Pretrvávajúce nízka expresia v hZip1 mucinózní karcinómy vaječníkov, hrubého čreva, žalúdka a pľúc

Pretrvávajúce nízka expresia hZip1 v hlienovým karcinómov vaječníkov, hrubého čreva, žalúdka a pľúc
abstraktné
pozadia
mucinózního karcinómov z rôznych orgánov sú morfologicky podobné a môžu zdieľať podobnosti na molekulárnej a biochemické úrovni, ktoré by mohli osvetliť ich patogenézy a riadenie vplyv. Medzi faktory podieľajúce sa na patogenéze hlienovým karcinómov zostáva neznáma; čo je pravdepodobné, že jeden prispieva k aktuálnemu nedostatku biomarkerov pre detekciu. Vzhľadom k tomu, zmeny zinku sa podieľajú na niektorých druhov rakoviny, napríklad, prostaty; sme hodnotili možnosť podobnú úlohu v hlienovým karcinómov.
Metódy
Cieľom súčasnej práce je študovať expresiu hZip1 imunohistochemicky v hlienovým karcinómov v porovnaní s non-nádorového epitelu a bežných karcinómov. Mikroskopické sústavy tkanív skla obsahujúci mucinózní karcinómov vaječníkov (n = 35
), hrubého čreva (n
= 51), žalúdka (n
= 32) a pľúc (n =
21) boli použité.
Výsledky ukázali,
hZip1 pretrvávajúce nízku expresiu v mucinózní v porovnaní s ovariálnej karcinómy serózna a normálne tkanive (P
menšie ako 0,05), hrubého čreva, adenokarcinóm a normálne sliznice (P Hotel &0,001) a adenokarcinóme žalúdka a normálny epitel (P
menšie ako 0,05). hZip1 tiež ukázala nízku expresiu v pľúcnych karcinómov hlienovým.
Závery
hZip1 je v hlienovým karcinómov trvalo klesal z rôznych orgánov. Napriek tomu, že tieto predbežné výsledky sú nepravdepodobné, že by veľa diagnostický význam, tieto nálezy naznačujú, že hZip1 hrá zásadnú úlohu v karcinogenéze z hlienovým nádorov.
Kľúčové
Zinc transporter hZip1 mucinózní karcinómy vaječníkov hrubého čreva Žalúdok Lung pozadí
Klinické štúdie a experimentálny dôkaz preukázali, že koncentrácia zinku sa v adenokarcinóme prostaty konzistentne nižší v porovnaní s normálnymi prostaty. Zip1 zinku vychytávania transportér, okrem iných členov transportných génov zinku, je zodpovedný za absorpciu a akumuláciu zinku z obehu v normálnych žliaz proti koncentračnému gradientu. Malígny prostatickej žľazy vykazujú down regulácii Zip1, zvyčajne všade a exprimovaný proteín, čo je výraz, ktorý bude eliminovať príjem a hromadeniu zinku intracelulárne [1-4].
Na rozdiel od vyššie uvedeného role zinku v prostate sa úloha hZip1 expresie v adenokarcinómy iných orgánov doteraz nebola skúmaná komplexne. Žiadny taký presvedčivý pozadia existuje pre epiteliálne rakovinou vaječníkov pre príklad, ktorý je považovaný za jeden z najmenej pochopil zo všetkých hlavných ľudských malignít [5]. Identifikácia najdôležitejších počiatočné zmeny v rakoviny vaječníkov môžu uľahčiť vývoj lepších metód pre včasnú diagnózu, a to prostredníctvom objavenie epitelových karcinómu vaječníkov biomarkerov, a pre vývoj viac optimálnych liečebných prístupov, ktoré sa zameriavajú na kľúčové molekulárnych dráh [6].
