PLoS ONE: Mangiferin Mitiga ulcera gastrica a ratti Ischemia /riperfuso: Coinvolgimento di PPAR-γ, NF-kB e Nrf2 /HO-1 segnalazione Pathways

Estratto

Mangiferin (MF), un xanthonoid da Mangifera indica , è stato dimostrato di avere effetti gastroprotettori antisecretori e antiossidante contro diversi modelli di ulcera gastrica; Tuttavia, il suo meccanismo molecolare non sono state chiarite. Pertanto, lo scopo di questo studio è stato quello di testare l'effetto modulatorio su diverse vie di segnalazione che utilizzano il modello di ischemia /riperfusione per la prima volta. Gli animali sono stati trattati con MF, omeprazolo (OMP), e il veicolo. Gli studi meccanicistici hanno rivelato che MF mediato il suo effetto gastroprotettori in parte tramite inducendo l'espressione di Nrf2, HO-1 e PPAR-γ con downregulating quella di NF-kB. Sorprendentemente, l'effetto di MF, in particolare la dose elevata, superiore a quello mediato da OMP tranne Nrf2. I risultati molecolari si sono riflessi sui biomarcatori misurati, in cui l'effetto antiossidante di MF si è manifestata con l'aumento della capacità antiossidante totale e glutatione, oltre normalizzare il livello malondialdeide. Inoltre, MF diminuito l'/elevazione ossido nitrico R-indotta I, un effetto che era migliore di quella di OMP. Nel siero, MF, la dose dipendente, maggiore sintasi endoteliale dell'ossido nitrico, mentre ha ridotto la isoforma inducibile. Per quanto riguarda l'effetto anti-infiammatorio di MF, ha ridotto il livello sierico di IL-1β e SE-selectina, effetti che si specchiavano sul livello dei tessuti di mieloperossidasi, il marcatore infiltrazione dei neutrofili. Inoltre, MF possedeva un carattere antiapoptotico evidenziato da elevare il livello Bcl-2 e riducendo quello della caspasi-3 in un ordine dose correlato. In conclusione, i meccanismi gastroprotettori intendere di MF sono mediati, in parte, attraverso la modulazione dello stress ossidativo, infiammazione e l'apoptosi, eventualmente tramite l'Nrf2 /HO-1, vie di segnalazione PPAR-γ /NF-kB.

Visto : Mahmoud-Awny M, Attia AS, Abd-Ellah MF, El-Abhar HS (2015) Mangiferin Mitiga ulcera gastrica ischemia /riperfuso Ratti: Coinvolgimento di PPAR-γ, NF-kB e Nrf2 /HO-1 vie di segnalazione. PLoS ONE 10 (7): e0132497. doi: 10.1371 /journal.pone.0132497

Editor: Ashraf B. Abdel-Naim, Facoltà di Farmacia, Università di Ain Shams, Egitto

Ricevuto: 18 marzo 2015; Accettato: 15 Giugno 2015; Pubblicato: 21 Luglio 2015

Copyright: © 2015 Mahmoud-Awny et al. Questo è un articolo ad accesso libero distribuito sotto i termini della Creative Commons Attribution License, che permette l'uso senza restrizioni, la distribuzione e la riproduzione con qualsiasi mezzo, a condizione che l'autore originale e la fonte sono accreditati

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Introduzione

Nel corso gastrica ulcera prosperità malattia di upshots fermavano a disagio l'equilibrio tra la distruttiva e gli eventi di protezione. Lo stress ossidativo è un fattore chiave che genera ulcera gastrica e si traduce in sovrapproduzione di radicali liberi (FRS) [1]. L'ischemia gastrico /riperfusione (I /R) imita archetipo indotta da stress ulcera gastrica, nel qual caso, FRS elevate, ossido nitrico (NO), leucociti molecola di adesione "E-selectina" [2], infiltrazione di neutrofili [3], e squilibrio redox [4] svolgono un ruolo sostanziale nella sua patogenesi. Allo stesso modo, il fattore-kappa B nucleare (NF-kB), un fattore di trascrizione redox-sensibili, ha un ruolo fondamentale nella lesione di I /R [5]. Esso regola l'espressione di diversi geni associati con l'infiammazione e danno cellulare, come l'interleuchina -1β (IL), -6, molecole di adesione cellulare e ossido nitrico sintasi inducibile (iNOS). D'altra parte, diversi fattori mediare la loro gastroprotezione contro i danni ossidativi da alleviare la risposta infiammatoria, questi includono perossisomi recettore attivante la proliferazione (PPAR) -γ [6, 7] e heamoxygenase-1 (HO-1) [8]. Quest'ultimo è l'isoforma inducibile di HO che risponde alle sollecitazioni, come lo stress ossidativo e rimane ampiamente considerato come un meccanismo di protezione contro le lesioni dei tessuti ossidativo [9].

