Identifikavimas naujų ciklooksigenazę-2-priklauso nuo genų Helicobacter pylori infekcijos in vivo

Identifikavimas naujų ciklooksigenazę-2-priklausomų genų Helicobacter pylori
infekcijos in vivo
tezės
Background
Helicobacter pylori pervežimas yra labai svarbus faktorius, į gerybinės ir neoplastiniu skrandžio patogenezėje ligos. Ciklooksigenazės-2 (COX-2) yra sužadinamoji pagrindinis fermentas arachidono rūgšties metabolizmo ir yra centrinis tarpininkas uždegimas ir vėžio. Išraiška, COX-2 geno pervežimas yra iki-reguliuojama skrandžio gleivinės metu H. pylori
infekcijos tačiau pathobiological pasekmės šio sustiprinto COX-2 raiškos dar nėra būdinga. Šio tyrimo tikslas buvo nustatyti naujus genus žemyn srove Cox-2 in vivo pervežimas modelio, tokiu būdu nustatant galimus tikslus ir į COG-2 vaidmens tyrimo H. pylori
patogenezę ir inicijavimas anksto vėžinių pokyčių.
rezultatai
genų ekspresijos, profiliai skrandžio gleivinę, pagal peles, paveiktas su konkrečiu COX-2 inhibitorius (NS398) arba transporto priemonės buvo analizuojami skirtingais laiko kiekis (6, 13 ir 19 savaitę) po H. pylori
infekcijos. H. pylori
infekcija paveikė 385 genų ekspresiją per eksperimentinį laikotarpį, įskaitant reguliavimo skrandžio fiziologijos, platinimo, apoptozės ir gleivinės gynybos. Sąlygomis, COX-2 slopinimo, 160 tikslinės genai reguliuoja kaip H. pylori
infekcijos rezultatas. Cox-2 priklauso poaibis įtraukti tuos įtakojančių skrandžio fiziologiją (gastrinas, Galr1
), epitelio barjeras funkciją (Tjp1, connexin45, Aqp5
), uždegimas (Icam1
), apoptozė (Clu
) ir proliferacija (Gdf3, Igf2
). Vien Gydymas NS398 sukėlė diferencialinę išraišką 140 genų, iš kurių 97 buvo unikalus, rodo, kad šie genai reguliuoja sąlygomis bazinio COX-2 ekspresija.
Išvada
Šis tyrimas nustatė keletą naujų COX-2 skydelį priklausomų genų įtaką tiek pagal įprastas ir sukeliamas H. pylori
infekcijos uždegiminėms ligoms. Šie duomenys pateikti naujų svarbių ryšius Cox-2 ir uždegiminių procesų, epitelio remonto ir vientisumą.
Faktai
Helicobacter pylori
infekcija yra susijusi su skrandžio sutrikimų įvairovė, įskaitant lėtinį gastritą, dvylikapirštės žarnos opaligė, gleivinės, susijusio limfinės audinių (MALT) limfoma, ir skrandžio adenokarcinoma [1, 2]. Bakterijos patogeniškumas yra nustatomas pagal epidemiologinių poveikių, taip pat bakterijų ir priimančiųjų veiksnių [1, 3]. Bakterijų kolonizacija skrandžio gleivinės sukelia vystymosi lėtinė uždegiminė įsiskverbti, kuris yra lydimas sustiprinto išleidimo uždegimo mediatorių, augimo faktorių ir reaktyvių deguonies metabolitų [2, 4].
Sužadinamoji COX-2 fermentą ir jos constitutively išreiškė izoformos COG-1 yra pagrindiniai reguliatoriai žmogaus prostaglandinų metabolizmo [5-7]. Galutiniai produktai, jų fermentinį aktyvumą sudaro prostaglandinų ir tromboksanai, kurie buvo priskirti kritiniams reguliavimo pagrindinių fiziologinių ir patologinių procesų, įskaitant trombocitų agregacijos, gimdymui, T-ląstelių vystymąsi, uždegimas ir vėžys [5-7] skydelį. COX-2 fermentinis aktyvumas yra iš esmės reguliuojama per de novo
sintezės cox-2 baltymų [5, 6].
