PLoS ONE: Mangiferin reduserer magesår i iskemi /reperfunderes Rats: Involvering av PPAR-γ, NF-kB og Nrf2 /HO-1 signalveier

Abstract

Mangiferin (MF), en xanthonoid fra Mangifera indica, har vist seg å ha antisekretorisk og antioksidant gastroprotective effekt mot ulike magesår modeller; imidlertid dens molekylære mekanisme har ikke tidligere blitt belyst. Derfor er målet med denne studien var å teste dens modulerende effekt på flere signalveier ved hjelp av iskemi /reperfusjon modell for første gang. Dyr ble behandlet med MF, omeprazol (OMP), og kjøretøyet. Den mekanistiske undersøkelser viste at MF-mediert dens magesekkbeskyttende virkning dels via indusering av ekspresjon av Nrf2, HO-1 og PPAR-γ sammen med downregulating at av NF-kB. Overraskende er effekten av MF, særlig den høye dose, overskredet det mediert av OMP bortsett Nrf2. De molekylære Resultatene ble reflektert på biomarkører målt, hvor antioksidant effekten av MF ble manifestert ved å øke total antioksidantkapasitet og glutation, foruten å normalisere malondialdehyde nivå. I tillegg sank MF I /R-indusert nitrogenoksid høyde, en effekt som var bedre enn den for OMP. I serum, MF, avhengig av dose, forbedret endotelial nitrogenoksid syntase, mens redusert induserbare isoformen. Når det gjelder anti-inflammatoriske virkning av MF, det reduserte serumnivå av IL-1β og SE-selektin, effekter som ble speilet på vevsnivå av myeloperoxydase, den neutrofil infiltrasjon markør. I tillegg MF besatt en antiapoptotic karakter dokumentert ved å heve BCL-2 nivå og redusere det av caspase-3 i en doserelatert rekkefølge. Som en konklusjon er de intimated gastrobeskyttende mekanismene for MF-formidlet, delvis, ved modulering av oksidativt stress, inflammasjon og apoptose muligens via Nrf2 /HO-1, PPAR-γ /NF-kB signalveier.

Citation : Mahmoud-Awny M, Attia AS, Abd-Ellah MF, El-Abhar HS (2015) Mangiferin reduserer magesår i iskemi /reperfunderes Rats: Involvering av PPAR-γ, NF-kB og Nrf2 /HO-1 signalveier. PLoS ONE 10 (7): e0132497. doi: 10,1371 /journal.pone.0132497

Redaktør: Ashraf B. Abdel-Naim, Avdeling for farmasi, Ain Shams University, EGYPT

mottatt: 18 mars 2015; Godkjent: 15 juni 2015; Publisert: 21.07.2015

Copyright: © 2015 Mahmoud-Awny et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir

finansiering:.. forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere

konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

i løpet av magesår sykdom velstand upshots vuvuzelaer til nød balansen mellom destruktive og beskyttelses hendelser. Oksidativt stress er en viktig faktor som skaper magesår og resulterer i overproduksjon av frie radikaler (FR) [1]. Den gastriske ischemi /reperfusjon (I /R) Arketype ligner stressindusert magesår, i hvilket tilfelle, forhøyede FR, nitrogenoksid (NO), leukocytt adhesjonsmolekyl "E-selektin" [2], neutrofil infiltrering [3], og Redox ubalanse [4] spille en betydelig rolle i patogenesen. Likeledes nukleær faktor kappa B-(NF-kB), en redoks-følsom transkripsjonsfaktor, og har en sentral rolle i I /R-skade [5]. Den regulerer uttrykket av flere gener assosiert med betennelse og celleskade, for eksempel interleukin (IL) -1β, -6, cellulære adhesjonsmolekyler og induserbar nitrogenoksid syntase (iNOS). På den annen side er flere faktorer medierer deres gastroprotection mot oksidativ skade ved å lindre den inflammatoriske respons, disse inkluderer peroksisomproliferator-aktivert reseptor (PPAR) -γ [6, 7] og heamoxygenase-1 (HO-1) [8]. Sistnevnte er den induserbare isoform av HO som reagerer på stress, slik som oksidativt stress og den forblir ansett som en beskyttelsesmekanisme mot oksidativ vevskade [9].

