PLOS ONE: mangiferina atenua úlcera gástrica em ratos A isquemia /reperfusão: Envolvimento de PPAR-γ, NF-kB e Nrf2 /HO-1 Sinalização Pathways

Abstract

mangiferina (MF), um xanthonoid de Mangifera indica , tem sido provado que têm efeitos anti-secretores gastroprotectores e antioxidantes contra diferentes modelos de úlcera gástrica; No entanto, o seu mecanismo molecular não foi elucidado anteriormente. Por conseguinte, o objectivo deste estudo foi para testar o seu efeito modulador sobre várias vias de sinalização utilizando o modelo de isquemia /reperfusão, pela primeira vez. Os animais foram tratados com o MF, omeprazol (OMP), e o veículo. Os estudos mecanísticos revelou que a MF mediada seu efeito protector gástrico em parte através de indução da expressão de Nrf2, HO-1 e PPAR-γ juntamente com regulação negativa de que o NF-kB. Surpreendentemente, o efeito de MF, especialmente a dose alta, que excedeu mediada por OMP excepto para Nrf2. Os resultados moleculares foram refletiu sobre os biomarcadores medidos, onde o efeito antioxidante do MF foi manifestada por aumentar a capacidade antioxidante total e glutationa, além de normalizar o nível de malondialdeído. Além disso, MF reduziu a elevação óxido nítrico I /induzido-R, um efeito que foi melhor do que a de OMP. No soro, MF, dependente da dose, aumentada sintase endotelial de óxido nítrico, enquanto que reduziu a isoforma indutível. Em relação ao efeito anti-inflamatório do MF, que reduziu o nível de soro de IL-1β e SE-selectina, efeitos que foram espelhadas no nível do tecido de mieloperoxidase, o marcador de infiltração de neutrófilos. Além disso, MF possuía um carácter anti-apoptótico evidenciado pela elevação do nível de Bcl-2 e que a redução de caspase-3 em uma ordem relacionada com a dose. Como conclusão, os mecanismos gastroprotective intimado da MF são mediados, parcialmente, pela modulação do estresse oxidativo, inflamação e apoptose, possivelmente através do Nrf2 /HO-1, PPAR-γ /NF-kB vias de sinalização.

Citation : Mahmoud-Awny M, Attia AS, Abd-Ellah MF, El-Abhar HS (2015) mangiferina atenua úlcera gástrica na isquemia /reperfusão Rats: Envolvimento de PPAR-γ, NF-kB e Nrf2 /HO-1 vias de sinalização. PLoS ONE 10 (7): e0132497. doi: 10.1371 /journal.pone.0132497

editor: Ashraf B. Abdel-Naim, Faculdade de Farmácia da Universidade Ain Shams, EGIPTO

Recebido: 18 Março, 2015; Aceito: 15 de junho de 2015; Publicação: 21 de julho de 2015

Direitos de autor: © 2015 Mahmoud-Awny et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel

financiamento:.. os autores não têm apoio ou financiamento para relatar

Conflito de interesses:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Durante gástrica úlcera prosperidade doença da upshots congregados à aflição o equilíbrio entre a destrutiva e os eventos de protecção. O stress oxidativo é um factor chave que gera a úlcera gástrica e resulta na produção excessiva de radicais livres (FRS) [1]. A isquemia gástrica /reperfusão (I /R) imita arquétipo úlcera gástrica induzida por stress, no caso, FRs elevadas, óxido nítrico, que (NÃO), a molécula de adesão de leucócitos "E-selectina" [2], a infiltração de neutrófilos [3], e desequilíbrio redox [4] desempenham um papel importante na sua patogênese. De igual modo, o factor nuclear kappa B (NF-kB), um factor de transcrição sensíveis a redox, tem um papel fundamental na lesão de I /R [5]. Ela regula a expressão de vários genes associados com inflamação e lesão celular, tais como a interleucina -1β (IL), -6, moléculas de adesão celular e sintase do óxido nítrico induzível (iNOS). Por outro lado, vários factores medeiam a sua gastroproteção contra lesão oxidativa ao atenuar a resposta inflamatória, estes incluem PPAR (PPAR) -γ [6, 7] e heamoxygenase-1 (HO-1) [8]. Esta última é a isoforma induzível de HO que responde ao estresse, como o stress oxidativo e ele ainda é amplamente considerado como um mecanismo de proteção contra a lesão do tecido oxidativo [9].

