitoisuus, 1,0 g /l härän johti populaatiossa vähentämiseen n. 30% verrattuna ohjaus (TSB ilman sappi) hetkellä 0 tuntia. Lisäksi, sen jälkeen 1 h elinkykyisten määrä väheni n. 40% verrattuna pitoisuus TSB 1,0 g /l härän 0 h. Kuitenkin, kun 2 h talteenotto ja seuraus jäljellä solujen havaittiin, koska B. cereus
pitoisuus oli samanlainen kuin 0 h, ja lopuksi sen jälkeen 3 h, väestö oli kasvanut n. 1 log verrattuna, että 0 h. Kuitenkin, kun läsnä on 5,0 g /l härän indusoi pysyvää laskua 4,1 log CFU /ml keskimäärin (inaktivaation 88% vegetatiivisten solujen) ja 10,0 g /l härän 3,9 log CFU /ml (inaktivaatio 94 %). Kuvio 2 Survival B. cereus NVH 1230-88 Tryptone Soya Broth (TSB), 37 ° C: ssa pH: ssa 7,2 (A) ja pH 5,0 (B), jossa on vaihteleva sappeen (häränsappea, Difco) pitoisuudet: 0,0 g /l (valkoinen ), 1,0 g /l (vaaleanharmaa), 5,0 g /l (tummanharmaa) ja 10,0 g /l (musta).
TSB happamassa 5,0, n. 99% B. cereus
ymppi heti inaktivoitiin sappeen altistuminen, riippumatta sapen pitoisuus, mikä johtaa jatkuvasti koko B. cereus
laskee n. 3,0 log pmy /ml. B. cereus
inokulaatti sisälsi 0,1 ja 0,2% itiöt, niin jatkuva itiöiden määrät saatiin koko kokeen: 2,6 (± 0,2) log itiötä /ml alussa ja 2,5 (± 0,3) log itiötä /ml on end. Kun tämä itiöiden väestö huomioon, kasvullista solut edelleen muodostivat enemmistön (n. 60%) 1% sappea kestävä B. cereus
.
Keskustelu
selviytyminen kasvullisen solujen aikana mahalaukun kulun oli samanlainen kuin aiempien tutkimusten kanssa perunamuusia väliaineen [3]. Näiden kokeilujen n. 10% kasvullisen solut selvisi mahalaukun kulkua, joista suurin osa ensimmäisen mahalaukun jae kun mahalaukun pH oli välillä 5,0 ja 4,0. Nämä solut siirrettiin elävältä suoliston astiaan ja siten välillä 5,5 ja 6,5 ​​log pmy /ml B. cereus
odotettiin suolistossa astiassa. Kuitenkin paljon pienempi määrä, joka lähentää B. cereus
itiöiden määrä, saatiin aikana pohjukaissuolessa vaiheessa. Tämä osoittaa, että vegetatiivinen solut, jotka selvisivät mahaportin inaktivoitiin suoliston ympäristössä. Inkuboimalla erissä kokeiluja TSB ja vaihtelevia pitoisuuksia sapessa osoitti, että suurin osa (99,1%) vegetatiivisten solujen inaktivoitiin välittömästi sen jälkeen sappeen altistuksen pH: ssa 5,0, riippumatta sapen pitoisuus on välillä 1,0-10,0 g härän /l. Lopuksi vegetatiivinen B. cereus
soluja, jotka selvisivät mahaportin poistettiin aikana myöhemmin pohjukaissuolen vaihe, jonka bakteereja tappava vaikutus sappeen.
Bakteereja tappava vaikutus sappinesteen kasvullisen B. cereus
soluissa oli pH: sta riippuvaista. PH: ssa 7,0, inaktivaatio korreloi sappeen pitoisuus, ja alhaisin sapen pitoisuus (1 g /l) voi edes selviytymistä ja kasvua. Sitä vastoin pH: ssa 5,0, instant inaktivointi enemmistön (> 99%) vegetatiivisten solujen tapahtunut, riippumaton sapen pitoisuus (alueella 1,0-10,0 g /l). Samanlainen kuin meidän tuloksia, inaktivaation Listeria monocytogenes sappihappojen myös lisääntynyt voimakkaasti happamassa pH: ssa 5,5 [26]. Bakteerien inakti- vointiin sappi on samanlainen, että orgaanisia happoja, jotka ovat erityisen tehokkaita matalassa pH: ssa. Logaritminen happovakio (pKa) konjugoitumattoman sappihappojen on noin 5,1, mutta konjugaatio glysiinin alentaa pKa n. 3.7 [27]. Konjugaatio tauriini johtaa vielä alhaisempi pKa n. 1.5 [28]. Tämän seurauksena suurin osa konjugoitujen sappihappojen dissosioituu ja ionisoitua useimmat fysiologiset ja suoliston pH-arvoja, eli 95,24% pH: ssa 5,0 ja 99,95% pH: ssa 7,0 glycoconjugated sappihappoja. Vain järjestäytynyt muodot sappihappojen voi passiivisesti solukalvon ylittämiseksi, kun taas liukenevat ja ionized konjugoidut sappihapot edellyttävät erityisiä aktiivista liikennejärjestelmien [29]. Tämän seurauksena, 4,67%: n konjugoitujen sappihappojen voi tulla B. cereus
solujen pH: ssa 5,0, mutta sitä vastoin vain 0,03% pH: ssa 7,0. Lisäksi sisäinen pH elinkelpoisten B. cereus
soluja aina välissä 6,0 ja 7,5, riippuen ulkoisesta pH ja viljelyolosuhteet [30]. Sen jälkeen, kun liukenemattomassa sappihapot ovat diffundoituneet B. cereus
soluja, suurin osa niistä (99,50-99,98%) läpikäy solunsisäisen dissosiaation, mikä tappava sisäisen happamuuden.