En av de transkripsjonelle regulatorer av HO-1 er den nukleær faktor-E2-relaterte faktor-2 (Nrf2) [9], som er lokalisert i cytoplasma under normale betingelser og samvirker med Keap1 (molekylsensor cysteinrike proteiner Kelch lignende ECH assosiere protein 1) for å bli hurtig nedbrutt av ubiquitin-proteasom-reaksjonsveien [10, 11]. Omvendt under oksidativt stress forhold, er Keap1 oksidert og Nrf2 ubiquitinering senkes [11], frigjørende, og dermed Nrf2 fra Keap1. Nrf2 blir deretter translokert inn i kjernen for å tjore med antioksydant responselement av målgenet promotoren [12, 13] som forårsaker umiddelbar transaktivering av de kodende genene. Disse genene inkluderer mange enzymatiske antioxidant og avgiftende gener, slik som glutation (GSH) peroksydase /reduktase, HO-1, og GSH S-transferase [14].

Mangiferin (MF), en naturlig forekommende glucosylxanthone, besitter en magesekk effekt via
sine antisekretoriske og antioksidantaktivitet, som bekreftet i ulike dyremodeller av magesår [15], men ikke det jeg /R-modellen, som er målet for dagens arbeid. MF ble rapportert å formidle sin antioksidantaktivitet på ulike nivåer av oksidative sekvens. Det genererer MF fenoksy-radikaler, og binder seg til metallioner (Fe ^{2 + /3 +) i form av en stabil MF-jernkompleks som ikke tillater dannelsen av hydroksyl (OH), radikaler og /eller okso-Ferryl grupper og rensker lipid peroksy /alkoksy-radikaler, for derved å opprettholde den cellulære oksidasjons-antioksydant balanse [16]. Til tross for den detaljerte cellulære reaksjoner er beskrevet, men de molekylære signalveier har ikke blitt håndtert før.}

På molekylært nivå, den nåværende Målet var å vurdere mulig involvering av Nrf2 /HO-1, PPARy, og NF -κB signalveier i magesekk effekten av MF, i tillegg til andre biomarkører for å avgrense mulige gastroprotective mekanismer med hypoksi /Reoksygeneringen modell.

Materialer og metode

Dyr

Mann Wistar rotter som veide 180-220 g (Research Institute of Ophthalmology, Giza, Egypt) ble holdt på en 12h lys /mørke sykluser, konstant miljøforhold og ble opprettholdt på et riktig kosthold chow og vann ad libitum
. Før eksperimentere (24 timer) alle dyr ble holdt individuelt i bred mesh bunn bur og fastet. Dyrene ble håndtert i henhold til retningslinjer godkjent av Animal Care og bruk komité Avdeling for farmasi, Kairo Universitet, Kairo, Egypt (Permit Number: PT 575). Alle kirurgiske prosesser ble utført under tiopental anestesi, og alle anstrengelser ble gjort for å minimere lidelse.

Narkotika

Mangiferin [MF] ble kjøpt fra Sigma-Aldrich Chemical Company (St Louis, MO, USA) og omeprazol [OMP] fra Chemo SA (Lugano, Sveits). Alle andre kjemikalier og reagenser som ble brukt var av analytisk kvalitet. MF og OMP ble oppløst i saltoppløsning som skal injiseres intraperitonealt.

Induksjon av gastrisk mucosal ischemi /reperfusjon (I /R), og behandlinger

I /R-modell ble utført i henhold til metoden tidligere beskrevet av Kotani et al. [17] med noen modifikasjoner. I korthet, i henhold til tiopental anestesi (50 mg /kg, i.p.), ble rotten celiac arterien okkludert i 30 min., Hvoretter reperfusjon ble tillatt i 72 timer ved declamping arterien. Rotter ble tildelt i 5 grupper (n = 7-9); Dyrene i den første gruppen fikk saltløsning, og den cøliaki arterie ble håndteres uten fastklemming for å tjene som sham-opererte kontrollgruppe. Rotter i de følgende grupper ble utsatt for I /R; den ubehandlede (andre) gruppe, fikk saltløsning, og ble betegnet som den positive kontroll (I /R), mens de øvrige 3 grupper ble behandlet, med MF (10 mg /kg; MF _{10, for det tredje gruppe), MF ( 20 mg /kg; MF 20, for det fjerde gruppe), og OMP (20 mg /kg; OMP 20; femte gruppe). Alle behandlinger ble utført 30 min. før operasjonen og for 3 dager etter reperfusjon.}