Um dos reguladores de transcrição de HO-1 é o nuclear relacionado com o factor-E2 fator-2 (Nrf2) [9], que está localizada no citoplasma em condições normais e interage com Keap1 (o sensor de proteína rica em cisteína molecular Kelch semelhante ECH associando proteína 1) a ser rapidamente degradados pela via da ubiquitina-proteassoma [10, 11]. Ao contrário, sob condições de estresse oxidativo, Keap1 é oxidado e Nrf2 ubiquitination é reduzida [11], liberando, assim, Nrf2 de Keap1. Nrf2 é depois translocado para o núcleo para amarrar com o elemento de resposta antioxidante do promotor do gene alvo [12, 13] causar transactivação imediata dos genes de codificação. Estes genes incluem muitos antioxidantes enzimáticos e genes de desintoxicação, como a glutationa (GSH) com peroxidase /redutase, HO-1, e GSH S-transferase [14].

mangiferina (MF), um glucosylxanthone ocorrência natural, possui um efeito gastroprotective via
suas atividades anti-secretores e antioxidantes, como verificado em diferentes modelos animais de ulceração gástrica [15], mas não o modelo de I /R, que é o objetivo do trabalho atual. MF foi relatado para mediar a sua actividade antioxidante em diferentes níveis da sequência oxidativo. Ele gera radicais fenoxi MF e se liga a iões de metais (Fe ^{2 + /3 +) sob a forma de um complexo de ferro-MF estável que não permite a geração de hidroxilo (OH) radicais e /ou oxo-ferryl grupos peroxi e elimina lípido /radicais alcoxi, desse modo, a manutenção do equilíbrio de oxidação-antioxidante celular [16]. Apesar das reações celulares detalhados descritos, no entanto, as vias de sinalização molecular não tenha sido abordado antes.}

No nível molecular, o presente objetivo foi avaliar o possível envolvimento de Nrf2 /HO-1, PPAR, e NF -κB vias de sinalização no efeito gastroprotetora do MF, além de outros biomarcadores para delinear os mecanismos potenciais gastroprotective utilizando o modelo de hipoxia /reoxigenação.

Materiais e Método

Animais

Homem ratos Wistar, pesando 180-220 g (Instituto de Pesquisa de Oftalmologia, Giza, Egito) foram mantidos em uma luz 12h /ciclos escuros, condições ambientais constantes e foram mantidos com uma comida de dieta adequada e água ad libitum
. Antes do experimento (24 horas) Todos os animais foram mantidos individualmente em gaiolas de largura inferior malha e jejum. Os animais foram tratados de acordo com as orientações aprovadas pela Comissão de animal Cuidado e Uso de Faculdade de Farmácia da Universidade do Cairo, Cairo, Egipto (Permit Number: PT 575). Todos os processos cirúrgicos foram realizados sob anestesia com tiopental, e todos os esforços foram feitos para minimizar o sofrimento.

Drugs

mangiferina [MF] foi adquirido de Sigma-Aldrich Chemical Company (St Louis, MO, EUA) e omeprazol [OMP] de Chemo SA (Lugano, Suíça). Todos os outros produtos químicos e reagentes usados ​​foram de grau analítico. MF e OMP foram dissolvidos em solução salina a ser injectado por via intraperitoneal.

