PLoS ONE: Mangiferin vermindert maagzweer in ischemie /reperfusie Rats: Betrokkenheid van PPAR-γ, NF-KB en Nrf2 /HO 1-signaalwegen

Abstract

Mangiferin (MF), een xanthonoid van Mangifera indica, is bewezen om antisecretoire en antioxidant gastrobeschermende effecten tegen verschillende maagzweer modellen hebben; echter, de moleculaire mechanisme niet eerder opgehelderd. Daarom was het doel van deze studie zijn modulerend effect te testen op verschillende signaalwegen met de ischemie /reperfusie model voor de eerste keer. Dieren werden behandeld met MF, omeprazol (OMP), en het voertuig. De mechanistische studies bleek dat MF gemedieerd het gastroprotectieve effect deels via induceren van de expressie van Nrf2, HO-1 en PPAR-γ met die neerwaarts reguleren van NF-KB. Verrassenderwijs het effect van MF, met name de hoge dosis, hoger dan die gemedieerd door OMP behalve Nrf2. De moleculaire resultaten zijn terug te vinden op de biomerkers gemeten, waar de antioxiderende werking van MF kwam tot uiting door het verhogen van de totale antioxidant capaciteit en glutathion, naast het normaliseren van malondialdehyde niveau. Bovendien verlaagde de MF I /R-geïnduceerde stikstofoxide verhoging, een effect dat beter dan die van OMP was. In het serum, MF, dosisafhankelijk, verbeterde endotheel stikstofoxide synthase, terwijl verminderde de induceerbare isovorm. Betreffende het ontstekingsremmende effect van MF, verminderde het serumgehalte van IL-1β en sE-selectine, effecten die werden weerspiegeld op weefselniveau van myeloperoxidase, de neutrofiele infiltratie marker. Bovendien, MF bezat een antiapoptotic karakter blijkt uit het verhogen van Bcl-2-niveau en het verminderen van dat van caspase-3 in een dosis-gerelateerde orde. Als conclusie, worden de doorschemeren gastrobeschermende mechanismen van MF-gemedieerde, gedeeltelijk, door modulatie van oxidatieve stress, ontsteking en apoptose, mogelijk via de Nrf2 /HO 1-, PPAR-γ /NF-KB signaalwegen.

Citation : Mahmoud-Awny M, Attia AS, Abd-Ellah MF, El-Abhar HS (2015) Mangiferin vermindert maagzweer in ischemie /reperfusie Rats: Betrokkenheid van PPAR-γ, NF-KB en Nrf2 /HO 1-signaalwegen. PLoS ONE 10 (7): e0132497. doi: 10.1371 /journal.pone.0132497

Editor: Ashraf B. Abdel-Naim, Faculty of Pharmacy, Ain Shams University, EGYPTE

Ontvangen: 18 maart 2015; Aanvaard: 15 juni 2015; Gepubliceerd: 21 juli 2015

Copyright: © 2015 Mahmoud-Awny et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Data Beschikbaarheid: Alle relevante gegevens zijn binnen het papier

financiering:.. de auteurs hebben geen steun of financiering aan te melden

Competing belangen. de auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Tijdens maagzweer ziekte welvaart van upshots bijeen om nood het evenwicht tussen de destructieve en de beschermende evenementen. Oxidatieve stress is een belangrijke factor die maagzweren en resultaten verwekt in de overproductie van vrije radicalen (FR) [1]. De maag ischemie /reperfusie (I /R) archetype bootst stress veroorzaakte maagzweren, waarbij, verhoogde FR, stikstofoxide (NO), leukocyt adhesiemolecuul "E-selectine" [2], neutrofiel infiltratie [3], en redox onbalans [4] spelen een belangrijke rol in de pathogenese. Evenzo nuclear factor-kappa B (NF-KB), een redox-gevoelige transcriptiefactor, een sleutelrol bij de I /R schade [5]. Het regelt de expressie van verschillende genen geassocieerd met ontsteking en celschade, zoals interleukine (IL) -1β, -6, cellulaire adhesiemoleculen en induceerbare stikstofoxidesynthase (iNOS). Anderzijds, verschillende factoren bemiddelen hun gastroprotection tegen oxidatieve schade die het verlichten van de ontstekingsreactie omvatten deze peroxisoom proliferator geactiveerde receptor (PPAR) -γ [6, 7] en heamoxygenase-1 (HO-1) [8]. De laatste is de induceerbare isovorm van HO die reageert op stress, zoals oxidatieve stress blijft het algemeen beschouwd als een beschermingsmechanisme tegen oxidatieve weefselbeschadiging [9].

