PLOS ONE: Mangiferin mitiga la úlcera gástrica en ratas La isquemia /reperfundido: La participación de PPAR-γ, el NF-kB y Nrf2 /HO-1 de señalización Pathways

Extracto

Mangiferin (MF), un xanthonoide de Mangifera indica , se ha demostrado que tienen efectos gastroprotectores antisecretores y antioxidantes contra diferentes modelos de úlcera gástrica; sin embargo, su mecanismo molecular no se ha aclarado anteriormente. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue probar su efecto modulador sobre varias vías de señalización utilizando el modelo de isquemia /reperfusión por primera vez. Los animales fueron tratados con MF, omeprazol (OMC), y el vehículo. Los estudios mecanísticos revelaron que MF mediada su efecto gastroprotector en parte a través de la inducción de la expresión de Nrf2, HO-1 y PPAR-γ junto con la regulación negativa de la de NF-kB. Sorprendentemente, el efecto de MF, especialmente la dosis alta, superó a la mediada por OMP excepción de Nrf2. Los resultados moleculares se reflejaron en los biomarcadores medidos, donde el efecto antioxidante de MF se manifiesta por el aumento de la capacidad antioxidante total y el glutatión, además de normalizar el nivel de malondialdehído. Además, disminuyó el MF /elevación de óxido nítrico inducida por R I, un efecto que era mejor que la de OMP. En el suero, MF, dependiente de la dosis, el aumento de óxido nítrico sintasa endotelial, mientras que reduce la isoforma inducible. En cuanto al efecto anti-inflamatorio de MF, redujo el nivel en suero de IL-1β y sE-selectina, efectos que se reflejan en el nivel de los tejidos de la mieloperoxidasa, el marcador de la infiltración de neutrófilos. Además, MF poseía un carácter antiapoptótico se evidencia mediante la elevación de nivel de Bcl-2 y la reducción de la de caspasa-3 en un orden relacionado con la dosis. Como conclusión, se median los mecanismos protectores gástricos dio a entender de MF, en parte, por la modulación del estrés oxidativo, la inflamación y la apoptosis, posiblemente a través de la Nrf2 /HO-1, PPAR-γ /NF-kB vías de señalización.

Visto : Mahmoud-awny M, Attia AS, Abdel-Elah MF, El-Abhar HS (2015) Mangiferin mitiga la úlcera gástrica en la isquemia /reperfundido ratas: La participación de PPAR-γ, el NF-kB y Nrf2 /HO-1 vías de señalización. PLoS ONE 10 (7): e0132497. doi: 10.1371 /journal.pone.0132497

Editor: B. Ashraf Abdel-Naim, Facultad de Farmacia, Universidad de Ain Shams, EGIPTO

Recibido: 18 Marzo, 2015; Aceptado: 15 de Junio ​​de 2015; Publicado: 21 de julio 2015

Derechos de Autor © 2015 Mahmoud-awny et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

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financiación:.. los autores no tienen ningún soporte o financiación reportar

Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

Durante la úlcera gástrica prosperidad enfermedad del upshots congregó a la angustia el equilibrio entre la destrucción y los eventos de protección. El estrés oxidativo es un factor clave que engendra la úlcera gástrica y los resultados en la sobreproducción de radicales libres (FRs) [1]. La isquemia gástrica /reperfusión (I /R) imita arquetipo inducida por el estrés de la úlcera gástrica, en cuyo caso, FRs elevadas, el óxido nítrico (NO), leucocitos molécula de adhesión "E-selectina" [2], la infiltración de neutrófilos [3], y desequilibrio redox [4] juegan un papel importante en su patogénesis. Del mismo modo, el factor nuclear kappa B (NF-kB), un factor de transcripción sensible a redox, tiene un papel fundamental en la lesión I /R [5]. Se regula la expresión de varios genes asociados con la inflamación y la lesión de las células, como la interleucina -1β (IL), -6, moléculas de adhesión celular y la sintasa de óxido nítrico inducible (iNOS). Por otra parte, varios factores median sus gastroprotección contra daño oxidativo mediante la reducción de la respuesta inflamatoria, que incluyen receptor activado por el proliferador de peroxisomas (PPAR) -γ [6, 7] y heamoxygenase-1 (HO-1) [8]. Esta última es la isoforma inducible de HO que responde al estrés, como el estrés oxidativo y sigue siendo ampliamente considerado como un mecanismo de protección contra lesiones de tejidos oxidativo [9].

