A inactivação de células vegetativas Bacillus cereus pelo ácido gástrico e biliar in vitro durante o trânsito gastrointestinal

Inactivação de Bacillus cereus
células vegetativas de ácido gástrico e bile durante in vitro
trânsito gastrointestinal da arte abstracta
Fundo
A origem alimentar patógeno Bacillus cereus
pode causar intoxicação alimentar diarreicas pela produção de enterotoxinas no intestino delgado. O pré-requisito para a doença diarréica é, portanto, a sobrevivência durante a passagem gastrointestinal.
Métodos
células vegetativas de 3 diferentes B. cereus
estirpes foram cultivadas em uma matriz de comida de verdade composto, verde lasanha, e sua sobrevivência durante a simulação subsequente de passagem gastrointestinal foi avaliada usando in vitro
experimentos simulando o trânsito através do trato gastrointestinal superior humano (da boca ao intestino delgado).
resultados
Não houve sobrevivência de células vegetativas, apesar dos altos níveis de inóculo de 7,0 para 8,0 log UFC /g, e a presença de diversos componentes alimentares potencialmente protectores. fracções significativas (aprox. 10% do inoculo consumido) de células vegetativas B. cereus
sobreviveram passagem gástrica, mas foram subsequentemente inactivadas por exposição em meio intestinal biliar fracamente ácido (pH 5,0). Em contraste, os baixos números de esporos presentes (até 4,0 log de esporos /g) mostrou excelente sobrevivência e manteve-se esporos viáveis ​​por toda a simulação passagem gastrointestinal.
Conclusão
células vegetativas são inactivados pelo ácido gástrico e bílis durante a passagem gastrointestinal , enquanto que os esporos são resistentes e sobreviver. Portanto, a forma fisiológica (células vegetativas) ou esporos de B. cereus
consumido determina a sobrevivência subsequente gastrointestinal e, assim, a dose infecciosa, que se espera que seja muito menor do que para os esporos células vegetativas. Não houve diferenças significativas na capacidade de sobrevivência gastrointestinal foi encontrado entre as diferentes estirpes. No entanto, considerável variabilidade tensão foi observada em tendência esporulação durante o crescimento em meio de laboratório e alimentos, o que tem implicações importantes para o potencial de sobrevivência gastrointestinal de estirpes diferentes B. cereus
.
Palavras-chave
Bacillus cereus
bile In vitro
simulação Gastrointestinal passagem Background
B. cereus
pode causar emético e diarreicas e intoxicação alimentar pela produção de resp. emético (cereulide) e toxinas diarreicas (enterotoxina não-hemolítico (Nhel), hemolisina BL (Hbl), citotoxina K (CytK), etc.) [1]. Em contraste com a toxina cereulide extremamente estável, as enterotoxinas são facilmente degradados por enzimas digestivas e ácidos (proteases) e enterotoxinas pré-formadas em alimentos, assim, não retêm a sua toxicidade durante a passagem gastrointestinal [2]. Portanto, o pré-requisito para a intoxicação alimentar diarreicas é enterotoxinas produção por B. cereus
no intestino delgado, de modo a sobrevivência gastrointestinal de vegetativa B. cereus
foi investigada. Foi mostrado anteriormente que aprox. 10% das células vegetativas sobreviveram passagem gástrica [3]. Em seguida, as bactérias sobreviventes são confrontados com bílis no lúmen do duodeno, a parte proximal do intestino delgado.