Een van de transcriptionele regulatoren van HO-1 is nucleaire factor-E2-gerelateerde factor-2 (Nrf2) [9], die is gelokaliseerd in het cytoplasma bij normale omstandigheden en samenwerkt met Keap1 (de moleculaire sensor cysteïnerijke eiwitten Kelch-achtige ECH associëren eiwit 1) snel wordt afgebroken door de ubiquitineproteasoomroute [10, 11]. Daarentegen, onder oxidatieve stress omstandigheden, Keap1 geoxideerd en Nrf2 ubiquitinering wordt verlaagd [11], het bevrijden, dus Nrf2 van Keap1. Nrf2 Vervolgens translocatie in de kern om tether de antioxidant responselement van het doelwitgen promoter [12, 13] dat directe transactivatie van de coderende genen. Deze genen omvatten vele enzymatische antioxidant en ontgiftende genen, zoals glutathion (GSH) peroxidase /reductase, HO-1, en glutathion S-transferase [14].

Mangiferin (MF), een natuurlijk voorkomend glucosylxanthone, bezit een gastroprotectieve effect
via de anti-secretorische en antioxidant activiteiten, zoals onderzocht in verschillende diermodellen van maagzweren [15], maar niet het I /R model dat het doel van dit werk. MF gerapporteerd zijn antioxiderende activiteit mediëren op verschillende niveaus van de oxidatieve sequentie. Genereert MF fenoxygroepen en bindt aan metaalionen (Fe ^{2 + /3 +) in de vorm van een stabiele MF-ijzercomplex die de vorming van hydroxyl (OH) groepen toestaat en /of oxo-ferryl groepen en vangt lipide peroxy /alkoxygroepen, waardoor handhaving van de cellulaire oxidatie-antioxidant balans [16]. Ondanks de gedetailleerde cellulaire reacties beschreven, maar de moleculaire signaalwegen is niet eerder aangepakt.}

Op moleculair niveau, het huidige doel was om de mogelijke betrokkenheid van Nrf2 /HO 1-, PPARy en NF beoordelen -κB signaalwegen in het gastrobeschermende effect van MF, naast andere biomarkers om de potentiële gastrobeschermende mechanismen af ​​te bakenen met behulp van de hypoxie /reoxygenatie model.

Materialen en Method

Dieren

Male Wistar ratten, met een gewicht van 180-220 g (Research Institute of Ophthalmology, Giza, Egypte) werden op een 12 uur licht /donker cycli, constante milieuomstandigheden gehouden en werden op een goed dieet chow en water onderhouden ad libitum
. Voorafgaand aan het experiment (24 uur) werden alle dieren individueel in brede mesh bodem kooien gehouden en gevast. De dieren werden behandeld op basis van de door de Animal Care en gebruik Comite van de Faculty of Pharmacy, Universiteit van Caïro, Cairo, Egypte goedgekeurde richtlijnen (Permit Nummer: PT 575). Alle chirurgische procedures werden uitgevoerd onder thiopental, en alle inspanningen werden gedaan om het lijden te minimaliseren.

Drugs

Mangiferin [MF] werd gekocht bij Sigma-Aldrich Chemical Company (St. Louis, MO, USA) en omeprazol [OMP] van Chemo SA (Lugano, Zwitserland). Alle andere chemicaliën en reagentia waren van analytische kwaliteit. MF en OMP werden opgelost in zoutoplossing intraperitoneaal in te spuiten.