Uno de los reguladores de la transcripción de HO-1 es la nuclear relacionada con el factor de E2 factor de 2 (Nrf2) [9], que se localiza en el citoplasma en condiciones normales e interactúa con Keap1 (la proteína rica en cisteína sensor molecular Kelch-como ECH asociar proteína 1) que se degrada rápidamente por la vía de la ubiquitina-proteasoma [10, 11]. Por el contrario, en condiciones de estrés oxidativo, Keap1 se oxida y Nrf2 ubiquitinación se baja [11], liberando, por lo tanto, Nrf2 de Keap1. Nrf2 se transloca luego al núcleo para atar con el elemento de respuesta antioxidante del promotor del gen diana [12, 13] causando transactivación inmediata de los genes de codificación. Estos genes incluyen muchos antioxidante enzimática y desintoxicantes genes, tales como glutatión (GSH) peroxidasa /reductasa, HO-1, y GSH-S-transferasa [14].

Mangiferin (MF), una glucosylxanthone de origen natural, posee un efecto gastroprotector a través de sus actividades
antisecretores y antioxidantes, que se han verificado en diferentes modelos animales de ulceración gástrica [15], pero no la /R modelo I, que es el objetivo del presente trabajo. MF se informó para mediar su actividad antioxidante en diferentes niveles de la secuencia oxidativo. Se genera radicales fenoxi MF y se une a los iones metálicos (Fe ^{2 + /3 +) en forma de un complejo de hierro-MF estable que no permite la generación de hidroxilo (OH) radicales y /o oxo-ferril grupos y neutraliza peroxi lípidos /radicales alcoxi, de ese modo, mantener el equilibrio de oxidación-antioxidante celular [16]. A pesar de las reacciones celulares detallados descritos, sin embargo, las vías de señalización molecular no ha sido abordado antes.}

A nivel molecular, el presente objetivo fue evaluar la posible participación de Nrf2 /HO-1, PPAR, y NF -κB vías de señalización en el efecto gastroprotector de MF, además de otros biomarcadores para delinear los posibles mecanismos protectores gástricos mediante el modelo de hipoxia /reoxigenación.

Material y Método

Animales

Varón ratas Wistar, con un peso de 180-220 g (Instituto de Investigación de Oftalmología, Giza, Egipto) se mantuvieron en un 12 horas de luz /oscuridad ciclos, condiciones ambientales constantes y se mantuvieron en un Chow dieta adecuada y agua ad libitum
. Antes del experimento (24 horas) a todos los animales se mantuvieron individualmente en jaulas de fondo de malla de ancho y de ayuno. Los animales fueron manejados de acuerdo con las directrices aprobadas por el Comité para el Cuidado y Uso de Animales de la Facultad de Farmacia, Universidad de El Cairo, El Cairo, Egipto (Número de Permiso: PT 575). Todos los procesos quirúrgicos se realizaron bajo anestesia con tiopental, y se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento.

Medicamentos

Mangiferin [MF] se adquirió de Sigma-Aldrich Chemical Company (St. Louis, MO, EE.UU.) y omeprazol [OMP] de Chemo SA (Lugano, Suiza). Todos los demás productos químicos y reactivos utilizados fueron de grado analítico. MF y OMP se disolvieron en solución salina para ser inyectado por vía intraperitoneal.

