Identifikacija novih ciklooksigenaze-2 ovisan gena u Helicobacter pylori u vivo

identifikacije novih inhibitora ciklooksigenaze-2 ovisnih gena Helicobacter pylori pregled infekcije in vivo
apstraktna pregled Pozadina
Helicobacter pylori
je ključni faktor u određivanju patogenezi benignih i maligne želučanih bolesti. Ciklooksigenaze-2 (COX-2) je inducibilan ključni enzim u metabolizmu arahidonske kiseline i središnje je medijator u inflamaciji i raka. Ekspresija gena
COX-2 je doregulirana u sluznici želuca u H. pylori infekcije pregled ali patološkim posljedice ovog poboljšanog ekspresija COX-2 su još uvijek nisu karakterizirani. Cilj ovog istraživanja bio je utvrditi nove gene nizvodnog COX-2 u in vivo
modelu, pri čemu se identificira potencijalne mete za proučavanje uloge COX-2 u H. pylori pregled patogenezi i iniciranje tvorničkih kancerogene promjena. | Rezultati
Gene Expression profili u sluznici želuca u miševa koji su tretirani sa specifičnim COX-2 inhibitora (NS398) ili nosač su analizirani u različitim vremenskim točkama (6, 13 i 19 tjedana) nakon H. pylori pregled infekcije. H. pylori pregled infekcija utječe na ekspresiju gena 385 tijekom eksperimentalnog razdoblja, uključujući i regulatora želučane fiziologije, proliferacija, apoptozu i sluznice obrane. Pod uvjetima COX-2 inhibiciju, 160 ciljnih gena regulirane su kao rezultat H. pylori pregled infekcije. Cox-2 ovisna podskup uključeni oni koji utječu na želudac fiziologiju (gastrin, Galr1 pregled), funkciju epitela barijere (Tjp1, connexin45, Aqp5
), upala (Icam1
), apoptoza (Clú
) i proliferacija (Gdf3, IGF2 pregled). Liječenje s NS398 samog uzrokovalo je diferencijalna ekspresija 140 gena, od kojih su 97 bili jedinstveni, što znači da se ti geni regulirani u uvjetima bazalnih ekspresija COX-2. Pregled Zaključak pregled Ova studija je identificirala panel nove COX-2 ovisni geni utjecali iu normalnim iu upalnim stanjima izazvanim H. pylori pregled infekcije. Ovi podaci pružaju značajne nove veze između COX-2 i upalnih procesa, epitelnim popravak i integriteta. Pregled Pozadina
Helicobacter pylori pregled infekcija povezana sa raznim poremećajima želučane uključujući kronični gastritis, peptičkog ulkusa, sluznicu povezan limfnog tkiva (MALT) limfoma, i želuca adenokarcinom [1, 2]. Patogeničnost bakterija određena je epidemiološkim utjecajima kao što su bakterijske i domaćina faktora [1, 3]. Bakterijske kolonizacije želučane sluznice dovodi do razvoja kroničnog upalnog infiltrata, koje je popraćeno s povećanom otpuštanja medijatora upale, faktora rasta i reaktivnih kisikovih metabolita [2, 4].
Inducibilne COX-2 enzim i njegove konstitutivno eksprimirani izoforma COX-1 su ključni regulatori ljudskog prostaglandina metabolizma [5-7]. Krajnji produkti njihove enzimatske aktivnosti obuhvaćaju panel prostaglandine i tromboksane, koje su identificirane kao kritičan regulatori osnovnih fizioloških i patoloških procesa, uključujući agregacije trombocita, porođaja, razvoj T-stanica, upala i raka [5-7]. COX-2 Enzimska aktivnost mjeri se regulira de novo
sinteze COX-2 proteina [5, 6].