Inductie van maagslijmvlies ischemie /reperfusie (I /R) en behandelingen

De I /R model werd uitgevoerd volgens de werkwijze eerder beschreven door Kotani et al. [17] met enige modificaties. In het kort onder thiopental (50 mg /kg, i.p.), werd de rat coeliakie slagader afgesloten gedurende 30 min., Waarna reperfusie liet men 72 uur door ontklemmingstijden de slagader. Ratten werden toegewezen in 5 groepen (n = 7-9); dieren in de eerste groep ontving zoutoplossing en coeliakie slagader werd behandeld zonder houder te dienen als de schijn-geopereerde controle groep. Ratten in de volgende groepen werden onderworpen aan I /R; de onbehandelde (tweede) groep ontving zoutoplossing en werd aangeduid als positieve controle (I /R), terwijl de andere 3 groepen behandeld met MF (10 mg /kg; MF _{10; derde groep), MF ( 20 mg /kg; MF 20, vierde groep) en OMP (20 mg /kg; OMP 20, vijfde groep). Alle behandelingen werden uitgevoerd 30 min. voor de operatie en gedurende 3 dagen na de reperfusie.}

histopathologisch onderzoek

Maag, van drie representatieve dieren in elke groep, werd onmiddellijk ondergedompeld in 10% formaline-zoutoplossing, ingebed in paraffine en 5 urn secties werden bereid, gekleurd met hematoxyline en eosine (H &E) en microscopisch onderzocht

Biochemische metingen

aan het einde van de reperfusie tijd en onder diepe anesthesie met ether werd bloed verzameld uit. de halsader sera te bereiden, vervolgens werden de dieren gedood en de maag werd uitgesneden, geopend langs de grotere kromming en gespoeld met ijskoude zoutoplossing. De omvang van de bruto mucosale schade (ulcus Index) werd beoordeeld en uitgedrukt als de som van de zweer lengten per maag in mm [18]. Kort samengevat, een verlicht vergrootglas (3x) werd gebruikt om de lengte van de lange laesies (mm) in de klier gedeelte van de maag te meten, terwijl de petechea laesies werden geteld en elke vijf laesies werden weergegeven als 1 mm of zweer.

Ongeveer 50 mg van het maagslijmvlies werd overnacht ondergedompeld in RNA latere oplossing, bewaard bij -80 ° C tot kwantitatieve real-time PCR (qRT-PCR) kwantificering. De resterende mucosa werd afgeschraapt en gehomogeniseerd in ijskoud water (MPW-120, Polen) met de maximale snelheid gedurende 1 minuut. Het homogenaat werd gecentrifugeerd bij 5000 rpm gedurende 5 minuten bij 4 ° C en de resulterende supernatanten werden aliquots bewaard en opgeslagen bij -80 ° C tot de bepaling van parameters maag.

Schatting homogenaat /serum parameters met ELISA techniek

het homogenaat /serumspiegels van de volgende parameters werden geëvalueerd met de bijbehorende ELISA kits haakjes:.. IL-1β, sE-selectine (Abcam Inc., Cambridge, UK, Cat No. ab100768 en ab171334, respectievelijk), iNOS, eNOS (EIAab, Wuhan, China, Cat No. E0837r en E0868r, respectievelijk), B-cel leukemie /lymfoom-2 (Bcl-2;. USCN Life Science Inc., Wuhan, China, Cat nr. E90778Bo) en caspase-3 (Cusabio Biotech Co, Wuhan, China, Cat. No. CSB-E08857r). Elke biomarker werd verwerkt volgens de procedures van de fabrikant verschaft. Serum totaal antioxidant capaciteit (TAC) werd gemeten volgens de methode van Benzie en Starin [19]. In het kort werd tripyridyltriazine ferri (Fe ^{3 + -TPTZ) complex aan de ijzerhoudende vorm verminderd met de antioxidanten aanwezig in het monster bij een zure pH, een intens blauwe kleur die kan worden gevolgd door meting van de verandering in absorptie bij vloei 593 nm. De wijziging houdt rechtstreeks verband met het gecombineerde of totale reducerende vermogen van elektronendonerende niet-enzymatische antioxidanten aanwezig in het reactiemengsel. De TAC-niveau werd uitgedrukt als um /L.}

Schatting van maag-activiteit /inhoud van myeloperoxidase (MPO), malondialdehyde (MDA), gereduceerd glutathion (GSH) en de totale stikstofoxide (NOx).