Bile consiste principalmente em ácidos biliares (aproximadamente 72% do total de lípidos), além de fosfolipidos (aprox. 24% ) e colesterol (aprox. 4%) [4]. Em seres humanos, estes ácidos biliares consistem principalmente de ácido eólico (entre 50% e 80%) e ácido quenodesoxicólico (entre 20% e 50%) [5, 6]. Eles são sintetizados no fígado a partir do colesterol e conjugado com glicina (aprox. 75%) ou taurina (aprox. 25%), com proporções de conjugação, dependendo da dieta, entre outros factores [6, 7]. A secreção de bile é desencadeada pela libertação de gordura e de ácido do estômago para o duodeno, o que resulta em 7 a 15 mM de sais biliares no intestino delgado após uma refeição, o que corresponde com 5 a 10 g Oxgall /G [7-10]. Desconjugação de ácidos biliares por bactérias intestinais indígenas ocorre principalmente no íleo distai, onde aprox. 95% dos ácidos biliares é reabsorvida, dos quais aprox. 15% é não-conjugada [7, 10]. Ambos os ácidos biliares conjugados e não conjugados são absorvidas por difusão passiva ao longo de todo o intestino, mas este processo é mais eficiente para os ácidos biliares não-conjugados. Além disso, os sistemas de transporte específicos activos estão presentes no íleo distai, que são mais eficientes na absorção de ácidos biliares conjugados. Depois da absorção a partir do intestino, os ácidos biliares são transportados para o fígado através do sangue, reconjugated e segregada de novo na vesícula biliar. Este processo de reciclagem de ácidos biliares é chamado circulação entero-hepática.
O papel fisiológico de ácidos biliares é a aumentar a solubilidade da gordura dietética e facilitar a sua degradação e a absorção. Devido às suas propriedades detergentes, ácidos biliares também alterar as membranas celulares e, portanto, têm efeitos citotóxicos e bactericidas, visíveis por um aumento da fluidez da membrana e permeabilidade [11-14]. Dependendo da concentração biliar, perturbação da integridade da membrana celular ocorre quase instantaneamente, provocando fugas e a morte celular, ou de forma mais lenta e subtilmente, alterando a permeabilidade da membrana e fluidez, a actividade de proteínas críticas na membrana da célula e a hidrofobicidade da membrana [15 ]. Além disso a destruição da integridade da membrana celular bacteriana, bílis também induz danos no ADN, enrolamento incorrecto e desnaturação das proteínas, levando à morte das bactérias [16].
Bactérias Gram-positivas tendem a ser mais sensíveis do que a bile Gram negativas, mas a tolerância bile é muito cepa específica, de modo afirmações generalizadas para espécies que não são possíveis [17-19]. Apesar dos efeitos bactericidas da bílis, algumas micro-organismos desenvolveram resistência biliar por indução de enzimas metabolizadoras de bílis e os sistemas de transporte ou, alterando a permeabilidade da membrana, a fluidez ou carga. Alguns patógenos entéricos pode mesmo depender de bile como um sinal de acolhimento para a regulação virulência. Por exemplo, Salmonella enterica serovar Typhimurium AcrAB possui a bomba de efluxo multidrogas para a remoção e transporte de bílis através da membrana externa [20]. Além disso, a invasão das células epiteliais do hospedeiro por esta bactéria é induzida por concentrações biliares reduzido, de modo que após o trânsito para o íleo distai ou na camada de muco [21].
A co-ingestão de alimentos é um factor importante na antibacteriana actividade da bílis no intestino. inactivação de bactérias bile é influenciada pela presença de componentes do alimento, o que pode criar um micro-ambiente de protecção ou biliar ligam. Por exemplo, a concentração máxima tolerada biliar por B. cereus
durante o crescimento em meio intestinal era de 3 g /L de porcino bílis quando pea foi suplementado, enquanto apenas 0,9 g /L e 0,6 g /l de bilis foram toleradas na presença de leite e a ausência de alimentos, respectivamente [22]. Também para Lactobacillus curvatus, a presença de uma matriz de comida, ou seja carne, aumentou a sua tolerância à bílis e, subsequentemente, a sua sobrevivência gastrointestinal [23]. Similarmente, a tolerância de bílis de Bifidobacterium breve foi aumentada por proteínas de soja [24].
Neste estudo, a sobrevivência gastrointestinal de B. cereus vegetativo
células foi investigada e ligada ao papel bactericida da bílis. O B. cereus
inoculo foi cultivada no compósito com matriz de comida lasanha Verde antes da in vitro
simulação da passagem gastrointestinal para incluir quaisquer efeitos protectores potenciais das partículas de alimentos sobre a sobrevivência gastrointestinal de B. cereus
.