Uno dei regolatori trascrizionali di HO-1 è il fattore nucleare-E2 legate [9] factor-2 (Nrf2), che è localizzato nel citoplasma in condizioni normali e interagisce con Keap1 (molecolare sensore ricche di cisteina proteina Kelch-like ECH associare proteina 1) di essere rapidamente degradato dal pathway ubiquitina-proteasoma [10, 11]. Al contrario, in condizioni di stress ossidativo, Keap1 viene ossidato e Nrf2 ubiquitinazione si abbassa [11], liberando, in tal modo, Nrf2 da Keap1. Nrf2 viene traslocata nel nucleo per legare con l'elemento risposta antiossidante del promotore gene bersaglio [12, 13] causando transattivazione immediata dei geni codifica. Questi geni includono molte antiossidante enzimatica e geni disintossicante, quali glutatione (GSH) perossidasi /reduttasi, HO-1, e GSH S-transferasi [14].

Mangiferin (MF), un glucosylxanthone naturale, possiede un effetto gastroprotettivi via
sue attività antisecretori ed antiossidanti, come verificato in diversi modelli animali di ulcera gastrica [15], ma non il modello di I /R, che è l'obiettivo del lavoro attuale. MF è stato segnalato per mediare sua attività antiossidante a diversi livelli della sequenza ossidativa. Esso genera MF radicali fenossi e si lega a ioni metallici (Fe ^{2 + /3 +) sotto forma di un complesso MF-ferro stabile che non consente la generazione di idrossile (OH) radicali e /o oxo-ferryl gruppi e spazza lipidi perossidico /radicali alcossilici, in tal modo, mantenendo l'equilibrio ossido-antiossidante cellulare [16]. Nonostante le reazioni cellulari dettagliate descritte, tuttavia, le vie di segnalazione molecolare non è stato affrontato prima.}

Al livello molecolare, l'attuale obiettivo era quello di valutare il possibile coinvolgimento di Nrf2 /HO-1, PPAR, e NF -κB vie di segnalazione in effetti gastroprotettori di MF, oltre ad altri biomarcatori per delineare i possibili meccanismi gastroprotettivi utilizzando il modello /riossigenazione ipossia.

Materiali e Metodo

Animali

Male ratti Wistar, del peso di 180-220 g (Research Institute of Ophthalmology, Giza, Egitto) sono stati mantenuti su una luce di 12 ore cicli giorno /notte, le condizioni ambientali costanti e sono stati mantenuti su una corretta dieta chow e acqua ad libitum
. Prima di sperimentare (24 ore) tutti gli animali sono stati tenuti singolarmente in ampie gabbie fondo in rete e digiuno. Gli animali sono stati trattati secondo le linee guida approvate dal Comitato di cura e l'uso di animali della Facoltà di Farmacia, Università del Cairo, Il Cairo, Egitto (numero di autorizzazione: PT 575). Tutti i processi chirurgici sono stati eseguiti in anestesia tiopentale, e tutti gli sforzi sono stati fatti per ridurre al minimo le sofferenze.

Farmaci

Mangiferin [MF] è stato acquistato da Sigma-Aldrich Chemical Company (St Louis, MO, USA) e omeprazolo [OMP] da Chemo SA (Lugano, Svizzera). Tutti gli altri prodotti chimici e reagenti utilizzati erano di grado analitico. MF e OMP sono stati sciolti in soluzione fisiologica per essere iniettato per via intraperitoneale.

