Inaktivering af Bacillus cereus vegetative celler ved mavesyre og galde under in vitro mave transit

Inaktivering af Bacillus cereus
vegetative celler ved mavesyre og galde under in vitro
gastrointestinale transittid
Abstract
Baggrund
fødevarebårne patogener Bacillus cereus
kan forårsage diarré madforgiftning ved produktion af enterotoksiner i tyndtarmen. Forudsætningen for diarré sygdom er således overlevelse under gastrointestinal passage.
Metoder
vegetative celler af 3 forskellige B. cereus
stammer blev dyrket i en rigtig sammensat fødevare matrix, lasagne verde, og deres overlevelse under den efterfølgende simulering af gastrointestinal passage blev vurderet ved hjælp af in vitro
eksperimenter simulerer transit gennem den menneskelige øvre mave-tarmkanalen (fra mund til tyndtarmen).
Resultater
Ingen overlevelse vegetative celler blev observeret, på trods af de høje inokulumniveauer niveauer af 7,0 til 8,0 log CFU /g og tilstedeværelsen af ​​forskellige potentielt beskyttende fødevarekomponenter. Væsentlige fraktioner (ca.. 10% af den forbrugte inoculum) af B. cereus
vegetative celler overlevede gastrisk passage, men de blev efterfølgende inaktiveret ved galde eksponering i svagt sure intestinal medium (pH 5,0). I modsætning hertil det lave antal af sporer stede (op til 4,0 log sporer /g) viste fremragende overlevelse og forblev levedygtige sporer hele mave passage simulering.
Konklusion
vegetative celler inaktiveres ved mavesyre og galde under gastrointestinal passage , mens sporerne er resistente og overleve. Derfor er den fysiologiske formen (vegetative celler eller sporer) af B. cereus
forbruges bestemmer efterfølgende gastrointestinal overlevelse og dermed den infektive dosis, som forventes at være meget lavere for sporer end vegetative celler. Ingen signifikante forskelle i gastrointestinal overlevelse evne blev fundet blandt de forskellige stammer. Imidlertid blev betydelig belastning variation hos sporedannelse tendens under vækst i laboratoriet medium og mad, som har stor betydning for mave-overlevelse potentiale forskellige B. cereus
stammer.
Nøgleord
Bacillus cereus
Bile In vitro
simulering Gastrointestinal passage Baggrund
B. cereus
kan forårsage brækmiddel og diarré og madforgiftning ved produktion af hhv. brækmiddel (cereulide) og diarré-toksiner (ikke-hæmolytisk enterotoxin (Nhe), hæmolysin BL (HBL), cytotoksin K (CytK), etc.) [1]. I modsætning til den ekstremt stabil toksin cereulide, er enterotoksin let nedbrydes af syre og fordøjelsesenzymer (proteaser) og således præformede enterotoksin i fødevarer bevarer ikke deres toksicitet under gastrointestinal passage [2]. Derfor er forudsætningen for diarré madforgiftning enterotoksin produktion af B. cereus
i tyndtarmen, så den gastrointestinale overlevelse vegetative B. cereus
blev undersøgt. Det blev tidligere vist, at ca.. 10% af de vegetative celler overlevede gastrisk passage [3]. Dernæst overlevende bakterier konfronteret med galde i lumen af ​​duodenum, den proximale del af tyndtarmen.
Bile består hovedsageligt af galdesyrer (ca. 72% af de totale lipider), foruden phospholipider (ca.. 24% ) og cholesterol (ca.. 4%) [4]. Hos mennesker er disse galdesyrer består hovedsageligt af cholsyre (mellem 50% og 80%) og chenodeoxycholsyre (mellem 20% og 50%) [5, 6]. De syntetiseres i leveren ud fra cholesterol og konjugeret til glycin (ca.. 75%) eller taurin (ca.. 25%), med konjugeringsteknikker forhold afhængigt af kost blandt andre faktorer [6, 7]. Udskillelsen af ​​galde udløses af fedt og syre-frigivelse fra maven ind i tolvfingertarmen, hvilket resulterer i 7 til 15 mM galdesalte i tyndtarmen efter et måltid, svarende til 5 til 10 g Oxgall /L [7-10]. Dekonjugering af galdesyrer af indfødte tarmbakterier forekommer hovedsagelig i den distale ileum, hvor ca.. 95% af de galdesyrer reabsorberes, hvoraf ca.. 15% er ukonjugeret [7, 10]. Både konjugerede og ukonjugerede galdesyrer absorberes ved passiv diffusion langs hele tarmen, men denne proces er mere effektivt for ukonjugerede galdesyrer. Derudover specifikke aktive transportsystemer er til stede i den distale ileum, der er mere effektive til optagelse af konjugerede galdesyrer. Efter absorption fra tarmen, bliver galdesyrer transporteres til leveren via blodet, reconjugated og udskilles igen i galden blæren. Denne genvindingsproces af galdesyrer kaldes enterohepatisk cirkulation.
