PLoS ONE: Mangiferin lievittää mahahaavan Iskemia /reperfuusio Rats: osallistuminen PPAR-γ, NF-KB ja Nrf2 /HO-1: n signaloinnin Pathways

tiivistelmä

Mangiferin (MF), joka on xanthonoid alkaen Mangifera indica , on todettu olevan eritystä estävää ja antioksidantti mahaa suojaava vaikutus vastaan ​​eri mahahaava mallia; kuitenkin, sen molekyyli-mekanismia ei ole aiemmin selvitetty. Siksi Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli testata sen modu vaikuttaa useisiin signalointipolkujen käyttämällä iskemia /reperfuusio malli ensimmäistä kertaa. Eläimiä hoidettiin MF, omepratsolin (OMP), ja ajoneuvo. Mekanistinen tutkimukset paljastivat, että MF välittämä sen mahaa suojaava vaikutus osittain kautta indusoi ilmaus Nrf2, HO-1 ja PPAR-γ yhdessä vähen- tämisessä, että NF-KB. Yllättäen vaikutus MF, erityisesti suurilla annoksilla, ylittänyt välittämä OMP paitsi Nrf2. Molekyyli tulokset heijastuvat biomarkkerit mitataan, missä antioksidantti vaikutusta MF ilmeni lisäämällä yhteensä antioksidanttien ja glutationin lisäksi normalisoi malondialdehydipitoisuus tasolla. Lisäksi, MF pienensi I /R-indusoidun typpioksidin korkeus, vaikutus, joka oli parempi kuin OMP. Seerumissa, MF, annosriippuvaisesti, parantaa endoteelin typpioksidisyntaasia, kun taas vähentää indusoituvaa isoformia. Mitä tulee tulehduksia MF, se vähensi seerumin IL-1β ja sE-selektiini, vaikutuksia, jotka peilataan Kudostason myeloperoksidaasin, neutrofiilien tunkeutuminen merkki. Lisäksi MF hallussaan antiapoptoottista merkki osoituksena nostamalla Bcl-2 ja alentamaan että kaspaasi-3 suhteessa annokseen järjestyksessä. Kuten voidaan todeta, että vihjasi gastroprotektiivinen mekanismeja MF välittyvät osittain, moduloimalla oksidatiivisen stressin, tulehdus ja apoptoosin mahdollisesti kautta Nrf2 /HO-1, PPAR-γ /NF-KB signalointireitteihin.

Citation : Mahmoud-Awny M, Attia AS, Abd-Ellah MF, El-Abhar HS (2015) Mangiferin lievittää mahahaavan Iskemia /reperfuusio Rats: osallistuminen PPAR-γ, NF-KB ja Nrf2 /HO-1 signalointireitteihin. PLoS ONE 10 (7): e0132497. doi: 10,1371 /journal.pone.0132497

Editor: Ashraf B. Abdel-Naim, Farmasian tiedekunta, Ain Shams University, Egypti

vastaanotettu 18 maaliskuuta 2015 Hyväksytty: 15 Kesäkuu 2015; Julkaistu: 21 heinäkuu 2015

Copyright: © 2015 Mahmoud-Awny et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

rahoitus: kirjoittajat eivät tuki ja rahoitus raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

aikana mahahaava tauti hyvinvoinnin upshots kerääntyy hädässä tasapaino tuhoisaa ja suojaava tapahtumia. Oksidatiivinen stressi on keskeinen tekijä, joka synnyttää mahahaava ja aiheuttaa ylituotantoa vapaiden radikaalien (FR: t) [1]. Mahalaukun iskemia /reperfuusion (I /R) arkkityyppi jäljittelee stressin aiheuttama mahahaava, jolloin, kohonnut FR: typpioksidi (NO), valkosolut adheesiomolekyyli "E-selektiini" [2], neutrofiilikeräytymän [3], ja redox epätasapaino [4] on merkittävä asema sen synnyssä. Samoin tumatekijä-kappa B (NF-KB), redox-herkkää transkriptiotekijä, on keskeinen rooli I /R vahinkoa [5]. Se säätelee useiden geenien ekspression, jotka liittyvät tulehdukseen ja solujen vahinkoa, kuten interleukiini (IL) -1β, -6, soluadheesiomolekyylit ja indusoituvan typpioksidisyntaasin (iNOS). Toisaalta, useita tekijöitä välittävän gastroprotection hapettumista vastaan ​​vamman lievittämiseksi tulehdusvasteen, näitä ovat peroksisomiproliferaattoreilla aktivoituvan reseptori (PPAR) -γ [6, 7], ja heamoxygenase-1 (HO-1) [8]. Jälkimmäinen on indusoituva isoformi HO, joka vastaa rasituksia, kuten oksidatiivisen stressin ja se pysyy pidetään yleisesti suojamekanismi vastaan ​​oksidatiivista kudosvauriota [9].