histopatologiske undersøkelser

Mage, fra tre representative dyr i hver gruppe, ble umiddelbart nedsenket i 10% formalin-saltvann, innebygd i parafin, og 5 pm seksjoner ble fremstilt, farget med hematoksylin og eosin (H &Co. E), og undersøkt mikroskopisk

biokjemiske målinger

Ved slutten av reperfusjon tid og under dyp eterbedøvelse, blod ble samlet fra. vena jugularis for å fremstille sera, deretter ble dyrene avlivet og magen ble skåret ut, åpnet langs den store kurvatur, og skylles med en iskald saltløsning. Omfanget av brutto slimhinneskader (Sår Index) ble vurdert og uttrykt som summen av sår lengder pr mage mm [18]. I korte trekk ble en belyst forstørrelsesglass (3x) som brukes til å måle lengden av de lange lesjonene (mm) i kjertel del av magesekken, mens petechea lesjoner ble tellet og hver fem lesjoner ble fremstilt som 1 mm av sår.

Omtrent 50 mg av mageslimhinnen ble neddykket natten over i RNA senere løsning, lagret ved -80 ° C inntil kvantitativ real-time PCR (QRT-PCR) kvantifisering. Den gjenværende mukosa ble skrapet av og homogenisert i iskald saltløsning (MPW-120, Polen) ved hjelp av den maksimale hastighet i 1 min. Homogenatet ble sentrifugert ved 5000 rpm i 5 minutter ved 4 ° C og de resulterende supernatanter ble holdt i alikvoter og lagret ved -80 ° C inntil bestemmelse av mage-parametere.

Estimering av homogenatet /serumparametere ved hjelp av ELISA teknikken

Homogenatet /serumnivå av følgende parametre ble evaluert ved å bruke de tilsvarende ELISA kits som vist i parentes.. IL-1β, sE-selektin (Abcam Inc., Cambridge, Storbritannia, Cat No. ab100768 og ab171334, henholdsvis), iNOS enos (EIAab, Wuhan, Kina, Cat No. E0837r og henholdsvis E0868r,), B-celle leukemi /lymfom-2 (BCL-2;. USCN Life Science Inc., Wuhan, Kina, Cat Nei. E90778Bo) og caspase-3 (Cusabio Biotech Co., Wuhan, Kina, kat. nr CSB-E08857r). Hver biomarkør ble behandlet i henhold til produsentens prosedyrer som følger med. Serum total antioksidant kapasitet (TAC) ble målt ved anvendelse av metoden Benzie og starin [19]. I korthet ble treverdig tripyridyltriazine (Fe ^{3 + -TPTZ) -komplekset redusert til jern form ved antioksidanter tilstede i prøven ved en sur pH, for å gi en intens blå farge som kan overvåkes ved å måle endringen i absorbans ved 593 nm. Endringen er direkte relatert til den kombinerte eller totale reduserende kraft av elektrondonerende ikke-enzymatiske antioksidanter til stede i reaksjonsblandingen. TAC-nivå ble uttrykt som iM /L.}

Estimering av mage aktivitet /innhold av myeloperoxidase (MPO), malondialdehyde (MDA), redusert glutation (GSH) og total nitrogenoksid (NOx).