Existujú dôkazy, že sa týka zinok ako potenciálny nádorového supresor činidlá a ZIP1
transportérom ako tumor supresorového génu v niektorých epiteliálnych nádorov vaječníkov. Lightman et al. vykazovali veľmi významný pokles koncentrácie zinku malígne tkaniva vaječníkov v porovnaní s ich kolegami nenádorových [7]. Bae et al. ukázali, že liečba zinku OVCAR-3 buniek vykazuje nádorové supresorové účinky so zvýšenou apoptózu [8]. OVCAR-3 je ľudský epiteliálne bunková línia karcinómu vaječníkov, ktorá vznikla z malígny ascites pacienta s zle diferencované "papilárna adenokarcinóm" vaječníka [9]. Významná korelácia medzi poklesom hladiny v krvi a vlasovej pokožky, vlasov zinku sa zvýšením výskytu rakoviny vaječníkov bola označená [7, 10]. Tieto predbežné údaje, aby bolo rozumné očakávať, že existuje rozdiel v úrovni medzi zinku malígnych a nemalígna buniek, ktoré môžu byť spojené s alteráciou príjmu zinku transportéra; pravdepodobne Zip1.
V súčasnej klasifikácie ovariálnych nádorov, mucinózní nádory sú klasifikované ako povrch epiteliálnych nádorov. Primárne mucinózní nádory vaječníkov sú klasifikované do benígne, hraničné, alebo malígnych kategórií v závislosti na ich histologických nálezoch. Neoplastické bunky môžu byť z gastrointestinálneho typu, endocervikálního typu, alebo zmesi obidvoch typov buniek, ktoré existujú v seromucinous nádorov [11]. Primárne invazívne mucinózní karcinómy vaječníkov sú veľmi neobvyklé, predstavuje iba 3-10% všetkých vaječníkov epiteliálne tumory, a metastatické nádory, najčastejšie z gastrointestinálneho traktu (GIT), sú častejšie [12, 13]. Preto je možnosť, že mucinózní nádor vaječníka je metastatické skôr než primárne ovariálny karcinóm vždy musí byť vyhovené. Bežné primárne servery sú GIT, najmä hrubé črevo [14] príloha [15, 16], a slinivky brušnej [17], a menej často zo žalúdka [18]. Endocervikálne adenokarcinóm občas rozšíril do vaječníka [19].
Predpokladali sme, že mucinózní karcinóm, bez ohľadu na inom mieste orgánov, by mohli zdieľať podobnosti na molekulárnej a biochemické úrovni, ktoré sa prejavujú podobnú morfológiou na rôznych anatomických miestach. Anatomický site zrejme bude diktovať chirurgický prístup; Avšak, molekulárne a biochemické vlastnosti by mohli byť užitočné pri vývoji a zložení adjuvantnej liečebných protokolov.
V tejto správe ukazujeme, prvýkrát, konzistentné vzor nízkou expresiou proteínu hZip1 v mucinózní karcinómov z rôzne orgány, vrátane vaječníkov, hrubého čreva, žalúdka a pľúc. Predložené dôkazy sú tu nepriamo podporuje pravdepodobnosť, že ZIP1
gén je podstatným krokom vo vývoji hlienovým novotvarov.