Yksi transkription säätelijöitä HO-1 on ydinvoima tekijä-E2 liittyvä tekijä-2 (Nrf2) [9], joka on lokalisoitu sytoplasmassa normaaliolosuhteissa ja vuorovaikutuksessa Keap1 (molekyyli anturi kysteiiniä runsaasti proteiinia Kelch kaltaisen ECH liittyvän proteiinin 1) voidaan nopeasti hajoavan jonka ubikitiini-proteasomireitillä [10, 11]. Päinvastoin, alle oksidatiivisen stressin olosuhteissa, Keap1 hapetetaan ja Nrf2 ubikitinaatio lasketaan [11], vapauttaen siten Nrf2 alkaen Keap1. Nrf2 sitten kulkeutua tumaan kytkettyinä antioksidantin kanssa vaste-elementti kohdegeenin promoottori [12, 13], joka aiheuttaa välittömiä transaktivaation koodaavat geenit. Nämä geenit ovat monet entsymaattisen hapettumisen ja myrkkyjä geenejä, kuten glutationia (GSH) peroksidaasi /reduktaasin, HO-1, ja GSH-S-transferaasi [14].

Mangiferin (MF), joka on luonnossa esiintyvä glucosylxanthone hallussaan mahaa suojaava vaikutus kautta
sen eritystä estävää ja antioksidantin toimintaa, kuten todentaa eri eläinmalleissa mahahaava [15], mutta ei I /R malli, joka on tavoitteena nykyisen työn. MF oli raportoitu välittävän sen antioksidantti eri tasoilla oksidatiivisen järjestyksessä. Se tuottaa MF fenoksi radikaaleja ja sitoutuu metalli-ionit (Fe ^{2 + /3 +) muodossa stabiilin MF-rauta monimutkaisia, että ei salli sukupolven hydroksyyli (OH) radikaaleja ja /tai okso-ferryl ryhmiä ja scavenges lipidien perok- /alkoksiradikaaleista siten, säilyttäen solujen hapetus-antioksidanttitasapainon [16]. Huolimatta yksityiskohtainen solureaktioissa kuvataan kuitenkin molekyyli signalointireittejä ei ole puututtu ennen.}

molekyylitasolla, esillä tavoitteena oli arvioida mahdollista osallistumista Nrf2 /HO-1, PPARy, ja NF -κB signaalireaktioteissä gastroprotektiivinen vaikutus MF, lisäksi muita biomarkkerit hahmotella mahdollisia gastroprotective mekanismeja käyttämällä hypoksia /uudelleenhapetukselle malli.

Materiaalit ja menetelmä

Eläimet

Male Wistar rottia, jotka painoivat 180-220 g (Research Institute of Ophthalmology, Giza, Egypti) on pidetty 12 tunnin valo /pimeä syklit, vakio ympäristöolosuhteet ja ylläpidettiin oikea ruokavalio ruokaa ja vettä halun
. Ennen kokeilla (24 h) kaikki eläimiä pidettiin yksittäin laaja silmän pohjassa häkit ja paastosi. Eläimet käsiteltiin mukaisesti hyväksymien suuntaviivojen Animal Care ja käyttö komitean Farmasian tiedekunta, Kairon yliopisto, Kairo, Egypti (Luvan numero: PT 575). Kaikki kirurgiset prosessit suoritettiin tiopentaali anestesiassa, ja yritettiin minimoida kärsimyksen.

Drugs

Mangiferin [MF] ostettiin Sigma-Aldrich Chemical Company (St. Louis, MO, USA) ja omepratsoli [OMP] alkaen Chemo SA (Lugano, Sveitsi). Kaikki muut kemikaalit ja reagenssit olivat analyyttistä laatua. MF ja OMP liuotettiin suolaliuokseen voidaan injektoida intraperitoneaalisesti.