On raportoitu, että tiettyjen elintarvikkeiden komponentteja lisäsi sapen toleranssi B. cereus
vegetatiivinen soluja suolen väliaineessa pH 6,5 [22]. Kuitenkin komposiitti elintarvikematriisin lasagne verde ei lieventää haitallisia vaikutuksia sapen on B. cereus
aikana kokeissa pH: ssa 5,0. On mahdollista, että ruoka tyyppi vaikutuksia vain havaitaan enemmän optimi-pH tälle elintarvikevälitteiset patogeenin, kun selvempi eroja hoitojen odotetaan.
Toisin vegetatiivisiin soluihin, B. cereus
itiöt ei inaktivoi sapen vaikka ne eivät itää suoliston alustassa, joka sisältää 5-10 g /l härän. Tämä on sama kuin havaintoja dynaaminen simulointi ruuansulatuskanavan kulkua itiöitä [25], jossa itiöt pysyivät muuttumattomina aikana suun, vatsan ja pohjukaissuolen vaihe ja alkoi vasta itämisen aikana dialyysin, kun sapen pitoisuus aleni 5,0 g /l härän sappirakon < 0,5 g /l, ja niitä erän inkuboinnin kokeissa [31], jossa itiöt itivät 2 tunnin sisällä suolen simulointi alustassa, joka sisälsi 1,0 g /l sappeen. Muut tutkimukset kertoi myös, että itiöt pystyivät itää ja lisääntyä simuloidussa suoliston sisältävä neste sappeen (1,5 g härän /l) [32] ja että sapen vastus B. cereus
itiöitä oli parempi kuin vegetatiivisen soluihin [33 ]. Lopuksi korkea sapen pitoisuuksia (≥ 5 g /l härän) eivät salli itiöiden itämisen ja hämärä sappi pitoisuuksina (alle 5 g /l) indusoi itävyys ja kasvu.
Lisäksi sen merkitys ravinteiden ruoansulatus ja imeytyminen, sappi on myös tärkeä antimikrobisen yhdisteen suolessa [7]. Epänormaali alhainen suoliston sappi tasoja voi esiintyä ihmisiä sappeen tai maksan poikkeavuudet tai puutteita enterohepaattisen kierron, jotka saattavat tehdä nämä ihmiset erityisen alttiita ripuli, sillä tehostetun selviytymisen nautitaan ja suolistobakteerien. Lisäksi, sappihapot ovat endogeenisiä laksatiiveja, joten imeytymishäiriö sappihappojen ohutsuolesta, mikä nostaa sapen tasoa päätelaitteeseen ohutsuolessa ja paksusuolessa, voivat myös aiheuttaa ripulia [34].
Päätelmä
B. cereus
vegetatiivinen solut eivät ole voineet jatkaa ruoansulatuskanavan kohtaa niin simuloida in vitro
kokeessa, huolimatta korkeasta inokulaatin pitoisuus 7,0-8,0 log CFU /ml ja viljelyä inokulaattierä komposiitti elintarvikematriisin lasagne verde. Suurin vegetatiivisten solujen inaktivoitiin mahahapon, ja eloonjääneiden solujen myöhemmin inaktivoitiin sapen aikana pohjukaissuolessa vaiheessa. Sen sijaan, B. cereus
itiöt selvisi simulointi ruoansulatuskanavan passage ja pysyi itiöt epäedullisissa olosuhteissa itävyys (ja seuraus). Siksi infektoiva annos B. cereus
todennäköisesti vaihtelee fysiologinen lomakkeen kulutetaan, on pienempi korkeasti kestävä itiöitä. Vaikka maha eloonjääminen oli samanlainen eri kannat, niiden itiöiden muodostuminen taipumus vaihteli huomattavasti, mikä puolestaan ​​on merkittäviä vaikutuksia maha selviytymisen mahdollisuuksia ja siten infektoiva annos eri B. cereus
kantoja.
Julistukset
kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alla linkkejä kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 13099_2012_68_MOESM1_ESM.pdf Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 13099_2012_68_MOESM2_ESM.pdf Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 Kilpailevat kiinnostusta
Me kaikki kirjoittajat, ilmoittaa, että meillä ei ole kilpailevia intressejä.
Tekijät maksuosuudet
SC, MU ja TVdW suunnitellut kokeet; SC ja SH suorittaa kokeellista työtä ja käsitellä tulokset; SC kirjoitti käsikirjoituksen apunaan MU, NB ja TVdW. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Jatkuvasti alhaiset ilmentyminen hZip1 vuonna mucinous karsinoomat munasarja, paksusuoli, vatsan ja keuhkojen
• Exsanguinating ylemmän ruoansulatuskanavan verenvuotojen takia Unusual malformaatio (AVM) mahan ja perna: tapausselostus