Skrandžio, sustiprintos cox-2
išraiška buvo nustatyta, per H. pylori
-triggered gastritas, taip pat gleivinių streso pažeidimų, viršutinės virškinamojo trakto opų ir po išemijos /reperfuzijos pažeidimų [8-10]. COX-2 ir su juo susijusių prostanoidais taip pat atrodo, kad prisidėti prie skrandžio vėžio patogenezėje. Skrandžio adenokarcinoma ir ikivėžinių gleivinės pakitimai dažnai per išreikšti COX-2
geną [11-14], ir padidėjęs naviką COX-2 lygis, atrodo, susijęs su gilesne naviko invazijos [15] ir dažnumo padidėjimą limfinės metastazių [ ,,,0],16]. Be to, buvo įrodyta, COX-2 inhibitoriai stipriai slopina proliferaciją žmogaus skrandžio vėžio ląsteles in vitro
[1, 17, 18], taip pat eksperimentinės skrandžio adenokarcinomos nuogas pelių [17]. Neseniai tačiau daug ataskaitų ginčijo nuomonę, kad tai kovos navikas veikla yra dėl to, COX-2 patį [19]. Asmenys, vartojantys COX-inhibitoriais buvo pranešta rodyti mažesnį pavojų vystymuisi skrandžio karcinoma [20], tačiau pranešama širdies ir kraujagyslių šalutinis poveikis, susijęs su lėtiniu koksibų administravimo reiškia, kad klinikinis naudojimas COG-inhibitorių antikancerogenas gydymo prieštaringai (Apžvalgą į [21]) išraiška, COX-2 geno pervežimas.
Todėl atrodo, kad svarbus žingsnis gerybinių ir piktybinių skrandžio ligų patogenezę, todėl paaiškinimas ne tik jo indėlį į H. pylori
-dependent patogenezė, bet ir tolesni padariniai Cox slopina vaistų yra specialios klinikinės reikšmės.
Mes jau anksčiau įrodė, kad H. pylori
gali tiesiogiai įtakoti išraišką COX-2
skrandžio epitelinių ląstelių per transkripcijos mechanizmai, ir nustatė MAPK-ERK priklauso nuo aktyvavimo proksimalinio NVS
-regulatory CRE-EBOX elementas yra pagrindinis žingsnis H. pylori pervežimas ir reakcijos į COX-2 geno pervežimas [22] , Nors šie rezultatai dar kartą patvirtino Patofiziologinis ryšį tarp bakterijos ir COX-2
, molekulinės vykdymo pasroviui nuo COX-2 metu skrandžio H. pylori
infekcijos liko neatpažinta.
Čia mes analizuojami genų ekspresiją skrandžio epitelio pelių, vartojusių COX-2 inhibitorius konkretaus NS398, skirtingais laiko momentais po H. pylori
infekcijos naudojant mikrotablic DNR ir galėjo nustatyti genų ekspresijos profilius reguliuojamas H. pylori pervežimas per COX-2-priklauso ir nepriklausomi mechanizmus.
rezultatai
nustatymas COX-2 inhibitorius koncentracijos
nustatyti tinkamą koncentraciją inhibitorių mūsų H. pylori
infekcija modelis, PGE2 koncentracija buvo matuojama skrandžio gleivinės po H. pylori
infekcijos buvimą ar nebuvimą, COX-2 slopinimo su NS398. Infekuotų pelių parodė, 50% padidinti PGE2 lygmeniu skrandžio gleivinės. Gydymas užkrėsto pelių su NS398 (10 mg /kg) lėmė Europos Sąjungos oficialiajame PGE2 Toks sumažinimas, kad ji nesiskyrė nuo kontrolinės grupės (duomenys neparodyti). Todėl padarė išvadą, kad 10 mg /kg pakako slopinti Cox 2 veiklą nuo A H. pylori
infekcijos buvimo.
ilgalaikio vartojimo specifinio COX-2 inhibitorius NS398 neturi didelės įtakos bakterijų kolonizacija ar uždegimo balų
Visi pelės užkrėstų grupių buvo kolonizuota H. pylori
, kaip nustatyta kiekybinio kultūrą. Bakterijų apkrova padidėja tik šiek tiek tarp 6 ir 19 savaičių (1a paveikslas) laikotarpį. neatvyko administracija NS398 turėti didelį poveikį bakterijų kolonizacija. H. pylori infekcija