induktio mahalaukun limakalvon iskemian /reperfuusion (I /R) ja hoitoja

I /R malli suoritettiin menetelmän mukaisesti aikaisemmin kuvanneet Kotani et al. [17] joitakin muutoksia. Lyhyesti, alle tiopentaali anestesia (50 mg /kg, i.p.), rotan sisusvaltimorunko tukittiin 30 min., Jonka jälkeen reperfuusion annettiin 72 tuntia, jonka declamping valtimon. Rotat varattu 5 ryhmään (n = 7-9); eläimet ensimmäisessä ryhmässä sai suolaliuosta ja sisusvaltimorunko hoidettiin ilman kiristys palvelemaan valeleikataan kontrolliryhmään. Rottia seuraaviin ryhmiin alistettiin I /R; käsittelemätön (toinen) ryhmä, sai suolaliuosta ja sen merkitään positiivisella kontrollilla (I /R), kun taas muut 3 ryhmää hoidettiin, MF (10 mg /kg; MF _{10; kolmas ryhmä), MF ( 20 mg /kg; MF 20; neljäs ryhmä), ja OMP (20 mg /kg; OMP 20; viides ryhmä). Kaikki käsittelyt tehtiin 30 min. ennen käyttöä ja 3 päivän kuluttua reperfuusion.}

Histopatologisten tutkimusten

Vatsa, kolmesta edustaja eläimistä kussakin ryhmässä, oli heti upotettiin 10% formaliiniin-suolaliuosta, upotettiin parafiiniin, ja 5 um kohdat valmistustavasta värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H &E), ja tutkittiin mikroskoopilla.

biokemialliset määritykset

lopussa reperfuusion aikaa ja syvässä eetterianestesiassa, verta kerättiin kaulalaskimoon valmistaa seerumit, sitten eläimet tapettiin, ja maha irrotettiin, avattiin suurempaa kaarta pitkin ja huuhdeltiin jääkylmällä suolaliuoksella. Laajuus brutto limakalvovauriot (haavauma Index) arvioitiin ja ilmaistiin summana haava pituuksien kohti vatsaan mm [18]. Lyhyesti, valaistu suurennus (3x) käytettiin mittaamaan pituus pitkä leesioita (mm) rauhas osa mahassa, kun taas petechea leesiot laskettiin ja jokaisen viiden leesiot olivat edustettuina 1 mm haavauma.

noin 50 mg mahan limakalvon upotettiin yön RNA myöhemmin liuokseen, varastoitiin -80 ° C: ssa kunnes kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR: n (qRT-PCR) kvantifiointi. Jäljellä limakalvo romutettiin pois ja homogenisoitiin jääkylmässä suolaliuoksella (MPW-120, Puola) käyttäen maksiminopeudella 1 min. Homogenaatti sentrifugoitiin 5000 rpm: llä 5 minuutin ajan 4 ° C: ssa, ja tuloksena supernatantit pidettiin otetuista eristä ja säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes määritys mahalaukun parametrit.

arviointi homogenaattia /seerumin parametrit käyttäen ELISA tekniikalla.

Homogenaatti /seerumin seuraavia parametreja arvioitiin käyttämällä vastaavaa ELISA sarjat, kuten on esitetty suluissa: IL-1β, sE-selektiini (Abcam Inc., Cambridge, UK, Cat. No. ab100768 ja ab171334, vastaavasti), iNOS, eNOS (EIAab, Wuhan, Kiina, Cat. No. E0837r ja E0868r, vastaavasti), B-solujen leukemia /lymfooma-2 (Bcl-2; USCN Life Science Inc., Wuhan, Kiina, Cat . Ei E90778Bo) ja kaspaasi-3 (Cusabio Biotech Co., Wuhan, Kiina, Cat. No. CSB-E08857r). Kukin biomarkkereiden prosessoitiin valmistajien säädetyt menettelyt. Seerumin kokonais antioksidantteja (TAC) mitattiin käyttäen menetelmää Benzie ja Starin [19]. Lyhyesti, rauta tripyridyltriazine (Fe ^{3 + -TPTZ) kompleksi pelkistetään rauta muotoon antioksidantit näytteessä läsnä happamassa pH: ssa, jolloin saatiin voimakkaan sininen väri, joka voidaan seurata mittaamalla absorbanssin muutos 593 nm. Muutos liittyy suoraan yhdistetty tai kokonaan vähentämään voima elektroneja luovuttavan ei-entsymaattisten antioksidantteja läsnä reaktioseoksessa. TAC-tason ilmaistiin uM /l.}

Arvio mahalaukun aktiivisuuden /pitoisuus myeloperoksidaasin (MPO), malonidialdehydi (MDA), pelkistettyä glutationia (GSH) ja yhteensä typpioksidin (NOx).