La inducción de la isquemia de la mucosa gástrica /reperfusión (I /R) y tratamientos

Se realizó el modelo I /R de acuerdo con el método previamente descrito por Kotani et al. [17] con algunas modificaciones. Brevemente, bajo anestesia con tiopental (50 mg /kg, i.p.), la arteria celíaca rata se ocluyó durante 30 min., Después de lo cual se permitió reperfusión durante 72 horas por desclampaje la arteria. Las ratas fueron asignadas en 5 grupos (n = 7-9); animales en el primer grupo recibieron solución salina y la arteria celiaca fue manejado sin sujeción para servir como el grupo de control con operación simulada. Ratas en los siguientes grupos se sometieron a I /R; el (segundo) grupo no tratado, recibió solución salina y se denota como el control positivo (I /R), mientras que los otros 3 grupos se trataron, con MF (10 mg /kg; MF _{10; tercer grupo), MF ( 20 mg /kg; MF 20; cuarto grupo), y OMP (20 mg /kg; OMP 20; quinto grupo). Todos los tratamientos se realizaron 30 min. antes de la operación y durante 3 días después de la reperfusión.
secciones}

Los exámenes histopatológicos

Estómago, a partir de tres animales representativos de cada grupo, se sumergió inmediatamente en formalina al 10%, solución salina, se incluyeron en parafina, y 5μm se prepararon, se tiñeron con hematoxilina y eosina (H & e), y examinaron microscópicamente

mediciones bioquímicas

al final del tiempo de reperfusión y bajo anestesia con éter profundo, se recogió sangre de. la vena yugular para preparar sueros, a continuación, los animales fueron sacrificados y el estómago se extirpó, se abrió a lo largo de la curvatura mayor, y se enjuagó con una solución salina enfriada con hielo. El grado de daño de la mucosa bruto (índice de úlcera) se evaluó y se expresa como la suma de las longitudes de úlcera por estómago en mm [18]. En pocas palabras, se utilizó una lupa iluminada (3x) para medir la longitud de las lesiones largas (mm) en la parte glandular del estómago, mientras que las lesiones petechea se contaron y cada cinco lesiones fueron representados como 1 mm de úlcera.

Sobre 50 mg de mucosa gástrica se sumergió durante la noche en solución de ARN más tarde, se almacena a -80 ° C hasta la cuantificación de PCR cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR). La mucosa restante fue desechado fuera y se homogeneizaron en solución salina enfriada con hielo (MOP-120, Polonia), utilizando la velocidad máxima durante 1 min. El homogeneizado se centrifugó a 5000 rpm durante 5 min a 4 ° C y los sobrenadantes resultantes se mantuvieron en alícuotas y se almacenó a -80 ° C hasta la determinación de parámetros gástricos.

Estimación de los parámetros de homogeneizado /suero usando ELISA técnica

El homogeneizado /niveles séricos de los siguientes parámetros fueron evaluados utilizando los correspondientes kits de ELISA como se muestra en paréntesis:.. IL-1β, sE-selectina (Abcam Inc., Cambridge, Reino Unido, Cat No. ab100768 y ab171334, respectivamente), iNOS, eNOS (EIAab, Wuhan, china, Cat No. E0837r y E0868r, respectivamente), leucemia de células B /linfoma-2 (Bcl-2;. USCN Life Science Inc., Wuhan, china, gato . Nº E90778Bo) y la caspasa-3 (Cusabio Biotech Co., Wuhan, china, Cat. Nº CSB-E08857r). Cada biomarcador se procesa de acuerdo con los procedimientos de los fabricantes proporcionados. El suero capacidad antioxidante total (TAC) se midió utilizando el método de Benzie y Starin [19]. Brevemente, tripyridyltriazine férrico (Fe ^{3 + -TPTZ) complejo se redujo a la forma ferrosa por los antioxidantes presentes en la muestra a un pH ácido, para producir un color azul intenso que se puede controlar mediante la medición del cambio de absorbancia a 593 nm. El cambio está directamente relacionado con la potencia combinada o total de la reducción de donante de electrones antioxidantes no enzimáticos presentes en la mezcla de reacción. El nivel de TAC se expresa como M /L.}

Estimación de la actividad gástrica /contenido de mieloperoxidasa (MPO), malondialdehído (MDA), glutatión reducido (GSH) y el total de óxido nítrico (NOx).