neryškiai į viduriniosios klasės gastritas užkrėstų pelių, kurios turėjo tendenciją didinti sunkumo laikui bėgant, bet nesukėlė opa formavimo ar įrodymų metaplazijos (žr 1b paveiksle, ir 1C pav palyginimų pelių į 13 savaitę gali kiekvienoje grupėje). Šie pastebėjimai atitinka ataskaitų iš kitų studijų, kur pelėms buvo užsikrėtę panašių laiką [23, 24]. Histologinis tyrimas parodė, administravimą transporto priemonės ir vien NS398 sukelia žemos kokybės gastritas laikui bėgant (1b pav.) 1 pav administracija konkretaus COX-2 inhibitorius NS398 neturi didelės įtakos bakterijų kolonizaciją ar uždegiminėmis balus. A. Gydymas NS398 neturi įtakos H. pylori
kolonizacijos C57 BL /6 pelių. KSV Gauta iš individualios pelių skrandžiai ne 6, 13 ir 19 savaičių po infekcijos (pildomas apskritimai). B. pasiskirstymas patologijos balai užkrėstų ir kontrolės pelių. Patologija pelnytas pagal Sidnėjaus sistemą taip: nieko uždegimą (0), žemos kokybės, ne -active gastritas ir žemos kokybės švelnus aktyvumo gastritas (1), viduriniosios klasės lengvas aktyvus gastritas (2). C. hematoksilinu ir eozinas tamsintas parafino skyriai nuo 13 savaites po infekcijos, atstovybes vaizdus ne iš infekuotų pelių, vartojusių tik transporto priemonė (V), ne užkrėstų pelių, vartojusių NS398 (NS398) užkrėstų pelių (B + HP
) ir infekuotų pelių gydomi NS398 (NS398 + Hp
). 13 savaitę (17 savaičių po infekcijos), vidutinio sunkumo aktyvus gastritas buvo stebimas tiek V + Hp
ir NS398 + HP
grupes. Originalus priartinimas 20 x, mastelis baras = 50 mkm
RNR iš gyvūnų, turinčių panašias balai ir kolonizavimo lygiais (3 pelėmis kiekvienai grupei) buvo sujungtos ir naudojami atlikti tris eksperimentinius palyginimų. Neužkrečiama, palyginti su užsikrėtusiu (V vs
v + HP
), užsikrėtę prieš NS398 apdoroti ir užsikrėtę (B + HP vs pervežimas NS398 + Hp
) ir neužkrečiama, lyginant su užkrėstas ir NS398 apdoroti (V vs pervežimas NS398) (2A pav). Eksperimentas buvo sukurta, kad galėtume nustatyti genų ekspresijos profilius pelių, vartojusių transporto atskirai arba NS398 į transporto priemonės skrandžius ir izoliuoti juos nuo H. pylori
infekcijos poveikio. 2 pav Pasaulinis genų ekspresijos į skrandžio gleivinės, infekuotų H. pylori pelių. A. Veno diagrama, iliustruojanti skirtingai išreikštas genų analizę (daugiau nei 3 kartus aukštyn arba žemyn) per tyrimo laikotarpį. Genų pravažiuojančių ribinės kriterijus numeris nurodomas kiekvienam eksperimento Palyginimui: Infected palyginti neužkrečiama pelėms (V vs pervežimas V + Hp
), užsikrėtę pelėms, palyginti NS398 apdoroti ir infekuotų pelių (B + HP vs
NS398 + HP
) ir neužkrečiama pelės palyginti NS398 apdoroti (V vs pervežimas NS398). Skaičiai skliausteliuose atstovauti skaičių viso genus skirtingai išreikštas trijų eksperimentinių palyginimų. B. Tendencijų sklypai atstovaujanti pasaulinį genų ekspresiją išmatuota 3 eksperimentinių palyginimų. Kiekvienas taškas Y ašyse yra vidutinis išraiška santykio genų pravažiuojančių ribinės kriterijus savaitėmis 6, 13 ir 19 po gydymo pradžios, t viena eilutė atitinka vieną geną. Į 33 infekcijomis susiję genai, kurie buvo skirtingai išreikštos kaip NS398 gydymo rezultatas yra paryškinti raudonai visiems palyginimų. COX-2 (Ptgs2) žymima geltona linija.
Pasaulinis genų ekspresija skrandžio gleivinės H. pylori
užkrėsti peles Viesbutis The naudojami šiame tyrime RNR buvo išskirta iš skrandžio gleivinės
tik ir histologiniai tyrimai skrandžiams parengtas tokiu būdu patvirtino, kad raumenų ar kitų jungiamojo audinio grindžiama gleivinę nebuvo įtrauktos į mūsų preparatų (nerodomas). Į genų ekspresijos pokyčiai matomi šiame tyrime todėl labai tikėtina, kad atspindėtų transkripcijos reakcija apsiriboja tuo skrandžio epitelinių ląstelių ir besivystančio Limfocitinio ir granuliocitų infiltratų, kurie apibūdina lėtinis H. pylori
infekcija. Nutraukimus dėl reikšmingų pokyčių genų ekspresijos buvo nustatyti p < 0,05 ir trys kartus pokytis [25].