aktiivisuus MPO (U /g), merkkiaine kudoksen neutrofiilien Infiltraatio, arvioitiin mukaan Bradley et al. [20]. Menetelmä perustuu mittaamalla vetyperoksidi-riippuvaista hapettumista o-dianisidiini, katalysoivat MPO, mikä johtaa siihen, että muodostuu yhdiste, jolla on lisääntynyt absorbanssi 460 nm: ssä. Indeksinä Härskiintyminen tiobarbituurihapon reagoivat aineet (TBARS), jota edustaa MDA, käytettiin määrittämään hapettumista, seuraavaa menetelmää Mihara ja Uchiyama [21]. MDA-TBA-additiotuote kehittyy vaaleanpunainen väri, joka uutettiin n-butanolia ja mitataan kahdella aallonpituudella, nimittäin
., 520 ja 535 nm. Kuvatun menetelmän Ahmed et ai. [22] annettiin arvioida ei-proteiini sulfhydryyliryhmät (lähinnä GSH) saattamalla Ellmanin reagenssilla jälkeen saostamaan proteiini SH-ryhmiä. Reaktio Ellmanin reagenssin muodostivat vakaan keltainen väri 5 merkapto-2-nitrobentsoehappo, joka mitattiin kolorimetrisesti 412 nm: ssä (mg /g).

Mahalaukun limakalvon NO-tuotannon arvioitiin epäsuorasti nitriitti /nitraattipitoisuus menetelmän mukaisesti Miranda et ai. [23], jossa vanadiinitrikloridi käytettiin vähentämään nitraatin nitriitiksi. Vaaleanpunainen atsoväriaine reaktion tuottama nitriitin kanssa sulfaniilihappo, jota seuraa tämän jälkeen voidaan liittää N- (1-naftyyli) -etyleenidiamiini mitattiin kolorimetrisesti 540 nm: n ja NOx: ilmaistiin uM /g.

kvantitatiivinen reaaliaikainen (RT) -PCR-

Kokonais-RNA uutettiin mahalaukun limakalvon käyttäen vain P Kokonais-RNA Extraction kit (BioFlux, Hangzhou, Kiina). Puhtaus saatu RNA varmistettiin spectrophoto-metrisesti 260/280 nm: ssä. Yhtä suuret määrät RNA: ta (0,368 ug) otettiin retro- transskriboidun osaksi ensimmäisen juosteen komplementaarinen DNA (cDNA), 37 ° C: ssa 50 min. käyttämällä 200 U /ul M-MuLV käänteiskopioijaentsyymin (SibEnzyme, Novosibirsk, Venäjä), 1 ui satunnaisia ​​hexamer (Qiagen, LRS Laboratories, Inc. Korea), ja 0,1 M DTT 50 ui reaktioseosta. Arvioida ilmentymisen antioksidantti ja tulehdukseen liittyvä kohdegeenien, RT-PCR suoritettiin käyttäen SYBR green PCR Master Mix (Qiagen), kuten valmistaja on kuvannut. Lyhyesti, 25 ui reaktiotilavuudessa, 5 ui cDNA: ta, lisättiin 12,5 ul: aan 2x SYBR vihreä master mix ja 2,5 ui (2,5 uM) kutakin aluketta. Sekvenssit alukkeet olivat: PPAR-γ sense-aluketta 5'-GCGGAGATCTCCAGTGATATC-3 '; antisense-aluke 5'-TCA GCGACTGGGACTTTTCT-3 '; NF-KB: n p65: n sense-aluketta 5'-TGCAGAAAGAAGACATTGAGGTG-3 '; antisense-aluke 5'-AGGCTAGGGTCAGCGTATGG-3 '; Nrf2-sense-aluketta 5'-ATGGCC ACACTTTTCTGGAC-3 '; antisense-aluke 5'-AGATGTCAAGCGGGTCACTT-3 '; HO-1-sense-aluketta 5'-CGTGCAGAGAATTCTGAGTTC-3 '; antisense-aluke 5'-AGACG CTTTACGTAGTGCTG-3 '; ja glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasin (GAPDH), sense-aluke 5'-GGGCAGCCCAGAACATCA-3 '; antisense-aluke 5'-TGACCTTG CCCACAGCCT-3 '. PCR-reaktioita olivat 15 min 95 ° C: ssa aktivointia HotStarTaq DNA Polymerase, jota seurasi 45 sykliä 94 ° C: ssa 15 sekuntia (denaturointi), 55 ° C 30 sekuntia (pariutuminen) ja 72 ° C 30 sekuntia (laajennus ). Suhteellinen ekspressio laskettiin 2 ^{-ΔΔCT kaavan [24].}

Tilastollinen analyysi

Data ilmaistiin keskiarvona ± SEM 7-9 eläimiä. Tilastollisia vertailuja avulla suoritettiin käyttämällä yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA), jota seurasi Student-Newman-Keuls-testi. Tilastollinen merkitys eroa pidettiin osoitteessa P
< 0.05.