Materiais e métodos
B. cereus
cepas, o cultivo e enumeração
O B. cereus
estirpes ATCC 14579, NVH 1230-1288 e 73 FF (Tabela 1) foram cultivadas e subsequentemente, subcultivadas em 10 mL de caldo de soja triptona (TSB, Oxoid) durante 24 h a 30 ° C. Depois da centrifugação e ressuspensão em 1 ml de solução fisiológica Peptona Sal (PPS, 8,5 g /L de NaCl (Fluka) e 1 g /L neutralizada peptona bacteriológica (Oxoid)), 830 uL de a subcultura foi inoculado em 83 g de lasanha Verde (adquirido em supermercado local) em sacos Stomacher e incubadas durante 24 h a 22 ° C. verde lasanha Retail foi comprado no supermercado local, que continha em log média de 4,7 UFC /g bactérias totais (desvio padrão de 1,3 log UFC /g, análise de 11 produtos diferentes durante um período de 6 meses) e ≤ log 2,0 UFC /g B . cereus
. O pH médio deste produto alimentar foi 5,52 (desvio padrão ± 0,06) .table 1 A simulação da passagem gastrointestinal foi realizada com três estirpes B. cereus diferentes: o tipo de estirpe de B. cereus ATCC 14579, a clínica isolado B. cereus NVH 1230 -88 de um surto de intoxicação alimentar diarreicas e o isolado de alimentos B. cereus FF 73 a partir da matriz alimentar pertinentes, ou seja, verde lasanha
B. cereus estirpe
Origem
temperatura de crescimento mininal ( ° C)
Hbl produção
produção Nhe
ATCC114579
estirpe Art > 10
+
+
NVH2 1230 -88
clínicas (fezes humanas)
8
+
- FF3 73
alimentos (verde lasanha)
10
+
+
1ATCC = American Type Culture Collection, EUA; 2NVH = Escola Norueguesa de Ciências Veterinárias, Oslo, Noruega; 3FF = Flanders 'Recolha de Alimentos, na Bélgica.
A contagem total e B. cereus
contagem foram determinadas por plaqueamento das diluições apropriadas em PPS em triptona soja Agar (TSA) e ágar manitol-gema-Polimixina B (MJ .., respectivamente concentrações de esporos foram determinadas por plaqueamento após aquecimento a 80 ° C durante 10 min
in vitro
simulação de passagem gastrointestinal of the gastrointestinal experiência de simulação dinâmica compreendida cinco fases: 1) a boca, 2) o estômago, 3) do duodeno, 4) de diálise e 5) o íleo [25]. Resumidamente, o Verde lasanha contendo o B. cereus
inoculo (83 g) foi misturada com meio de saliva (56 mL, pH 6,5, 37 ° C) por stomaching durante 1 min (Stomacher Lab Blender 400, Seward) e incubou-se durante 10 min antes da transferência para o recipiente de estômago. O pH gástrico foi diminuída 5,0-3,0 durante os primeiros 90 minutos e a 2,0 durante o último 90 min de ácido continuamente adicionado (M HCl 0,28). O esvaziamento gástrico foi iniciado 30 minutos após o início da fase gástrica em 5 fracções por bombeamento descontínua, de tal maneira que aprox. 25% do conteúdo gástrico foi removido após 1 h, 50% após 2 h e 75% após 3 h. O esvaziamento gástrico fraccionada resultou num 150 min sobreposição entre o estômago e duodeno fase, em que o B. cereus
inoculo foi dividido em sub-populações que foram submetidas a vários tempos de incubação diferentes na fase de estômago (min. 30 min, max . 180 min) e fase duodeno (min. 10 min, máx. 160 min). O recipiente intestinal foi anaeróbia (lavada com gás de azoto) e continha meio intestinal com 10,0 g /l de bilis (Oxgall, Disco) e o pH pH foi ajustado automaticamente por um controlador de pH (FerMac 260, Electrolab) para permanecer a um pH de 5,0 durante o primeiros 45 minutos e a pH 6,0, durante a última 115 min. E o final da fase de duodeno, os conteúdos gástricos completas foram transferidos e a concentração biliar foi reduzido por diluição de 5 g /L. Durante a fase seguinte, ≥ 90% deste biliar foi removido por diálise e competição com bactérias intestinais humanas foi simulado durante a fase final do íleo. No entanto, após a eliminação de células vegetativas de B. cereus
, o experimento foi interrompido gastrointestinal, resultando em experiências que consistem de apenas os primeiros três fases. tolerância Bile Os experimentos foram realizados em triplicado com diferentes B. cereus
inóculos em dias diferentes.