H. pylori
užkrėstų pelių, 385 genų tyrimo (2a pav) metu išlaikė ribinės reikšmės kriterijus bent viename metu. H.pylori
užsikrėtę pelių, kurios buvo apdorotos NS398 turėjo 160 diferencijuotai išreikšti genuose. Pelėms, gydytiems vien NS398 140 genai buvo skirtingai išreiškiama (2a pav). Naudojant atimtiniam požiūrį, genai buvo suskirstyti į pogrupius, atspindinčių svarbiausius eksperimentinius poveikį. H.pylori
infekcijos, COX-2 slopinimo, ir COX-2 slopinimo infekcijos metu
H. pylori infekcija
sukėlė sudėtingi rašto pasaulinės genų ekspresijos per eksperimento (2B pav) laikotarpį. Gydymas užkrėsto pelių su NS398 lėmė atskirą genų ekspresijos parašą, kuris buvo papildyti infekcijos poveikio. Trisdešimt trys iš genų skirtingai išreikštos užkrėstų pelių buvo NS398 gydymo (raudona pabrėžė genus), be to, dar 107 genai buvo išreikšta tik NS398 gydytų ir užkrėstų pelių rezultatas. Tokiu būdu iš genų pogrupis apibrėžta Cox-2 priklausomų genai buvo nustatyta. Mes suskirstyti šiuos genus į pogrupius palengvinti tolesnę analizę remiantis genų ontologija kategorijas, naudojant DAVID įrankis genų Anotacija NCBI http:... //David abcc ncifcrf valst /. 1 lentelėje yra pasirinktas COX-2 priklausomas genus (pilnas sąrašas gali būti rasti papildomų failų 1 lentelė S2),. Dauguma genų parodė svyruojantį išraiška modelis, nurodantis, kad kontrolės mechanizmus ir kaupiamąjį poveikį tiek infekcijos ir COX-2 slopinimo vaidina genų ekspresijos vaidmenį per time.Table 1 eksperimentinio projektavimo
savaitė

-4 & -3
0
6
13
19
Pelės (N)
Automobilio tik
(V )
17
Mock infekcija
gydymas prasideda
5
6
6
NS398 (10 mg /kg)
(NS398)
17
maketas infekcija
gydymas prasideda
5
6 6
automobilis plius H.pylori
(B + HP
)
24
užkrėsti SS1
gydymas pradeda
NS398 (10 mg /kg), taip pat H. pylori
(NS398 + HP pervežimas)
8
8
8 24
užkrėsti SS1
gydymas prasideda
8
8
8
po savaitės 0 pelėms kasdien SC. injekcijos NS398 ar transporto priemonės vien kaip nurodyta. Pelės buvo nužudyti 6. 13 ir 19 savaičių po gydymo ir H. pylori pervežimas kolonizacijos (CFU) pradžios, tada patologijos balai buvo nustatyti ir buvo parengta bendra RNR.
Poveikis NS398 skrandžio genų ekspresijos profilius
Ankstesni tyrimai dėl COX-2 inhibitorius NS398 į in vitro
įvairovė ir in vivo
modelių parodė, kad yra specialus inhibitorius COX-2 su mažai arba jokios įtakos glaudžiai susiję, constitutively išreiškė COG-1
[26, 27]. Mūsų tyrimo duomenimis, ilgalaikis administravimas pasirodė turėti poveikį genų ekspresiją, kurie gali būti išspręsti ar kompensuojama už po kelių mėnesių, nes didelę dalį genų, kurie buvo iki reguliuojamų po savaitės 6 administracijos nebuvo kitaip išreiškė po savaitės 13 (2B pav ir 1 lentelė). Tik 33 genų, kurie veikė NS398 taip pat buvo reguliuojamas atsako į infekciją. Pilnas sąrašas genų reguliuojamų kaip NS398 gydymo rezultatas rodomas (papildomas failą 1, Stalo S3.
Papildyti "atimtiniam" metodą klasifikuojant genus, duomenys buvo susitelkę naudojant neprižiūrimą požiūris. Savarankiškai užsakymas matrica (sOM) buvo sukurtas naudojant visas COX-2 priklausomas genus, 3 paveiksle pateiktas som sklypas COX2-priklausomų genų nustatytus studijų (kairėje skydelio), teisė skydelis rodo tuos pačius genus matrica rodo H poveikį vieni. pylori
infekcija dėl tų pačių genų (taip pat žr 2 lentelę). Apskritai, reguliuojamos genai pateko į funkcines kategorijas yra susiję su epitelio barjero funkcija, platinimo ir priežiūros ar uždegimas (apibendrinto 3B pav) .table 2 Sulenkite pokyčius genų ekspresijos reglamentuojamų kaip infekcijos rezultatas H. pylori parsisiųsti ir /ar gydymo konkrečiu COX-2 inhibitorių, parinktų genų NS398
simbolis
Genė NAME:
genijus ONTOLOGIJA

V vs V + Hp
v + HP vs NS398 + HP
V vs Ns398

6
19
13 6
13
19
6
13
19
ADN
adipsin
chimotripsinas, veikla.
papildymas activation.
3.06
1.9
-1.32
-2.4
1.93
-1.07
-1.53
-2.56
-1.97
Akt3
thymoma virusinė Proto-onkogeno 3
baltymų amino rūgščių phosphorylation
-1.52
6.68
-1.02
-1.09
1.28
1.33
-1.44
-1.03
-1.06
AV148957
Connexin 45
vandens transport
1.39
-3.25
-1.04
1.29
-1.11
1.39
1
1.09
-1.01
Ccl5
chemokine (CK motyvas) ligando 5
chemokino veikla.