La actividad de MPO (U /g), un marcador de capacidad de infiltración de neutrófilos tejido, se evaluó de acuerdo a Bradley et al. [20]. El método se basa en la medición de la peróxido de hidrógeno dependen de la oxidación de o-dianisidina, catalizada por MPO, lo que resulta en la formación de un compuesto que muestra un aumento de la absorbancia a 460 nm. Como un índice de sustancias de ácido tiobarbitúrico peroxidación lipídica reactivas (TBARS), representada por el MDA, se utilizó para determinar el daño oxidativo, siguiendo el método de Mihara y Uchiyama [21]. El aducto MDA-TBA desarrolla color rosado, que se extrajo con n-butanol y se mide en dos longitudes de onda, viz
., 520 y 535 nm. El método descrito por Ahmed et al. [22] fue adoptada para evaluar los grupos sulfhidrilo que no son proteínas (principalmente GSH) por reacción con el reactivo de Ellman después de precipitar los grupos SH de proteínas. La reacción con el reactivo de Ellman formó un color amarillo estable de 5 ácido mercapto-2-nitrobenzoico, que se midió colorimétricamente a 412 nm (mg /gm).

mucosa gástrica producción de NO se calculó indirectamente como nitrito de concentración /nitrato de acuerdo con el método de Miranda et al. [23], donde se utilizó tricloruro de vanadio de reducir el nitrato en nitrito. La rosa azo-colorante producido por la reacción de nitrito con ácido sulfanílico seguido por el posterior acoplamiento con N- (1-naftil) etilendiamina se midió colorimétricamente a 540 nm y se expresó como NOx M /gm.

cuantitativa en tiempo real (RT) -PCR

ARN total fue extraído de la mucosa gástrica utilizando Simplemente P ARN total kit de Extracción (BioFlux, Hangzhou, china). La pureza del ARN obtenido se verificó espectrofotométricamente a 260/280 nm. Igual cantidad de ARN (0,368 g) se retrotranscribió en el ADN complementario de primera hebra (ADNc) a 37 ° C durante 50 min. utilizando 200 U /l M-MuLV transcriptasa inversa (SibEnzyme, Novosibirsk, Rusia), 1 l de hexámero aleatorio (Qiagen, LRS Laboratories, Inc. Corea), y 0,1 M de DTT en una mezcla de reacción 50 mL. Para evaluar la expresión de genes diana antioxidantes y asociados con la inflamación, RT-PCR se realizó con verde SYBR PCR Master Mix (Qiagen) como se describe por el fabricante. En pocas palabras, en un volumen de reacción de 25 l, se añadieron 5 l de cDNA a 12,5 l de 2x SYBR verde Master Mix y 2,5 l (2,5 M) de cada cebador. Las secuencias de cebadores fueron: PPAR-γ sentido cebador 5'-GCGGAGATCTCCAGTGATATC-3 '; cebador antisentido 5'-TCA GCGACTGGGACTTTTCT-3 '; NF-kB p65 cebador sentido 5'-TGCAGAAAGAAGACATTGAGGTG-3 '; cebador antisentido 5'AGGCTAGGGTCAGCGTATGG-3 '; Nrf2 cebador sentido 5'-ATGGCC ACACTTTTCTGGAC-3 '; cebador antisentido 5'-AGATGTCAAGCGGGTCACTT-3 '; HO-1 cebador sentido 5 'CGTGCAGAGAATTCTGAGTTC-3'; cebador antisentido 5'AGACG CTTTACGTAGTGCTG-3 '; y gliceraldehido-3 fosfato deshidrogenasa (GAPDH) cebador sentido 5'-GGGCAGCCCAGAACATCA-3 '; cebador antisentido 5'-TGACCTTG CCCACAGCCT-3 '. Las reacciones de PCR incluyeron 15 min a 95 ° C para la activación de HotStarTaq ADN polimerasa, seguido de 45 ciclos a 94 ° C durante 15 s (desnaturalización), 55 ° C durante 30 segundos (hibridación), y 72 ° C durante 30 s (extensión ). La expresión relativa se calculó a partir del 2 ^{-ΔΔCT fórmula [24].}

El análisis estadístico

Los datos se expresaron como media ± E.E.M de 7-9 animales. Las comparaciones estadísticas entre los medios se llevaron a cabo usando análisis unidireccional de la varianza (ANOVA), seguido por prueba de Student-Newman-Keuls. La significación estadística de la diferencia se consideró a P
< 0.05.

