Стойкие низкое выражение hZip1 в муцинозных карцином яичников, толстой кишки, желудка и легких

Стойкие низкое выражение hZip1 в муцинозных карцином яичников, толстой кишки, желудка и легких
Аннотация
Справочная информация
муцинозные карцином из разных органов морфологически сходны и могли бы разделить сходства на молекулярном и биохимическом уровнях, которые могут осветить их патогенез и управление влиянием. Факторы, участвующие в патогенезе муцинозных карцином остаются неизвестными; которая, вероятно, один вклад в текущий недостаток биомаркеров для обнаружения. Поскольку изменения цинка участвуют в некоторых видов рака, например, предстательной железы; мы оценили возможность аналогичной роли в муцинозных карцином.
Методы
Целью настоящей работы является изучение экспрессии hZip1 с помощью иммуногистохимии в муцинозных карцином по сравнению с неопухолевых эпителии и обычных карцином. Ткань микрочипов слайды, содержащие муцинозные карцином яичника (п
= 35), двоеточие (п
= 51), желудка (п
= 32) и легких (п
= 21) были использованы.
Результаты
hZip1 показали стойкое низкую экспрессию в муцинозная по сравнению с овариальных серозных карцином и нормальной ткани (P &
ЛТ; 0,05), аденокарциномы толстого кишечника и нормальной слизистой оболочки (P &
л; 0,001), а также аденокарциномы желудка и нормальный эпителий (P &
л; 0,05). hZip1 также показали низкую экспрессию в легочных муцинозных карцином.
Выводы
hZip1 последовательно уменьшается в муцинозных карцином из различных органов. Несмотря на то, что эти предварительные результаты вряд ли будут иметь большое диагностическое значение, эти данные свидетельствуют о том, что hZip1 играет фундаментальную роль в канцерогенеза муцинозных опухолей.
Ключевые слова
цинковый Транспортер hZip1 Mucinous карцином яичник Colon Желудок Lung фона
Клинические исследования и экспериментальные данные установили, что уровни цинка последовательно уменьшились в аденокарциномы предстательной железы, по сравнению с нормальными железы. Zip1 цинка поглощение транспортером, в дополнение к другим членам генов транспортеров цинка, отвечает за поглощение и накопление цинка из кровотока в нормальных желез против градиента концентрации. Злокачественные простатической железы демонстрируют понижающую регуляцию Zip1, как правило, Повсеместно выраженный белок, выражение, которое позволит устранить поглощение и накопление цинка внутриклеточно [1-4].
В отличие от вышеупомянутой роли цинка в простаты, роль экспрессии hZip1 в аденокарциномы других органов не ранее были всесторонне изучены. Нет такого неоспоримым фон не существует для эпителиального рака яичников, например, который считается одним из наименее понятных всех основных человеческих [5] злокачественных опухолей. Определение наиболее важных начальных изменений при раке яичников может способствовать развитию более совершенных методов ранней диагностики, путем выявления эпителиальных яичников биомаркеров рака, а также для разработки более оптимальных терапевтических подходов, нацеленных на ключевые молекулярные пути, [6].
Существует доказательство того, что имеет отношение цинка в качестве потенциального супрессора агента и ZIP1
переносчика как ген-супрессор опухолей в некоторых эпителиального рака яичников. Лайтман и др. показали весьма значительное уменьшение концентрации цинка злокачественной ткани яичников, по сравнению с их неопухолевых коллегами [7]. Bae и др. показало, что обработка цинка клеток OVCAR-3 оказывает опухолевые супрессоры эффекты с повышенным апоптозом [8]. OVCAR-3 представляет собой человеческий эпителиальный яичников линии клеток рака, которая была создана из злокачественных асцит пациента с плохо дифференцированной "папиллярного аденокарциномы" из [9] яичнике. Значительная корреляция между снижением уровня в крови и волосистой части головы, волосы цинка с увеличением заболеваемости раком яичников сообщалось [7, 10]. Эти предварительные данные позволяют разумно ожидать, что существует различие в уровнях цинка между доброкачественных и злокачественных клеток, которые могут быть связаны с изменением, иллюстрирующий поглощение цинка транспортером; предположительно Zip1.