Indução de isquemia gástrica mucosa /reperfusão (I /R) e tratamentos

foi realizada O modelo de I /R de acordo com o método anteriormente descrito por Kotani et al. [17], com algumas modificações. Resumidamente, sob anestesia com tiopental (50 mg /kg, i.p.), a artéria celíaca rato foi ocluída durante 30 min., Após o que a reperfusão foi deixada durante 72 horas por desclampeamento da artéria. Os ratos foram distribuídos em 5 grupos (n = 7-9); animais do primeiro grupo receberam solução salina e a artéria celíaca foi manuseado sem aperto para servir como grupo de controlo operado por simulação. Os ratos nos grupos seguintes foram submetidos a I /R; o (segundo) grupo não tratado, receberam solução salina e foi denotado como o controlo positivo (I /R), enquanto os outros 3 grupos foram tratados, com MF (10 mg /kg; CM _{10, o terceiro grupo), MF ( 20 mg /kg; CM 20; quarto grupo), e OMP (20 mg /kg; OMP 20; quinto grupo). Todos os tratamentos foram realizados 30 min. antes da operação e durante 3 dias após a reperfusão.
seções}

Os exames histopatológicos

Estômago, de três animais representativos de cada grupo, foi imediatamente imerso em formalina a 10% com solução salina, embebidos em parafina, e 5m foram preparados e corados com hematoxilina e eosina (H & e), e examinadas microscopicamente

medições bioquímicas

no final do tempo de reperfusão e sob anestesia com éter profunda, o sangue foi recolhido a partir de. a veia jugular para preparar soros, em seguida, os animais foram sacrificados e o estômago foi extirpado, abertos ao longo da curvatura maior e lavados com uma solução salina gelada. A extensão dos danos da mucosa bruto (índice de ulceração) foi avaliada e expresso como a soma dos comprimentos de úlcera por estômago, em mm [18]. Resumidamente, um ampliador iluminado (3x) foi utilizado para medir o comprimento das longas lesões (em mm) na parte glandular do estômago, enquanto que as lesões petechea foram contadas e cada cinco lesões foram representados como 1 mm de úlcera.

Cerca de 50 mg da mucosa gástrica foi submerso durante a noite em solução de ARN depois, armazenado a -80 ° C até quantitativa PCR em tempo real (qRT-PCR) quantificação. A mucosa restante foi desmantelada fora e homogeneizados em solução salina arrefecida com gelo (MPW-120, Polónia), utilizando a velocidade máxima durante 1 min. O homogenato foi centrifugado a 5000 rpm durante 5 min a 4 ° C e os sobrenadantes resultantes foram mantidas em aliquotas e armazenado a -80 ° C até a determinação de parâmetros gástricos.

Estimativas de parâmetros de homogenato /soro usando ELISA técnica

O homogeneizado /níveis séricos dos seguintes parâmetros foram avaliados utilizando os kits ELISA correspondentes, como mostrado na parênteses:.. IL-1β, sE-selectina (Abcam Inc., Cambridge, Reino Unido, Cat No. ab100768 e ab171334, respectivamente), iNOS, eNOS (EIAab, Wuhan, China, Cat No. E0837r e E0868r, respectivamente), leucemia de células B /linfoma-2 (Bcl-2;. USCN Life Science Inc., Wuhan, China, Cat Não. E90778Bo) e caspase-3 (Cusabio Biotech Co., Wuhan, China, Cat. No. CSB-E08857r). Cada biomarcador foi processado de acordo com os procedimentos do fabricante fornecidas. Soro capacidade antioxidante total (TAC) foi medida utilizando o método de Benzie e Starin [19]. Resumidamente, tripyridyltriazine férrico (Fe ^{3 + -TPTZ) complexo foi reduzida para a forma ferrosa por os antioxidantes presentes na amostra a um pH ácido, para se obter uma cor azul intensa que pode ser monitorizada medindo a variação da absorvância a 593 nm. A mudança está directamente relacionada com o poder redutor combinada ou total de dador de electrões antioxidantes não enzimáticos presentes na mistura de reacção. O nível de CAT foi expressa como? M ​​/L.}

Estimativa da actividade gástrica /conteúdo de mieloperoxidase (MPO), o malondialdeído (MDA), glutationa reduzida (GSH) e total de óxido nítrico (NOx).