aktiviteten av MPO (U /g), en markør for vev nøytrofile infitration, ble vurdert i henhold til Bradley et al. [20]. Fremgangsmåten er basert på måling av den hydrogenperoksyd-avhengig oksidasjon av o-dianisidin, katalysert av MPO, noe som resulterer i dannelsen av en forbindelse som oppviser en økt absorbans ved 460 nm. Som en indeks på lipidperoksydasjon tiobarbitursyre-reaktive substanser (TBARS), representert ved MDA, ble anvendt for å bestemme oksidativ skade, etter fremgangsmåten til Mihara og Uchiyama [21]. MDA-TBA-adduktet utvikler rosa farge, som ble ekstrahert med n-butanol og måles ved to bølgelengder, nemlig
., 520 og 535 nm. Fremgangsmåten beskrevet av Ahmed et al. [22] ble vedtatt å vurdere ikke-protein sulfhydrylgrupper (hovedsakelig GSH) ved å reagere med Ellman reagens etter utfelling av protein SH-grupper. Reaksjonen med Ellmans reagens dannet en stabil gul farve fra 5 merkapto-2-nitrobenzosyre, som ble målt kolorimetrisk ved 412 nm (mg /g).

gastrisk mucosal NO-produksjon ble bestemt indirekte ved at nitritt /nitratkonsentrasjonen i henhold til fremgangsmåten ifølge Miranda et al. [23], hvor vanadiumtriklorid ble brukt til å redusere nitrat til nitritt. Den rosa azo-fargestoff fremstilt ved omsetning av nitritt med sulfanilsyre, etterfulgt av den påfølgende kobling med N- (1-naftyl) -etylendiamin ble målt kolorimetrisk ved 540 nm og NOx ble uttrykt som uM /g.

kvantitativ real-time (RT) -PCR

Total RNA ble ekstrahert fra mageslimhinnen ved hjelp av Simply P Total RNA Utvinning kit (BioFlux, Hangzhou, Kina). Renheten av det oppnådde RNA ble verifisert spektrofotometrisk-metrisk ved 260/280 nm. Like mengder av RNA (0,368 pg) ble retrotranscribed inn i første-tråd som er komplementær DNA (cDNA) ved 37 ° C i 50 min. bruker 200 U /mL M-MuLV revers-transkriptase (SibEnzyme, Novosibirsk, Russland), 1 ul tilfeldig heksamer (Qiagen, LRS Laboratories, Inc. Korea), og 0,1 M DTT i en 50 mL reaksjonsblandingen. For å vurdere ekspresjon av antioksidant og inflammasjonsassosierte målgener, ble RT-PCR utført ved anvendelse av SYBR grønn PCR Master Mix (Qiagen) som beskrevet av fabrikanten. I korthet, i en 25 ul reaksjonsvolum, 5 pl av cDNA ble tilsatt til 12,5 ul av 2x SYBR grønn konsentrat-blanding og 2,5 ul (2,5 uM) av hver primer. Sekvensene til primerne var: PPAR-γ forstand primer 5'-GCGGAGATCTCCAGTGATATC-3 '; antisense-primer 5'-TCA GCGACTGGGACTTTTCT-3 '; NF-kB p65 forstand primer 5'-TGCAGAAAGAAGACATTGAGGTG-3 '; antisense-primer 5'-AGGCTAGGGTCAGCGTATGG-3 '; Nrf2 forstand primer 5'-ATGGCC ACACTTTTCTGGAC-3 '; antisense-primer 5'-AGATGTCAAGCGGGTCACTT-3 '; HO-1 forstand primer 5'- CGTGCAGAGAATTCTGAGTTC-3 '; antisens primer 5'AGACG CTTTACGTAGTGCTG-3 '; og glyceraldehyd-3-fosfat dehydrogenase (GAPDH) forstand primer 5'-GGGCAGCCCAGAACATCA-3 '; antisense-primer 5'-TGACCTTG CCCACAGCCT-3 '. PCR-reaksjoner inkluderte 15 minutter ved 95 ° C for aktivering av HotStarTaq DNA-polymerase, etterfulgt av 45 sykluser ved 94 ° C i 15 sekunder (denaturering), 55 ° C i 30 sek (annealing), og 72 ° C i 30 sek (forlengelse ). Den relative ekspresjon ble beregnet fra 2 ^{-ΔΔCT formel [24].}

Statistisk analyse

Data ble uttrykt som middelverdier ± S.E.M. på 7-9 dyr. Statistiske sammenligninger mellom middel ble utført ved anvendelse av enveis variansanalyse (ANOVA), fulgt av Student-Newman-Keuls test. Den statistiske betydningen av forskjellen ble ansett på P
< 0,05.