Fysiologiske rolle af galdesyrer er at forøge opløseligheden af ​​fedt og lette dens nedbrydning og absorption. På grund af deres vaskemiddel egenskaber, galdesyrer også ændre cellemembraner og dermed har cytotoksiske og bakteriedræbende virkninger, mærkbare ved en øget membran fluiditet og permeabilitet [11-14]. Afhængigt af galde koncentration, afbrydelse af cellemembranen integritet den forekommer næsten øjeblikkeligt, hvilket forårsager celle lækage og død, eller langsommere og raffineret ved at ændre membranpermeabiliteten og fluiditet, aktiviteten af ​​kritiske proteiner i cellemembranen og membranen hydrofobicitet [15 ]. Ud over destruktion af den bakterielle cellemembran integritet, galde inducerer også DNA-ødelæggelse, denaturering og fejlfoldning af proteiner, hvilket fører til død af bakterier [16].
Grampositive bakterier tendens til at være mere følsomme over for galde end Gram- negative bakterier, men galde tolerance meget stamme specifikke, så generaliserede udsagn for arter, der ikke er mulige [17-19]. På trods af de bakteriedræbende virkninger af galde, har nogle mikroorganismer udviklet galde modstand ved induktion af galde enzymer og transportsystemer eller ved at ændre permeabilitet membran, flydende eller afgift. Nogle enteriske patogener kan endda afhænge af galde som en vært signal til virulens regulering. For eksempel Salmonella enterica serovar Typhimurium besidder multidrug efflukspumpen AcrAB for galde fjernelse og transport gennem den ydre membran [20]. Desuden er invasion af værtens epitelceller af denne bakterie induceret af sænkede galdekoncentrationer, så efter transit til den distale ileum eller ind slimlaget [21].
Co-indtagelse af fødevarer er en vigtig faktor i det antibakterielle aktivitet af galde i tarmene. Bile inaktivering af bakterier påvirkes af tilstedeværelsen af ​​fødevarer komponenter, der kan skabe beskyttende mikro-miljøer eller binde galde. For eksempel er den maksimale galde koncentration tolereres af B. cereus
under vækst i intestinal mediet var 3 g /l porcin galde når Ært suppe blev suppleret, mens kun 0,9 g /l og 0,6 g /L galde blev tolereret i nærvær mælk og fraværet af fødevarer, henholdsvis [22]. Også for Lactobacillus curvatus, tilstedeværelsen af ​​en fødevare matrix, nemlig kød, øget sin galde tolerance og derefter sin gastrointestinal overlevelse [23]. Tilsvarende blev galden tolerance på Bifidobacterium breve forstærket af sojaproteiner [24].
I denne undersøgelse blev den gastrointestinale overlevelse vegetative B. cereus
celler undersøgt og forbundet med den baktericide rolle af galde. B. cereus
inokulum blev dyrket i det sammensatte fødevarer matrix lasagne verde forud for in vitro
simulering af mave passage til at omfatte eventuelle beskyttende virkninger af den mad partikler på det gastrointestinale overlevelse B. cereus
.