a actividade da MPO (U /g), um marcador de infiltração de neutrófilos dos tecidos, foi avaliada de acordo com Bradley et ai. [20]. O método baseia-se na medição da oxidação de hidrogénio dependente de peróxido de o-dianisidina, catalisada pela MPO, que resulta na formação de um composto que exibe um aumento da absorvância a 460 nm. Como índice de peroxidação lipídica substâncias reactivas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), representada por MDA, foi utilizado para determinar o dano oxidativo, seguindo o método de Mihara e Uchiyama [21]. O aduto MDA-TBA desenvolve cor-de-rosa, que foi extraído por n-butanol e medidos em dois comprimentos de onda, viz
., 520 e 535 nm. O método descrito por Ahmed et ai. [22] foi adoptada para avaliar os grupos sulfidrilo não proteicos (principalmente GSH) por reacção com o reagente de Ellman, após a precipitação dos grupos SH proteína. A reacção com o reagente de Ellman formada uma cor amarela estável de ácido 5-mercapto-2-nitrobenzóico, o qual foi medida colorimetricamente a 412 nm (mg /g).

na mucosa gástrica a produção de NO foi estimada indirectamente como nitrito de concentração /nitrato de acordo com o método de Miranda et al. [23], em que o tricloreto de vanádio foi usada para reduzir o nitrato em nitrito. A azo-corante-de-rosa produzido pela reacção de nitrito com ácido sulfanílico seguido pelo acoplamento subsequente com N- (1-naftil) etilenodiamina foi medida colorimetricamente a 540 nm e de NOx foi expressa como uM /g.

quantitativo em tempo real (RT) -PCR

o ARN total foi extraído a partir da mucosa gástrica utilizando simplesmente P ARN total Extraction kit (BioFlux, Hangzhou, China). A pureza do RNA obtido foi verificada spectrophoto-metricamente a 260/280 nm. Quantidades iguais de ARN (0,368 g) foram retrotranscrito no ADN complementar da primeira cadeia (ADNc) a 37 ° C durante 50 min. utilizando 200 U /mL de M-MuLV da transcriptase reversa (SibEnzyme, Novosibirsk, Rússia), 1 ul de hexâmero aleatório (Qiagen, Inc. LRS Laboratories, Coreia), e DTT 0,1 M numa mistura de reacção de 50 uL. Para avaliar a expressão de genes alvo antioxidantes e associadas a inflamação, a RT-PCR foi realizada utilizando SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen) conforme descrito pelo fabricante. Resumidamente, num volume de reacção de 25 ul, 5 ul de cDNA foi adicionado 12,5 ul de 2x SYBR green Master Mix e 2,5 ul (2,5 mM) de cada iniciador. As sequências dos iniciadores foram: iniciador de sentido directo 5'-GCGGAGATCTCCAGTGATATC-3 'PPAR-γ; iniciador anti-sentido 5'-TCA GCGACTGGGACTTTTCT-3 '; NF-kB p65 iniciador com sentido 5'-TGCAGAAAGAAGACATTGAGGTG-3 '; iniciador anti-sentido 5'-AGGCTAGGGTCAGCGTATGG-3 '; iniciador de sentido directo 5'-Nrf2 ATGGCC ACACTTTTCTGGAC-3 '; iniciador anti-sentido 5'-AGATGTCAAGCGGGTCACTT-3 '; HO-1 iniciador com sentido 5'-CGTGCAGAGAATTCTGAGTTC-3 '; iniciador anti-sentido 5'-AGACG CTTTACGTAGTGCTG-3 '; e gliceraldeído-3 fosfato desidrogenase (GAPDH) iniciador de sentido directo 5'-GGGCAGCCCAGAACATCA-3 '; iniciador anti-sentido 5'-TGACCTTG CCCACAGCCT-3 '. As reacções de PCR incluíram 15 min a 95 ° C durante a activação de HotStarTaq ADN Polimerase, seguido por 45 ciclos a 94 ° C durante 15 seg (desnaturar), 55 ° C durante 30 segundos (emparelhamento) e 72 ° C durante 30 seg (extensão ). A expressão relativa foi calculada a partir do 2 ^{fórmula -ΔΔCT [24].}

A análise estatística

Os dados foram expressos como média ± S.E.M de 7-9 animais. As comparações estatísticas entre os meios foram realizados usando análise de uma via da variância (ANOVA), seguida pelo teste de Student-Newman-Keuls. A significância estatística da diferença foi considerada em P Art < 0,05.