De activiteit van MPO (U /g), een marker van weefsel neutrofiele infiltratie werd beoordeeld aan Bradley et al. [20]. De werkwijze is gebaseerd op het meten van de waterstofperoxide-afhankelijke oxidatie van o-dianisidine, gekatalyseerd door MPO, wat resulteert in de vorming van een verbinding die een verhoogde absorptie bij 460 nm. Als een index van lipideperoxidatie thiobarbituurzuur reactieve stoffen (TBARS), vertegenwoordigd door MDA, werd gebruikt om de oxidatieve schade, volgens de werkwijze van Mihara en Uchiyama [21]. De MDA-TBA adduct ontwikkelt roze kleur, die werd gewonnen door n-butanol en gemeten bij twee golflengten, weten
., 520 en 535nm. De werkwijze beschreven door Ahmed et al. [22] vastgesteld om de niet-eiwit sulfhydryl groepen (voornamelijk GSH) beoordelen door reactie met het reagens van Ellman na neerslaan van het eiwit SH-groepen. De reactie met Ellman's reagens vormden een stabiele gele kleur van 5 mercapto-2-nitrobenzoëzuur, dat colorimetrisch werd gemeten bij 412 nm (mg /g).

Maagslijmvlies NO productie werd geschat indirect nitriet /nitraatconcentratie volgens de werkwijze van Miranda et al. [23], waarin vanadium trichloride gebruikt om nitraat te reduceren tot nitriet. De roze azo-kleurstof door de reactie van nitriet met sulfanilzuur gevolgd door de daaropvolgende koppeling met N- (1-naftyl) ethyleendiamine werd colorimetrisch gemeten bij 540 nm en NOx werd uitgedrukt in uM /g.

kwantitatieve real-time (RT) -PCR

Totaal RNA werd geëxtraheerd uit het maagslijmvlies met behulp van Simply P Totaal RNA Extraction kit (BioFlux, Hangzhou, China). De zuiverheid van de verkregen RNA werd gecontroleerd spectrofotometer-metrisch bij 260/280 nm. Gelijke hoeveelheden RNA (0,368 g) werden retrotranscribed in eerste streng complementair DNA (cDNA) bij 37 ° C gedurende 50 min. met behulp van 200 U /gl M-MuLV reverse-transcriptase (SibEnzyme, Novosibirsk, Rusland), 1 ui willekeurige hexameer (Qiagen, LRS Laboratories, Inc. Korea), en 0,1 M DTT in een 50 ul reactiemengsel. Om de expressie van antioxidant en ontsteking geassocieerd doelgenen bepalen, werd RT-PCR uitgevoerd onder toepassing SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen) zoals beschreven door de fabrikant. Kort samengevat, in een 25 pl reactievolume, 5 pi cDNA werd aan 12,5 ul 2x SYBR groen master mix en 2,5 pl (2,5 uM) van elke primer toegevoegd. De sequenties van de primers waren: PPAR-γ sense primer 5'-GCGGAGATCTCCAGTGATATC-3 '; antisense primer 5'-TCA GCGACTGGGACTTTTCT-3 '; NF-KB p65 sense primer 5'-TGCAGAAAGAAGACATTGAGGTG-3 '; antisense primer 5'AGGCTAGGGTCAGCGTATGG-3 '; Nrf2 sense primer 5'-ATGGCC ACACTTTTCTGGAC-3 '; antisense primer 5'-AGATGTCAAGCGGGTCACTT-3 '; HO-1 sense primer 5'CGTGCAGAGAATTCTGAGTTC-3 '; antisense primer 5'AGACG CTTTACGTAGTGCTG-3 '; en glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH) sense primer 5'- GGGCAGCCCAGAACATCA-3 '; antisense primer 5'-TGACCTTG CCCACAGCCT-3 '. PCR reacties waren 15 minuten bij 95 ° C voor de activering van HotStarTaq DNA polymerase, gevolgd door 45 cycli bij 94 ° C gedurende 15 seconden (denaturatie), 55 ° C gedurende 30 sec (annealing) en 72 ° C gedurende 30 sec (extensie ). De relatieve expressie werd berekend uit de 2 ^{-ΔΔCT formule [24].}

Statistische analyse

De gegevens werden uitgedrukt als gemiddelde ± S.E.M van 7-9 dieren. Statistische vergelijkingen tussen de gemiddelden werden uitgevoerd met behulp van one-way variantie-analyse (ANOVA), gevolgd door Student-Newman-Keuls-test. De statistische significantie van het verschil werd beschouwd op P
< 0.05.