Resultater

Effekt av MF og OMP på I /R-indusert ulcus index

MF, avhengig av dose, forbudt I /R gastrisk skade, som presentert av verdier av sår indeks (tabell 1), og effekten av MF _{20 var sammenlignbar med det som tilbys av OMP 20.}

effekt av MF og OMP på mRNA uttrykk for antioksidant gener

som illustrert i figur 1A og 1B, adaptiv respons mot i /R skade ble dokumentert i oppregulering av Nrf2 og HO-1 mRNA, som forklarer årsaken bak den forhøyede GSH nivået i ubehandlet i /R-gruppen. Disse mRNA upregulations var enda mer levende i de behandlede gruppene, og peker dermed på antioksidantkapasitet på MF.

Effekt av MF og OMP på redoks parametere

Som presentert i tabell 2 og 3 i /R fornærmelse forårsaket en ubalanse i den oksidative /nitrosative status. En bølge i MDA nivå (182%) og NOx produksjon (187,6%), parallelt med 5.1 folder øke i iNOS, ble oppfattet i I /R ubehandlet gruppe. Tvert imot, I /R skader halvert gunstig eNOS og reduserte TAC (69,7%), sammenlignet med simuleringsgruppen. Alle disse endringene ble tilbakestilt ved OMP, samt MF, på en doseavhengig måte. I nesten alle parametere MF _{20 hadde den fremtredende effekt. Angå GSH, I /R-modellen, uventet, løftet det opp med 32%, en effekt som ble ytterligere forsterket av de ulike legemiddelregimer.}

Effekt av MF og OMP på mRNA uttrykk for PPAR-γ og NF -κB gener

Som vist i figur 1C, dyr med i /R-skade viste en signifikant reduksjon i den gastriske ekspresjon av den antiinflammatoriske PPAR-γ (25% av narre nivå), sammen med en markert økning i at av de proinflammatoriske faktor NF-kB (11,9 fold) (fig 1 D). Interessant, MF behandlede grupper var i stand til å motvirke de I /R-relaterte virkninger i henhold til det undersøkte doseringsnivå. OMP, på den annen side, viste en mindre effekt enn MF gjorde på NF-kB, men endret ikke den minsket PPAR-γ.

Effekt av MF og OMP på mage inflammatoriske cytokiner og nøytrofile infiltrasjon

Tabell 4 viser i /R-mediert mage ugagn, som forverret inflammatoriske biomarkører. Den økte serumnivåene av IL-1β, SE-selektin, og gastrisk MPO aktivitet ved 5,2, 5,6, og 2,2 folder, henholdsvis, sammenlignet med narre opererte kontrollgruppen. Alle disse endringene ble signifikant stanset ved behandling med MF på en doseavhengig måte. Likevel, MF _{20 effekter avløst som formidles av referansestandard OMP. Disse observasjonene indikerer at MF kan modulere de inflammatoriske cytokiner og nøytrofile rekruttering for å redusere I /R-indusert skade.}

Effekt av MF og OMP på apoptotiske biomarkører

Som vist i tabell 4, i /R fornærmelse utløste apoptose av mageslimhinnen som dokumentert av 6,85 folder økning av caspase-3 nivå. I samme forbindelse, I /R reduserte nivået av anti-apoptotiske markør Bcl-2 (59%). Imidlertid har ikke administrering av MF, på en doseavhengig måte, har stoppet disse endringene betydelig, effekter som har overgått de formidlet av OMP.