Resultados

Efecto de MF y OMP en la I /R índice de úlcera inducida por

MF, dependiente de la dosis, prohibido el /la lesión gástrica inducida R-yo, como presentada por los valores de índice de úlcera (Tabla 1) y el efecto de MF _{20 era comparable a la ofrecida por OMP 20.}

efecto de MF y OMP en la expresión de ARNm de genes antioxidantes

Como se ilustra en la figura 1A y 1B, la respuesta adaptativa frente a la lesión por I /R se evidenció en la regulación al alza de Nrf2 y HO-1 mRNA, lo que explica la razón detrás del elevado nivel de GSH en el grupo I /R sin tratar. Estos upregulations mRNA fueron aún más vívida en los grupos tratados, señalando, por lo tanto, a la capacidad antioxidante de MF.

Efecto de MF y OMP en parámetros redox

Tal como se presenta en las Tablas 2 y 3 el insulto I /R causó un desequilibrio en el estado oxidativo /nitrosativo. Un aumento en el nivel de MDA (182%) y la producción de NOx (187,6%), en paralelo con 5,1 pliegues aumentar la expresión de iNOS, que se percibía en el grupo no tratado I /R. Por el contrario, la lesión I /R reduce a la mitad la eNOS beneficioso y redujo el TAC (69,7%), en comparación con grupo de tratamiento simulado. Todas estas alteraciones se revirtieron por OMP, así como MF, de una manera dependiente de la dosis. En casi todos los parámetros MF _{20 tuvo el efecto prominente. En cuanto a GSH, el modelo E /R, de forma inesperada, la elevó en un 32%, un efecto que fue reforzada por los diferentes regímenes de medicamentos.}

Efecto de MF y OMP en la expresión del ARNm de PPAR-γ y NF -κB genes

Como se muestra en la figura 1C, los animales con I /R lesión revelaron una disminución significativa en la expresión gástrica del PPAR-γ anti-inflamatoria (25% del nivel de tratamiento simulado), con un marcado incremento en que el factor de proinflamatorio NF-kappa B (11,9 veces) (Fig 1D). Curiosamente, MF grupos tratados fueron capaces de contrarrestar los efectos de E /R-relacionados de acuerdo con el nivel de dosis probado. OMP, por otra parte, mostró un efecto menor que MF hizo el NF-kB, pero no alteró el PPAR-γ disminuido.

Efecto de MF y OMP de citoquinas inflamatorias gástricas y la infiltración de neutrófilos

la Tabla 4 muestra la /daño gástrico R mediada I, que agrava los biomarcadores inflamatorios. Se aumentó los niveles séricos de IL-1β, sE-selectina, y la actividad MPO gástrico por 5.2, 5.6, y 2.2 pliegues, respectivamente, en comparación con el simulacro de operación en grupo control. Todas estas alteraciones se interrumpieron significativamente por el tratamiento con MF en una forma dependiente de la dosis. No obstante, el MF _{20 efectos reemplazó la mediación de la OMP patrón de referencia. Estas observaciones indican que la MF puede modular las citoquinas inflamatorias y neutrófilos reclutamiento para mitigar I /R lesión inducida.}

Efecto de MF y OMP sobre los biomarcadores apoptóticas

Tal como se presenta en la Tabla 4, la I /R insulto disparé apoptosis de la mucosa gástrica como se evidencia por el aumento de 6,85 pliegues de nivel de la caspasa-3. En el mismo contexto, I /R disminuyó el nivel del marcador anti-apoptótica de Bcl-2 (59%). Sin embargo, la administración de MF, de una manera dependiente de la dosis, se ha detenido estas alteraciones significativamente, efectos que han superado las mediadas por OMP.