de B. cereus
B. cereus
estirpe NVH 1230-1288 foi cultivado e, posteriormente repicadas em 10 ml de TSB durante 24 h a 30 ° C. Em seguida, 100 ul da subcultura foi inoculada em tubos contendo 9,9 ml de TSB e incubou-se a 37 ° C. O pH da TSB era ou neutro (pH = 7,2) ou ácida (pH = 5,0) e suplementado com concentrações biliares diferentes, resultando em concentrações finais de 0,0 (controlo de TSB), 1,0, 5,0 e 10,0 g /L Oxgall (Difco ). A sobrevivência da vegetativa B. cereus
células foi avaliada por plaqueamento das diltutions apropriadas no PPS na TSA. Foi determinada
A produção de toxina
Produção de enterotoxinas Nhe e Hbl analisando amostras de 1 ml após filtração (0,2 filtros mm seringa, Whatman) com os Duopath® cereus Enterotoxins (Merck) de acordo com as instruções dos fabricantes.
Resultado
Crescimento de B. cereus
in verde lasanha
O verde lasanha foi inoculado com aprox . 6,0 CFU /g de B. cereus
e incubadas durante 24 h a 22 ° C para se obter um inoculo vegetativo altamente concentrada de B. cereus
células cultivadas numa matriz alimentar compósito com microbiota alimentos por simular o armazenamento de lasanha contaminado pelo temperatura do quarto. Isto resultou em Verde lasanha contendo aprox. 8,5 log UFC /g de bactérias totais, dos quais B. cereus
constituídos 7,0 a 8,0 CFU /g, dependendo da estirpe (Tabela 2). B. cereus
NVH 1230-1288 mostrou uma concentração de esporos estável de 3,5 esporos de log /g, proveniente do inóculo TSB. Em contraste, a esporulação adicional era aparente a partir de aprox. 4,0 esporos de log /g para 4,5 esporos de log /g após 30 h de B. cereus
Notavelmente FF 73., B. cereus
ATCC 14579 não produziu quaisquer esporos após 30 h de incubação, com apenas números muito baixos ( 3,0 esporos /g) observada em apenas um dos sacos de 3 replicados. Após a inoculação e incubação, o Verde lasanha foi, portanto, altamente contaminado com B. cereus
células vegetativas (7,0 a 8,0 log CFU /g) na fase de crescimento estacionário e baixas quantidades de esporos de B. cereus
(até 4,0 log esporos /g) .table 2 Crescimento das três estirpes diferentes B. cereus na matriz de alimentos antes da simulação da passagem gastrointestinal; valores médios de experiências independentes em triplicado, expressos em CFU log /g ± desvio-padrão são apresentados
B. cereus estirpe
Tempo (h)
0

22
24
26
28
30
B. cereus
ATCC14579
Contagem total
5,8 ± 0,1
8,3 ± 0,6
8,4 ± 0,3
8,8 ± 0,2
8,8 ± 0,3
8,9 ± 0,2
total B. cereus
5,7 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,7 ± 0,3
7,2 ± 0,3
7,0 ± 0,2
B. cereus
esporos Art < 2,0 ± 0,0 Art < 2,0 ± 0,0 Art < 2,0 ± 0,0 Art < 2,0 ± 0,0 Art < 2,0 ± 0,0
2,3 ± 0,6
B. cereus
NVH 1230-1288
Contagem total
5,9 ± 0,1
8,2 ± 0,2
8,4 ± 0,1
8,9 ± 0,0
8,9 ± 0,1
8,8 ± 0,2
total de B. cereus
6,2 ± 0,3
7,9 ± 0,2
8,2 ± 0,1
8,5 ± 0,2
8,3 ± 0,3
7,9 ± 0,1
B. cereus
esporos
3,5 ± 0,6
3,5 ± 0,2
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
B. cereus
FF 73 Contagem total
5,7 ± 0,1
8,5 ± 0,1
8,7 ± 0,1
9,0 ± 0,0
9,0 ± 0,3
8,9 ± 0,3
total de B. cereus
5,7 ± 0,1
8,1 ± 0,2
8,0 ± 0,1
8,3 ± 0,1
8,2 ± 0,1
8,3 ± 0,2
B. cereus
esporos
3,8 ± 0,2
3,9 ± 0,4
3,9 ± 0,4
4,0 ± 0,5
4,0 ± 0,3
4,5 ± 0,1
Não foi detectada a produção de enterotoxinas in verde lasanha após 24 h por B. cereus
ATCC 14579 e B. cereus
NVH 1230-1288, enquanto Nhe foi esporadicamente detectada (em 1 de 3 repetições) no caso de B. cereus
FF 73. Isto foi provavelmente devido ao pH ácido de 5,5 Verde lasanha e a temperatura relativamente baixa de incubação de 22 ° C, que não são ideais para a produção de enterotoxina [1]. No entanto, a presença de enterotoxinas pré-formados nos alimentos não são responsáveis ​​pela intoxicação alimentar diarreicas, uma vez que eles são degradados rapidamente durante a passagem gastrointestinal [2].