Resultaten

Effect van MF en OMP op de I /R-geïnduceerde ulcera index

MF, dosisafhankelijk, verboden de I /R-geïnduceerde maag letsel, zoals door waarden van ulcus index (tabel 1) en het effect van MF _{20 vergelijkbaar met die aangeboden door OMP 20.}

effect van MF en OMP op de mRNA expressie van genen antioxidant

Zoals getoond in figuur 1A en 1B, adaptieve respons tegen I /R schade werd aangetoond in de opregulatie van Nrf2 en HO-1 mRNA, die de reden achter het verhoogde GSH niveau onbehandelde I /R-groep uit. Deze mRNA upregulations waren nog levendiger in de behandelde groepen, wijst dus de antioxiderende capaciteit van MF.

Effect van MF en OMP op redoxparameters

Zoals weergegeven in Tabel 2 en 3 de I /R belediging veroorzaakt een onbalans in de oxidatieve /nitrosatieve-status. Een stijging van de MDA-niveau (182%) en NOx productie (187,6%), parallel met 5,1 vouwen verhoging van iNOS, werd in de I /R onbehandelde groep waargenomen. Integendeel, de I /R schade gehalveerd de uiteindelijk eNOS verkleinde TAC (69,7%), in vergelijking met placebo groep. Al deze veranderingen werden teruggedraaid door OMP, en MF, op een dosisafhankelijke wijze. In bijna alle parameters MF _{20 had prominente effect. Betreffende GSH, de I /R model onverwacht verhoogd door 32%, een effect dat verder werd versterkt door de verschillende drug.}

Effect van MF en OMP op de mRNA expressie van PPAR-γ en NF -κB genen

Zoals weergegeven in figuur 1C, dieren met I /R schade onthulde een significante afname van de expressie van de maag ontstekingsremmende PPAR-γ (25% van de sham niveau), met een duidelijke stijging doordat de proinflammatoire NF-KB (11,9-voudig) (figuur 1D). Interessant MF behandelde groepen konden de I /R-gerelateerde effecten tegen te gaan volgens het dosisniveau getest. OMP, daarentegen, vertoonden minder effect dan MF deed op NF-kB, maar het verminderde PPAR-γ niet veranderen.

Effect van MF en OMP op gastrische inflammatoire cytokines en neutrofielen infiltratie

Tabel 4 toont de I /R-gemedieerde maag kwaad, waarbij de inflammatoire biomarkers verergerd. Het versterkt de serumniveaus van IL-1β, sE-selectine en maag MPO-activiteit van 5,2, 5,6 en 2,2 plooien respectievelijk, vergeleken met de schijn-geopereerde controle groep. Al deze veranderingen waren significant onderbroken door de behandeling met MF op een dosisafhankelijke wijze. Toch is de MF _{20 effecten achterhaald dat gemedieerd door de referentie-standaard OMP. Deze waarnemingen geven aan dat de MF inflammatoire cytokinen en neutrofielen rekrutering kunnen moduleren te zwakken I /R-geïnduceerde schade.}

Effect van MF en OMP de apoptotische biomarkers

Zoals weergegeven in Tabel 4, de I /R insult veroorzaakt apoptose van maagslijmvlies zoals blijkt uit de toename van 6,85 plooien caspase-3 niveau. In dezelfde context, I /R verminderde het niveau van de anti-apoptotische marker Bcl-2 (59%). Toediening van MF, op een dosisafhankelijke wijze, heeft deze veranderingen gestopt aanzienlijk, effecten die gemedieerd worden door OMP overtroffen.