Výsledky
nízka expresia hZip1 vo vaječníku hlienovým karcinómov oproti vysokú expresiu v ovariálnych karcinómov serózna
priemerný vek pacientov s karcinómami vaječníka bol 51,4 (rozmedzie 22-81) rokov. Tissue microarray (TMA) pozostáva zo 17. normálneho tkaniva vaječníkov, z ktorých všetky boli silne (3+) pozitívne pre hZip1. Šesťdesiat percent (21/35) z mucinózní karcinómov boli negatívne (0) po slabý (1+) pozitívnych na hZip1 (obr. 1a). Na rozdiel od toho hZip1 výraz bol mierne (2+) silno (3+) pozitívne v 91% (138/152) zo serózna karcinóm (obr. 1b). Expresie hZip1 bola v ovariálnych karcinómov mucinózní významne nižšie v porovnaní s serózna karcinóm (1,3 vs. 2,6; P 0,001) a normálne ovariálnej tkaniva (p = 0,015) (obr 1c.). Obr. 1 hZip1 expresie v mucinózní a non-mucinózní karcinómy vaječníkov, hrubého čreva, žalúdka a pľúc. IHC analýza bola vykonaná na mikroskopické sústavy tkanív sklíčka zložených z 35 ovariálnych karcinómov, mucinózní 152 ovariálny serózna karcinóm, 51 hrubého mucinózní karcinómy, 129 konvenčné hrubého adenokarcinómy, 31 žalúdočné mucinózní karcinóm, 4 konvenčné žalúdočné adenokarcinómy a 21 pľúcne mucinózní karcinómy. servisný zástupca negatívne ovariálny mucinózní karcinóm v porovnaní s b silne pozitívne serózna karcinóm prípad pre hZip1 proteínu. c Diagram ukazuje priemerné hZip1 IHC skóre v normálnych vaječníkoch, mucinózní a serózna karcinómy. d Zástupca slabo pozitívna hrubého mucinózní karcinóm v porovnaní s e silne pozitívne konvenčné črevné adenokarcinóm prípad pre hZip1 proteínu. f Diagram ukazuje priemerné hZip1 IHC skóre v normálnom epitelu hrubého čreva, mucinózní a konvenčných hrubého čreva adenokarcinómov. g Reprezentatívny negatívny žalúdočnej mucinózní karcinóm v porovnaní s pr silne pozitívne konvenčné adenokarcinómom žalúdka puzdro pre hZip1 bielkovín. aj schéma, ktoré ukazuje priemerné hZip1 IHC skóre v normálnej žalúdočnej sliznici, mucinózní a konvenčných žalúdočných adenokarcinómov. j Reprezentatívny slabé a silné pozitívne K pľúcnej mucinózní prípadov karcinómu pre hZip1 proteínu. ZIP1 proteín bol vizualizovaný pomocou DAB hematoxylínom kontrastným farbivom. Šípky ukázali negatívne /slabo pozitívna mucinózního karcinomové bunky. Tam je štatisticky významný rozdiel
Tam bol štatisticky významne nižší expresiu hZip1 v nízkym stupňom serózna v porovnaní s high grade serózna karcinómy (P 0,05). Tiež došlo k nižšej expresie hZip1 v nízkom stupni v porovnaní s vysoko kvalitnou ovariálnej mucinózní karcinómov (p = 0,6). Nebol zistený žiadny vzťah medzi klinickom štádiu a hZip1 IHC skóruje.
Nízka expresie v hZip1 mucinózní karcinómov v porovnaní vysokú expresiu v konvenčných adenokarcinóme hrubého čreva
Priemerný vek pacientov s karcinómom hrubého čreva bol 57,4 (rozmedzie 20-90 ) rokov. TMA zložený z 12 normálne tkanive hrubého čreva, ktoré boli mierne 83% (10/12) (2+) silno (3+), pozitívne na hZip1. Päťdesiat päť percent (28/51) z mucinózní karcinómov boli negatívne (0) po slabý (1+) pozitívnych na hZip1 (obr. 1d). Na rozdiel od toho hZip1 výraz bol mierne (2+) silno (3+) pozitívne v 96% bežného hrubého adenokarcinóm (124/129) puzdra (Obr. 1e). Priemerná expresie hZip1 bola v tračníka mucinózní karcinómov (1,7), významne nižšie v porovnaní s konvenčnými hrubého adenokarcinómov (2.8) a normálne sliznice hrubého čreva (2.2), (P Hotel &0,001). (Obr. 1 f)
hZip1 expresia bola znížená v závislosti na zvyšujúce sa stupeň v oboch mucinózní a non-mucinózní nádory hrubého čreva sa žiadny štatisticky významný rozdiel. Nebol zistený žiadny vzťah medzi klinickom štádiu a hZip1 IHC skóruje.