Materialer og metoder
B. cereus
stammer, dyrkning og tælling
B. cereus
stammer ATCC 14579, NVH 1230-1288 og 73 FF (tabel 1) blev dyrket og efterfølgende subkultiveret i 10 ml trypton-soja-bouillon (TSB, Oxoid) i 24 timer ved 30 ° C. Efter centrifugering og resuspension i 1 ml Fysiologisk pepton saltopløsning (PPS, 8,5 g /L NaCl (Fluka) og 1 g /l neutraliseret bakteriologisk pepton (Oxoid)), blev 830 pi af subkultur inokuleret på 83 g lasagne verde (købt i det lokale supermarked) i blenderen poser og inkuberet i 24 timer ved 22 ° C. Retail lasagne verde blev købt i det lokale supermarked, som indeholdt i gennemsnit 4,7 log CFU /g totale bakterier (standardafvigelse på 1,3 log CFU /g, analyse af 11 forskellige produkter i løbet af en 6 måneders periode) og ≤ 2,0 log CFU /g B . cereus
. Den gennemsnitlige pH af denne fødevareprodukt var 5,52 (standardafvigelse ± 0,06) .table 1 Simuleringen af ​​gastrointestinal passage blev udført med tre forskellige B. cereus-stammer: typen stamme B. cereus ATCC 14579, den klinisk isolat B. cereus NVH 1230 -88 fra en diarré madforgiftning udbrud og maden isolere B. cereus FF 73 fra den relevante mad matrix, nemlig lasagne verde
B. cereus stamme
Origin
mininal vækst temperatur ( ° C)
HBL produktion
Nhe produktion
ATCC114579
typen stammen
> 10
+
+
NVH2 1230 -88
kliniske (humane fækalier)
8
+ -
FF3 73
mad (lasagne verde)
10
+
+
1ATCC = American Type Culture Collection, USA; 2NVH = norske School of Veterinary Science, Oslo, Norge; 3FF = Flandern 'Food Collection, Belgien.
Samlede antal og B. cereus
count blev bestemt ved udpladning passende fortyndinger i PPS på Tryptone Soya Agar (TSA) og Mannitol-Æggeblomme-polymyxin B agar (MYP .., henholdsvis Spore koncentrationer blev bestemt ved udpladning efter opvarmning til 80 ° C i 10 minutter Salg In vitro
simulering af gastrointestinal passage
dynamiske gastrointestinal simuleringseksperiment omfattede fem faser: 1) munden, 2) maven, 3) duodenum, 4) dialyse og 5) ileum [25]. Kort fortalt blev lasagne verde indeholdende B. cereus
inokulum (83 g) blandet med spyt medium (56 ml, pH 6,5, 37 ° C) ved stomaching i 1 min (Stomacher Lab Blender 400, Seward) og inkuberet i 10 min før overførsel til maven fartøj. Den gastriske pH blev reduceret fra 5.0 til 3.0 i løbet af de første 90 minutter og til 2,0 i den sidste 90 min ved kontinuert tilsat syre (0,28 M HCI). Mavetømning blev indledt 30 minutter efter starten af ​​den gastriske fase i 5 fraktioner ved diskontinuerlig pumpning på en sådan måde, at ca.. 25% af maveindholdet blev fjernet efter 1 time, 50% efter 2 timer og 75% efter 3 timer. Den fraktionelle mavetømning resulterede i et 150 min overlapning mellem mavesækken og duodenum fase, hvori B. cereus
inokulum blev delt i subpopulationer, der har gennemgået forskellige inkubationstider i maven fase (min. 30 min, max . 180 min) og duodenum fase (min. 10 min, maks. 160 min). Tarmens fartøj var anaerob (skyllet med nitrogen gas) og indeholdt intestinal medium med 10,0 g /l galde (Oxgall, Difco), og pH pH blev automatisk justeret ved en pH-controller (FerMac 260, Electrolab) at forblive ved pH 5,0 i løbet af første 45 min og ved pH 6,0 under den sidste 115 min. Og enden af ​​duodenum fase blev de omhandlede mavens indhold overført og koncentrationen galde blev sænket ved fortynding til 5 g /L. Under den næste fase, blev ≥ 90% af denne galde fjernes ved dialyse og konkurrence med menneskelige tarmbakterier blev simuleret i den sidste ileum fase. Men efter eliminering af B. cereus
vegetative celler, blev den gastrointestinale eksperiment stoppet, hvilket resulterer i eksperimenter, der består af de tre første kun faser. Forsøgene blev udført i tre eksemplarer med forskellige B. cereus
inokula på forskellige dage.