Effekt av MF og OMP på mage histopatologiske forandringer

forbedring virkningene av de forskjellige legemiddelregimer for de testede biomarkører ble ytterligere bekreftet ved de histologiske funn som er presentert i figur 2. figuren viser mikrofotografiene av mageslimhinnen, som viser [A] normal gastrisk mucosal (mu), submucosal (sm) og muscularis ( ml) arkitektur i sham-opererte rotte delen. [B] I /R seksjoner avslører sloughed slimhinnen (m), juxtraposed med underliggende blødning (svart pil), [C] alvorlig vaskulær lunger (V), fokusbetennelsesceller infiltrasjon (m), hovedsakelig som nøytrofile, og ødem (O) i submucosa. [D] MF _{10 avsnitt avslører bare lunger i submucosal blodårer (V) med mild inflammatorisk celleinfiltrasjon (gul pil) og /eller ødem. På den annen side, [E] MF 20 snitt, i likhet med skinn-opererte kontroll, viser normal intakt histologisk struktur, bortsett fra en meget mild vaskulær lunger (v) i submucosa; MF 20 virkning erstattet at av [F] OMP, hvor belastet blodkar (V) og ødem i submucosal lag er fortsatt detektert i OMP-seksjonene.}

diskusjon

Skjønt tidligere studier har dokumentert antioksidant [15] og anti-inflammatorisk [25] kapasiteter på MF, men ingen har avklart de potensielle molekylære stier involvert i å reparere den forstyrrede redox /inflammatoriske systemer. Således, i den foreliggende arbeid har vi bekreftet mucosal gastrisk ekspresjon av Nrf2 /HO-en for å forstå hvis denne signalveien er involvert i MF antioksidant mekanisme. I tillegg har studier rettet ekspresjonen av NF-kB og PPAR-γ for å utforske også noen av de mulige MF anti-inflammatorisk molekylære maskineri.

Vårt signaltransduksjonsveiene studier viste at I /R har betydelig oppregulert mRNA av Nrf2 og HO-en peker til en mulig adaptiv effekt av kroppen mot i /R skade fornærmelse; disse funnene etterligne at av Pan og kollegaer [26] i en retinal I /R-modellen. Forbedret HO-1 protein uttrykk, regulert av Nrf2 [27], kan oppstå som følge av oksidativt stress [28] og inflammatoriske sykdommer og er allment akseptert som en beskyttende mekanisme mot oksidativt vevsskade [9], fakta som støtter våre funn. MF, på den annen side, bekreftet sin antioksidant virkning ved å heve ytterligere ekspresjon av Nrf2 og HO-1, resultater som ble registrert tidligere i en hepatotoksisk modell [29]. Så langt vi kjenner til, er dette funnet den første direkte bevis for en magesekk rolle MF gjennom Nrf2 /HO-en antioksidant sti i I /R-indusert ulcus modell.

antioksidant karakter av MF ble ytterligere manifestert heri ved sin evne til å bekjempe i /R-indusert økning i lipid-peroksider [30] og reduksjonen i TAC [31]. Effekten av I /R og MF på GSH viste det samme mønster ble observert i Nrf2 og HO-1-ekspresjon, hvor I /R forårsaket en subtil, men betydelig økning i GSH, en effekt som ble forsterket ytterligere ved MF [32] . Denne handlingen, peker på en mulig kompenserende reaksjon mot I /R skade og forbinder GSH med Nrf2 /HO-1 signalveien som støttet hittil av Das et al. [29]. Korrelasjonen mellom GSH og Nrf2 kan være relatert til den molekylære krysstale mellom oppregulert Nrf2 og den γ-glutamyl-ligase [10, 33], et enzym som katalyserer det hastighetsbegrensende trinnet i GSH-syntese [34]. I tillegg stammer HO-en antioksidant rolle fra dens evne til å katalysere nedbrytning av pro-oksidant heme til jern, biliverdin, og karbonmonoksyd [35]; biliverdin blir deretter omdannet til bilirubin, som virker som en antioksidant mot lipidperoksidasjon [36].