U želucu poboljšane cox-2 pregled ekspresija je nađeno u H. pylori
-triggered gastritis, kao i na sluznice stresa lezija, gastroduodenalnih ulkusa i nakon oštećenja ishemije /reperfuzije [8-10]. Cox-2 i njegovih povezanih prostanoidi se pojaviti doprinijeti patogenezi karcinoma želuca. Želučani adenokarcinoma i premalignih lezija sluznice često prekomjerno eksprimiraju COX-2 gena
[11-14] i povišene intratumoralno Cox-2 razine Čini se da su povezani s dubljim tumorske invazije [15] i povećane učestalosti limfnog metastaze [ ,,,0],16]. Osim toga, Cox-2 inhibitori su pokazali da se snažno potiskuju proliferaciju ljudskih stanica raka želuca in vitro pregled [1, 17, 18], kao i eksperimentalne želučanog adenokarcinoma u golih miševa [17]. Nedavno međutim, broj izvješća doveli su u pitanje tvrdnju da ta anti aktivnost tumor je posljedica inhibicije COX-2 sama [19]. Pojedinci koji uzimaju inhibitore COX su izvijestili da biste prikazali su smanjeni rizik za razvoj želučanog karcinoma [20], no zabilježene kardiovaskularne nuspojave povezane s kroničnom coxib uprave znači da klinička primjena inhibitora COX za anti-kancerogeno liječenja je sporno (Recenziju u [21]). pregled Izražavanje
gena COX-2, dakle, kako se čini važan korak u patogenezi benignih i malignih oboljenja želuca i stoga, potrebno je objasniti ne samo svojim doprinosom H. pylori
ovisna patogeneze, ali i nizvodno učinci Cox inhibiciju lijekova od posebnog kliničkog značaja. pregled ranije smo pokazali da se H. pylori pregled može izravno utjecati ekspresija COX-2
u želučanim epitelnim stanicama putem transkripcijski mehanizmi i identificirati MAPK-ERK ovisna aktivacija bliži cis
-regulatory CRE-EBOX elementa kao ključni korak u H. pylori
-response od COX-2
gena [22] , A ovi rezultati dodatno je ovo potvrdila patofiziološki vezu između bakterija i COX-2
Molekularna efektora nalazi nizvodno od COX-2 u želučanom H. pylori infekcije pregled ostali neidentificirani.
Ovdje analizirani na ekspresiju gena u želučane epitel miševa tretiranih s COX-2 inhibitora specifične NS398, u različitim vremenskim točkama nakon H. pylori pregled infekcije pomoću DNK microarrays i bili su u stanju definirati genetske profile ekspresije propisane H. pylori
kroz Cox-2 ovisan i nezavisnih mehanizama. | Rezultati
Određivanje koncentracije COX-2 inhibitor Netlogu za određivanje odgovarajuće koncentracije inhibitora u našoj H. pylori pregled infekcija modela, razine PGE2 izmjerene su u sluznici želuca nakon H. pylori
infekcije u prisutnosti ili odsutnosti COX-2 inhibicije s NS398. Zaraženi miševi su pokazali 50% povećanje u PGE2 nivou u sluznici želuca. Tretman zaraženih miševa s NS398 (10 mg /kg) dovodi do smanjenja u PGE2 tako da se ne razlikuju od kontrolne skupine (podaci nisu prikazani). Stoga je zaključio da je doza od 10 mg /kg bila je dovoljna za suzbijanje Cox 2 aktivnosti u prisutnosti H. pylori pregled infekcije.
dugotrajnog davanja specifičnog COX-2 inhibitora NS398 bitno ne utječu na bakterijske kolonizacija ili upalnih rezultate
Svi miševi u zaraženim grupe su kolonizirani s H. pylori pregled, kako je određena kvantitativnom kulture. Bakterijskog opterećenja porasla tek neznatno u razdoblju od 6 do 19 tjedana (Slika 1a). Administracija NS398 nije pojavio imati značajan učinak na bakterijske kolonizacije. Infekcija s H. pylori pregled uzrokovana niskim do stupnja gastritis srednje u zaraženih miševa koji tendenciju porasta u težini tijekom vremena, ali nije dovelo do stvaranja ulkusa ili dokaz metaplazije (vidi sliku 1B i 1C Slika za usporedbe miševe u svakoj skupini na tjedan 13). Ova zapažanja su u skladu s izvješćima