Bile tolerance B. cereus
B. cereus
stammen NVH 1230-1288 blev dyrket og efterfølgende subkultiveret i 10 ml TSB i 24 timer ved 30 ° C. Derefter 100 pi af subkultur blev inokuleret i glasrør indeholdende 9,9 ml TSB og inkuberet ved 37 ° C. PH af TSB er enten neutrale (pH = 7,2) eller sur (pH = 5,0) og suppleret med varierende galdekoncentrationer, hvilket resulterer i slutkoncentrationer på 0,0 (TSB-kontrol), 1,0, 5,0 og 10,0 g /L Oxgall (Difco ). Overlevelsen af ​​vegetative B. cereus
celler blev vurderet ved udpladning passende diltutions i PPS på TSA.
Toxin produktion
Produktion af enterotoksiner Nhe og HBL blev bestemt ved at analysere 1 ml prøver efter filtrering (0,2 um sprøjte filtre, Whatman) med Duopath® cereus Enterotoksiner (Merck) i henhold til producentens anvisninger.
Resultater
vækst af B. cereus
i lasagne verde
lasagne verde blev podet med ca. . 6,0 CFU /g B. cereus
og inkuberet i 24 timer ved 22 ° C til opnåelse af en stærkt koncentreret inokulum af vegetative B. cereus
celler dyrket i sammensatte levnedsmidler matrix med fødevarer mikrobiota ved at simulere opbevaring af forurenet lasagne på stuetemperatur. Dette resulterede i lasagne verde indeholder ca.. 8.5 log CFU /g total bakterier, hvoraf B. cereus
udgjorde 7,0 til 8,0 CFU /g, afhængigt af stamme (tabel 2). B. cereus
NVH 1230-1288 viste en stabil spore koncentration på 3,5 log sporer /g, stammer fra TSB inokulum. I modsætning hertil yderligere sporulering fremgik af ca.. 4,0 log sporer /g til 4,5 log sporer /g efter 30 h for B. cereus
FF 73. Bemærkelsesværdigt, B. cereus
ATCC 14579 ikke producerer nogen sporer efter 30 timers inkubation, med kun meget lave tal ( 3,0 sporer /g) observeret i kun 1 af de 3 replikate poser. Efter inokulering og inkubation blev lasagne verde således stærkt forurenet med B. cereus
vegetative celler (7,0 til 8,0 log CFU /g) i den stationære vækstfase og lave mængder af B. cereus
sporer (op til 4,0 log sporer /g) .table 2 vækst af de tre forskellige B. cereus stammer i fødevarer matrix før simulering af gastrointestinal passage; gennemsnitlige værdier af uafhængige forsøg i tre eksemplarer udtrykt i log CFU /g ± standardafvigelse præsenteres
B. cereus stamme
Time (h)
0

22
24
26
28
30
B. cereus
ATCC14579
alt tæller
5,8 ± 0,1
8,3 ± 0,6
8,4 ± 0,3
8,8 ± 0,2
8,8 ± 0,3
8,9 ± 0,2
alt B. cereus
5,7 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,7 ± 0,3
7,2 ± 0,3
7,0 ± 0,2
B. cereus
sporer
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
2,3 ± 0,6
B. cereus
NVH 1230-1288
Total tæller
5,9 ± 0,1
8,2 ± 0,2
8,4 ± 0,1
8,9 ± 0,0
8,9 ± 0,1
8,8 ± 0,2
Total B. cereus
6,2 ± 0,3
7,9 ± 0,2
8,2 ± 0,1
8,5 ± 0,2
8,3 ± 0,3
7,9 ± 0,1
B. cereus
sporer
3,5 ± 0,6
3,5 ± 0,2
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
B. cereus