Nízka expresie hZip1 v hlienovým karcinómov oproti vysokú expresiu v konvenčných adenokarcinómov žalúdku
Priemerný vek pacientov trpiacich žalúdočných karcinómov bol 56 (rozmedzie 22-78 ) rokov. TMA skladá z 5 normálne žalúdočnej epitel, z ktorých všetky boli silne (3+) pozitívne pre hZip1. Dvadsaťdva percent (7/32) z hlienovým karcinómov boli negatívne (0) po slabý (1+) pozitívne pre hZip1 (obr. 1 g). Na rozdiel od všetkých bežných prípadoch adenokarcinómu (n
= 4) boli silno (3+) pozitívnych na hZip1 (viď obr. 1 h). Expresie hZip1 bol v žalúdočných mucinózní karcinómov významne nižšie v porovnaní s konvenčnou adenokarcinóme žalúdka (2,2 vs. 3; P
menšie ako 0,05). A normálna žalúdočné epitel (P
= 0,027) (obr. 1i)
priemerné skóre hZip1 bol vysoký stupeň mucinózní karcinómy žalúdka významne nižšie v porovnaní s ich kolegami na nízkych (1,9 vs. 2,7, p Hotel &0,01). Nebol zistený žiadny vzťah medzi klinickom štádiu a hZip1 IHC skóruje.
Nízka expresie hZip1 v hlienovým karcinómy pľúc
Priemerný vek pacientov s pľúcnou hlienovým karcinómov bola 55,1 (rozmedzie 38-71) rokov. TMA zložený z 21 pľúcnych karcinómov mucinózní, z ktorých 1, 3, 4 a 13 prípadov bolo negatívne (0), 1+, 2+, 3+ a pozitívne na expresiu proteínu hZip1, respektíve s priemerným skóre 2,4. Normálny pľúcny epitel v priľahlých častiach silne (3+) vyjadruje hZip1 (obr. 1 Ján a K). Nebol zistený žiadny vzťah medzi klinickom štádiu a hZip1 IHC skóruje.
Tabuľka 1 zhŕňa výsledky expresie hZip1 proteínu v normálnej tkanive, hlienovým a non-hlienovým karcinómy vaječníkov, hrubého čreva, žalúdka a lung.Table 1 hZip1 expresie v normálnej , mucinózní a non-mucinózní karcinómy vaječníkov, hrubého čreva, žalúdka a pľúc
Diagnóza
hZip1 IHC skóre
Celková
negatívny
1 +
2+
3+
vaječník
Normal
0
0
0
17 (100%)
17
mucinózního karcinómy
15 (43%)
6 (17%) Sims 3 (9%)
11 (31%)
35
serózna karcinómy
1 (0,7%)
13 (9%)
32 (21%)
106 (70%)
152
hrubého čreva
Normálne NETHRY.cz 0
2 (17%)
6 (50%)
4 (33%)
12
mucinózního karcinómy Sims 3 (6%)
25 (49%)
7 ( 14%)
16 (31%)
51
adenokarcinóm
1 (1%)
4 (3%)
15 (12%)
109 (84% )
129
žalúdka
Normal
0
0
0
5 (100%)
5
mucinózního karcinómy
0
7 (22%)
12 (37%)
13 (41%)
32
adenokarcinóm NETHRY.cz 0
0
0
4 (100%)
4
pľúc
Normálne NETHRY.cz 0
0
0
21 (100%)
21
mucinózního karcinómy
1 (5%)
3 (14%)
4 (19%)
13 (62%)
21
Diskusia
Ako všeobecné pravidlo platí, mucinózní karcinómy predstavujú malý zlomok nádorov v rôznych orgánoch s o 3-10% u ovariálne nádory, 7% všetkých hrubého čreva a konečníka, 1,5% žalúdočných karcinómov, a veľmi zriedka v pľúcach [12, 20]. V porovnaní s konvenčnými adenokarcinómov, mucinózní nádory majú tendenciu byť spájaný s mladom veku, pokročilom štádiu nádoru, a odlišných molekulárnych vzorov, ako sú mikrosatelitních nestabilita a mutácií BRAF a Kras
génov [21, 22].