Uždegiminį atsaką
1,23
-1,13
3.01
1.08
-1,13
-1,54
-1,21
1,48
1.08
CRPD. Dmbt1
ištrintas piktybinių smegenų auglių 1 /CRP ductin, muclin
maitėda receptorius.
navikas suppressor
4.15
-3.15
7.74
-2.64
-2.09
-2.15
1.78
1.28
-1
Gast
gastrin
hormone veikla
6.37
-1,21
1,8
-8,41
-1,87
-1,01
1
-2,35
1,45 pervežimas Hsp70-3
šilumos šoko baltymas 1A
šaperonas activity
5.3
-1.86
1.31
-5.41
1.13
-1.15
3.23
-1.35
1.11
Icsbp1
interferon sutarimas punktus privalomi baltymų 1
imuninį atsaką;. transkripcija regulation
1
-1.31
3.36
1.19
1.23
-1.39
1
2.04
-1.37
Ifi47
interferon gama indukuojamąją baltymų
ATF privalomas activity
1.3
-1.29
6.03
1.2
-1.13
-1.97
-1.85
-1.29
1.45
Ly75
lymphocyte antigenas 75
gynybos reakcija
1.23
-2,25
3.37
1,36
-1,15
1
1
1
1.39
Mup5
pagrindinis šlapimo baltymų 5
feromonų privalomas veiklos, transporto, autovežis activity
4.94
-1.08
3
-6.56
-1.23
-2.5
7.56
-1.5
1.31
Ptgs1
prostaglandin-endoperoxide sintezės 1
prostaglandinų biosynthesis
-1.36
-1.03
-1.02
1.16
1.03
1
1.26
1.47
1.12
Ptgs2
prostaglandin-endoperoxide sintezės 2
prostaglandinų biosynthesis
1.27
4.34
1.47
-1.02
1.17
1
-1.55
-1.24
-1.47
Odc
Ornithine decarboxlyase
karboksi- liazės veikla
1,05
-1,69
-1,19
-1,34
-3,12
-1,11
1.94
-1,4
1,23
Slc7a11. cd98 Light
tirpinio vežėjas šeima 7 narys 11. CD98 šviesos
katijonų amino rūgštis, transporter
1.37
3.42
1.19
1.09
2.24
1.33
-1.7
-1.64
-1.07
Tff1
trefoil 1 veiksnys
atsakas į wounding
-2.94
5.57
-3.06
-2.28
9.16
-1.56
-1.37
-6.56
2.84
Tgtp
T-cell specifinis GTPase
GTP privalomas veikla
1.26
-1,24
8.29
1.55
-1,17
-2,72
-1.37
1,31 pervežimas 1,43
geno Ontologija (GO) klasifikacija rodo genų funkcijai. pilnas sąrašas ekspresijos lygį visų genų tyrimo galima rasti papildomų failų 1, Stalai S1-3.
3 paveikslas Expression modelio COX-2 priklauso . genai A. Dvimatis savarankiškai užsakymas matrica (SOM) klasteris rodo santykinį išraiška lygį visų COX-2 priklausomų genų nustatytų šiame tyrime (p > 0,05). tiekėjų ir žemyn reglamentai nurodyta raudona arba mėlyna spalvinimas atitinkamai. Juoda jautrūs rodo panašų genų ekspresiją abiejuose mėginiuose. teisė skydelis rodo klasteris, gautų iš genų ekspresijos modelis NS398 pelių (V + HP pervežimas vs NS398 + Hp
). kairiajame skydelyje rodo . išraiška tų pačių genų užkrėstų pelių (unclustered) genas funkcijų ir literatūros nuorodų, susijusių su H. pylori infekcija
rodomi lentelėje 3. genai montavimo iškiliausius funkcines kategorijas yra pažymėta spalva: proliferacija /apoptozė (šviesiai mėlyna ), epitelio vientisumas (oranžinė), uždegiminė reakcija (raudona) ir skrandžio fiziologija (žalia), B. diagrama apibendrinant bendrą fiziologinį poveikį COX-2 priklausomų genų per visą bandymo laikotarpį, genų kategorijos spalvos kaip A.
Patvirtinimas išraiškos pasirinktų COX-2 priklausomų genų
vidutinis pokytis išraiškos lygio Cox1 (Ptgs1)
ir COX2 (Ptgs2)
, ir apie COX2-priklausomų genų, dalyvaujančių uždegimo pasirinkimą (ląstelėje sukibimas molekulė 1, Icam1
; Transformuojantis augimo faktorius B1, Tgfb1
), skrandžio funkcija (Gastrinas, Gast
), barjero funkcija (Aquaporin 5, Aqp5;
Glaudžioji jungtis baltymas 1, Tjp1
) ir proliferacija /Kancerogeninis (Ornithine dekarboksilazės , Odc1
) buvo nustatytas atskirų pelių visais laiko momentais realaus laiko PGR (papildomų failų 1 lentelė S4). 94% atvejų išraiškos kaita gali būti patvirtinta (aukštyn arba tolesnis reguliuojama per tris kartus nutraukė kriterijai).