73
FF alt tæller
5,7 ± 0,1
8,5 ± 0,1
8,7 ± 0,1
9,0 ± 0,0
9,0 ± 0,3
8,9 ± 0,3
Samlet B. cereus
5,7 ± 0,1
8,1 ± 0,2
8,0 ± 0,1
8,3 ± 0,1
8,2 ± 0,1
8,3 ± 0,2
B. cereus
sporer
3,8 ± 0,2
3,9 ± 0,4
3,9 ± 0,4
4,0 ± 0,5
4,0 ± 0,3
4.5 ± 0.1
Ingen produktion af enterotoksiner blev påvist i lasagne verde efter 24 timer af B. cereus
ATCC 14579 og B. cereus
NVH 1230-1288, mens Nhe blev sporadisk påvist (i 1 ud af 3 replikater) i tilfælde af B. cereus
73. FF Dette skyldtes sandsynligvis den sure pH-værdi 5,5 af lasagne Verde og det ret lave inkubationstemperatur på 22 ° C, som ikke er optimale til enterotoxin produktion [1]. Men foruddannede enterotoksiner i fødevarer er ikke ansvarlige for diarré madforgiftning, da de hurtigt nedbrydes under gastrointestinal passage [2]. Salg In vitro
simulering af gastrointestinal passage af B. cereus
vegetative celler
lasagne verde forurenet med 7,0 til 8,0 log CFU /ml B. cereus
vegetative celler i den stationære vækstfase blev udsat for in vitro
simulering af gastrointestinal passage (figur 1). Overlevelse af B. cereus
(< 1 log-reduktion) blev observeret under munden fase og de første 30 min af maven fase, hvor gastrisk pH var mellem 5,0 og 4,0. Derefter når gastrisk pH faldt under 4,0, de vegetative celler blev hurtigt inaktiveret i maven fase mærkbar som et hurtigt fald i den samlede B. cereus
tæller til tilsvarende værdier af B. cereus
spore tæller i mavens fartøjer. B. cereus
total og spore tællinger i duodenum fase forblev ca.. 1,0 log CFU /mL for B. cereus
ATCC 14579, ca.. 2.5 log CFU /mL for B. cereus
NVH 1230-1288. Og ca. 3,5 log CFU /mL for B. cereus
FF 73. Interessant nok sporen tællinger af B. cereus
NVH 1230-1288 faldt i maven fase under den sidste time og mest sur pH. Da den samlede B. cereus
tæller ikke ændrede, indikerer dette initiering af sporespiring. B. cereus
ATCC 14579 viste inkonsekvent spore produktion, hvilket resulterer i fraværet af sporer i de to første simuleringer og meget lave tal (lidt over detektionsgrænsen på 1,0 sporer /ml) i løbet af de sidste to eksperimenter. Figur 1 Inaktivering af vegetative celler under den dynamiske in vitro simulering af gastrointestinal passage med B. cereus ATCC 14579 (1), B. cereus
NVH 1230-1288 (2) og B. cereus
73 FF (3); B. cereus
alt (a) og spore (b) tællinger blev bestemt ved udpladning på MYP uden og med varmebehandling (10 minutter ved 80 ° C), henholdsvis i lasagnen verde (□), munden fase (◊), maven fase (Δ) og duodenum fase (○); middelværdierne og standardafvigelsen for tredobbelte eksperimenter på forskellige dage præsenteres.
Ingen påvisningstest for enterotoksiner Nhe og HBL blev udført, eftersom ikke blev observeret nogen vækst i nogen af ​​gastrointestinale faser, hvilket er en forudsætning for enterotoksin produktion [1 ].