Efecto de MF y OMP de los cambios histopatológicos gástricos

La mejora efectos de los diferentes regímenes de medicamentos en los biomarcadores ensayados fueron confirmados además por los hallazgos histológicos se presentan en la figura 2. La figura ilustra las fotomicrografías de la mucosa del estómago, que muestran [a] normal de la mucosa gástrica (mu), submucosa (sm) y muscular ( ml) de la arquitectura en la sección de ratas con operación simulada. [B] secciones I /R revelan mucosa (m) sloughed, juxtraposed con hemorragia subyacente (flecha negro), [C] severa congestión vascular (V), focal células inflamatorias de infiltración (m), principalmente como neutrófilos y edema (O) en submucosa. [D] MF _{10 sección divulga solamente la congestión en los vasos sanguíneos de la submucosa (V) con leve infiltración de células inflamatorias (flecha amarilla) y /o edema. Por otra parte, [E] MF 20 sección, similar control de la operación de placebo a, muestra la estructura histológica normal intacta, excepto por una congestión vascular muy leve (v) en la submucosa; el MF 20 efecto, al de los OMP [F], donde los vasos sanguíneos congestionados (V) y el edema en la capa submucosa todavía se detectan en las secciones de OMP.}

Discusión

Aunque estudios previos han documentado el antioxidante [15] y anti-inflamatorias [25] capacidades de MF, sin embargo, ninguno ha aclarado las vías moleculares potenciales involucrados en la reparación de los sistemas redox inflamatorias /perturbados. Por lo tanto, en el presente trabajo se ha verificado la expresión de la mucosa gástrica de Nrf2 /HO-1 a entender si esta vía de señalización está implicada en el mecanismo antioxidante MF. Además, el estudio dirigido la expresión de NF-kappa B y PPAR-γ para explorar también parte de la maquinaria molecular anti-inflamatoria posible MF.

Nuestros estudios de transducción de señales revelaron que I /R tiene upregulated significativamente el ARNm de Nrf2 y HO-1 que apunta a un posible efecto de adaptación del cuerpo contra el insulto de I /R dañar; estos hallazgos imitan la de Pan y compañeros de trabajo [26] en un modelo de retina I /R. Enhanced HO-1 en la expresión de proteínas, regulado por Nrf2 [27], puede ocurrir en respuesta al estrés oxidativo [28] y las enfermedades inflamatorias y es ampliamente aceptado como un mecanismo de protección contra lesiones de tejidos oxidativo [9], hechos que apoyan nuestros hallazgos. MF, por otra parte, afirmó su efecto antioxidante elevando aún más la expresión de Nrf2 y HO-1, los resultados que fueron registrados previamente en un modelo hepatotóxico [29]. A lo mejor de nuestro conocimiento, este hallazgo es la primera evidencia directa de un papel gastroprotector de MF través de la vía Nrf2 antioxidante /HO-1 en el modelo de úlcera I /R-inducida.

El carácter antioxidante de MF fue manifestado adicionalmente en este documento por su capacidad para combatir la elevación I /R-inducida en peróxidos de lípidos [30] y la disminución de TAC [31]. Sin embargo, el efecto de la I /R y MF en GSH mostró el mismo patrón observado en Nrf2 y HO-1 de expresión, donde I /R causó un aumento sutil, pero significativo de GSH, un efecto que fue reforzado por MF [32] . Esta acción, apunta a una posible respuesta compensatoria contra la lesión I /R y vincula GSH con la vía de señalización Nrf2 /HO-1 como apoyado hasta ahora por Das et al. [29]. La correlación entre GSH y Nrf2 puede estar relacionado con la diafonía molecular entre el Nrf2 upregulated y de la γ-glutamilcisteína ligasa [10, 33], una enzima que cataliza la etapa limitante de la velocidad en la síntesis de GSH [34]. Además, HO-1 papel antioxidante se debe a su capacidad para catalizar la descomposición del hemo pro-oxidante en el hierro, biliverdina, y monóxido de carbono [35]; biliverdina se convierte entonces en la bilirrubina, que actúa como un antioxidante frente a la peroxidación de los lípidos [36].