Induzione gastrica ischemia mucosa /riperfusione (I /R) e trattamenti

Il modello I /R è stata eseguita secondo il metodo precedentemente descritto da Kotani et al. [17] con alcune modifiche. Brevemente, in anestesia tiopentale (50 mg /kg, i.p), l'arteria celiaca ratto è stata occlusa per 30 min., Dopo di che la riperfusione è stato permesso per 72 ore dal declamping l'arteria. I ratti sono stati assegnati in 5 gruppi (n = 7-9); gli animali del primo gruppo hanno ricevuto soluzione salina e l'arteria celiaca è stata gestita senza bloccaggio per servire come gruppo di controllo sham-operated. Ratti nei seguenti gruppi sono stati sottoposti a I /R; non trattato (secondo) di gruppo, ricevuto salina ed è stato indicato come controllo positivo (I /R), mentre gli altri 3 gruppi sono stati trattati con MF (10 mg /kg; MF _{10; terzo gruppo), MF ( 20 mg /kg; MF 20; quarto gruppo), e OMP (20 mg /kg; OMP 20; quinto gruppo). Tutti i trattamenti sono stati fatti 30 min. prima del funzionamento e per 3 giorni dopo la riperfusione.
sezioni}

esami istopatologici

Stomaco, da tre animali rappresentativi di ciascun gruppo, è stato immediatamente immerso in 10% formalina salina, inclusi in paraffina, e 5 micron sono stati preparati, colorate con ematossilina e eosina (H & e), e esaminati al microscopio

misurazioni biochimiche

al termine del tempo di riperfusione e sotto anestesia profonda etere, il sangue è stato raccolto da. la vena giugulare per preparare i sieri, quindi animali sono stati eutanasia e lo stomaco è stato asportato, aperto lungo la grande curvatura, e risciacquato con una soluzione salina ghiacciata. L'entità del danno alla mucosa lordo (ulcera Index) è stato valutato ed espresso come la somma delle lunghezze ulcera a stomaco in mm [18]. Brevemente, è stato utilizzato un ingranditore (3x) per misurare la lunghezza delle lesioni lunghe (mm) nella parte ghiandolare dello stomaco, mentre le lesioni petechea stati contati ed ogni cinque lesioni sono state rappresentate come 1 mm di ulcera.

a proposito di 50 mg di mucosa gastrica è stato sommerso durante la notte in RNA tardi soluzione, conservati a -80 ° C fino quantitativa real-time PCR (qRT-PCR) quantificazione. La mucosa restante è stata scartata fuori e omogeneizzato in soluzione salina ghiacciata (MPW-120, Polonia) utilizzando la massima velocità per 1 min. L'omogenato è stato centrifugato a 5000 rpm per 5 minuti a 4 ° C ed i supernatanti risultanti sono stati tenuti in aliquotes e conservato a -80 ° C fino alla determinazione dei parametri gastrici.

Stima di omogenato parametri /siero usando ELISA tecnica

L'omogeneizzato /livelli sierici dei seguenti parametri sono stati valutati usando i corrispondenti kit ELISA come indicato tra parentesi:.. IL-1β, sE-selectina (Abcam Inc., Cambridge, UK, Cat No. ab100768 e ab171334, rispettivamente), iNOS, eNOS (EIAab, Wuhan, Cina, Cat No. E0837r e E0868r, rispettivamente), la leucemia a cellule B /linfoma-2 (Bcl-2;. USCN life Science Inc., Wuhan, Cina, Cat Nr. E90778Bo) e caspasi-3 (Cusabio Biotech Co., Wuhan, Cina, Cat. No. CSB-E08857r). Ogni biomarcatore è stato elaborato secondo le procedure del produttore previsti. Siero capacità antiossidante totale (TAC) è stata misurata con il metodo di Benzie e Starin [19]. Brevemente, tripyridyltriazine ferrico (Fe ^{3 + -TPTZ) complesso è stata ridotta alla forma ferrosa dagli antiossidanti presenti nel campione a un pH acido, per produrre un colore blu intenso che può essere monitorato misurando la variazione di assorbanza a 593 nm. Il cambiamento è direttamente correlato al potere riducente combinato o totale del donatore di elettroni antiossidanti non enzimatici presenti nella miscela di reazione. La TAC è stata espressa come mM /L.}

Stima di attività gastrica /contenuto della mieloperossidasi (MPO), malondialdeide (MDA), glutatione ridotto (GSH) e l'ossido nitrico totale (NOx).