NS398 pelių, iš Tjp1 išraiška
smarkiai išaugo ankstyvosiose stadijose tyrimo palyginti su užsikrėtusiu pelėmis (3 paveikslas). Pelė EST homologiczne Connexin 45 (AV148957, Gja7) taip pat buvo sumažėjo užsikrėtusių pelių, nepriklausomai nuo NS398 gydymo, nes buvo skrandžio aquaporin Aqp5 (3 paveikslas). Tai rodo, kad COX-2 slopinimo turi įtakos H. pylori poveikį
tarpininkaujant įtakos skrandžio barjero funkcija, todėl tiriama tai dar in vitro pervežimas modelį. Vakarų dėmė analizė parodė, kad H. pylori infekcija, taip pat
lėmė didėja Zona occludens 1 (ZO1, žmogaus homologą į Tjp1) baltymų ekspresiją in vitro
MKN28 skrandžio epitelinių ląstelių, ir kad šis padidėjimas buvo slopinamas buvimas NS398 (4A pav.) Įdomu tai, kad šis poveikis buvo nepriklausomas nuo nepašalinta IV tipo sekrecijos sistemos buvimą, arba su citotoksinas Vaca akivaizdoje, kaip H. pylori
išbraukta mutantai taip pat sukeltas ZO1 išraiška (4B pav.) Išraiška ODC buvo sumažėjo MKN28 ląstelių gydomiems NS398 (4c paveikslą), ir taip pat buvo nepriklausoma nuo funkcinio IV tipo skyriuje aparato ar Vaca buvimą. 4 pav COX-2 priklauso išraiška ZO1 ir ornitinu dekarboksilazės į MKN28 ląstelių išlaikomų iš H. pylori infekcija. A. išraiška Zona occludens-1 (ZO1) buvo nustatomas 6 h po infekcijos Vakarų dėmė į MKN28 ląstelių su kuriuo H. pylori pervežimas laukinio tipo P12 ar izogeninių mutantai nebus, visas CAG Pai (PAI) arba Vaca (Vaca). ZO1 buvo iki reguliuojama po užsikrėtimo, nepriklausomai nuo CagA PAI ar Vaca (viršutinis), o raiška sumažėjo ląstelių gydomiems NS398 (mažesnis). B. išraiška ornitinu dekarboksilazės baltymo (ODC) nepaveikė H. pylori
infekcijos, bet buvo sumažinta, atsižvelgiant į NS398.
Diskusija Viesbutis The Šio tyrimo tikslas akivaizdoje buvo pagerinti mūsų žinias apie vaidmuo ciklooksigenazės-2 H. pylori
-triggered gleivinės uždegimas, nustatant naujų pasroviui molekulinius vykdymo įtaisai. In vivo
požiūris čia atsižvelgiama taip pat, jei pažvelgti į transcriptome lygio, į sudėtingų pokyčių, kurie įvyksta, kaip lėtinio uždegiminio atsako į H. pylori
infekcijos ir COX-2 slopinimo.
abu H. pylori
infekcija, ir NS398 gydymas sukėlė unikalius transkripcijos parašų skrandžio gleivinės pelių, nepaisant patologijos balai panašumo ir kolonizacijos tankis tarp skirtingų grupių (1 paveikslas). Tai įdomūs, nes kitoje ataskaitoje, kurioje naudojamas gleivine susijęs limfoidinio audinio limfoma (SALYKLAS limfomos), transkripcijos profilių BALB /c pelių infekuotų H. heilmannii
buvo nustatyta po 12 iki 24 mėnesių, ir didelių pokyčių modelį genų reguliavimo įvyko ankstesnes ligos stadijose (< 12 mėnesių, lengvas ar vidutinio sunkumo patologija) [28]. Praėjus šiam laikui, grupuojama 300 dauguma skirtingai išreikštas genų leidžiama atskirti užkrėstus pelių į grupes, atitinkančias beveik lygiai su savo patologinę apibūdinimo. Atsižvelgiant į mūsų duomenimis, mes išvadą, kad ankstyvoje kūrimo etapo lėtinį aktyvų gastritas metu, standartinis patologija analizė nėra galima aptikti subtilus, bet svarbūs pokyčiai gleivinę.
NS398 specialiai slopina COX-2 baltymų, ir pakitimai, Cox-2
genų ekspresijos gali būti tikėtinas, kai infekuotų pelių buvo gydomi tam tikrą COX-2 inhibitorius, arba kaip galimo grįžtamojo ryšio mechanizmą "dalyvauja PGE 2 [29], arba kaip kompensacinė mechanizmas įveikti fermentiniu slopinimą. Nepastebėta reikšmingų pokyčių, COX-2
išraiškos in vivo
tačiau remia mintį, kad COX-2
geno ekspresija skrandžio kontroliuoja įvairių veiksnių. COX-2 yra išreiškiamas tiek uždegiminių ir skrandžio epitelinių ląstelių [22], ir savo išraiška gali būti kontroliuojamos pagal skirtingais mechanizmais, įvairių kraujo ląstelių tipų.