Tulokset

vaikutus MF ja OMP I /R aiheuttama haavaindeksi

MF, annosriippuvaisesti, kiellettiin I /R aiheuttamaa mahalaukun vahinkoa, kuten esittämät arvot haavaindeksi (taulukko 1) ja vaikutus MF _{20 oli verrattavissa tarjoamia OMP 20.}

vaikutus MF ja OMP mRNA- ilmentymisen hapettumisenestoaine geenien

Kuten kuviossa 1A ja 1B, mukautuva vastaan ​​I /R vamma oli osoituksena ylössäätelyyn Nrf2 ja HO-1-mRNA, mikä selittää syy kohonnut GSH tason hoitamattomien I /R-ryhmä. Nämä mRNA upregulations olivat vieläkin elävä käsitellyissä ryhmissä, osoittaen siten, että antioksidantti kapasiteettia MF.

vaikutus MF ja OMP on redox parametrien

Kuten taulukoissa 2 ja 3 I /R loukkaus aiheutti epätasapainoa oksidatiivisen /nitrosative tila. Nousuun MDA tason (182%) ja NOx tuotanto (187,6%), rinnastettavissa 5,1 taittuu kasvaa iNOS, koettiin I /R käsittelemättömän ryhmän. Päinvastoin, I /R vahinkoa puolittunut hyödylliset eNOS ja vähensi TAC (69,7%), verrattuna näennäistä ryhmään. Kaikki nämä muutokset olivat palautunut OMP sekä MF, annoksesta riippuvaisella tavalla. Lähes kaikki parametrit MF _{20 oli merkittävä vaikutus. Mitä GSH, I /R malli, yllättäen, koholla se 32%, vaikutus, joka lisäsi entisestään eri huumeiden hoito.}

vaikutus MF ja OMP mRNA- ilmentymisen PPAR-γ ja NF -κB geenit

Kuten kuviossa 1C, eläimiä I /R vamma paljasti huomattavan laskun mahalaukun ilmaus tulehdusta PPAR-γ (25% huijausta taso), jossa on huomattavasti enemmän että on tulehdusta edistäviä NF-KB (11,9-kertainen) (kuvio 1 D). Mielenkiintoista, MF käsiteltyjen ryhmien pystyivät torjumaan I /R-liittyvät vaikutukset mukaan tutkitulla annoksella. OMP, toisaalta, osoitti vaikutus on vähäisempi kuin MF tekivät NF-KB, mutta eivät muuttaneet vähentynyt PPAR-γ.

vaikutus MF ja OMP mahalaukun tulehdusta edistävien sytokiinien ja neutrofiilien tunkeutuminen

Taulukko 4 esittää I /R-välitteisen mahalaukun pahaa, mikä pahentaa tulehduksellinen biomarkkerit. Se kasvatti seerumin IL-1β, sE-selektiini ja mahalaukun MPO aktiivisuus 5,2, 5,6, ja 2,2 taittuu, tässä järjestyksessä, verrattuna valeleikatuilla kontrolliryhmään. Kaikki nämä muutokset olivat merkittävästi pysäytettiin hoito MF annoksesta riippuvaisella tavalla. Tästä huolimatta MF _{20 vaikutukset korvattu että välittämiä referenssistandardia OMP. Nämä havainnot osoittavat, että MF voivat moduloida tulehduksellisten sytokiinien ja neutrofiilien rekrytointi lieventää I /R aiheuttama vamma.}

vaikutus MF ja OMP apoptoottiseen biomarkkerit

Kuten esitetään taulukossa 4 I /R loukkaus laukaisi apoptoosin mahan limakalvon osoituksena 6,85 taittuu kasvua kaspaasi-3 tasolla. Samassa yhteydessä, I /R laski tasolle anti-apoptoottisten marker Bcl-2 (59%). Kuitenkin anto MF, annoksesta riippuvaisella tavalla, on keskeyttänyt nämä muutokset merkittävästi, vaikutukset, jotka ovat ylittäneet niille välittämää OMP.