L'attività di MPO (U /g), un marker di tessuto neutrofili infiltrazione, è stata valutata in base alle Bradley et al. [20]. Il metodo si basa sulla misurazione del perossido di idrogeno-dipendente ossidazione di o-dianisidina, catalizzata da MPO, che porta alla formazione di un composto presentante una maggiore assorbanza a 460 nm. Come indice di perossidazione lipidica dell'acido tiobarbiturico (TBARS sostanze reattive), rappresentati da MDA, è stata utilizzata per determinare il danno ossidativo, seguendo il metodo di Mihara e Uchiyama [21]. L'addotto MDA-TBA sviluppa colore rosa, che è stato estratto da n-butanolo e misurata a due lunghezze d'onda, cioè
., 520 e 535nm. Il metodo descritto da Ahmed et al. [22] è stato adottato per valutare i gruppi sulfidrilici non proteici (principalmente GSH) per reazione con il reagente di Ellman dopo precipitare le proteine ​​SH-gruppi. La reazione con il reagente di Ellman formò un colore giallo stabile di 5 acido mercapto-2-nitrobenzoic, che è stato determinato per colorimetria a 412 nm (mg /g).

mucosa gastrica produzione di NO è stata stimata indirettamente, come il nitrito di concentrazione /nitrati secondo il metodo di Miranda et al. [23], in cui il vanadio tricloruro è stato utilizzato per ridurre il nitrato in nitrito. La rosa azo-dye prodotto dalla reazione di nitrito con acido solfanilico seguito dal successivo accoppiamento con N- (1-naftil) etilendiammina stata misurata colorimetricamente a 540 nm e NOx è stata espressa in mM /gm.

quantitativa in tempo reale (RT) -PCR

l'RNA totale è stato estratto dalla mucosa gastrica utilizzando semplicemente kit P RNA totale Estrazione (BioFlux, Hangzhou, Cina). La purezza del RNA ottenuto è stata verificata spettrofotome-metricamente a 260/280 nm. Uguali quantità di RNA (0,368 mg) sono stati retrotrascritti in primo filamento di DNA complementare (cDNA) a 37 ° C per 50 min. utilizzando 200 U /ml M-MuLV della trascrittasi inversa (SibEnzyme, Novosibirsk, Russia), 1 ml esamero casuale (Qiagen, LRS Laboratories, Inc. Corea), e 0.1 M DTT in una miscela di reazione di 50 microlitri. Per valutare l'espressione di geni bersaglio antiossidanti e infiammazione associata, RT-PCR è stata effettuata utilizzando SYBR green PCR Master Mix (Qiagen) come descritto dal produttore. In breve, in un volume di reazione di 25 ml, 5 ml di cDNA è stato aggiunto a 12,5 ml di 2x SYBR master mix verde e 2,5 ml (2,5 micron) di ciascun primer. Le sequenze di primer sono stati: PPAR-γ senso di primer 5'-GCGGAGATCTCCAGTGATATC-3 '; primer antisenso 5'-TCA GCGACTGGGACTTTTCT-3 '; NF-kB p65 senso di primer 5'-TGCAGAAAGAAGACATTGAGGTG-3 '; primer antisenso 5'-AGGCTAGGGTCAGCGTATGG-3 '; Nrf2 senso di primer 5'-ATGGCC ACACTTTTCTGGAC-3 '; primer antisenso 5'-AGATGTCAAGCGGGTCACTT-3 '; HO-1 senso di primer 5'-CGTGCAGAGAATTCTGAGTTC-3 '; primer antisenso 5'-AGACG CTTTACGTAGTGCTG-3 '; e gliceraldeide-3 fosfato deidrogenasi (GAPDH) senso di primer 5'-GGGCAGCCCAGAACATCA-3 '; primer antisenso 5'-TGACCTTG CCCACAGCCT-3 '. reazioni PCR inclusi 15 min a 95 ° C per l'attivazione di HotStarTaq DNA Polymerase, seguita da 45 cicli a 94 ° C per 15 sec (denaturazione), 55 ° C per 30 sec (ricottura), e 72 ° C per 30 sec (estensione ). L'espressione relativa è stata calcolata dal 2 ^{formula -ΔΔCT [24].}

Analisi statistica

I dati sono stati espressi come media ± S.E.M di 7-9 animali. Confronti statistici tra mezzi sono stati effettuati utilizzando analisi della varianza ad una via (ANOVA), seguita da test di Student-Newman-Keuls. La significatività statistica della differenza è stata considerata a P
< 0.05.