Effect van MF en OMP op gastrische histopathologische veranderingen

De verbeterende effecten van de verschillende drug's op de geteste biomarkers werden verder bevestigd door de histologische bevindingen in figuur 2. de figuur toont de microfoto van maagslijmvlies, die laten zien [A] normaal maagslijmvlies (mu), submucosale (sm) en muscularis ( ml) architectuur in de schijn-geopereerde rat sectie. [B] I /R secties onthullen afgestoten mucosa (m), juxtraposed met onderliggende bloeding (zwarte pijl), [C] ernstige vasculaire congestie (V), focale ontstekingscellen infiltratie (m), voornamelijk als neutrofielen en oedeem (O) in submucosa. [D] MF _{10 sectie onthult alleen de congestie in de submucosale bloedvaten (V) met een milde infiltratie van ontstekingscellen (gele pijl) en /of oedeem. Anderzijds, [E] MF 20 gedeelte, gelijk aan sham-operated control, toont normale intacte histologische structuur, op een zeer milde vasculaire congestie (v) in de submucosa; de MF 20 vervangen effect dat van [F] OMP, waarbij verstopte bloedvaten (V) en oedeem in de submucosa nog gedetecteerd in de OMP secties.}

Discussie

Hoewel eerdere studies hebben de antioxidant [15] en anti-inflammatoire [25] capaciteit van MF gedocumenteerd, maar deze heeft het potentieel moleculaire routes betrokken bij het herstellen verstoorde redox /inflammatoire systemen verduidelijkt. Dus in dit werk hebben we het maagslijmvlies expressie van Nrf2 geverifieerde /HO-1 te begrijpen als deze signaalroute is betrokken bij de MF antioxidant mechanisme. Daarnaast is de studie gericht op de expressie van NF-KB en PPAR-γ ook enkele mogelijke MF ontstekingsremmende moleculaire machinerie verkennen.

De signaaltransductie studies bleek dat I /R aanzienlijk opgereguleerd het mRNA van Nrf2 en HO-1 wijst op een mogelijke adaptieve effect van het lichaam tegen I /R schade insult; deze bevindingen na te bootsen die van de Pan en collega's [26] in een retinale I /R model. Verbeterde HO-1 eiwitexpressie gereguleerd door Nrf2 [27], kunnen optreden als gevolg van oxidatieve stress [28] en ontstekingsziekten en wordt algemeen aanvaard als een beschermingsmechanisme tegen oxidatieve weefselbeschadiging [9], feiten dat onze bevindingen ondersteunen. MF, anderzijds, bevestigt de antioxidantwerking door verder verhogen van de expressie van Nrf2 en HO-1, resultaten die eerder in een hepatotoxische model [29] werden opgenomen. Om het beste van onze kennis, deze bevinding is de eerste directe bewijs voor een gastrobeschermende rol van MF door de Nrf2 /HO antioxidant-1 pathway in de I /R-geïnduceerde ulcera model.

De antioxidant karakter van MF werd verder hierin geopenbaard door zijn vermogen om de I /R-geïnduceerde verhoging in lipideperoxyden [30] en de daling TAC [31] bestrijden. Het effect van I /R en MF op GSH vertoonde dezelfde tendens die in Nrf2 en HO-1 expressie, waarin I /R veroorzaakt een subtiele maar significante stijging van GSH, een effect dat verder werd versterkt door MF [32] . Deze actie, duidt op een eventueel compensatie respons tegen I /R schade en verbindt GSH met Nrf2 /HO 1-signaleringsroute zoals tot dusver ondersteund door Das et al. [29]. De correlatie tussen GSH en Nrf2 kan worden gerelateerd aan de moleculaire overspraak tussen de opgereguleerd Nrf2 en de γ-glutamylcysteïne ligase [10, 33], een enzym dat de snelheidsbepalende stap in GSH synthese [34] katalyseert. Bovendien, HO-1 antioxidant rol komt voort uit het vermogen om de verdeling van de pro-oxidant in heem ijzer, biliverdine en koolmonoxide [35] katalyseren; biliverdine wordt vervolgens omgezet in bilirubine, die fungeert als een antioxidant tegen lipideperoxidatie [36].