В текущей классификации новообразований яичников, муцинозные опухоли классифицируются как поверхности эпителиальных опухолей. Первичные муцинозные опухоли яичников подразделяются на доброкачественные, пограничными, или злокачественных категорий в зависимости от их гистологических особенностей. Опухолевые клетки могут быть желудочно-кишечного тракта типа, эндоцервикальной типа, или смеси обоих типов клеток, которые существуют в seromucinous опухолей [11]. Первичные инвазивные муцинозные карцином яичника очень редки, что составляет лишь 3-10% всех овариальных эпителиальных опухолей и метастатических опухолей, наиболее часто из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), являются более распространенными [12, 13]. Таким образом, вероятность того, что коллоидный опухоль в яичнике является метастатическим, а не первичный рак яичников всегда должны быть развлекали. Общие первичные сайты GIT, особенно толстой кишки [14], добавление [15, 16], и поджелудочной железы [17] и реже из желудка [18]. Endocervical аденокарциномы иногда распространяться на яичнике [19].
Мы предположили, что муцинозные карцином, независимо от того, другой сайт органа, могли бы разделить сходства на молекулярном и биохимическом уровнях, которые проявляются по аналогичной морфологии в различных анатомических участках. Анатомической, очевидно, будет диктовать хирургический подход; Однако, молекулярные и биохимические характеристики могут быть более полезными при разработке и состав адъювантной протоколов лечения.
В этом отчете мы показываем, впервые, последовательная картина низкой экспрессии белка hZip1 в муцинозных карцином из различные органы, в том числе яичников, толстой кишки, желудка и легких. Доказательства, представленные в настоящем документе косвенно подтверждает вероятность того, что ZIP1
ген является важным шагом в развитии муцинозных новообразованиями.
Результаты
низкой экспрессии hZip1 в яичниках муцинозных карцином по сравнению с высоким уровнем экспрессии в яичниках серозных карцином
средний возраст пациентов с карциномой яичников был 51,4 (диапазон 22-81) лет. Ткань микрочипов (TMA), состоящий из 17 нормальных тканей яичников, все из которых были сильно (3+), положительный результат на hZip1. Шестьдесят процентов (21/35) из муцинозных карцином были отрицательными (0) до слабого (1+) положительный результат на hZip1 (рис. 1а). В противоположность этому, экспрессия hZip1 была умеренно (2+) к сильно (3+), положительным в 91% (138/152) серозных карцином (рис. 1b). Выражение hZip1 была значительно ниже в овариальных карцином муцинозных по сравнению с серозной карциномой (1,3 по сравнению с 2,6; Р &л; 0,001) и нормальная ткань яичников (Р = 0,015) (рис 1в.). Инжир. Выражение 1 hZip1 в муцинозных и не муцинозных карцином яичников, толстой кишки, желудка и легких. Анализ IHC проводили на ткани микрочипов слайдов, состоящих из 35 овариальных муцинозных карцином, 152 яичниковые серозных карцином, 51 толстокишечные муцинозные карцином, 129 обычных ободочной аденокарциномы, 31 желудочные муцинозные карцином, 4 обычные желудка аденокарциномы и 21 легких муцинозные карциномы. Представителем негативный коллоидный рак яичников по сравнению с б сильно положительный серозный случай карциномы для белка hZip1. с диаграмма, показывающая средние оценки hZip1 IHC в нормальных яичниках, муцинозных и серозных карцином. d Представитель слабый положительный коллоидный рак толстого кишечника по сравнению с е сильно положительный результат обычной аденокарциномы ободочной случай для белка hZip1. е Диаграмма, показывающая средние баллы hZip1 IHC в нормальной