Risultati

Effetto di MF e OMP su I /index ulcera R-indotta

MF, la dose dipendente, vietata la lesione di I /R-indotta gastrica, come presentato da valori di indice di ulcera (Tabella 1) e l'effetto di MF _{20 era paragonabile a quella offerta da OMP 20.}

effetto MF e OMP sull'espressione dell'mRNA dei geni antiossidanti

Come illustrato in Fig 1A e 1B, risposta adattativa contro la lesione di I /R è stato evidenziato nel upregulation di Nrf2 e hO-1 mRNA, il che spiega il motivo dietro il livello di GSH elevata in trattata gruppo I /R. Questi mRNA upregulations erano ancora più vividi nei gruppi trattati, indicando, in tal modo, per la capacità antiossidante di MF.

Effetto di MF e OMP sui parametri redox

Come illustrato nelle tabelle 2 e 3 l'insulto I /R causato uno squilibrio ossidativo /status nitrosativo. Un aumento del livello di MDA (182%) e la produzione di NOx (187.6%), in parallelo con 5,1 pieghe aumentare di iNOS, è stato percepito nel /gruppo non trattato I R. Al contrario, il pregiudizio I /R dimezzato il benefico eNOS e ridotto il TAC (69,7%), rispetto al gruppo sham. Tutte queste modifiche sono state annullate con OMP, così come MF, in un modo dipendente dalla dose. In quasi tutti i parametri MF _{20 ha avuto l'effetto di rilievo. Per quanto riguarda GSH, il modello di I /R, inaspettatamente, ha elevato è del 32%, un effetto che è stato ulteriormente rafforzato dalle diverse terapie farmacologiche.}

Effetto di MF e OMP sull'espressione dell'mRNA di PPAR-γ e NF -κB geni

Come illustrato nella figura 1C, animali con I /R lesioni hanno rivelato una diminuzione significativa nell'espressione gastrica del movimento anti-infiammatorio di PPAR-γ (25% del livello sham), con un aumento marcato in quella del fattore NF-kB proinfiammatorie (11,9 volte) (Fig 1D). È interessante notare, MF trattata gruppi erano in grado di contrastare gli effetti di I /R-correlato in conformità al livello di dose testata. OMP, d'altra parte, ha mostrato un effetto minore rispetto MF fatto su NF-kB, ma non ha alterato il PPAR-γ diminuito.

Effetto MF e OMP sulle citochine infiammatorie gastriche e neutrofili infiltrazione

Tabella 4 descrive l'/male gastrica R-mediata i, che aggrava i biomarker di infiammazione. E 'aumentato i livelli sierici di IL-1β, sE-selectina, e l'attività MPO gastrica da 5.2, 5.6, 2.2 e pieghe, rispettivamente, rispetto al gruppo di controllo la farsa operato. Tutte queste alterazioni erano significativamente interrotte dal trattamento con MF in modo dose-dipendente. Ciò nonostante, la MF _{20 effetti sostituito quella mediata dalla OMP standard di riferimento. Queste osservazioni indicano che MF in grado di modulare le citochine infiammatorie e neutrofili reclutamento per mitigare I /infortunio R-indotta.}

Effetto di MF e OMP sui biomarcatori apoptotici

Come riportato nella Tabella 4, la I /R insulto innescato l'apoptosi della mucosa gastrica, come dimostra l'aumento 6,85 pieghe della caspasi-3 livelli. Nello stesso contesto, I /R diminuito il livello del marcatore anti-apoptotica Bcl-2 (59%). Tuttavia, la somministrazione di MF, in modo dose-dipendente, ha fermato queste alterazioni in modo significativo, effetti che hanno superato quelle mediate da OMP.