Bile tolerance B. cereus
vækst og overlevelse af B. cereus
NVH 1230-1288 blev bestemt i nærværelse af varierende galdekoncentrationer (figur 2). Ved optimale betingelser, dvs. neutral TSB med pH 7,2, virkningen af ​​galde var koncentrationsafhængig. Den laveste koncentration på 1,0 g /L Oxgall resulterede i en population reduktion på ca.. 30% i sammenligning med kontrolgruppen (TSB uden galde) ved tiden 0 timer. Endvidere efter 1 time optællingen af ​​levedygtige blev reduceret med ca.. 40% i sammenligning med koncentrationen i TSB med 1,0 g /L Oxgall ved 0 timer. Men efter 2 timer genvinding og udvækst af de resterende celler blev observeret, fordi B. cereus
koncentration var sammenlignelig fra 0 timer, og endelig efter 3 timer, befolkningen var steget med ca.. 1 log i sammenligning med den ved 0 timer. Tilstedeværelsen af ​​5,0 g /l Oxgall inducerede en permanent nedgang til 4,1 log CFU /ml i gennemsnit (inaktivering af 88% af de vegetative celler), og at af 10,0 g /l Oxgall til 3,9 log CFU /ml (inaktivering af 94 %). Figur 2 Overlevelse af B. cereus NVH 1230-1288 i trypton-soja-bouillon (TSB) ved 37 ° C med pH 7,2 (A) og pH 5,0 (B) med varierende galde (Oxgall, Difco) koncentrationer: 0,0 g /L (hvid ), 1,0 g /l (lysegrå), 5,0 g /l (mørkegrå) og 10,0 g /L (sort). Salg In TSB ved sur pH 5,0, ca.. 99% af B. cereus
inokulum blev øjeblikkeligt inaktiveret ved galden eksponering, uanset galden koncentration, hvilket resulterer i konstant total B. cereus
tællinger på ca.. 3.0 log CFU /mL. B. cereus
inokulum indeholdt mellem 0,1 og 0,2% sporer, blev så konstante sporen tællinger opnået hele forsøget: 2,6 (± 0,2) log sporer /ml i begyndelsen og 2,5 (± 0,3) log sporer /ml ved ende. Tager denne spore befolkning i betragtning, de vegetative celler stadig udgjorde hovedparten (ca.. 60%) af en% galde resistent B. cereus
.
Diskussion
overlevelse vegetative celler under gastrisk passage var ens til den i tidligere undersøgelser med kartoffelmos medium [3]. I løbet af disse eksperimenter, ca.. 10% af de vegetative celler overlevede gastrisk passage, de fleste af dem i første gastrisk fraktion når gastrisk pH var mellem 5,0 og 4,0. Disse celler blev overført levende i den intestinale beholder og således mellem 5,5 og 6,5 log CFU /ml B. cereus
var forventet i den intestinale fartøj. Men meget lavere tæller, som tilnærmede B. cereus
spore tæller, blev opnået under duodenum fase. Dette indikerer, at de vegetative celler som overlevede gastrisk passage blev inaktiveret i tarmsystemet miljø. Batch inkubation eksperimenter i TSB og varierende koncentrationer af galde viste, at hovedparten (99,1%) af vegetative celler blev inaktiveret umiddelbart efter galde eksponering ved pH 5,0, uanset koncentrationen galden i området fra 1,0 til 10,0 g Oxgall /L. Som konklusion blev der vegetative B. cereus
celler, som overlevede gastrisk passage elimineres under den efterfølgende duodenum fase ved den baktericide virkning af galde.
Den baktericide virkning af galde på vegetative B. cereus
celler var pH-afhængig. Ved pH 7,0, blev inaktivering korreleret med galden koncentration og den laveste galde koncentration (1 g /l) endog tilladt overlevelse og vækst. I modsætning hertil ved pH 5,0, instant inaktivering af flertallet (> 99%) forekom i vegetative celler, uafhængig af galde koncentration (i intervallet fra 1,0 til 10,0 g /l). Svarende til vores resultater, inaktivering af Listeria monocytogenes af galdesyrer blev også stærkt forøget ved sur pH 5.5 [26]. Inaktivering af bakterier ved galde svarer til den af ​​organiske syrer, som er både særlig effektiv ved lavt pH. Den logaritmiske syredissociationskonstant (pKa) af ukonjugerede galdesyrer er ca. 5,1, men konjugation med glycin sænker pKa til ca. 3.7 [27]. Konjugation med taurin fører til en endnu lavere pKa på ca.. 1.5 [28]. Som følge heraf er de fleste af konjugerede galdesyrer dissocieret og ioniseres på mest fysiologiske og intestinale pH-værdier, nemlig 95,24% ved pH 5,0 og 99,95% ved pH 7,0 i glycoconjugated galdesyrer. Kun den ikke-ioniserede former af galdesyrer kan passivt krydse cellemembranen, mens de dissocierede og ioniserede konjugerede galdesyrer kræver specifikke aktive transportsystemer [29]. Som et resultat, kan 4,67% af de konjugerede galdesyrer ind i B. cereus
celler ved pH 5,0, i modsætning til kun 0,03% ved pH 7,0. Desuden indre pH af levedygtige B. cereus Salg celler altid ligger mellem 6,0 og 7,5, afhængig af de ydre pH og dyrkningsbetingelser [30]. Efter de dissocierede galdesyrer har diffunderet ind i B. cereus
celler, de fleste af dem (99,50-99,98%) undergår intracellulær dissociation, hvilket resulterer i letale indre forsuring.