Además de reparar el estado redox perturbado, MF extendió su efecto como para inducir la nitrosative estrés, también. MF opone el efecto I /R de los niveles de eNOS /iNOS, donde se restaura la actividad de la enzima constitutiva eNOS [37] y la disminución de la isoforma inducible nociva [38]. Por lo tanto, se espera que el nivel elevado de iNOS en el grupo no tratado es responsable del nivel excedente de NOx, que socava la integridad de la mucosa gástrica vía
su interacción con el anión superóxido y la formación de peroxinitrito [39]. Este último es un radical libre potente que perturba macromoléculas celulares a través de la peroxidación de lípidos, la función mitocondrial directa, inhibición de la membrana de Na ^{+ /K + - ATPasa, y la modificación de proteínas oxidativo [40]. Por el contrario, la producción mediada por MF de NOx puede ser expulsado de la eNOS restaurados, y no iNOS, apoyando, por lo tanto, los antioxidantes /propiedades de eliminación de radicales libres de MF [16]. El NO de protección apaga los radicales libres con la consiguiente preservación de GSH en la mucosa gástrica; GSH actúa tanto como un agente de barrido nucleófila de superóxidos y como un cofactor en la reducción peroxidasa mediada GSH de peróxidos de hidrógeno [41].}

Los eventos perjudiciales que siguen el insulto I /R incluyen el aumento de la liberación de mediadores proinflamatorios y reclutamiento de leucocitos, además de molestar a los oxidantes /maquinarias nitrosative [42]. En el estudio actual, MF validado su efecto inmuno-modulador /anti-inflamatoria, que se habían documentado anteriormente [25, 43], mediante la inhibición de IL-1β [43], E-selectina [25] y de neutrófilos infiltración [44] en otros diferentes modelos. Estos efectos pueden estar relacionados en parte a los cambios MF-moduladores en el nivel molecular. MF indujo la expresión del gen de PPAR-γ, junto con la regulación a la baja de los padres inflamatoria factor de transcripción /mediador NF-kappa B, lo que dificulta, por lo tanto, el efecto de I /R. Estudios anteriores han informado de que está mediado el efecto perjudicial I /R parcialmente a través de la supresión de la
ARNm PPAR-γ [7, 45], que es un factor de transcripción que actúa como un regulador pleiotrópico influyente de anti-inflamación, antioxidante, y procesos de limpieza fagocito mediada. Aparte de su efecto genómico directa, PPAR se encontró para interactuar negativamente con otros factores de transcripción como NF-kappa B, que es la base de muchos aspectos el efecto anti-inflamatorio /inmunomodulador de PPAR [25, 46], hechos que el tono con nuestros hallazgos. Además, se informó de la mayor expresión de PPAR para inhibir la producción de NOx /iNOS [47], la oferta, por lo tanto, una explicación para la inhibición mediada por MF en iNOS. PPAR también impide las citoquinas macrófagos impulsada y moléculas de adhesión de leucocitos, como se ve en el presente documento, en parte vía
la supresión de la expresión del gen de NF-kappa B [25, 48]. Además, se informó de MF para reducir la adhesión de PMNs al ​​endotelio y vigilado en contra de su infiltración en el tejido gástrico [49], junto con la modulación de PPAR-γ y la expresión de NF-kB. Estos resultados apoyan nuestra en E-selectina, iNOS, y MPO, como se mencionó antes. Además, el MF inducida por HO-1 puede racionalizar la regulación al alza el carácter anti-inflamatorio de MF, a través de su
monóxido de carbono subproducto, lo que confiere una propiedad anti-inflamatoria [50]. A tal fin, los resultados experimentales de nuestro estudio identificar otro mecanismos gastroprotectores, tanto a nivel celular y molecular mediante el cual MF protegida mucosa gástrica contra I lesión /R-inducida. Estos resultados corroboran los hallazgos de estudios anteriores en un modelo experimental de colitis [51, 52], y de definir la acción antiinflamatoria de MF.