In vitro
simulação de passagem gastrointestinal de B. cereus
células vegetativas
a lasanha Verde contaminado com 7,0 a 8,0 log de UFC /mL B. cereus
células vegetativas na fase estacionária de crescimento foi submetido a simulação in vitro
da passagem gastrointestinal (Figura 1). Observou-se durante a fase de boca e os primeiros 30 minutos da fase estômago quando o pH gástrico foi entre 5,0 e 4,0; Sobrevivência de B. cereus
(uma redução de log <). Depois disso, quando o pH gástrico diminuído abaixo de 4,0, as células vegetativas foram rapidamente inactivado na fase estômago, perceptível como um rápido declínio do total B. cereus
contagens para valores semelhantes de B. cereus, contagem de esporos em
os vasos gástricos. O B. cereus
totais e esporos contagens durante a fase de duodeno permaneceu aprox. 1,0 log UFC /mL de B. cereus
ATCC 14579, aprox. 2,5 log UFC /mL de B. cereus
NVH 1230-1288 e aprox. 3,5 log UFC /mL de B. cereus
Curiosamente FF 73., a contagem de esporos de B. cereus
NVH 1230-1288 diminuiu durante a fase de estômago durante a última hora e pH mais ácido. Uma vez que o B. cereus
total de contagem não se alterou, isso indica o início da germinação dos esporos. B. cereus ATCC 14579
mostrou produção de esporos inconsistente, resultando na ausência de esporos durante as primeiras duas simulações e números muito baixos (ligeiramente acima do limite de detecção de 1,0 esporos /ml) nas duas últimas experiências. Figura 1 Inactivação de células vegetativas durante a dinâmica na simulação in vitro de passagem gastrointestinal com B. cereus ATCC 14579 (1), B. cereus
NVH 1230-1288 (2) e B. cereus
73 FF (3); o B. cereus
(a) e (b) de esporos contagens foram determinadas por plaqueamento em MJ, sem e com tratamento térmico (10 minutos a 80 ° C), respectivamente, no Verde lasanha (□), a fase total da boca (◊), a fase de estômago (Δ) e a fase duodeno (○); os valores médios e desvio padrão de ensaios em triplicado em dias diferentes são apresentadas.
Nenhum teste de detecção de enterotoxinas Nhe e Hbl foram realizados, uma vez que nenhum crescimento foi observado durante qualquer uma das fases gastrointestinais, o que é um pré-requisito para a produção de enterotoxina [1 ].