ободочной эпителия, коллоидный и обычными ободочной аденокарциномы. г Представитель отрицательного желудка коллоидный рак по сравнению Н сильно положительной обычной аденокарциномы желудка случае для белка hZip1. я диаграмма, показывающая средний балл hZip1 IHC в нормальной слизистой оболочке желудка, коллоидный и обычных желудка аденокарциномы. J Типичные слабые и сильные положительные K легочные случаи коллоидный рак для белка hZip1. ZIP1 белок визуализировали с использованием DAB гематоксилин контрастирующая. Стрелки показывали отрицательные /слабые положительные муцинозные клетки карциномы. * Существует статистически значимая разница
Был статистически значимое ниже выражение hZip1 в низкой степени по сравнению с серозной высокого класса серозных карцином (P &ЛТ; 0,05). Кроме того, была ниже выражение hZip1 в низкой степени по сравнению с высокосортных овариальных карцином муцинозных (P = 0,6). Там не было никакой связи между клинической стадии и оценки hZip1 IHC.
Низкой экспрессии hZip1 в муцинозных карцином по сравнению с высоким уровнем экспрессии в обычной аденокарциномы толстой кишки
Средний возраст пациентов с карциномой ободочной кишки был 57,4 (диапазон 20-90 лет). ТМА состоит из 12 нормальной толстой ткани из которых 83% (10/12) были умеренно (2+) сильно (3+) положительно для hZip1. Пятьдесят пять процентов (28/51) из муцинозных карцином были отрицательными (0) до слабого (1+) положительный результат на hZip1 (рис. 1д). В противоположность этому, экспрессия hZip1 была умеренно (2+) сильно (3+) положительна в 96% обычной аденокарциномы толстого кишечника (124/129) случаев (рис. 1е). Среднее выражение hZip1 была значительно ниже в ободочной муцинозных карцином (1.7) по сравнению с обычными ободочной аденокарциномы (2.8) и нормальной слизистой оболочки толстой кишки (2.2) (P &
л; 0,001). (. Рис 1f)
hZip1 выражение было снижено в зависимости от повышения класса в обоих муцинозных и не муцинозных опухолей толстой кишки, без статистически значимой разницы. Там не было никакой связи между клинической стадии и оценки hZip1 IHC.
Низкой экспрессии hZip1 в муцинозных карцином по сравнению с высоким уровнем экспрессии в обычных аденокарциномы желудка
Средний возраст больных с желудочными карцином составила 56 (диапазон 22-78 лет). ТМА состоит из 5 нормального желудочного эпителия, все из которых были сильно (3+) положительно для hZip1. Двадцать два процента (7/32) из ​​муцинозных карцином были отрицательными (0) до слабого (1+) положительный результат на hZip1 (рис. 1 г). В отличие от этого, все обычные случаи аденокарциномы (п
= 4) были сильно (3 +) положительный результат на hZip1 (рис. 1 ч). Выражение hZip1 была значительно ниже в желудочном муцинозных карцином по сравнению с обычными аденокарциномы желудка (2,2 против 3; P
&л; 0,05). И нормальная желудочная эпителий (P = 0,027
) (. Рис 1i) <бр> средний балл hZip1 был значительно ниже в высокосортных муцинозных карцином желудка по сравнению с их аналогами низких классов (1.9 против прогноза 2.7, р
≪ 0,01). Там не было никакой связи между клинической стадии и оценки hZip1 IHC.
Низкой экспрессии hZip1 в муцинозных карцином легкого
Средний возраст пациентов с легочными муцинозных карцином был 55,1 (диапазон 38-71) лет. ТМА состоит из 21 легких муцинозных карцином, из которых 1, 3, 4 и 13 случаев были отрицательными (0), 1+, 2+, 3+ и положительным для экспрессии белка hZip1 соответственно со средним счетом 2.4. Нормальный эпителий легких в соседних участках сильно (3+) выражает hZip1 (рис. 1j и К). Там не было никакой связи между клинической стадии и оценки hZip1 IHC.
В таблице 1 приведены результаты экспрессии белка hZip1 в нормальной ткани, муцинозных и не муцинозных карцином яичников, толстой кишки, желудка и выражение hZip1 lung.Table 1 в нормальном , муцинозные и не муцинозные карцином яичников, толстой кишки, желудка и легких
Диагноз