iz drugih studija u kojima su miševi zaraženi za slične vremenskih razdoblja [23, 24]. Histološka analiza pokazala administraciju vozila i NS398 sama izaziva gastritis low-grade kroz vrijeme (Slika 1B). Slika 1 Davanje Specifični COX-2 inhibitora NS398 ne utječe značajno na bakterijske kolonizacije ili upalnih rezultate. A. Liječenje s NS398 ne utječe na H. pylori pregled kolonizaciju u C57 BL /6 miševa. CFU učitavaju se s želucima pojedine miševe na 6, 13 i 19 tjedana nakon infekcije (ispunjeni krugovi). B. Raspodjela patologija rezultate u inficiranim i kontrolnih miševa. Patologija je zabio u skladu sa Sydney sustav na sljedeći način: bez upale (0), niskog stupnja, ne -active gastritis i niskog stupnja blagi aktivni gastritis (1), srednji stupanj blagi aktivni gastritis (2). C. hematoksilinom i eozinom obojene parafinskih sekcija od 13 tjedana nakon infekcije, reprezentativne slike iz nezaraženih miševa koji su tretirani samo sa nosačem (V), koje nisu inficirane miševa tretiranih s NS398 (NS398) inficiranih miševa (V + Hp
) i inficiranih miševa tretiranih s NS398 (NS398 + HP Netlogu). Do tjedan 13 (17 tjedana nakon infekcije), umjereno aktivan gastritis uočeno kako u V + HP Netlogu i NS398 + HP-ov pregled skupina. Izvorni uvećanje 20 ×, mjerilo = 50 mm pregled RNA od životinja sa sličnim rezultatima i razini za naseljavanje (3 miševa po skupini) su sakupljene i koristiti za izvođenje tri eksperimentalne usporedbe. Non-om u odnosu na zaraženom (V vs
V + HP pregled), zaraženi odnosu NS398 liječi i zaražene (V + ks vs
NS398 + HP Netlogu), i ne-om u odnosu na non-om i NS398 tretira (V vs
NS398) (Slika 2). Eksperiment je osmišljen kako bi nam omogućiti da se utvrdilo profila genske ekspresije u želucima miševa koji su primili samo nosač ili NS398 u vozilu, i razlučiti to od posljedica H. pylori pregled infekcije. Slika 2 ekspresija gena u želučanoj sluznici miševa inficiranih s H. pylori. A. Venn dijagram prikazuje slom različito izraženi gena (više od 3 preklopite prema gore ili dolje) tijekom razdoblja ispitivanja. Broj gena koji prolaze kriterije cut-off je indiciran za svaku eksperimentalnu usporedbu: Zaražene naspram ne-inficirani miševi (V vs
V + HP Netlogu), zaraženi miševi u odnosu na NS398 liječi i inficiranih miševa (V + HP vs pregled NS398 + HP
) i ne-inficiranih miševa u odnosu na NS398 liječi (V vs
NS398). Brojevi u zagradama predstavljaju broj ukupno gena različito izražene u tri eksperimentalne usporedbe. B. Trend parcela predstavlja globalnu ekspresiju gena mjereno u 3 eksperimentalne usporedbe. Svaka točka na osi y predstavlja prosječni omjer ekspresije gena za koje prolaze kriterije odstranjivanja tjedna 6, 13 i 19 godina nakon pokretanja tretman, tj jedan redak predstavlja jedan gen. 33 gena infekcija povezanih koji su različito izraženi kao rezultat NS398 liječenja označene su crvenom bojom za sve usporedbe. COX-2 (Ptgs2) označen je žute linije. Pregled ekspresija gena u sluznicu želuca i H. pylori
inficiranih miševa pregled RNA korištena u ovoj studiji je ekstrahirana iz želučane sluznice
samo, i histološke analize želucima pripremljenih na taj način potvrdili su da je mišić ili drugog vezivnog tkiva u podlozi sluznicu nisu bili uključeni u našim pripremama (nije prikazano). Promjene u ekspresiji gena vidjeti u ovom istraživanju su, dakle, vrlo vjerojatno, da bi odražavala prepisivanja odgovor ograničena na želučanog epitelnim stanicama i limfocitne u razvoju i granulocitne infiltrata koji karakteriziraju kronični H. pylori pregled infekcije. Cut-off za značajne promjene u ekspresiji gena su postavljene u p < 0,05 i tri puta promjene [25].