tolerância Bile de B. cereus
o crescimento e sobrevivência de B. cereus
NVH 1230-1288 foi determinada na presença de várias concentrações biliares (Figura 2). Em condições óptimas, isto é, TSB neutro com pH 7,2, o efeito da bílis era dependente da concentração. A concentração mais baixa de 1,0 g /L Oxgall resultou numa redução da população de aprox. 30% em comparação com o controlo (TSB sem biliar) no tempo 0 h. Além disso, depois de 1 h, a contagem de viáveis ​​foi reduzido com aprox. 40% em comparação com a concentração em TSB com 1,0 g /L Oxgall a 0 h. No entanto, depois de 2 horas de recuperação e crescimento das células remanescentes foi observada, porque o B. cereus
concentração foi semelhante ao de 0 h, e finalmente, depois de 3 h, a população tinha aumentado com aprox. 1 log em comparação com o que a 0 h. No entanto, a presença de 5,0 g /L Oxgall induziu uma diminuição permanente a 4,1 log UFC /mL, em média (inactivação de 88% das células vegetativas) e que de 10,0 g /L Oxgall a 3,9 log UFC /mL (inactivação de 94 %). Figura 2 Sobrevivência de B. cereus NVH 1230-1288 em Caldo de Triptona de Soja (TSB) a 37 ° C com pH 7,2 (A) e pH 5,0 (B) com várias concentrações (Oxgall, Disco) biliares: 0,0 g /L (branco ), 1,0 g /L (cinzento claro), 5,0 g /L (cinzento escuro) e 10,0 g /L (preto). Online em TSB a pH ácido 5,0, aprox. 99% de B. cereus
inoculo foi instantaneamente inactivado por exposição a bílis, independentemente da concentração biliar, resultando no total constante B. cereus
contagens de aprox. 3,0 log UFC /mL. O B. cereus
inoculo continha entre 0,1 e 0,2% de esporos, a contagem de esporos foram obtidos tão constante ao longo da experiência: 2,6 (± 0,2) esporos /mL log no início e 2,5 (± 0,3) esporos log /ml no fim. Tomando esta população de esporos em conta, as células vegetativas ainda constituíam a maioria (aprox. 60%) do 1% bile resistentes B. cereus
.
Discussão
A sobrevivência das células vegetativas durante a passagem gástrica foi semelhante ao de estudos anteriores com meio de puré de batata [3]. Durante esses experimentos, aprox. 10% das células vegetativas sobreviveram passagem gástrica, a maioria delas na primeira fracção gástrico quando o pH gástrico foi entre 5,0 e 4,0. Estas células foram transferidas para dentro do vaso vivo intestinal e, assim, entre 5,5 e 6,5 log UFC /mL B. cereus
eram esperados no vaso intestinal. No entanto, as contagens muito baixas, o que aproximou o B. cereus
contagem de esporos, foram obtidos durante a fase de duodeno. Isto indica que as células vegetativas que sobreviveram a passagem gástrica foram inactivadas no ambiente intestinal. experiências de incubação de lote em TSB e variando as concentrações de bílis mostrou que a maioria (99,1%) de células vegetativas foi inactivada imediatamente após a exposição bílis a pH 5,0, independentemente da concentração biliar no intervalo de 1,0 a 10,0 g Oxgall /L. Em conclusão, vegetativo B. cereus
células que sobreviveram a passagem gástrica foram eliminados durante a fase de duodeno subsequente pelo efeito bactericida da bile.
O efeito bactericida da bile na vegetativo B. cereus
células era dependente do pH. A pH 7,0, a inactivação foi correlacionada com a concentração biliar, e a concentração mais baixa biliar (1 g /L) ainda permitiu a sobrevivência e crescimento. Em contraste, a pH 5,0, a inactivação instante de a maioria (> 99%) de células vegetativas ocorreu, independente da concentração biliar (na gama de 1,0 a 10,0 g /L). Semelhante aos nossos resultados, a inactivação de Listeria monocytogenes por ácidos biliares foi também fortemente aumentada em pH ácido 5,5 [26]. A inactivação de bactérias por biliar é semelhante ao que por ácidos orgânicos, que são particularmente eficazes tanto a pH baixo. A constante de acidez logarítmica (pKa) dos ácidos biliares não-conjugados é cerca de 5,1, mas conjugação com glicina reduz o pKa para aprox. 3.7 [27]. Conjugação com taurina leva a um pKa inferior do mesmo aprox. 1.5 [28]. Como consequência, a maior parte dos ácidos biliares conjugados é dissociado e ionizado na maioria dos valores de pH fisiológicos e intestinais, ou seja, 95,24%, a pH 5,0 e 99,95% a pH 7,0 para os ácidos biliares glicoconjugado. Apenas as formas ionizadas de ácidos biliares pode passivamente atravessar a membrana celular, ao passo que os ácidos biliares conjugados dissociadas e ionizadas requerem sistemas de transporte activos específicos [29]. Como resultado, 4,67% dos ácidos biliares conjugados pode inserir o B. cereus
células a pH 5,0, em contraste com apenas 0,03% a pH 7,0. Além disso, o pH interno das células viáveis ​​de B. cereus
sempre situa-se entre 6,0 e 7,5, dependendo do pH e condições de cultura externos [30]. Depois de os ácidos biliares sem dissociar ter migrado para células de B. cereus
, a maioria deles (99,50-99,98%) sofre dissociação intracelular, resultando na acidificação interna letal.