hZip1 IHC счет

Всего

Негативный

1 +

2+

3+

яичнике
Нормальный
0 0

0
17 (100%) <бр> 17
муцинозные карцином
15 (43%)
6 (17%)
3 (9%)
11 (31%)
35
серозных карцином <бр> 1 (0,7%)
13 (9%)
32 (21%)
106 (70%)
152
ободочной кишки
Normal 0

2 (17%)
6 (50%)
4 (33%)
12
муцинозные карцином
3 (6%)
25 (49%) 7
( 14%)
16 (31%)
51
Аденокарциномы
1 (1%)
4 (3%)
15 (12%)
109 (84% )
129
желудок
Нормальный
0 0

0
5 (100%) страница 5 муцинозные карцином
0
7 (22%) 12
(37%)
13 (41%)
32
Аденокарциномы
0 0

0
4 (100%) <бр> 4
Lung
Normal 0

0 0

21 (100%)
21
муцинозные карцином
1 (5%)
3 (14%)
4 (19%)
13 (62%)
21
Обсуждение
Как правило, муцинозные раки представляют собой лишь малую часть новообразований в различных органах с о 3-10% среди новообразований яичников, 7% всех колоректального рака, 1,5% желудочных карцином, и очень редко в легких [12, 20]. По сравнению с обычными аденокарциномы, муцинозные опухоли, как правило, связаны с раннего возраста, продвинутой стадии опухоли и различных молекулярных моделей, таких как нестабильность микросателлитных и мутации BRAF и KRAS
генов [21, 22].
Разграничение первичный рак яичников муцинозная от метастазов других органов в основном аппендикса и colorectum может быть сложной задачей [13, 23]. Эта дифференциация имеет решающее значение и клиническое значение, учитывая, что протоколы лечения, как правило, с учетом каждого участка органа. Например на основе платины таксана агенты используются при лечении первичных аденокарцином в отличие от фторурацил, который является основным химиотерапевтическое средство используется для метастатической карциномы в яичниках, происходящих из colorectum [24, 25].
Для опухоли к считать коллоидный рак, а не обычный аденокарциномы зависит от сайта органов и систем классификации. Яичниковые муцинозные карцином показывают заметные количества внутриклеточного муцина в более чем 90% опухолевых клеток [11]. В противоположность этому, колоректальный коллоидный рак определяется, если по меньшей мере 50% объема опухоли состоит из внеклеточной муцина [26]. Муцинозные карцином отличаются от обычных и перстнем карцином в различных органах с определенными молекулярными изменениями и клиническими результатами [25]. Общие черты между яичниках и колоректального муцинозных карцином включают более высокую распространенность в более молодом возрасте и большего размера опухоли на презентации. В противоположность этому, более высокая доля овариальных карцином муцинозных по сравнению с серозных карцином диагностируется на низкой стадии, в то время как колоректальный муцинозные раки кажутся столь же вероятно, как не муцинозные карцином представить на низкой стадии [23, 27, 28].
Более 2-х лет назад, Лайтман и др. [7] сообщили о низком уровне в сыворотке крови и опухолевой ткани цинка у больных с "злокачественными опухолями яичников". Тем не менее, в этой публикации, никакого упоминания о какого рода опухолей яичников не были включены в исследование и не так много клиническая информация была предоставлена ​​[7]. Сравнительно недавно, Bae и соавт. [8] сообщили о том, что лечение Ястребаце-3 (злокачественный яичников клеточной линии) и НОС (нормальный овариальный клеточной линии) с цинком цитрата соединения приводят к индуцированным накоплению цинка больше, в бывшей линии клеток, чем вторые. Это привело к уменьшению количества клеток и активность М-аконитазы в Ястребаце-3 с повышенным апоптозом. Авторы пришли к выводу, что воздействие высокой концентрации цинка предотвращает пролиферацию клеток OVCAR-3 [8]. Клеточная линия OVCAR-3 используется Bae и соавт. является человек эпителиальной яичников линии клеток рака, которая была создана из злокачественных асцит пациента с плохо дифференцированной "папиллярного аденокарциномы", а не муцинозной карциномы яичников [8, 9]. Более механистических исследований предпочтительно с муцинозных карциномы яичников клеточных линий, например, RMUG-L, RMUG-S, МН-1, OMC-1 и MCAS [29] рекомендуется дополнительно изучить роль цинка и транспортеров в патогенезе и по крайней мере теоретически, влияние управления муцинозных карцином.