Det blev rapporteret, at visse fødevarekomponenter øget galden tolerance af B. cereus
vegetative celler i intestinal medium med pH 6,5 [22]. Men den sammensatte fødevare matrix lasagne verde ikke mindske de skadelige virkninger af galde på B. cereus
under vores eksperimenter ved pH 5,0. Det er muligt, at fødevarer typen indebærer kun observeres ved en mere optimal pH for denne fødevarebårne patogen, når der forventes mere udtalte forskelle mellem behandlingerne.
I modsætning til vegetative celler, blev B. cereus
sporer ikke inaktiveret ved galde , selvom de ikke spire i den intestinale medium indeholdende 5 til 10 g /L Oxgall. Dette falder sammen med observationer af dynamiske simulering af gastrointestinal passage af sporer [25], hvor sporer var upåvirket under munden, maven og duodenum fase og kun startet spiring under dialyse, når galden koncentrationen blev sænket fra 5,0 g /L Oxgall til < 0,5 g /L og de af batch inkubation eksperimenter [31], hvor sporer spiret inden 2 timer i tarm simulation medium, der indeholder 1,0 g /L galde. Andre undersøgelser rapporterede endvidere, at sporerne var i stand til at spire og formere sig i simuleret tarmvæske indeholdende galde (1,5 g Oxgall /L) [32], og at galden modstand B. cereus
sporer var bedre end den for vegetative celler [33 ]. Afslutningsvis høj galdekoncentrationer (≥ 5 g /L Oxgall) tillader ikke sporespiring, mens lav galdekoncentrationer (< 5 g /l). Inducere spiring og udvækst
Ud over sin betydning i næringsstof fordøjelse og absorption, galde er også en vigtig antimikrobiel forbindelse i tarmen [7]. Unormale lave tarm galde niveauer kan forekomme hos mennesker med galde eller lever abnormiteter eller med fejl og mangler i den enterohepatiske cirkulation, som kan gøre disse mennesker, især modtagelige for diarré på grund af forbedret overlevelse indtages og tarmbakterier. Desuden galdesyrer er endogene afføringsmidler, så malabsorption af galdesyrer fra tyndtarmen, hvilket fører til øget galde niveauer i terminalen tyndtarmen og tyktarmen, kan også resultere i diarré [34].
Konklusion
B. cereus
vegetative celler var ude af stand til at overleve gastrointestinal passage som simuleret ved in vitro
eksperiment, trods den høje inokulumkoncentration på 7,0 til 8,0 log CFU /ml og dyrkningen af ​​podestoffet i det sammensatte fødevarer matrix lasagne Verde. Størstedelen af ​​vegetative celler blev inaktiveret af mavesyren, og de overlevende celler blev efterfølgende inaktiveret ved galden under duodenum fase. I modsætning hertil B. cereus
sporer overlevede simulering af gastrointestinal passage og forblev sporer under ugunstige betingelser for spiring (og udvækst). Derfor er den infektive dosis for B. cereus
sandsynligvis varierer alt efter den fysiologiske form, der forbruges, er lavere for de stærkt resistente sporer. Selvom mave overlevelse var ens for de forskellige stammer, deres sporulering tendens varierede betydeligt, hvilket igen har stor betydning for mave-overlevelse potentiale og dermed infektiøse dosis af de forskellige B. cereus
stammer.
Erklæringer
forfattere 'originale indsendte filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 13099_2012_68_MOESM1_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 1 13099_2012_68_MOESM2_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 2 Konkurrerende interesse
Vi, alle forfattere, erklære, at vi ikke har nogen konkurrerende interesser.
Forfattere bidrag
SC, MU og TVdW designet forsøgene; SC og SH udførte eksperimentelle arbejde og behandles resultaterne; SC skrev manuskriptet hjulpet af MU, NB og TVdW. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Vedvarende lav ekspression af hZip1 i mucinous carcinomer i æggestokkene, colon, mave og lunge
• Exsanguinating øvre GI blødninger skyldes Usædvanlige AVM (AVM) i mave og milt: en case-rapport