Diferenciácia primárny vaječníkov mucinózní karcinóm z metastáz z iných orgánov väčšinou dodatku a kolorekta môže byť náročné [13, 23]. Toto rozlíšenie je základným faktorom a klinický význam vzhľadom na to, že liečebné protokoly majú tendenciu byť navrhnuté tak, aby každé miesto orgánov. Napríklad na báze platiny taxánmi, činidlá sa používajú pri liečbe primárnych ovariálnych karcinómov na rozdiel od fluorouracilu, ktorý je hlavnou chemoterapeutickej činidlo používa pre metastatickým karcinómom vaječníkov u pochádzajúce z kolorekta [24, 25].
Pre nádor považovať za mucinózní karcinóm, skôr než konvenčné adenokarcinóm, závisí na mieste orgánov a klasifikačné systémy. Ovariálne mucinózní karcinómy vykazujú nápadné množstvo intracelulárneho mucínu vo viac ako 90% nádorových buniek [11]. Naproti tomu, kolorektálny karcinóm mucinózní je definované, ak aspoň 50% objemu nádoru je zložený z extracelulárnej mucínu [26]. Mucinózní karcinómy sú odlišné od bežných a pečatný prsteň karcinómov v rôznych orgánoch so špecifickými molekulárnymi zmenami a klinické výsledky [25]. Spoločné rysy medzi vaječníkov a hrubého hlienovým karcinómov zahŕňajú vyššiu prevalenciu v mladšom veku a väčšiu veľkosť nádoru na prezentáciu. Na rozdiel od toho vyšší podiel ovariálnych karcinómov mucinózní v porovnaní s serózna karcinómy sú diagnostikované pri nízkom stupni, zatiaľ čo kolorektálnych karcinómov mucinózní sa zdá pravdepodobné, že rovnako ako non-mucinózní karcinómy, aby na nízkom stupni [23, 27, 28].
pred viac ako 2 desaťročia, Lightman et al. [7] označená v sére je nízka a nádorové tkanivá zinok u pacientov s "zhubných nádorov vaječníka". Avšak, v tejto publikácii, žiadna zmienka o aký druh ovariálnych nádorov boli zahrnuté do štúdie, a nie je veľa klinické informácie boli poskytnuté [7]. Relatívne nedávno, Bae et al. [8] hlásil, že liečba Ovčáry-3 (malígny bunkové línie vaječníkov) a nos (normálne vaječníkov bunkové línie) s pozinkovaným citrát zlúčeniny vedie k indukovanej akumulácie zinku viac v bývalom bunkovej línii, než to druhé. To malo za následok pokles počtu buniek a aktivity M-akonitázy v OVCAR-3 so zvýšenou apoptózu. Autori dospeli k záveru, že vystavenie vysokej koncentrácii zinku zamedzuje šíreniu OVCAR-3 buniek [8]. Bunková línia OVCAR-3 používa Bae et al. je ľudský epiteliálne bunková línia karcinómu vaječníkov, ktorá vznikla z malígny ascites pacienta s zle diferencované "papilárna adenokarcinóm" skôr ako mucinózní karcinóm vaječníka [8, 9]. Ďalšie štúdie mechanizmu najlepšie s mucinózní ovariálny karcinóm bunkových línií, napr, RMUG-L, RMUG-S, MN-1, OMC-1 a MCAS [29] sa odporúča, aby ďalej skúmať úlohu zinku a zinkových transportérov v patogenéze a prinajmenšom teoreticky riadenie vplyv hlienovým karcinómov.
my i ostatné presvedčivo preukázané, že hladina zinku a hZip1 transportér sú v prostate adenokarcinómov výrazne znížila. Pozadie a dôkazy sú plne a rozsiahlo prezentovaná v niekoľkých recenzií a správ [1-4]. To nás vyzývajú, aby rozšírilo štúdium v ​​náročných hlienovým karcinómov v rôznych orgánoch a porovnať expresiu hZip1 v mucinous proti non hlienovým karcinómov u niektorých z týchto orgánov.
Naše nové zistenia v tejto správe je, že hZip1 vykazovali trvalo nízku expresiu v mucinózní karcinómy vaječníkov, hrubého čreva, žalúdka a pľúc s žiadnu súvislosť medzi klinickom štádiu a hZip1 skóre v niektorom z hlienovým nádorov. Zaujímavé je, že sme identifikovali nízka expresia v hZip1 mucinózní karcinómov versus nulová tie mucinózní v troch orgánoch sme vykonali porovnanie v, a to; vaječníkov, hrubého čreva a žalúdka.