мы и другие окончательно установлено, что уровни цинка и hZip1 транспортер значительно уменьшились в аденокарциномы простаты. Фон и подтверждающие доказательства в полном объеме и широко представлены в ряде обзоров и докладов [1-4]. Это побудило нас расширить исследования в сложных муцинозных карцином в различных органах и сравнить экспрессию hZip1 в муцинозная по сравнению с не муцинозных карцином в некоторых из этих органов.
Наш новый вывод в настоящем докладе, что hZip1 показал стабильно низкую экспрессию в муцинозные карцином яичников, толстой кишки, желудка и легких, без связи между клинической стадией и оценки hZip1 в любой из муцинозных опухолей. Интересно, что мы определили низкую экспрессию hZip1 в муцинозных карцином по сравнению с не муцинозных из них в трех органах мы провели сравнение в, а именно; яичников, толстой кишки и желудка.
В частности, hZip1 сильно выражен во всех случаях нормальной ткани яичников и был умеренно сильно положительным в 91% серозных карцином. В противоположность этому, 60% овариальных карцином муцинозных были отрицательными к слабым положительным для выражения hZip1. Второй интересный вывод заключается в том, что существует статистически значимое более низкую экспрессию hZip1 в низкосортных овариальный серозно по сравнению с высокосортной серозной карциномы. Хотя это не было статистически значимым, по-прежнему hZip1 экспрессия была ниже в низкой степени по сравнению с высокого класса муцинозных карцином. Эти наблюдения могут свидетельствовать о том, что опухоли яичников более высокого класса могут приобретать различные механизмы, чтобы накопить больше цинка, отключив тормозные механизмы, которые выражают вниз цинкового Transporter hZIP1
ген, или, возможно, других членов цинка переносчика генов семейства.
сценарий был таким же в ободочной и желудочных карцином с низкой экспрессии hZip1 в муцинозной карциномы по сравнению с высоким уровнем экспрессии в обычных аденокарциномы в этих двух органов. В толстой кишке и желудке, 55% и 22% муцинозных карцином были отрицательными слабо положительной для hZip1 соответственно. В противоположность этому, экспрессия hZip1 была умеренной до сильной положительной у 96% и 100% от обычных аденокарциномы, соответственно, в толстой кишке и желудке. Число обычных желудочных аденокарцином, включенных в TMA был мал (п = 45). В отличие от рака яичника, экспрессия hZip1 была уменьшена в зависимости от увеличения класса в обоих муцинозных и не муцинозных опухолей толстой кишки и желудка. Это наблюдение может указывать на различные механизмы, участвующие в опухолевой прогрессии относительно регулирования концентрации цинка, которые нуждаются в более механистических исследований. В легком, мы также определили низкую экспрессию hZip1 в легочных муцинозных карцином. К сожалению, из-за не-наличия обычного аденокарциномы легкого TMA горками, мы не сравнивали экспрессию hZip1 в муцинозных и обычных легочных карцином.
Выводы
выражение hZip1, как представляется, последовательно уменьшается в муцинозных карцином из различных органов по отношению к неопухолевых тканей в этих органах. Тем не менее, hZip1 также уменьшается как функция увеличения класса в обоих муцинозных и не муцинозных опухолей в толстой кишке и желудке. Эти данные позволяют предположить, что hZip1 играет фундаментальную роль в канцерогенезе некоторых органов, особенно подчеркнутых в муцинозных опухолей. Необходимы дополнительные исследования, чтобы точно определить характер этой роли. Тем не менее, практически, есть небольшое значение в условиях низкой экспрессии hZip1 для дифференциальной диагностики муцинозных карцином.
Методы
ткани микрочипов (TMAS)