Mes galėjo nustatyti genų poaibį, kad buvo skirtingai, išreikštą kaip Cox rezultatas -2 slopinimas, pabrėžiant įtakos COX-inhibitorių skrandžio uždegimas taikymo sritį. COX-2 priklausomų genų pateko į daugelio funkcinių grupių, daugiausia tiems, kurie dalyvauja skrandžio fiziologija (rūgšties sekrecijos, judrumui), epitelio remonto ir platinimu, ir uždegimo mediatorių.
Gastrinas (Gast
) yra svarbus tarpininkas skrandyje [30-34] ir išraiška gleivinės buvo stipriai įtakota ne tik H. pylori infekcija
, bet taip pat slopina COX-2 (3 paveiksle, papildomų failų 1, Stalo S4 "). Be to, jos vaidmenį reguliuojant skrandžio rūgšties sekreciją, gastrinas turi mitybos poveikį ir reguliuoja platinimu ir remontas į gleivinę. Iš tiesų INS-DUJŲ transgeninių pelių, kurios kenčia nuo hypergastrinemia plėtoti karcinoma po užsikrėtimo Helicobacter pylori pervežimas [35]. Iš karcinoma plėtra Tačiau tik vyrų šiame modelyje [35]. Kiti darbuotojai taip pat pastebėjo, kad COX-2 slopinimo įtakos gastrinas išraiška in vitro pervežimas storosios žarnos vėžio modelis [34], taip pat H. pylori
teigiami skrandžio vėžiu sergantiems pacientams
kadangi išraiška [36]. apoptozė tarpininkavimo augimas diferenciacijos koeficientas 3 (Gdf3
) ir c-Myc (Mycs
) genai pasiekė 13 savaitę apoptozė slopina genų clusterin (Clu
) labai sumažėjo šiuo momentu. Paimta kartu, genų ekspresijos modelis yra galvoti apie kuri priklauso nuo iš epitelinių ląstelių proliferaciją /apoptozės norma pamainos po 13 savaičių nuo užsikrėtimo kaip NS398 gydymo rezultatas. Ilgesnės trukmės tyrimai turėtų būti reikalaujama nustatyti, ar šis poveikis tęsiasi arba kartojasi. Genų, kurie buvo anksčiau pastebėta, kad per išreikštas navikų (Mycs, Clu
) skaičius [37], naviko slopintuvai (Pataisa, Ptch
), ar su juo susijusius metastazių ar DNR remontas: bikunin ( Ambp
) [38], ornitino dekarboksilazės genas (oDC
), trilapis koeficientas 1 (Tff1
) [39], insulino augimo faktoriaus (Igf2
) [40] ir DNR reparacijos baltymas 1 (Ddb1
), taip pat buvo skirtingai išreikštas NS398 elgiamasi užkrėstą pelėms (3 paveikslas). Sąvoka modelis buvo sudėtingas, tačiau ir kai kurie tarpininkai linkę būti stiprinamas COX-2 slopinimo, o dauguma buvo žemyn reguliuojama (3 pav.) Tai tikriausiai atspindi reguliavimo vaidmenį COX-2 AS dalis kontrolės mechanizmų tinklo epitelio priežiūra. Į ODC
genas, pavyzdžiui, koduoja pagrindinių reglamentavimo fermentą į poliaminais kurie būtini ląstelių proliferaciją [41] ir buvo įrodyta, kad vaidinti vaidmenį kartu su COX-2 d atrofinį gastritas [42 plėtrai gamybos, 43]. Ji buvo pasiūlyta, kad COX-2 inhibitoriai gali slopinti ODC, ir tokiu būdu yra atsakingas, stebimų antiproliferacinio poveikio COX-2 inhibitorius [44]. Mūsų stebėjimas sumažėjimo ODC išraiškos kaip NS398 rezultatas traktuojamas H. pylori
infekciją tiek in vivo, parsisiųsti ir in vitro,
tyrimai (1 lentelė ir 4c paveikslą) yra laikantis šios sąvokos.
Helicobacter
infekcija yra labai susijęs su stiprios Th1-tipo uždegiminio atsako indukcijos, su aukšto lygio Ifnγ, kuri indukuoja išraiška kitų uždegimo mediatorių, tokių kaip iNOS ir COX-2
, ir taip pat cirkuliuojančių augimo faktorių pvz gastrinas [45]. Parama mintį, kad Ifnγ vaidina pagrindinį vaidmenį pritraukiant ir aktyvinti limfocitų [46, 47], mes nustatėme, kad išraiška, T-ląstelių paviršiaus žymenų Icam1
[48, 49] ir CD86 parsisiųsti ir ligandų (Parduodu
) [50] pasiekė 13 savaitę užkrėstų pelių. Interferonas priklausomi GTPases (Igtp
, Iigp laukiantis
) reguliuoja antimikrobinių veiklą Ifnγ į STAT1 priklausomu būdu [51, 52], o jų išraiška buvo žymiai mažesnis NS398 pelių iki pabaigos tyrimas. Apskritai, COX-2 aktyvumo paskatino sumažinto išraiška uždegimo mediatorių tarp 19 (3 ​​paveikslas) savaites 13 ir; įdomiai šis pokytis nebuvo atsispindi patologijos balai. COX-2 buvo įrodyta, kad moduliuoti Th1 /TH2 pusiausvyrą uždegiminių reakcijų ir COX-2, naudojant NS398 paskatino tirti in vitro
atsakas poliarizacijos skatino žmogaus PKVL link TH1 [53]. Autoriai postuluojama, kad lėtinis išraiška COX-2 ir gamyba PGE2 rezultatus į nuo gleivinės imuninio atsako, stiprinant tolerancijos būklę efektyvumo slopinimo. Genų ekspresijos šabloną mes čia stebimi iš tiesų atitinka su COX-2 slopinimo poveikį uždegimine reakcija (žr 3 pav ir 1 lentelę), nors Greitosios klasikinių Th1 /Th2 tarpininkų, tokių kaip IL-12, I-10 pakeitimus ir IL-4 reikšmingai nesiskyrė mūsų tyrime.