Konkrétne hZip1 je silne vyjadrený vo všetkých prípadoch normálne tkaniva vaječníkov a bol stredne až silne pozitívne v 91% serózna karcinómy. Naproti tomu 60% ovariálnych karcinómov mucinózní boli negatívne na slabo pozitívne na expresiu hZip1. Druhým zaujímavým zistením je, že tam bol štatisticky významný nižší expresiu hZip1 v low grade serózna vaječníkov v porovnaní s vysoko kvalitnou serózna karcinóm. Aj keď to nebolo štatisticky významné, ešte hZip1 expresia bola nižšia pri nízkom stupni v porovnaní s vysoko kvalitných mucinózní karcinómov. Tieto pozorovania môže znamenať, že vyššej platovej triedy vaječníkov nádory môžu nadobúdať rôznych mechanizmov akumulovať viac zinku vypnutím inhibičné, ktoré dole vyjadrujú zinok transportér hZIP1
gén, alebo možno ďalších členov transportéra génovej rodiny zinku.
scenár bol rovnaký v hrubého čreva a žalúdočných karcinómov s nízkou expresiou hZip1 v mucinózního karcinómu v porovnaní s vysokou expresiu v konvenčných adenokarcinómov v týchto dvoch orgánoch. V hrubom čreve a žalúdku, 55% a 22% karcinómov mucinózní boli negatívne na slabo pozitívne pre hZip1, resp. Na rozdiel od toho hZip1 výraz bol mierne silne pozitívny na 96% a 100% konvenčných adenokarcinómov, respektíve v hrubom čreve a žalúdku. Počet konvenčné žalúdočných adenokarcinómov zahrnuté do TMA bol malý (n = 45). Na rozdiel od ovariálnych karcinómov, hZip1 expresie bola znížená v závislosti na zvyšujúce sa stupeň v oboch mucinózní a non-mucinózní nádory hrubého čreva a žalúdka. Tieto pozorovania môžu poukazovať na rôznych mechanizmov zapojených do progresie nádoru týkajúcich sa regulácie obsahu zinku ktoré potrebujú viac mechanistické štúdie. V pľúcach, sme tiež zistil nízku expresiu hZip1 v pľúcnych karcinómov mucinózní. Bohužiaľ, a vzhľadom k un-dostupnosti konvenčné adenokarcinóm pľúc TMA diapozitívy, sme nemali porovnať expresiu hZip1 v hlienovým a bežných pľúcnych karcinómov.
Závery
hZip1 vyjadrenia sa zdá byť v hlienovým karcinómov trvalo klesal z celej rady orgánov v porovnaní s non-neoplastických tkanivách v týchto orgánoch. Avšak, hZip1 sa tiež znížila v závislosti na zvyšujúce sa stupeň v oboch mucinózní a non-mucinózní nádorov v hrubom čreve a žalúdku. Tieto zistenia naznačujú, že hZip1 hrá zásadnú úlohu v karcinogenéze niektorých orgánov, ktoré je osobitne zdôraznené v mucinózní nádory. Doplnkové štúdie sa vyžadujú presne definovať podstatu tejto role. Avšak, v praxi, tam je malá hodnota nízkou expresiou hZip1 pre diferenciálnej diagnostike hlienovým karcinómov.