vaikutus MF ja OMP mahalaukun histopatologisia muutoksia

Kohentuvilla vaikutuksia eri huumeiden hoito on testattu biomarkkerit olivat lisävahvistusta histologisen havainnot esitetty kuvassa 2. kuvassa on fotomikrograafeja mahalaukun limakalvon, mikä osoittaa [A] normaali mahalaukun limakalvon (mU), submukoosinen (sm) ja muscularis ( ml) arkkitehtuurin valeleikataan rotta osassa. [B] I /R kohdat paljastavat sloughed limakalvon (m), juxtraposed joilla on taustalla verenvuoto (musta nuoli), [C] vaikea verisuonten ruuhkat (V), polttoväli tulehdussolujen infiltraatiota (m), pääasiassa neutrofiilien, ja turvotus (O) in submukoosassa. [D] MF _{10 § divulges vain ruuhkia submukosaalisen verisuonissa (V), joilla on lievä tulehdussolujen infiltraatiota (keltainen nuoli) ja /tai turvotusta. Toisaalta, [E] MF 20 §, samanlainen vale- leikattuihin, osoittaa normaali ehjä histologiset rakenne, lukuun ottamatta hyvin lievä verisuonten ruuhkat (v) submukoosassa; MF 20 vaikutus korvasi että [F] OMP, jossa ruuhkainen verisuonet (V) ja turvotuksen submukosaalisen kerroksen edelleen havaitaan OMP osissa.}

Keskustelu

Vaikka aikaisemmat tutkimukset ovat dokumentoineet antioksidantti [15] ja tulehdusta [25] valmiuksia MF, mutta mikään niistä ei ole selvitetty mahdollisia molekyyli reittejä mukana korjaukset häiriintyvässä redox /tulehduksellinen järjestelmiä. Siten esillä olevassa työssä olemme vahvistaneet mahalaukun limakalvon ilmaus Nrf2 /HO-1 ymmärtää, jos tämä signalointireitille osallistuu MF antioksidantti mekanismi. Lisäksi tutkimus kohdennettua ilmentymistä NF-KB: n ja PPAR-γ tutkia myös joitakin mahdollisia MF tulehdusta molekyylikoneisto.

signaalitransduktion tutkimukset paljastivat, että I /R on merkittävästi voimistunut mRNA Nrf2 ja HO-1 osoittaa mahdolliseen mukautuva vaikutus kehoa I /R vahingoittamatta loukkaus; nämä havainnot matkivat että Pan ja työtoverit [26] on verkkokalvon I /R malli. Parannettu HO-1-proteiinin ilmentymisen, säätelee Nrf2 [27], voi esiintyä vastauksena oksidatiivista stressiä [28] ja tulehdussairaudet ja hyväksytään laajasti suojamekanismi vastaan ​​oksidatiivista kudosvaurioita [9], seikat, jotka tukevat havainnot. MF, toisaalta, vahvisti antioksidantti nostamalla edelleen ilmaus Nrf2 ja HO-1, tulokset, jotka on tallennettu aiemmin maksatoksista malli [29]. Parhaan tietomme mukaan tämä havainto on ensimmäinen suora näyttöä gastroprotective rooli MF kautta Nrf2 /HO-1 antioksidantti väylän I /R aiheuttama haava malli.

antioksidantti luonne MF edelleen ilmenee tässä sen kyky torjua I /R aiheuttama nousu lipidiperoksidipitoisuus [30] ja lasku TAC [31]. Kuitenkin vaikutus on I /R ja MF GSH osoitti samaa kaavaa havaittu Nrf2 ja HO-1 ilmentymisen, jossa I /R aiheutti hienovarainen, mutta merkittävä nousu GSH, vaikutus, joka oli suurennettu edelleen MF [32] . Tämä toiminta, viittaa mahdolliseen korvaavien vastaan ​​I /R vahinkoa ja linkit GSH kanssa Nrf2 /HO-1-signalointireitin kannattamaa tähän asti Das et al. [29]. Korrelaatio GSH ja Nrf2 saattaa liittyä molekyylin rajat puhua välillä voimistunut Nrf2 ja γ-glutamylcysteine ​​ligaasi [10, 33], entsyymi, joka katalysoi nopeutta rajoittava vaihe GSH synteesissä [34]. Lisäksi HO-1 antioksidantti rooli perustuu sen kykyyn katalysoida jakautuminen pro-hapetin hemin raudaksi, biliverdiini, ja hiilimonoksidi [35]; biliverdiini muutetaan sitten bilirubiini, joka toimii antioksidanttina vastaan ​​lipidiperoksidaatiossa [36].