Resultados

Efeito da MF e OMP em I /índice de úlcera induzida por R

MF, dependente da dose, proibiu a lesão de I /induzida por R gástrico, como apresentado por valores de índice de úlcera (Tabela 1) eo efeito da MF _{20 foi comparável ao oferecido pela OMP 20.}

efeito da MF e OMP na expressão de mRNA de genes antioxidantes

Como ilustrado na figura 1A e 1B, resposta adaptativa contra a lesão de I /R foi evidenciado na regulação positiva de Nrf2 e HO-1 mRNA, o que explica a razão por trás do elevado nível GSH no grupo I /R não tratada. Estes upregulations mRNA foram ainda mais vívida nos grupos tratados, apontando, assim, a capacidade antioxidante do MF.

Efeito da MF e OMP em parâmetros redox

Como apresentado nas Tabelas 2 e 3 o I /R insulto causado um desequilíbrio no estado oxidativo /nitrosativo. Um aumento na concentração de malondialdeído (182%) e produção de NOx (187,6%), em paralelo com 5.1 dobras aumentar na iNOS, foi percebida no grupo não tratado I /R. Pelo contrário, a lesão de I /R da metade da eNOS benéfico e reduzida no TAC (69,7%), comparado com o grupo simulado. Todas essas alterações foram revertidas pela OMP, bem como MF, de uma forma dependente da dose. Em quase todos os parâmetros MF _{20 tiveram o efeito proeminente. Em relação GSH, o modelo de I /R, inesperadamente, elevou de 32%, um efeito que foi reforçada pelos diferentes regimes medicamentosos.}

Efeito da MF e OMP sobre a expressão do mRNA do PPAR-γ e NF -κB genes

Tal como representado na figura 1C, os animais com I /R lesões revelou uma diminuição significativa na expressão gástrica do PPAR-γ anti-inflamatória (25% do nível sham), com um aumento acentuado em que o factor pró-inflamatória de NF-kB (11,9 vezes) (Figura 1D). Curiosamente, MF grupos tratados foram capazes de neutralizar os efeitos relativos a I /R de acordo com o nível de dose testados. OMP, por outro lado, mostrou um efeito menor do que o fez na MF NF-kB, mas não alterou a PPAR-γ diminuído.

Efeito do MF e OMP de citocinas inflamatórias e infiltração de neutrófilos gástricas

a Tabela 4 representa o mal I /mediada por R gástrico, o que agravou os biomarcadores inflamatórios. É impulsionada os níveis séricos de IL-1β, SE-selectina, e a actividade de MPO gástrica por 5.2, 5.6, e 2.2 dobras, respectivamente, em comparação com a operação simulada grupo de controlo. Todas essas alterações foram significativamente interrompida por tratamento com MF, de forma dependente da dose. No entanto, o MF _{20 efeitos substituído que mediada pela OMP padrão de referência. Estas observações indicam que a MF pode modular as citocinas inflamatórias e recrutamento de neutrófilos para mitigar I /lesão induzida por R.}

Efeito do MF e OMP nos biomarcadores apoptóticas

Como apresentado na Tabela 4, o I /R insulto apoptose desencadeada da mucosa gástrica, como evidenciado pelo aumento do nível de 6,85 dobras da caspase-3. No mesmo contexto, a I /R diminuiu o nível do marcador anti-apoptótica de Bcl-2 (59%). No entanto, a administração de MF, de uma forma dependente da dose, suspendeu estas alterações de forma significativa, os efeitos que ultrapassaram as mediadas pela OMP.