Effetto di MF e OMP su gastrici cambiamenti istopatologici

Il miglioramento effetti dei diversi regimi di droga sui biomarcatori testati sono stati ulteriormente confermati dai risultati istologici presentati nella figura 2. La figura illustra le microfotografie di mucosa dello stomaco, che mostrano [a] normale mucosa gastrica (mu), sottomucosa (SM) e muscolare ( mL) architettura nella sezione ratti sham-operated. [B] I sezioni /R rivelano sloughed mucosa (m), juxtraposed con emorragie sottostante (freccia nera), [C] grave congestione vascolare (V), focale infiammatorio le cellule infiltrazione (m), principalmente come neutrofili, ed edema (O) in sottomucosa. [D] MF _{10 sezione divulga solo la congestione nei vasi sanguigni della sottomucosa (V) con lieve infiltrazione infiammatoria delle cellule (freccia gialla) e /o edema. D'altra parte, [E] MF 20 sezione, simile controllo sham, mostra normale struttura istologica intatta, tranne per una congestione vascolare molto lieve (v) nella sottomucosa; MF 20 effetto sostituita quella di [F] OMP, in cui i vasi sanguigni congestionati (V) ed edema nello strato sottomucosa sono ancora rilevati in sezioni OMP.}

Discussione

Anche se studi precedenti hanno documentato l'antiossidante [15] e anti-infiammatori [25] capacità di MF, ma nessuno ha chiarito le possibili vie molecolari coinvolti nella riparazione dei sistemi infiammatori disturbati redox /. Così, in questo lavoro abbiamo verificato l'espressione della mucosa gastrica di Nrf2 /HO-1 per capire se questo percorso di segnalazione è coinvolta nel meccanismo antiossidante MF. Inoltre, lo studio mirato l'espressione di NF-kB e PPAR-γ per esplorare anche alcuni dei possibili MF macchinario molecolare anti-infiammatori.

I nostri studi di trasduzione del segnale hanno rivelato che I /R ha significativamente upregulated l'mRNA di Nrf2 e hO-1 che punta a un possibile effetto di adattamento del corpo contro l'insulto I /R danneggiare; questi risultati imitano quello di Pan e colleghi [26] in un /modello di retina I R. Migliorata l'espressione della proteina HO-1, regolato da Nrf2 [27], può verificarsi in risposta allo stress ossidativo [28] e le malattie infiammatorie ed è ampiamente accettata come un meccanismo di protezione contro le lesioni dei tessuti ossidativo [9], i fatti che supportano i nostri risultati. MF, invece, affermato il suo effetto antiossidante elevando ulteriormente l'espressione di Nrf2 e HO-1, i risultati che sono stati registrati in precedenza in un modello epatotossico [29]. Per quanto a nostra conoscenza, questo risultato è la prima prova diretta di un ruolo gastroprotettivi di MF attraverso la via Nrf2 /HO-1 antiossidante nel /modello di ulcera R-indotta io.

Il carattere antiossidante di MF è stato ulteriormente manifestata nella presente per la sua capacità di combattere l'/elevazione I R-indotta perossidi lipidici [30] e la diminuzione del TAC [31]. Tuttavia, l'effetto di I /R e MF GSH mostrato lo stesso modello osservato in Nrf2 e HO-1, dove I /R causato una sottile, ma significativo aumento GSH, un effetto che è stato amplificato ulteriormente MF [32] . Questa azione, indica una possibile risposta compensatoria contro le lesioni di I /R e collega GSH con la via di segnalazione Nrf2 /HO-1 come sostenuto finora da Das et al. [29]. La correlazione tra GSH e Nrf2 può essere correlato al cross-talk molecolare tra la Nrf2 upregulated e ligasi γ-glutamylcysteine ​​[10, 33], un enzima che catalizza il passo limitante tasso di GSH sintesi [34]. Inoltre, HO-1 ruolo antiossidante deriva dalla sua capacità di catalizzare la ripartizione della eme pro-ossidante in ferro, biliverdina, e monossido di carbonio [35]; biliverdina viene quindi convertita in bilirubina, che agisce come un antiossidante contro perossidazione lipidica [36].