H. pylori pregled zaraženih miševa, 385 gena prošao cut off kriterije u najmanje jednom tijekom ispitivanja (slika 2a). H. pylori
zaraženih miševa koji su bili tretirani s NS398 imale 160 diferencijalno eksprimirani geni. Kod miševa tretiranih s NS398 samo 140 geni su s različitiom ekspresijom (slika 2A). Korištenje subtraktivni pristup, geni su bili podijeljeni u podskupine koje odražavaju glavne eksperimentalne efekte. H. pylori pregled infekcije, Cox-2 gašenje, i Cox-2 gašenje tijekom infekcije pregled infekcija s H. pylori
izazvala kompleksni prikaz globalnog ekspresije gena tijekom razdoblja pokusa (slika 2B). Tretman zaraženih miševa s NS398 rezultirao različita ekspresije gena potpis, koji je dodatno na učinak infekcije. Trideset i tri gena različito izraženim u zaraženih miševa bio rezultat NS398 obrade (crveno istaknuto gene), osim dodatnih 107 gena su samo izražene u NS398 liječenih i zaraženih miševa. Na taj način je podgrupa gena definirano COX-2 je uspostavljen ovisne gene. podijeliti smo te gene u podskupine kako bi se olakšalo daljnje analize na temelju kategorija Gene ontologije koriste DAVID alat za gensku zapažanje na NCBI http:... //David abcc ncifcrf gov /. Tablica 1 sadrži odabrane Cox-2 ovisne gene (kompletan popis može se naći u dodatne datotečne 1, Tablica S2). Većina gena pokazala je nominalnu izraz uzorak ukazuje na to da kontrolne mehanizme i kumulativne učinke obje infekcije i Cox-2 suzbijanje igraju ulogu u ekspresiji gena nad time.Table 1 Eksperimentalni dizajn pregled Tjedan
pregled -4 & -3
0
6
13
19
Miševi (n) pregled vozila samo pregled (V )
17 pregled Mock infekcije pregled liječenje započne
5
6
6
NS398 (10 mg /kg) pregled (NS398)
17
Mock infekcije pregled liječenje početi
5 pregled 6 pregled 6
vozilo plus H. pylori pregled (V + ks pregled)
24 pregled zaraziti SS1 pregled, liječenje početi Netlogu 8 pregled osam pregled osam pregled NS398 (10 mg /kg) plus H. pylori
(NS398 + ks
)
24 pregled zaraziti SS1 pregled, liječenje početi
8 pregled osam pregled 8
Nakon tjedan 0 miševi primali dnevnu sc. injekcije NS398 ili vozilom na miru kao što je navedeno. Miševi su ubijeni na 6. 13 i 19 tjedana nakon početka liječenja i H. pylori
kolonizacije (CFU), a zatim patologija rezultati utvrđeni su i ukupna RNA je pripremljena. Pregled Učinak NS398 na želučani profila genske ekspresije
Prethodne studije o COX-2 inhibitora NS398 u različitim in vitro pregled i in vivo pregled modela su pokazali da je specifični inhibitor COX-2 aktivnosti s malo ili nimalo utjecaja na usko povezane, konstitutivno izrazio Cox-1
[26, 27]. U našoj studiji, dugotrajno davanje pojavili su učinci na ekspresiju gena koji mogu biti riješeni ili kompenzirati nakon nekoliko mjeseci, što je veliki dio gena koji su up-regulirana nakon tjedan 6 primjene nisu drugačije izraženo nakon tjedan dana 13 (Slika 2B i tablica 1). Samo 33 gena koji su bili pod utjecajem NS398 također su regulirani kao odgovor na infekciju. Kompletan popis gena reguliranih kao rezultat NS398 liječenja prikazana (Dodatni datoteka 1, Tablica S3. Pregled Za nadopuniti 'odbijajuće' metodu razvrstavanja gene, podaci su grupirani pomoću nadzirane pristup. A self-naručivanje matrica (SOM) je stvoren pomoću svih Cox-2 ovisne gene, Slika 3 prikazuje Som zemljište od COX-2-ovisnih gena identificiranih u studiju (lijevi dio), pravo ploča prikazuje matricu istih gena ukazuju na učinak H . pylori infekcije pregled sam na istih gena (vidjeti Tablicu 2). Općenito, regulirani geni pala u funkcionalne kategorije se odnose na epitelni barijerne funkcije, proliferacija i održavanja ili upala (sažeti su na slici 3B) .table 2 fold promjene u ekspresiji gena odabranih gena reguliranih kao rezultat infekcije s H. pylori Netlogu i /ili liječenje s posebnim Cox-2 inhibitora NS398 pregled
Gene NAME
Ontologija GENE

V vs V + HP
V + HP vs NS398 + HP-a
V vs Ns398
6 pregled 13 pregled, 19
6
13
19
6 pregled 13 pregled, 19 pregled, ADN pregled adipsina pregled kimotripsin, aktivnost. pregled dopuna activation.