H. pylori infekcija
buvo pranešta, kad nepažeistumėte epitelio vientisumas ir kelis galimus mechanizmus tai buvo pranešta (peržiūrėta [54]). CagA, pagrindinis H. pylori
patogeniškumo veiksnys, yra pernešami į epitelio ląsteles per IV tipo sekrecijos aparato [55, 56]. Studijas šunų inkstų ląstelių modelis (MDCK) parodė, kad CagA asocijuojasi su stora sankryžos adapteris baltymų zona occludens 1 (Zo-1, pelės homologą -tight sankryžos baltymas 1, Tjp1) ir junctional sukibimas molekulė (Jcam ar uogienė), todėl į ilgalaikio sutrikimo epitelio barjeras funkcija in vitro
[57]. Nors mes nustatėme, padidėjo išraiška Tjp1
tuo transkripcijos lygio NS398 gydytų užkrėstų pelių, Jcam
išraiška nepakinta. Be to, su Homologijos į Connexin 45 (AV148957, Gja7 pervežimas) ir Aqp5
buvo veikiama H. ​​EST pylori
infekcija nepriklausomai nuo NS398 gydymo (3 pav.) Kadangi abi Connexin 45 ir Aqp5 žinome vaidinti vaidmenį tarpląstelinės transporto vandeniu ir mažų molekulių, ir yra eksperimentinis įrodymas, kad Connexin 45 sąveikauja tiesiogiai su Tjp1 [58, 59], atrodytų, kad COX-2 taip pat turi tam tikrą vaidmenį vandens pusiausvyros išsaugojimas skrandžio epitelio. Ši idėja yra palaikoma mūsų in vitro
stebėjimų COX-2 priklausomas Zo-1 baltymo ekspresija MKN28 ląstelių. Priešingai, kurį Amieva et al ataskaitas. [57] Šis poveikis nebuvo susijęs su CagA statuso H. pylori
(4 paveikslas). Barjero funkcija poveikis pelių modelyje yra bet kuriuo atveju neturėtų būti, nes į CagA veiksmų, nes nors mes nustatėme, kad Helicobacter pylori
SS1 išreiškė CagA baltymų, mes negalėjome aptikti perkėlimas vienu In vitro
arba in vivo
eksperimentų (duomenys neparodyti). Todėl atrodytų, kad H. pylori
infekcija papildomus mechanizmus įtakos epitelinio vientisumą. Taip pat verta paminėti, kad kita H.pylori
patogeniškumo veiksnys, vacuolating toksinas (Vaca) sukelia formavimas skysčiu užpildytas vakuolėmis į epitelio ląsteles ir be to, ši veikla gali būti in vitro neslopina
pagal NS398 gydymo [60] , Kaip skrandžio aquaporin Aqp5 išreiškiamas ant šoninių ir tarpląstelinius membranų skrandžio kriptos [59], mes spėlioti, kad tai porų įtakoja pokyčius Glaudžioji jungtis baltymų, ir kad ji vaidina vaidmenį edemos vystymuisi epitelio metu infekcija.
remiantis paskelbtais pranešimais skaičių mėgino nušviesti genų reguliavimo H. pylori
infekcijos naudojant mikrogardeliq požiūrį studijuoti pasaulio genų ekspresiją skrandžio epitelinių ląstelių in vitro
[61-63] ( peržiūrima [64]), ataskaitų greitą uP-reguliavimą uždegimo mediatorių ir transkripcijos veiksnių įvairovė, kad būtų posakio modelio požymiai. Mūsų tyrimo duomenimis, nė viena iš platinimo susiję genai (c-fos, B-Fos c-Birželio parsisiųsti ir cyclinD1
(PCNA
)), kuriuos Sepulveda ir kt
., Nei tie, pranešė COX kt
.

• BARIATRIC chirurgija ir T2DM tobulinimo priemonės: matematinis model
• Antimikrobinis aktyvumas natūralių produktų prieš Helicobacter pylori: ar review