Efeito da MF e OMP em gástricas alterações histopatológicas

A melhoria efeitos dos diferentes regimes de drogas sobre os biomarcadores testados foram confirmados pelos achados histológicos apresentados na figura 2. A figura ilustra as fotomicrografias de mucosa do estômago, que mostram [A] normais da mucosa gástrica (mu), submucosa (sm) e muscular ( mL) arquitetura na seção de ratos sham-operados. [B] Eu seções /R revelam mucosa (m) descartadas, juxtraposed com hemorragia subjacente (seta preta), [C] severa congestão vascular (V), focal inflamatória células de infiltração (m), principalmente como neutrófilos e edema (O) na submucosa. [D] MF _{10 secção divulga única congestionamento nos vasos sanguíneos submucosa (V) com infiltração de células inflamatórias leve (seta amarela) e /ou edema. Por outro lado, [E] MF 20 secção, similar controle para sham-operado, mostra a estrutura histológica normal intacta, exceto por uma congestão vascular muito leve (v) na submucosa; o MF 20 efeito substituiu a de OMP [F], onde os vasos sanguíneos congestionados (V) e edema na camada submucosa ainda são detectados nas seções OMP.}

Discussão

Embora estudos anteriores documentaram o antioxidante [15] e anti-inflamatórias [25] capacidades de MF, mas nenhum veio clarificar as vias moleculares potenciais envolvidos em remendar os sistemas inflamatórios redox /perturbados. Assim, no presente trabalho, verificou-se a expressão da mucosa gástrica de Nrf2 /HO-1 para se compreender esta via de sinalização está envolvido no mecanismo antioxidante MF. Além disso, o estudo alvo a expressão de NF-kB e de PPAR-γ para explorar também algumas das máquinas anti-inflamatória molecular possível MF.

Os nossos estudos de transdução de sinal revelou que a I /R foi regulada positivamente de forma significativa o ARNm de Nrf2 e HO-1 apontando para um possível efeito de adaptação do corpo contra o insulto I /R danificar; Estes achados que imitam de Pan e colaboradores [26], em um modelo de retina de I /R. Reforçada a expressão da proteína HO-1, regulado por Nrf2 [27], pode ocorrer em resposta ao estresse oxidativo [28] e doenças inflamatórias e é amplamente aceito como um mecanismo de proteção contra a lesão do tecido oxidativo [9], os fatos que suportam os nossos achados. MF, por outro lado, afirma seu efeito antioxidante, elevando ainda mais a expressão de Nrf2 e HO-1, os resultados que foram previamente gravados num modelo hepatotóxico [29]. Para o melhor de nosso conhecimento, esta descoberta é a primeira evidência direta para um papel gastroprotective de MF através da via antioxidante Nrf2 /HO-1 no modelo de úlcera I /induzida por R.

O caráter antioxidante do MF foi adicionalmente aqui manifestada pela sua capacidade de combater a elevação de I /R em induzida por peróxidos lipídicos [30] e a diminuição da TAC [31]. No entanto, o efeito de I /R e MF em GSH mostrou o mesmo padrão observado em Nrf2 e HO-1 de expressão, em que a I /R causou um aumento subtil, mas significativa nos níveis de GSH, um efeito que foi ampliada ainda mais por MF [32] . Esta ação, aponta para uma possível resposta compensatória contra a lesão de I /R e liga GSH com a via de sinalização Nrf2 /HO-1 como suportado até então por Das et al. [29]. A correlação entre a GSH e Nrf2 podem estar relacionados com a conversa cruzada molecular entre o Nrf2 upregulated ea ligase γ-glutamilcisteína [10, 33], uma enzima que catalisa o passo limitante da velocidade na síntese de GSH [34]. Além disso, HO-1 papel antioxidante decorre de sua capacidade de catalisar a quebra do heme pró-oxidante em ferro, biliverdina e monóxido de carbono [35]; biliverdina, em seguida, é convertido para a bilirrubina, que actua como um antioxidante contra a peroxidação lipídica [36].