Foi relatado que certos componentes dos alimentos aumentou a bílis tolerância de B. cereus
células vegetativas em meio intestinal com [22] pH 6.5. No entanto, o compósito com matriz de comida lasanha Verde não mitigar os efeitos deletérios da bílis em B. cereus
durante as nossas experiências, a pH 5,0. É possível que os efeitos do tipo de alimentos só são observadas a um pH mais óptima para este agente patogénico de origem alimentar, quando são esperadas diferenças mais acentuadas entre os tratamentos.
Em contraste com as células vegetativas, B. cereus
esporos não foram inactivadas por biliar , embora eles não germinaram no meio intestinal contendo 5 a 10 g /L Oxgall. Isto coincide com as observações da simulação dinâmica da passagem gastrointestinal de esporos [25], onde os esporos foram afetados durante a boca, estômago e fase duodeno e só começaram a germinação durante a diálise, quando a concentração de bile foi reduzida de 5,0 g /L Oxgall a < 0,5 g /L e os das experiências de incubação de lote [31], onde os esporos germinaram dentro de 2 h em meio de simulação intestinal contendo 1,0 g /l de bilis. Outros estudos também relatado que os esporos foram capazes de germinar e multiplicar-se em fluido intestinal simulado contendo bílis (1,5 g Oxgall /L) [32], e que a resistência à bilis de B. cereus
esporos foi superior à de células vegetativas [33 ]. Em conclusão, as concentrações alta biliares (≥ 5 g /L Oxgall) não permitem a germinação de esporos, enquanto que as concentrações biliares baixo (< 5 g /L). Induzir a germinação e crescimento
Para além da sua importância na digestão de nutrientes e de absorção, bílis é também um importante composto antimicrobiano no intestino [7]. níveis biliares intestinais baixas anormais podem ocorrer em pessoas com biliar ou do fígado anormalidades ou com deficiências na circulação entero-hepática, que possam tornar essas pessoas especialmente suscetíveis a diarréia por causa do aumento de sobrevivência de bactérias ingeridas e intestinais. Além disso, os ácidos biliares são laxantes endógenos, então má absorção de ácidos biliares do intestino delgado, levando a aumentar os níveis biliares no intestino delgado terminal e o cólon, também pode resultar em diarreia [34].
Conclusão
B. cereus
células vegetativas foram incapazes de sobreviver à passagem gastrointestinal simulada pelo in vitro
experiência, apesar da concentração elevada de inoculo de 7,0 a 8,0 log de UFC /mL e a cultura de inoculo no compósito com matriz de comida lasanha Verde. A maioria das células vegetativas foi inactivado pelo ácido gástrico, e as células sobreviventes foram subsequentemente inactivadas por bílis durante a fase de duodeno. Em contraste, B. cereus
esporos sobreviveu a simulação da passagem gastrointestinal e permaneceu esporos durante condições desfavoráveis ​​para a germinação (e crescimento). Por conseguinte, a dose infecciosa para B. cereus
varia provavelmente de acordo com a forma fisiológica consumido, sendo menor para os esporos altamente resistentes. Embora a sobrevivência gastrointestinal foi semelhante para as diferentes estirpes, a sua tendência a esporulação variou consideravelmente, o que por sua vez, tem implicações importantes para a sobrevivência gastrointestinal e, assim, o potencial de dose infecciosa de diferentes estirpes de B. cereus
.
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dos autores
SC, MU e TVdW projetou as experiências; SC e SH realizado o trabalho experimental e os resultados processados; SC escreveu o manuscrito auxiliado por MU, NB e TVdW. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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