Lisäksi korjaukset häirityn redox tilan, MF laajensi vaikutus synnyttämään nitrosative stressi, samoin. MF vastusti I /R vaikutus tasoilla eNOS /iNOS, jossa se palautti aktiivisuuden konstitutiivinen entsyymi eNOS [37] ja vähensi haitallisten indusoituva isoformi [38]. Siksi on odotettavissa, että kohonnut iNOS hoitamattomassa ryhmässä vastaa ylijäämä taso NOx, mikä heikentää mahalaukun limakalvon eheyden kautta
sen vuorovaikutusta superoksidianionia ja muodostumista peroksinitriitin [39]. Jälkimmäinen on voimakas vapaiden radikaalien että häiritsee solun makromolekyylien kautta lipidiperoksidaation, suora mitokondrion vajaatoiminta, estämällä kalvo Na ^{+ /K + - ATPaasi toimintaa, ja oksidatiivisen proteiini muutoksia [40]. Päinvastoin, MF-välitteinen tuotanto NOx voidaan ajaa palautetusta Enos, eikä iNOS, tukevat siten, antioksidantti /vapaiden radikaalien huuhteluilman ominaisuudet MF [16]. Suojaava NO sammuttaa vapaita radikaaleja minkä seurauksena säilyttäminen GSH mahalaukun limakalvon; GSH toimii sekä nukleofiilisen raadonsyöjä superoksideja ja kofaktorina GSH peroksidaasi välittämää vähentämiseen vetyperoksideja [41].}

haitallisia tapahtumia, jotka seuraa I /R loukkaus ovat lisääntynyt vapautuminen tulehdusta edistävien välittäjäaineiden ja leukosyyttien lisäksi häiritsevää oksidatiivisen /nitrosative koneistoja [42]. Esillä olevassa tutkimuksessa, MF validoitu sen tulehdusta /immuuni-modulatorinen vaikutus, joka on dokumentoitu aiemmin [25, 43], inhiboimalla IL-1β [43], E-selektiini [25] ja neutrofiilien infiltraatiota [44] muissa eri malleja. Nämä vaikutukset voivat osittain yhteydessä MF-moduloivia muutoksia molekyylitasolla. MF indusoi geenin ilmentymisen PPAR-γ yhdessä downregulation vanhemman tulehduksellinen transkriptiotekijä /välittäjänä NF-KB: n, estävät näin ollen I /R vaikutuksesta. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että I /R vahingollista vaikutusta välittää osittain kautta
tukahduttaa PPAR-γ mRNA [7, 45], joka on transkriptiotekijä, joka toimii vaikutusvaltainen pleiotrooppisten säädin anti-tulehdus, antioksidantti, ja fagosyyttien välittämän siivous prosesseja. Sen lisäksi suoraan genomisesta vaikutus, PPARy havaittiin vuorovaikutuksessa negatiivisesti muiden transkriptiotekijöiden kuten NF-KB, taustalla monia näkökohtia tulehdusta /immunomodulatorinen vaikutus PPAR [25, 46], seikat, jotka sävy havaintomme. Lisäksi lisääntynyt ilmentyminen PPARy on raportoitu estävän NOx-tuotanto /iNOS [47], joka tarjoaa näin ollen selitystä MF-välitteinen inhibitio iNOS. PPARy vaikeuttaa myös makrofagien perustuva sytokiinien ja leukosyyttien adheesiomolekyylien, kuten nähdään tässä osittain kautta
estävän geenin ilmentymistä NF-KB: n [25, 48]. Lisäksi MF on raportoitu vähentävän adheesiota PMN: ien endoteeliin ja suojattava vastaan ​​infiltraatio mahalaukun kudoksen [49], ohella modulaatio PPAR-γ: n ja NF-KB: n ilmentymistä. Nämä havainnot tukevat meidän E-selektiinin, iNOS, ja MPO, kuten edellä mainittiin. Lisäksi MF aiheuttama HO-1 kiihdytyssäätely voi järkeistää tulehdusta luonne MF, kautta
sen sivutuotteena hiilimonoksidia, joka antaa tulehduksia ominaisuus [50]. Tätä varten kokeelliset tulokset Tutkimuksemme tunnistaa toisen gastroprotective menetelmät sekä molekyyli- ja solutason tasolla, jolla MF suojattu mahan limakalvoa vasten I /R aiheuttama vamma. Nämä tulokset tukevat havaintojen kanssa aikaisempien tutkimusten kokeellisessa koliitin malli [51, 52], ja pin alas tulehdusta toiminnan MF.

Aiemmin Wu et al. [53] on raportoitu, että PPAR-γ yliekspressio suojaa myös mitokondrion kalvon potentiaalia ja estää apoptoosia säätelemällä ekspressiota anti-apoptoottisten Bcl-2-perheen proteiineihin. Samoin hiilimonoksidi, sivutuote HO-1-aktiivisuuden, antaa anti-apoptoottista aktiivisuutta, jonka säätely ylöspäin antiapoptoottinen molekyyli Bcl-2, ja alas-säätely pro-apoptoottinen signaali Bax [54]. Data nykyisen tutkimus osoitti, että I /R-indusoidun mahalaukun vamman liittyy myös apoptoosin osoituksena huomattavaan vähenemiseen Bcl-2 [55] ja korkeus kaspaasi-3 [56], kun taas MF palasi I /R indusoimaan apoptoosia annoksesta riippuva nousu Bcl-2 tason, ja vähentäminen kaspaasi-3 tasolla. MF antiapoptoottinen vaikutus on sama kuin tulokset Ghosh et al. [38], ja se voi johtua MF-välitteistä säätelyä PPAR-γ ja /tai HO-1-mRNA-tasot.