Metódy
Tkanivové (TMA)
Všetky postupy boli vykonávané v súlade s príslušnými zákonmi a inštitucionálnymi smernicami so súhlasom inštitucionálne Review board. TMA kĺzačky zakúpené od amerického Biomax (Rockville, MD) boli použité v tejto štúdii. Vaječník TMA snímka zložený z 35, 152, 11 a 6 interpretovateľný mucinózního karcinómov vaječníkov, serózna karcinóm, rakovina priľahlú normálne tkanív a normálne (non-malígnych tkanivách), respektíve v jednom jadre tkaniva na jednotlivý prípad. Nie je známe, či sa mucinózní karcinómy zahrnuté do TMA z nádorov vaječníka sú primárne vaječníkov pôvodu alebo metastatických nádorov. Colon TMA snímka zložený z 51, 129 a 12 interpretable hlienovým karcinómov, adenokarcinómov konvenčné a normálne tkanivo, respektíve v jednom jadre tkaniva na jednotlivý prípad. Žalúdok TMA snímka zložený z 32 interpretable hlienovým karcinómov, 4 konvenčné adenokarcinómov a 3 prípady nemalígna normálne a 2 tumor priľahlé normálne žalúdočnej tkaniva v duplikovaných jadier na prípade. Pľúcne TMA snímka zložený z 21 interpretable mucinózní karcinómov v jednom jadre tkaniva na individuálny prípad.
Imunohistochémia (IHC)
hZip1 expresie proteínu bola stanovená pomocou IHC použitím protilátky anti-hZip1 štandardným protokolom [1, 4]. Stručne povedané, sklíčka TMA boli zbavené parafínu v xyléne a rehydratuje inkubáciou v znižovaní koncentrácie etanolu. Antigén vyhľadávanie bolo vykonané zahrievaním v 10 mM Tris-EDTA (10 mM Tris báza, 1 mM EDTA ,, 0,05% Tween 20, pH 9,0) pufri pri 98 ° C počas 20 minút, IHC farbenie sa uskutočňovalo inkubáciou sklíčka 5% BlokHen (AvasLabs, Tigard, Oregon), s následnou inkubáciou cez noc pri 4 ° C s hZip1 protilátky v 5% BlokHen následnou inkubáciou s chrenovou peroxidázou značené kozie anti kuracie IgY sekundárnej protilátky v zriedení 1: 200 (AvesLabs, Tigard , Oregon). Farba bola vyvinutá s DAB + chromogénne substrát a hematoxylínom bol použitý ako kontrastným farbivom.
Všetky rezy boli skúmané s Olympus BX53 () mikroskopu. Snímky boli spracované pomocou softvéru cellSens Štandardné XV Image Processing (Olympus of the Americas, Center Valley, PA). IHC bodovania sa vykonáva pomocou tabuľa potvrdila anatomickú patológom (MMD). Vzhľad membrány a cytoplazmatickej spojené hZip1 immuno-pozitivity žľazových epiteliálnych buniek bol použitý pre vyhodnocovanie, ako bolo predtým popísané [1, 4]. Intenzita farbenie nádoru bola semikvantitatívne vyhodnotí ako negatívny (bez farbenia), slabý (1+) (menej ako 10%), stredné (2+) (10-50%) a silné (3+) (viac ako 50%) pozitívnych závislosti na percente pozitívnych buniek.
Štatistická analýza
priemerné skóre hZip1 prejavu v rôznych kategóriách boli analyzované pomocou Studentovho t-test
. IHC výsledky boli považované za nominálnu zistiť význam. P
≤ 0,05 bola považovaná za významnú
Skratky
IHC :.
Imunohistochémia
TMA:
Tissue microarray


hZip1:
Human zinok transportér člen 1
deklarácia
Poďakovanie
Táto práca je financovaný klinický a translačný výskum zvýraznenie ocenenie z Ústavu patológie , mikrobiológie a imunológie na MM Desouki.
protichodnými záujmami
autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy. podieľanie sa
autori '
MMD a podieľal sa na dizajne štúdie a interpretácie dát. MMD, RBF a LC podieľal sa na tvorbe dát. MMD predstavil štúdiu vypracovala analýzu imunohistochemických markerov a vykonáva štatistickú analýzu. Všetci autori napísaný, čítať a schváli záverečnú rukopis.

• Co-sa vyvinul Helicobacter pylori a rakovinou žalúdka: trojica bakteriálnej virulencie, hostiteľskej citlivosť a životný štýl
• Inaktivácia Bacillus cereus vegetatívnych buniek žalúdočnej kyseliny a žlče počas in vitro tráviacom transit