I tillegg til å reparere den perturberte redoks-status, utvidet MF dens virkning for å medføre nitrosative stress, samt. MF motsetning I /R effekt på nivået av eNOS /iNOS, hvor den gjenopprettet aktiviteten av den konstitutive enzymet eNOS [37] og reduserte skadelige induserbare isoform [38]. Derfor er det forventet at det forhøyede nivå av iNOS i den ubehandlede gruppen er ansvarlig for den overskytende nivået av NOx, som undergraver gastrisk mucosal integritet via
dets interaksjon med superoksid anion og dannelse av peroxynitrite [39]. Sistnevnte er en potent fritt radikal som perturbs cellemakromolekyler gjennom lipidperoksidasjon, direkte mitokondriefunksjon, inhibering av membranen Na ^{+ /K + - ATPase-aktivitet, og oksydativ modifisering protein [40]. Omvendt, kan den MF-formidlede produksjon av NOx bli drevet fra de gjenopprettede eNOS og iNOS ikke, som støtter således antioksidant /fri-radikal fjernende egenskaper av MF [16]. Den beskyttende NO quenches frie radikaler med den derav følgende bevaring av GSH i mageslimhinnen; GSH fungerer både som en nukleofil åtseldyr av superoksyder og som en kofaktor i GSH peroxidase-mediert reduksjon av hydrogen peroksid [41].}

De skadelige hendelser som følge av I /R fornærmelse inkluderer økt frigjøring av proinflammatoriske mediatorer og rekruttering av leukocytter, foruten å forstyrre oksidative /nitrosative machineries [42]. I denne studien validert MF sin anti-inflammatorisk /immun-modulerende effekt, som ble dokumentert tidligere [25, 43], ved å hemme IL-1β [43], E-selectin [25] og nøytrofile infiltrasjon [44] i andre ulike modeller. Disse effektene kan kobles dels til MF-modulerende endringer på det molekylære nivå. MF induserte genet ekspresjon av PPAR-γ, sammen med nedregulering av den overordnede inflammatoriske transkripsjonsfaktor /mediator NF-kB, hindrer således at I /R effekt. Tidligere studier har rapportert at I /R skadelig effekt er formidlet delvis via
undertrykke PPAR-γ mRNA [7, 45], som er en transkripsjonsfaktor som fungerer som en innflytelsesrik pleiotropisk regulator av anti-inflammasjon, antioksidant, og phagocyte-mediert oppryddingsprosesser. I tillegg til sin direkte genomiske virkning, ble PPARy funnet å interagere negativt med andre transkripsjonsfaktorer som NF-kB, som ligger til grunn for mange aspekter av den anti-inflammatoriske /immunmodulerende effekt av PPARy [25, 46], fakta som tone med våre funn. Videre ble forsterket ekspresjon av PPARy rapportert å hemme produksjon av NOx /iNOS [47], som tilbyr således en forklaring på MF-mediert inhibering i iNOS. PPARy hindrer også makrofager drevet cytokiner og leukocytter adhesjonsmolekyler, sett her, delvis via
undertrykke genekspresjon av NF-kB [25, 48]. Videre MF ble rapportert å redusere adhesjonen av PMN til endotel og beskyttet mot deres infiltrasjon inn i gastrisk vev [49], sammen med modulering av PPAR-γ og NF-kB uttrykk. Disse funnene støtter oss på E-selektin, iNOS og MPO, som nevnt før. I tillegg kan MF-indusert HO-1 oppregulering rasjonalisere anti-inflammatorisk karakter av MF, via
sin biprodukt karbonmonoksid, som gir en anti-inflammatorisk eiendom [50]. For å nå dette målet, de eksperimentelle resultatene fra vår studie identifisere ytterligere gastroprotective mekanismer i begge de molekylære og cellulære nivåer der MF beskyttet mageslimhinnen mot I /R-indusert skade. Disse resultatene underbygge med funnene fra tidligere studier i en eksperimentell kolitt modell [51, 52], og peke ut den anti-inflammatorisk handling av MF.