Além remendar o estado redox perturbado, MF seu efeito prolongado para implicar o stress nitrosativo, bem. MF contrário o efeito de I /R em os níveis de eNOS /iNOS, em que restaurou a actividade da enzima constitutiva da eNOS [37] e diminuiu a isoforma induzível nociva [38]. Portanto, espera-se que o nível elevado de iNOS no grupo não tratado é responsável para o nível de excesso de NOx, o que compromete a integridade da mucosa gástrica
através da sua interacção com o anião de superóxido e a formação de peroxinitrito [39]. O último é um radical livre potente que perturba macromoléculas celulares através de peroxidação lipídica, disfunção mitocondrial directo, a inibição da membrana de Na ^{+ /K + - ATPase, a modificação de proteínas e oxidativo [40]. Pelo contrário, a produção de MF-mediada de NOx pode ser conduzido a partir da eNOS restaurado, e não iNOS, suportando, assim, o antioxidante /Free propriedades de eliminação de radicais de MF [16]. O NO protetora sacia radicais livres com a consequente preservação da GSH na mucosa gástrica; GSH atua tanto como um limpador nucleófila de superóxidos e como co-fator na redução mediada por peroxidase GSH de peróxido de hidrogênio [41].}

Os eventos deletérios que seguem a I /R insulto incluem o aumento da liberação de mediadores pró-inflamatórios e recrutamento de leucócitos, além de perturbar os oxidativos /maquinarias nitrosativo [42]. No estudo actual, MF validado o seu efeito imuno-moduladora /anti-inflamatório, que foi documentada anteriormente [25, 43], através da inibição da IL-1β [43], E-selectina [25] e de neutrófilos de infiltração [44] noutros diferentes modelos. Estes efeitos podem ser parcialmente ligado às mudanças MF-moduladores sobre a nível molecular. MF induzida a expressão do gene de PPAR-γ, juntamente com a regulação negativa do pai inflamatória do factor de transcrição /mediador de NF-kB, impedindo, assim, o efeito de I /R. Estudos anteriores relataram que o efeito prejudicial de I /R é mediada parcialmente através
suprimir o ARNm de PPAR-γ [7, 45], que é um factor de transcrição que actua como um regulador pleiotrópico influente de anti-inflamação, antioxidante, e processos de limpeza mediadas por fagócitos. Para além do seu efeito directo genómico, PPARy foi encontrada para interagir negativamente com outros factores de transcrio como NF-kB, que está na base muitos aspectos do efeito anti-inflamatório /imunomoduladores de PPARy [25, 46], fatos que tom com os nossos achados. Além disso, a expressão aumentada de PPARy foi relatado como inibindo a produção de NOx /iNOS [47], oferecendo, deste modo, uma explicação para a inibição mediada por MF em iNOS. PPAR também impede as citocinas macrófagos orientado e moléculas de adesão leucocitária, como aqui visto, em parte via
suprimir a expressão do gene de NF-kB [25, 48]. Além disso, foi relatado MF para reduzir a aderência de PMN para o endotélio e protegida contra a sua infiltração no tecido gástrico [49], juntamente com a modulação de PPAR-γ e a expressão de NF-kB. Estes resultados suportam o nosso no E-selectina, iNOS e MPO, como mencionado antes. Além disso, o MF-induzida HO-1 sobre-regulação pode racionalizar o carácter anti-inflamatória de MF, através
sua monóxido de carbono subproduto, o que confere uma propriedade anti-inflamatório [50]. Para esse fim, os resultados experimentais do nosso estudo identificar outros mecanismos gastroprotectores em ambos os níveis celulares e moleculares pelos quais MF protegidas mucosa gástrica contra a lesão de I /R-induzida. Estes resultados corroboram com os achados de estudos anteriores em modelo experimental de colite [51, 52], e de definir a ação anti-inflamatória da MF.