Все процедуры были выполнены в соответствии с соответствующими законами и институциональных руководящих принципов с одобрения институциональный наблюдательный совет. TMA слайды, приобретенные у США Biomax (Роквилл, штат Мэриленд), были использованы в настоящем исследовании. Завязь ТМА слайд состоит из 35, 152, 11 и 6 интерпретируемой муцинозной карцином, серозных карцином яичников, рака смежной нормальной ткани и нормальных (доброкачественных) тканей, соответственно, в ядре одной ткани на случай. Не известно, если муцинозные карцином, включенных в TMA опухолей яичников первичного происхождения яичников или метастатических опухолей. Colon ТМА слайд состоит из 51, 129 и 12 интерпретируемых муцинозных карцином, обычные аденокарциномы и нормальной ткани, соответственно, в ядре одной ткани на случай. Желудок ТМА слайд, состоящий из 32 интерпретируемых муцинозных карцином, 4 обычных аденокарциномы и 3 случая доброкачественных нормальных и 2 опухоли с нормальной желудочной ткани в дублированных ядер на случай. Легких ТМА слайд состоит из 21 интерпретируемых муцинозных карцином в ядре одной ткани на случай.
Иммуногистохимия (IHC)
hZip1 экспрессии белка определяли с помощью IHC с использованием антитела анти-hZip1 по стандартному протоколу [1, 4]. В кратком изложении, слайды были TMA депарафинировали в ксилоле и повторно гидратируют путем инкубации в уменьшении концентрации этанола. Антиген поиска было сделано путем нагревания в 10 мМ Трис-ЭДТА (10 мМ Трис-основание, 1 мМ ЭДТА ,, 0,05% Tween 20, рН 9,0) буфера при 98 ° С в течение 20 мин, ВВК окрашивание проводили путем инкубации слайды 5% BlokHen (AvasLabs, Tigard, Oregon) с последующей инкубацией в течение ночи при 4 ° C с hZip1 антителом в 5% BlokHen с последующей инкубацией с хреном меченных пероксидазой козьего антитела против куриного IgY вторичного антитела в разведении 1: 200 (AvesLabs, Tigard , штат Орегон). Цвет был разработан с DAB + хромогенный субстрат и гематоксилином был использован в качестве контрастирующая.
Все секции были рассмотрены с (BX53) микроскоп Olympus. Фотографии были обработаны с cellSens Standard XV обработки изображений программное обеспечение (Olympus Corporation Северной и Южной Америке, центр Valley, штат Пенсильвания). IHC подсчета очков была выполнена сертифицированным анатомической патологоанатомом (ММД). Появление мембраны и цитоплазмы, связанный hZip1 иммуно-положительности железистых эпителиальных клеток использовали для озвучивания, как описано ранее [1, 4]. Интенсивность Опухоль окрашивание полуколичественно оценивали как отрицательный (нет окрашивания), слабый (1+) (&л; 10%), умеренное (2+) (10-50%) и сильное (3+) (> 50%) в зависимости положительный на процент положительных клеток.
Статистический анализ
средние оценки экспрессии hZip1 в различных категориях были проанализированы с помощью т Стьюдента
-TEST. Счет IHC считались номинальным, чтобы выяснить значение. P
≤ 0,05 считалась значимой
Сокращения
IHC:.
Immunohistochemistry


TMA:
ткани микрочипов
<бр>
hZip1:
Человека цинка транспортер элемент 1


декларациях
Благодарности
Эта работа финансируется за счет клинической и поступательной премии расширения исследований из Департамента патологии , микробиология и иммунология М. М. Desouki.
конкурирующие интересы
авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов. взносов
Авторского
MMD и OF участвовали в разработке исследования и интерпретации данных. MMD, РФБ и LC участвовал в создании данных. MMD задуман исследования, проведен анализ иммуногистохимических маркеров и проводили статистический анализ. Все авторы разработаны, прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Совместно эволюционировали Helicobacter Pylori и рак желудка: триединство бактериальной вирулентности, восприимчиво…
• Инактивация Bacillus Cereus вегетативных клеток под действием желудочной кислоты и желчи во время экстракорпоральн…