Tidligere Wu et al. [53] rapporterte at PPAR-γ overekspresjon også beskytter mitokondriemembranpotensialet og forhindrer apoptose ved oppregulering av ekspresjon av anti-apoptotiske Bcl-2-familieproteiner. På samme måte, karbonmonoksyd, biprodukt av HO-1-aktivitet, overfører en anti-apoptotiske aktivitet ved oppregulering av anti-apoptotiske molekyl Bcl-2, og nedregulering av de pro-apoptotiske signal Bax [54]. Data over aktuelle studien viste at I /R gastrisk skade er assosiert også med apoptose som gjenspeiles av den markante reduksjonen av BCL-2 [55] og heving av caspase-3 [56], mens MF falt I /R indusert apoptose ved en doseavhengig økning av Bcl-2 nivå, og reduksjon av caspase-3 nivå. MF anti-apoptotiske effekt faller sammen med resultatene av Ghosh et al. [38], og kan tilbakeføres til MF-mediert oppregulering av PPAR-γ og /eller HO-1 mRNA-nivåer

Alle disse funn ble ytterligere reflektert på de histologiske forandringer.; I /R fornærmelse forårsaket utstøtingen av epithelial beskyttende laget og resulterte i en underliggende blødning med en markert opphopning av blodkar sammen med inflammatoriske celler infiltrasjon i lamina propria, en effekt som angir blodstrøm stans som ble ledsaget av ødem. Opphopning av blodkar kan skyldes heving av vasokonstriktor endotelin-1 i mage vev [57], økt leukocyttinfiltrasjon [58], og /eller redusert aktivitet av eNOS som dokumentert i denne studien. Følgelig, I /R var ikke bare ledsages av dannelse av frie radikaler, men også med en klar reduksjon i nivåene av endogene antioksidanter og økt infiltrasjon av inflammatoriske celler, endringer som ble hindret av MF, særlig ved den høye dosenivå, hvor normal histologisk strukturen ble observert.

Når det gjelder referanselegemiddel OMP, som utøver sin magesekkbeskyttende virkning av sin antioksidant, antiapoptotic [59], og anti-inflammatorisk [60] handlinger, utover syre undertrykkelse [61], vi avgrenset heri molekylære hendelser, som bidrar til disse effektene. I denne studien, dokumentert vi at OMP antioksidant virkning, dokumentert ved å hemme lipidperoksidasjon og øke forsvars biomarkører, formidles via
Nrf2 /HO-1 signalveien. OMP inhiberte også proinflammatorisk cytokin IL-1β, så vel som nøytrofil adhesjon og infiltrasjon som representert ved reduksjon sE-selektin nivå og MPO aktivitet, respektivt. Selv OMP downregulated ekspresjonen av NF-kB, men det kunne ikke bekjempe I /R effekt på PPAR-γ, noe som tyder på at den anti-inflammatoriske /immunmodulerende effekt av OMP stammer fra undertrykke NF-kB-genekspresjon, og eventuelt annen mekanismer, men ikke så stor som PPAR-γ.

Selv om effekten av OMP på Nrf2 uttrykk skredet som MF _{20, men det motsatte var tydelig på HO-1 og GSH, et avvik som kan være knyttet til deres virkninger på NF-kB. Sistnevnte ble vist seg å fungere som en negativ regulator av Nrf2 veien ved å konkurrere med det for binding til den transkripsjonelle ko-aktivator CREB-bindende protein (CBP) og også for å fremme binding av den ko-repressoren histon deacetylase 3 (HDAC3) til antioksidant respons element (ER) [62]; Disse effektene kan retardere Nrf2 mediert transkripsjon av nedstrøms mål.}

Videre er antiapoptotic egenskap av OMP-avhengige ikke bare av dets evne til å øke nivået av antiapoptotic protein, Bcl-2 eller for å redusere nivået av den apoptotiske markør, caspase-3, som detektert i den foreliggende undersøkelse, men også på reduksjon av oksidativ skade DNA [59].

Endelig kan man konkludere med at den magesekkbeskyttende virkning av MF, spesielt ved en dose på 20 mg /kg, kan tilskrives aktiveringen av Nrf2 /HO-en antioksidant vei, PPAR-γ anti-inflammatorisk veien via
downregulating NF-kB, og for å øke antiapoptotic protein Bcl- 2 og mink caspase-3. Alle disse mekanismene endelig opprettholde normal mage mucosal barriereintegritet.

• PLoS ONE: Toveis Høring mellom stress-indusert magesår og depresjon etter kronisk stress
• PLoS ONE: Høy Mobility Gruppe Box en hemmer magesår Healing gjennom Toll-like receptor 4 og Reseptor for Advanced Glycation End Products