Oltre ricostruire lo stato redox perturbato, MF esteso il suo effetto a comportare stress nitrosativo, pure. MF oppose l'effetto di I /R sui livelli di eNOS /iNOS, dove ripristinato l'attività dell'enzima eNOS costitutiva [37] e ha diminuito la isoforma inducibile nociva [38]. Pertanto, si prevede che il livello elevato di iNOS nel gruppo non trattato è responsabile del livello surplus di NOx, che compromette l'integrità della mucosa gastrica via
sua interazione con anione superossido e la formazione di perossinitrito [39]. Quest'ultimo è un radicale libero potente che perturba macromolecole cellulari attraverso la perossidazione lipidica, alterazione mitocondriale diretta, l'inibizione della membrana Na ^{+ /K + - ATPasi, e la modifica della proteina ossidativo [40]. Al contrario, la produzione MF-mediata di NOx può essere guidata dalle eNOS restaurati, e non iNOS, sostenendo, in tal modo, l'antiossidante /liberi proprietà scavenging radicali di MF [16]. Il NO di protezione spegne i radicali liberi con conseguente conservazione del GSH nella mucosa gastrica; GSH agisce sia come scavenger nucleofila di superossidi e come cofattore nella riduzione perossidasi-mediata GSH di perossidi di idrogeno [41].}

Gli eventi deleteri che seguono l'insulto I /R includono aumento rilascio di mediatori proinfiammatori e reclutamento dei leucociti, oltre disturbare i ossidativi /macchinari nitrosativo [42]. Nel corso di studio, MF convalidato la sua /effetto immuno-modulazione anti-infiammatori, che è stato documentato in precedenza [25, 43], inibendo IL-1β [43], E-selectina [25] e neutrofili infiltrazione [44] in altri modelli diversi. Questi effetti possono essere collegati in parte ai cambiamenti MF-modulatori a livello molecolare. MF induce l'espressione genica di PPAR-γ, insieme con la sottoregolazione del genitore infiammatoria fattore di trascrizione /mediatore NF-kB, impedendo, in tal modo, l'effetto I /R. Studi precedenti hanno riportato che l'effetto pregiudizievole I /R è mediato in parte via
sopprimere la PPAR-γ mRNA [7, 45], che è un fattore di trascrizione che agisce come un regolatore pleiotropica influente di anti-infiammazione, antiossidante, e processi di pulizia fagocita-mediata. Oltre al suo effetto genomico diretta, PPAR-gamma è stato trovato per interagire negativamente con altri fattori di trascrizione NF-kB, che è alla base molti aspetti l'effetto anti-infiammatorio /immunomodulante di PPAR-gamma [25, 46], i fatti che il tono con i nostri risultati. Inoltre, la maggiore espressione di PPAR-gamma è stato segnalato per inibire la produzione di NOx /iNOS [47], che offre, in tal modo, una spiegazione per l'inibizione MF-mediata in iNOS. PPAR impedisce anche le citochine macrofagi-driven e molecole di adesione leucocitaria, come si vede qui, in parte via
sopprimendo l'espressione genica di NF-kB [25, 48]. Inoltre, MF è stato segnalato per ridurre l'adesione dei PMN alla endotelio e custodito contro la loro infiltrazione nel tessuto gastrico [49], a fianco la modulazione di PPAR-γ e l'espressione di NF-kB. Questi risultati supportano la nostra su E-selectina, iNOS, e MPO, come accennato prima. Inoltre, l'MF-indotta HO-1 upregulation può razionalizzare il carattere anti-infiammatori di MF, via
sua monossido di sottoprodotto di carbonio, che conferisce una proprietà antinfiammatoria [50]. A tal fine, i risultati sperimentali del nostro studio identificano altri meccanismi gastroprotettivi a livello sia molecolari e cellulari con cui MF protetto mucosa gastrica contro danno da I /R-indotta. Questi risultati confermano con i risultati di studi precedenti in un modello sperimentale di colite [51, 52], e definire con precisione l'azione anti-infiammatoria di MF.

In precedenza Wu et al. [53] hanno riportato che PPAR-γ sovraespressione protegge anche potenziale di membrana mitocondriale e impedisce l'apoptosi dalla upregulating l'espressione delle proteine ​​Bcl-2 famiglia anti-apoptotici. Analogamente, monossido di carbonio, il sottoprodotto di HO-1, conferisce una attività anti-apoptotica dalla up-regulation della molecola anti-apoptotica Bcl-2, e il down-regolazione del segnale pro-apoptotica Bax [54]. I dati di questo studio hanno dimostrato che I /lesioni gastriche R-indotto è associato anche con l'apoptosi come dimostra la marcata riduzione di Bcl-2 [55] e l'elevazione della caspasi-3 [56], mentre MF è ritornato l'I /R apoptosi indotta da una dose dipendente elevazione del livello di Bcl-2, e la riduzione del livello di caspasi-3. L'effetto anti-apoptotico MF coincide con i risultati di Ghosh et al. [38] e può essere attribuito al upregulation MF-mediata di PPAR-γ e /o livelli di HO-1 mRNA