Anteriormente Wu et al. [53] informaron de que la sobreexpresión de PPAR-γ también protege el potencial de membrana mitocondrial y previene la apoptosis por la regulación positiva de la expresión de las proteínas de la familia Bcl-2 anti-apoptóticas. Del mismo modo, el monóxido de carbono, el subproducto de la actividad de HO-1, confiere una actividad anti-apoptótica por la sobre regulación de la molécula anti-apoptótica Bcl-2 y la baja regulación de la señal pro-apoptótica Bax [54]. Los datos de este estudio demostraron que I /lesión gástrica R inducida se asocia también con la apoptosis como lo demuestra la marcada reducción de Bcl-2 [55] y la elevación de la caspasa-3 [56], mientras que MF revirtió la I /R apoptosis inducida por una elevación dependiente de la dosis del nivel de Bcl-2, y la reducción del nivel de la caspasa-3. El efecto anti-apoptótico MF coincide con los resultados de Ghosh et al. [38] y puede atribuirse a la regulación al alza mediada por MF de PPAR-γ y /o los niveles de ARNm de HO-1

Todos estos hallazgos se reflejan más en los cambios histológicos.; el insulto I /R causado derramamiento de la capa protectora epitelial y dio lugar a una hemorragia subyacente con una congestión marcada de los vasos sanguíneos junto con células inflamatorias de infiltración en la lámina propia, un efecto que designa cese el flujo de sangre que fue acompañado por edema. La congestión de los vasos sanguíneos puede ser consecuencia de la elevación del vasoconstrictor endotelina-1 en el tejido gástrico [57], el aumento de la infiltración de leucocitos [58], y /o disminución de la actividad de eNOS como se documenta en el estudio actual. De acuerdo con ello, I /R no sólo estaba acompañado por la formación de radicales libres, sino también con una clara disminución de los niveles de antioxidantes endógenos y aumento de la infiltración de células inflamatorias, alteraciones que fueron obstaculizados por MF, sobre todo al nivel de dosis alta, donde histológico normales se observó estructura.

en cuanto a la OMP de referencia de drogas, que ejerce su efecto gastroprotector por su acción antioxidante, antiapoptótico [59], y anti-inflamatoria [60] acciones, más allá de la supresión de ácido [61], se delineó la presente, el eventos moleculares, que contribuyen a estos efectos. En el presente estudio, hemos documentado que OMP efectos antioxidantes, evidenciado mediante la inhibición de la peroxidación lipídica y el aumento de los marcadores biológicos de defensa, están mediados a través de la vía de señalización
Nrf2 /HO-1. OMP también inhibió la citoquina proinflamatoria IL-1β, así como la adhesión de neutrófilos y la infiltración como se representa mediante la reducción de nivel de sE-selectina y la actividad MPO, respectivamente. Aunque OMP downregulated la expresión de NF-kappa B, sin embargo, no podía combatir el efecto de E /R en PPAR-γ, lo que sugiere que el efecto inmuno-modulador /anti-inflamatoria de OMP se debe a la supresión de la expresión del gen NF-kappa B, y posiblemente otra mecanismos, pero no la de PPAR-γ
.

a pesar de que el efecto de la OMP en la expresión Nrf2 superó a la de MF _{20, sin embargo, lo contrario era obvio en HO-1 y GSH, una discrepancia que pueden estar vinculado a sus efectos sobre la NF-kB. Este último se demostró para actuar como un regulador negativo de la vía Nrf2 compitiendo con él por la unión a la proteína de unión CREB-co-activador transcripcional (CBP) y también para promover la unión de la co-represor de la histona desacetilasa 3 (HDAC3) al elemento de respuesta antioxidante (ARE) [62]; estos efectos pueden retardar la transcripción Nrf2 mediada de sus objetivos de abajo.}

Además, la propiedad antiapoptótico de OMP se basó no sólo en su capacidad para aumentar el nivel de la proteína antiapoptótica Bcl-2 o para disminuir el nivel de el marcador de apoptosis, la caspasa-3, tal como se detecta en el presente estudio, sino también en la reducción de daño oxidativo del ADN [59].

Finalmente, se puede concluir que el efecto gastroprotector de MF, especialmente a una dosis de 20 mg /kg, puede ser atribuido a la activación de la Nrf2 /HO-1 vía antioxidante, la vía anti-inflamatoria PPAR-γ a través de la regulación negativa de
NF-kappa B, y para el aumento de la proteína antiapoptótica Bcl 2 y la disminución de la caspasa-3. Todos estos mecanismos, finalmente, mantener la integridad de la barrera mucosa gástrica normal.

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