Naast het herstellen verstoorde redox status MF breidde zijn werking als de nitrosatieve stress te leiden, ook. MF tegen de I /R effect op de niveaus van eNOS /iNOS, waar het herstelde de activiteit van het constitutieve enzym eNOS [37] en verminderde de schadelijke induceerbare isovorm [38]. Daarom wordt verwacht dat het verhoogde niveau van iNOS in de onbehandelde groep is verantwoordelijk voor het overige niveau van NOx die gastrische mucosale integriteit ondermijnt
via de interactie met superoxide anion en de vorming van peroxynitriet [39]. De laatste is een krachtige vrije radicalen die cel macromoleculen verstoort tot lipideperoxidatie, direct mitochondriale remming membraan Na ^{+ /K + - ATPase activiteit en oxidatieve modificatie eiwit [40]. Omgekeerd kan de MF-gemedieerde productie van NOx stoten van de herstelde eNOS, iNOS en niet ondersteunen dus de antioxidant /vrije radicalen eigenschappen van MF [16]. De beschermende NO dooft vrije radicalen met als gevolg behoud van GSH in maagslijmvlies; GSH fungeert als een nucleofiele binder van superoxiden en als een cofactor in de GSH-peroxidase gemedieerde reductie van waterstof peroxide [41].}

De nadelige gebeurtenissen die de I /R insult volg omvatten verhoogde afgifte van pro-inflammatoire mediatoren en rekrutering van leukocyten, naast het verstoren van de oxidatieve /nitrosatieve machines [42]. In de huidige studie, MF gevalideerd zijn ontstekingsremmende /immuun-modulerende effect, dat eerder beschreven [25, 43], door het remmen van IL-1β [43], E-selectine [25] en neutrofiel infiltratie [44] in andere verschillende modellen. Deze effecten kunnen worden gekoppeld deels de MF-modulerende veranderingen op moleculair niveau. MF geïnduceerde genexpressie van PPAR-γ, samen met de downregulatie van de bovenliggende inflammatoire transcriptiefactor /mediator NF-KB, belemmeren derhalve de I /R werking. Eerdere studies hebben gemeld dat de I /R schade toebrengen gemedieerd gedeeltelijk via
onderdrukken van de PPAR-γ mRNA [7, 45], een transcriptiefactor die als een invloedrijke pleiotrope regulator van anti-inflammatie, antioxidant en-fagocyt bemiddelde opruimen processen. Naast de directe genomische werking PPARy bleek negatief interageren met andere transcriptiefactoren zoals NF-KB, die vele aspecten van het ontstekingsremmende /immunomodulerende effect van PPARy [25, 46] ten grondslag, feiten die toon met onze bevindingen. Bovendien is de verhoogde expressie van PPARy werd gemeld aan de productie van NOx /iNOS remmen [47], bieden dus een verklaring voor de MF-gemedieerde remming van iNOS. PPARy belemmert ook de macrofagen gedreven cytokinen en leukocyt adhesiemoleculen, zoals hierin beschouwd, deels via
onderdrukken van de genexpressie van NF-KB [25, 48]. Verder MF werd gemeld aan de adhesie van PMN's aan het endotheel te verminderen en bewaakt tegen hun infiltratie in maagweefsel [49], naast de modulering van PPAR-γ en NF-KB expressie. Deze bevindingen ondersteunen onze op E-selectine, iNOS en MPO, zoals eerder vermeld. Bovendien kan de MF-geïnduceerde HO-1 opregulatie anti-inflammatoire vermogen van MF rationaliseren, via
zijn bijproduct koolmonoxide, die een anti-inflammatoire eigendom [50] verleent. Daartoe de experimentele resultaten van onze studie identificeren gastrobeschermende andere mechanismen op de moleculaire en cellulaire niveaus waardoor MF beschermd maagslijmvlies tegen I /R-geïnduceerde schade. Deze resultaten bevestigen de bevindingen van eerdere studies in een experimenteel colitis model [51, 52], en vastpinnen van de anti-inflammatoire werking van MF.

Eerder Wu et al. [53] gemeld dat PPAR-γ overexpressie beschermt mitochondriale membraanpotentiaal en voorkomt apoptose door opwaarts reguleren van de expressie van de anti-apoptotische Bcl-2 familie eiwitten. Evenzo, koolmonoxide, het bijproduct van HO-1 activiteit, verleent een anti-apoptotische activiteit van de up-regulatie van de anti-apoptotische molecuul Bcl-2, en de neerwaartse regulatie van de pro-apoptotische signaal Bax [54]. Gegevens van deze studie toonden aan dat I /R-geïnduceerde gastrische schade is ook geassocieerd met apoptose zoals blijkt uit de duidelijke vermindering van Bcl-2 [55] en de hoogte van caspase-3 [56], terwijl MF keerde de I /R geïnduceerde apoptose door een dosis-afhankelijke verhoging van Bcl-2-niveau, en de vermindering van caspase-3 niveau. De MF anti-apoptotisch effect samenvalt met de resultaten van Ghosh et al. [38] en kunnen worden toegeschreven aan de MF-gemedieerde opregulatie van PPAR-γ en /of HO-1 mRNA levels