3.06
1.9
-1.32
-2.4
1.93
-1.07
-1.53
-2.56
-1.97
Akt3
thymoma virusni proto-onkogena 3 pregled proteina aminokiselina phosphorylation
-1.52
6.68
-1.02
-1.09
1.28
1.33
-1.44
-1.03
-1.06
AV148957
Connexin 45 pregled voda transport
1.39
-3.25
-1.04
1.29
-1.11
1.39
1
1.09
-1.01
Ccl5
chemokine (KZ motiv) ligand 5 pregled kemokina aktivnost.
Upalni odgovor
1,23 pregled -1,13 pregled 3,01 pregled 1,08 pregled -1,13 pregled -1,54 pregled -1,21
1,48 pregled 1,08 pregled CRPD-a. Dmbt1
izbrisati malignih tumora mozga 1 /CRP ductin, muclin pregled aktivnosti smetlar receptora. pregled, tumor suppressor
4.15
-3.15
7.74
-2.64
-2.09
-2.15
1.78
1.28
-1
Gast
gastrin
hormone Aktivnost
6.37 pregled -1,21 pregled 1.8 pregled -8,41 pregled -1,87 pregled -1,01 pregled 1 pregled -2,35 pregled 1,45
Hsp70-3
protein toplinskog šoka 1A pregled Chaperone activity
5.3
-1.86
1.31
-5.41
1.13
-1.15
3.23
-1.35
1.11
Icsbp1
interferon Konsenzus seq vezujući protein 1
imunološki odgovor;. transkripcija regulation
1
-1.31
3.36
1.19
1.23
-1.39
1
2.04
-1.37
Ifi47
interferon gama može inducirati proteina pregled ATP obvezujuća activity
1.3
-1.29
6.03
1.2
-1.13
-1.97
-1.85
-1.29
1.45
Ly75
lymphocyte Antigen 75 pregled obrambeni odgovor pregled 1,23 pregled -2,25 pregled 3.37
1,36 pregled -1,15 pregled 1 pregled 1 pregled 1 pregled 1,39 pregled Mup5
glavni mokraćnog protein 5 pregled feromon aktivnost vezanja, prijevoz, prijevoznik activity
4.94
-1.08
3
-6.56
-1.23
-2.5
7.56
-1.5
1.31
Ptgs1
prostaglandin-endoperoxide sintetaze 1 pregled prostaglandin biosynthesis
-1.36
-1.03
-1.02
1.16
1.03
1
1.26
1.47
1.12
Ptgs2
prostaglandin-endoperoxide sintaze 2 pregled, prostaglandin biosynthesis
1.27
4.34
1.47
-1.02
1.17
1
-1.55
-1.24
-1.47
Odc
Ornithine decarboxlyase pregled karboksi- liaze aktivnost
1,05 pregled -1,69 pregled -1,19 pregled -1,34 pregled -3,12 pregled -1,11 pregled 1,94 pregled -1,4 pregled 1.23 pregled Slc7a11. cd98 light pregled otopljena prijevoznik obitelj 7 član 11. CD98 svjetlo pregled, kationski aminokiselina transporter
1.37
3.42
1.19
1.09
2.24
1.33
-1.7
-1.64
-1.07
Tff1
trefoil Faktor 1 pregled odgovor wounding
-2.94
5.57
-3.06
-2.28
9.16
-1.56
-1.37
-6.56
2.84
Tgtp
T-cell specifične aktivnosti GTP-aze pregled GTP vezivanje
1,26 pregled -1,24 pregled 8.29
1,55 pregled -1,17 pregled -2,72 pregled -1.37 pregled 1,31
1,43
gena Ontologija (GO) klasifikacija ukazuje na funkciju gena. Cjeloviti popis razine ekspresije svih gena u studiju može se naći u dodatne datotečne 1, tablica S1-3.