Kaikki nämä löydökset olivat edelleen heijastuu histologisia muutoksia; I /R loukkaus aiheutti irtoaminen epiteelin suojakerroksen ja johti taustalla verenvuoto merkittävästi ruuhkia verisuonia yhdessä tulehdussolujen tunkeutuminen lamina propriaa vaikutus, joka nimeää verenvirtaus lopettamiseen, joka oli mukana turvotus. Ruuhkia verisuonten voi johtua korkeus vasokonstriktori endoteliini-1 mahalaukun kudoksessa [57], lisääntynyt leukosyyttien infiltraatiota [58], ja /tai vähentynyt aktiivisuus eNOS dokumentoitu nykyisessä tutkimuksessa. Vastaavasti I /R ei ollut ainoastaan ​​mukana vapaiden radikaalien muodostumista, mutta myös selvän laskun tasot endogeenisen antioksidantteja ja lisäsi tulehdussolujen, muutoksia, jotka haittasivat MF, erityisesti suurella annoksella, jossa normaali histologisia rakennetta ei havaittu.

osalta viittaus lääkkeen OMP, joka kykenee sen gastroprotektiivisen vaikutus antioksidantti, antiapoptoottisten [59], ja anti-inflammatorinen [60] toimia, sen jälkeen happo tukahduttaminen [61], me rajattu tässä tekstissä molekyyli tapahtumia, jotka edistävät näitä vaikutuksia. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme dokumentoitu, että OMP antioksidanttivaikutuksia, osoituksena estämällä lipidiperoksidaatiossa ja lisäämällä puolustus biomarkkerit, välittyvät kautta of the Nrf2 /HO-1 signalointireitin. OMP esti myös tulehdusta edistäviä sytokiini IL-1β, sekä neutrofiilien tarttumista ja tunkeutumisen edustaa vähentämällä sE-selektiini tason ja MPO toimintaa, vastaavasti. Vaikka OMP vaimentua ekspressiota NF-KB: n, mutta se ei voi torjua I /R-vaikutus PPAR-γ, mikä viittaa siihen, että anti-inflammatorinen /immuuni-modu- loiva vaikutus OMP johtuu tukahduttaa NF-KB-geenin ilmentymisen, sekä mahdollisesti muita mekanismit, mutta ei että PPAR-γ.

Vaikka vaikutus OMP on Nrf2 ilmaus ylitti MF _{20, mutta päinvastainen oli ilmeinen on HO-1 ja GSH, ristiriita, joka voi olla liittyy niiden vaikutukset NF-KB. Jälkimmäinen osoittautui toimimaan negatiivisena säätelijänä Nrf2 reitin kilpailemalla sen kanssa sitoutumisesta transkription koaktivaattori CREB: tä sitova proteiini (CBP), ja myös edistää sitoutumisen co-repressori histonideasetylaasi- 3 (HDAC3) antioksidantti vaste-elementin (ARE) [62]; nämä vaikutukset voivat hidastaa Nrf2 välittämän transkription sen loppupään tavoitteista.}

Lisäksi antiapoptoottisten omaisuutta OMP vedonnut paitsi sen kyky lisätä tasolle antiapoptoottisten proteiini, Bcl-2 tai pienentää tasolle apoptoottisen merkki, kaspaasi-3, kuten havaitaan tässä tutkimuksessa, vaan myös vähentämään oksidatiivisen DNA-vaurioita [59].

Lopuksi voidaan todeta, että gastroprotektiivinen vaikutus MF, erityisesti annoksella 20 mg /kg, voidaan katsoa johtuvan aktivoitumisen Nrf2 /HO-1 antioksidantti reitti, PPAR-γ tulehdusta reitin kautta
vähen- tämisessä NF-KB: n, ja lisäämällä antiapoptoottisten proteiinien Bcl- 2 ja vähentämällä kaspaasi-3. Kaikki nämä mekanismit lopulta säilyttää normaalin mahan limakalvon eheyden.

• PLoS ONE: Kaksisuuntainen välinen läpikuuluvuus stressin aiheuttama mahahaava ja masennus alle krooninen stressi
• PLoS ONE: High-Mobility Group Box 1 Estää mahahaavan Healing kautta Toll-kaltainen reseptori 4 ja Reseptori pitkälle Glycation End Products