Al deze bevindingen verder gereflecteerd op de histologische veranderingen.; de I /R insult veroorzaakte afstoting van de epitheliale beschermlaag en resulteerde in een onderliggende bloeding met een sterke verstopping van bloedvaten met ontstekingscellen infiltratie in de lamina propria, een effect dat de bloedstroom staken die gepaard ging met oedeem aanwijst. De verstopping van de bloedvaten kan de hoogte van de vasoconstrictor endotheline-1 in maagweefsel [57], verhoogde infiltratie van leukocyten [58], en /of verminderde activiteit van eNOS zoals beschreven in de huidige studie. Dienovereenkomstig, I /R niet alleen met vrije radicalen, maar ook een duidelijke afname in de niveaus van endogene antioxidanten en verhoogde infiltratie van ontstekingscellen, veranderingen die werden belemmerd door MF, vooral bij de hoge dosis, waarbij normale histologische structuur werd waargenomen.

met betrekking tot het referentiegeneesmiddel OMP, die zijn maagbeschermende werking uitoefent door de antioxidant, antiapoptotic [59], en anti-inflammatoire [60] acties, dan zuuronderdrukking [61], we hierin het afgebakende moleculaire gebeurtenissen die bijdragen tot deze effecten. In de huidige studie hebben we aangetoond dat OMP antioxidant effecten, blijkt uit het remmen van lipideperoxidatie en het verhogen van de verdediging biomarkers, worden bemiddeld via of the Nrf2 /HO 1-signaleringsroute. OMP remde ook de pro-inflammatoire cytokine IL-1β, en neutrofiel adhesie en infiltratie zoals weergegeven door reductie sE-selectine niveau MPO-activiteit, respectievelijk. Hoewel OMP downregulated de expressie van NF-KB, maar het kan de I /R effect op PPAR-γ niet bestrijden, wat suggereert dat de anti-inflammatoire /immuun-modulerende effect van OMP voort uit onderdrukking van NF-KB genexpressie, en eventueel andere mechanismen, maar niet van PPAR-γ.

Hoewel het effect van OMP op Nrf2 expressie toe dan de MF _{20, maar het omgekeerde is duidelijk op HO-1 en GSH een discrepantie kan zijn gekoppeld aan hun effecten op NF-KB. Deze werd bleek op te treden als een negatieve regulator van het Nrf2 reactieweg door met haar te concurreren voor binding aan de transcriptionele co-activator-CREB-bindend eiwit (CBP) en de binding van de co-repressor histon deacetylase 3 promoten (HDAC3) de antioxidant responselement (ARE) [62]; Deze effecten kunnen het Nrf2 gemedieerde transcriptie van de stroomafwaartse doelwitten vertragen.}

Verder is de anti-apoptotische eigenschap van OMP aangevoerde niet alleen zijn vermogen om het niveau van de anti-apoptotische eiwit verhogen, Bcl-2 of tot het niveau van verlagen de apoptotische marker, caspase-3, zoals gedetecteerd in deze studie, maar ook op de vermindering van oxidatieve DNA schade [59].

Tenslotte kan men concluderen dat de gastroprotectieve effect van MF, vooral in een dosis van 20 mg /kg, kan worden toegeschreven aan de activering van het Nrf2 /HO antioxidant-1 route, de PPAR-γ ontstekingsremmende pathway via
neerwaarts reguleren van NF-KB en het verhogen van de anti-apoptotische eiwit Bcl 2 en afnemende caspase-3. Al deze mechanismen uiteindelijk behoud van een normale maagslijmvlies barrière integriteit.

• PLoS: Bidirectionele Overspraak tussen stress geïnduceerde maagzweer en depressie onder chronische Stress
• PLoS ONE: High-Mobility Group Box 1 Remt maagzweer genezing door Toll-like receptor 4 en Receptor voor Advanced Glycation End Products