Tutti questi risultati sono stati ulteriormente riflettuto sulle alterazioni istologiche.; l'insulto I /R causato spargimento dello strato protettivo epiteliale e provocato emorragia sottostante con una marcata congestione dei vasi sanguigni con le cellule infiammatorie infiltrazione nella lamina propria, un effetto che designa la cessazione del flusso di sangue che è stato accompagnato da edema. La congestione dei vasi sanguigni può derivare dalla elevazione del vasocostrittore endotelina-1 nel tessuto gastrico [57], una migliore infiltrazione leucocitaria [58], e /o diminuzione dell'attività di eNOS come documentato in questo studio. Di conseguenza, I /R non è stato solo accompagnato dalla formazione di radicali liberi, ma anche con una netta diminuzione dei livelli di antiossidanti endogeni e una maggiore infiltrazione di cellule infiammatorie, alterazioni che sono state impedite da MF, soprattutto a livello alto dosaggio, dove normale istologici è stata osservata la struttura.

per quanto riguarda la OMP di riferimento della droga, che esercita il suo effetto gastroprotettori per le sue proprietà antiossidanti, antiapoptotico [59], e anti-infiammatori [60] azioni, al di là di soppressione acida [61], abbiamo delineato qui la eventi molecolari che contribuiscono a questi effetti. Nel presente studio, abbiamo documentato che OMP effetti antiossidanti, rappresentati da inibendo la perossidazione dei lipidi e aumentando i biomarcatori di difesa, sono mediati via
il percorso di segnalazione Nrf2 /HO-1. OMP anche inibito la citochina proinfiammatoria IL-1β, nonché adesione neutrofili e infiltrazione rappresentato riducendo livello sE-selectina e l'attività MPO rispettivamente. Anche se OMP downregulated l'espressione di NF-kB, eppure non riusciva a combattere l'effetto di I /R su PPAR-γ, suggerendo che l'effetto /immuno-modulazione anti-infiammatori di OMP nasce dal sopprimere l'espressione del gene NF-kB, e, eventualmente, altri meccanismi, ma non quella di PPAR-γ
.

Anche se l'effetto di OMP sull'espressione Nrf2 superato quello di MF _{20, ma al contrario era evidente il HO-1 e GSH, una discrepanza che possono essere legati ai loro effetti sulla NF-kB. Quest'ultimo è stato dimostrato di agire come regolatore negativo del pathway Nrf2 competendo con esso per il legame alla co-attivatore trascrizionale CREB-binding protein (CBP), e anche per promuovere il legame del co-repressore istone deacetilasi 3 (HDAC3) all'elemento risposta antiossidante (ARE) [62]; questi effetti possono ritardare la trascrizione mediata Nrf2 suoi bersagli a valle.}

Inoltre, la proprietà antiapoptotica di OMP invocato non solo sulla sua capacità di aumentare il livello della proteina antiapoptotica, Bcl-2 o diminuire il livello di il marcatore apoptotico caspasi-3, come rilevato nel presente studio, ma anche sulla riduzione del danno ossidativo del DNA [59].

Infine, si può concludere che l'effetto gastroprotettivo di MF, specialmente alla dose di 20 mg /kg, può essere attribuita alla attivazione della via Nrf2 /HO-1 antiossidante, la via anti-infiammatoria PPAR-γ via
downregulating NF-kB, e ad aumentare la proteina antiapoptotica Bcl- 2 e diminuendo caspasi-3. Tutti questi meccanismi, infine, mantenere la normale integrità della barriera della mucosa gastrica.

• PLoS ONE: bidirezionale Crosstalk tra stress-indotta ulcera gastrica e depressione in condizioni di stress cronico
• PLoS ONE: High Mobility Group Box 1 inibisce ulcera gastrica guarigione attraverso la Toll-like receptor 4 e Receptor for Advanced glicazione Prodotti finali