Anteriormente Wu et al. [53] relataram que o PPAR-γ superexpressão também protege o potencial de membrana mitocondrial e previne a apoptose por hiperregular a expressão das proteínas da família Bcl-2 anti-apoptóticas. Da mesma forma, o monóxido de carbono, o subproduto de HO-1 actividade, confere uma actividade anti-apoptótica pela sobre-regulação da molécula anti-apoptótica de Bcl-2, e a regulação negativa do sinal pro-apoptótica Bax [54]. Os dados do presente estudo demonstraram que a I /lesão gástrica induzida por R está também relacionado com a apoptose, como evidenciado pela diminuição acentuada de Bcl-2 [55] e a elevação da caspase-3 [56], enquanto MF reverteu a I /R a apoptose induzida por uma elevação dependente da dose dos níveis de Bcl-2, e redução do nível de caspase-3. O efeito anti-apoptótico MF coincide com os resultados de Ghosh et al. [38] e pode ser atribuída à sobre-regulação mediada por MF de PPAR-γ e /ou níveis de mRNA de HO-1

Todos estes resultados foram também reflectida nas alterações histológicas.; a I /R insulto causado desprendimento da camada protectora do epitélio e resultou numa hemorragia subjacente com uma congestão acentuada de vasos sanguíneos, juntamente com as células inflamatórias de infiltração na lâmina própria, um efeito que designa a cessação do fluxo de sangue que foi acompanhado por edema. O congestionamento de vasos sanguíneos pode resultar da elevação do vasoconstritor de endotelina-1 no tecido gástrico [57], aumentou a infiltração de leucócitos [58], e /ou a diminuição da actividade de SONe, conforme documentado no presente estudo. Por conseguinte, a I /R foi não só acompanhada pela formação de radicais livres, mas também com uma clara diminuição nos níveis de anti-oxidantes endógenos e aumento da infiltração de células inflamatórias, alterações que foram impedidas por MF, especialmente ao nível da dose alta, onde histológica normais observou-se estrutura.

Em relação à OMP referência ao fármaco, que exerce o seu efeito protector gástrico pela sua antioxidante, anti-apoptótico [59], e anti-inflamatório [60], para além acções de supressão de ácido [61], que é aqui delineada a eventos moleculares, que contribuem para estes efeitos. No presente estudo, nós documentado que OMP efeitos antioxidantes, evidenciada pela inibição da peroxidação lipídica e aumentando os biomarcadores de defesa, são mediadas via
a via de sinalização Nrf2 /HO-1. OMP também inibiu a citocina pró-inflamatória IL-1β, bem como a adesão de neutrófilos e a infiltração, como representado através da redução do nível SE-selectina e a actividade de MPO, respectivamente. Embora OMP regulada negativamente a expressão de NF-kB, no entanto, não podia combater o efeito de I /R em PPAR-γ, sugerindo que o efeito anti-inflamatório /imunomoduladores da OMP hastes de suprimir a expressão do gene de NF-kB, e, possivelmente, outras mecanismos, mas não o de PPAR-γ
.

Embora o efeito da OMP de expressão Nrf2 excedeu a das CM _{20, mas o oposto era óbvia em HO-1 e GSH, uma diferença que pode ser ligados aos seus efeitos no NF-kB. O último foi provado para actuar como um regulador negativo da via Nrf2 competindo com ele pela ligação ao co-activador transcricional da proteína de ligação a CREB (CBP) e também para promover a ligação do co-repressor da histona-desacetilase 3 (HDAC3) para o elemento de resposta antioxidante (ARE) [62]; estes efeitos podem retardar a transcrição mediada Nrf2 dos seus alvos a jusante.}

Para além disso, a propriedade anti-apoptótico de OMP invocado não apenas na sua capacidade de aumentar o nível da proteína anti-apoptótica, Bcl-2 ou para diminuir o nível de o marcador de apoptose, caspase-3, como detectado no presente estudo, mas também na redução de lesões oxidativas do ADN [59].

Finalmente, pode-se concluir que o efeito gastroprotector do MF, principalmente na dose de 20 mg /kg, pode ser atribuída à activação da via Nrf2 /HO-1 antioxidante, da via anti-inflamatória de PPAR-γ através
downregulating NF-kB, e para aumentar a proteína anti-apoptótica Bcl 2 e diminuindo a caspase-3. Todos estes mecanismos finalmente manter a integridade da barreira mucosa gástrica normal.

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