Slika 3 ekspresije Cox-2 ovisna . geni A. Dvodimenzionalna self-naručivanje matrica (SOM) cluster pokazuje relativnu razinu ekspresije svih Cox-2 ovisnih geni identificirani u ovom istraživanju (p > 0,05). gore ili prema dolje propisi su označene crvenom ili plavom sjenčanje respektivno. crna sjenčanje pokazuje sličnu ekspresiju gena u oba uzorka. u desnoj pokazuje grozd proizlazi iz ekspresije gena uzorak u NS398 miševa tretiranih (V + ks
vs NS398 + HP Netlogu). lijeva ploča pokazuje . izraz istih gena u oboljelih miševa (unclustered) gene funkcija i literature literature relevantne za H. pylori pregled infekcije su prikazani u tablici 3. geni koji odgovaraju najznačajnije funkcionalne kategorije su označene sa boja: proliferacija /apoptoza (blijedo plave ), epitelne integritet (narančasta), upalni odgovor (crveno) i želuca fiziologija (zeleno) B. Dijagram sažima cjelokupno fiziološki učinak COX-2 ovisnih gena tijekom razdoblja pokusa, kategorije gena su obojene kao u A.
Potvrda izražavanja odabranih Cox-2 ovisnih gena
srednja promjena u razini ekspresije od cox1 (Ptgs1) Netlogu i COX-2 (Ptgs2) Netlogu i izbor COX-2-ovisnih gena koji sudjeluju u upali (unutarstanični adhesion molecule 1, Icam1 pregled; Transformirajući faktor rasta b1, Tgfb1 pregled), želučani funkcija (gastrin, Gast pregled), funkcija barijere (Aquaporin 5, Aqp5; pregled, čvrsti spoj proteina 1, Tjp1 pregled) i proliferacija /karcinogeneze (ornitin dekarboksilaze , Odc1 pregled) određen je za pojedine miševe u svim vremenskim točkama u realnom vremenu PCR (dodatne datotečne 1, Tablica S4). U 94% slučajeva je promjena u izrazu mogla biti potvrđena (gore ili preuzet regulirati preko tri puta odsječena kriteriji).
U NS398 tretiranih miševa, izraz Tjp1
dramatično se povećao u ranim fazama studije u usporedbi s zaraženih miševa (slika 3). Miš EST homologna koneksini 45 (AV148957, Gja7) također je smanjen kod inficiranih miševa, bez obzira NS398 liječenja, kao što je na želučanu aquaporin Aqp5 (Slika 3). Pretpostavlja se da COX-2 inhibicija ima učinak na H.pylori
posredovanog utjecaja funkcije želuca barijere, stoga istraživali to dalje u in vitro modelu
. Western blot analiza pokazala je da je infekcija s H. pylori i
dovelo do povećanja Zona occludens 1 (ZO1, ljudski homolog Tjp1) ekspresije proteina in vitro pregled u MKN28 epitelnim stanicama želuca, a da taj porast je spriječeno u prisutnost NS398 (Slika 4A). Zanimljivo je da taj učinak ne ovisi o prisustvu sustava za izlučivanje nedirnutog tipa IV ili prisutnosti citotoksina Vaca kao H.pylori pregled mutanti je također inducirana ZO1 izraz (Slika 4B). Ekspresija ODC smanjen je MKN28 stanice tretirane NS398 (Slika 4C), te je također neovisno o prisustvu funkcionalnog uređaja tipa IV sekcije ili Vaca. Slika 4 Cox-2 ovisna ekspresija ZO1 i ornitin dekarboksilaze u MKN28 stanica ovisnih na H. pylori infekcije. A. Ekspresija zona occludens-1 (ZO1) određuje se pomoću Western blot na 6 sati nakon infekcije MKN28 stanica bilo s H. pylori
divlji tip P12 ili izogeničnih mutanti kojima nedostaje čitava CAG PAI (PAI) ili Vaca (Vaca). ZO1 su doregulirane nakon infekcije, neovisno CagA PAI ili Vaca (gornje), a ekspresija je smanjena u stanica koje su tretirane s NS398 (niži). B. Izražavanje ornitin dekarboksilaze proteina (ODC) nije bio pod utjecajem H. pylori pregled, infekcije, ali je smanjena u prisutnosti NS398. Pregled Rasprava
Cilj ovog istraživanja bio je unaprijediti naše znanje o uloga ciklooksigenaze-2 na H. pylori pregled -triggered upale sluznice prepoznavanjem novih nizvodno molekularne efektore. In vivo pregled pristup koji ovdje je također i uvid na razini transcriptome, u složenim promjenama koje se javljaju kao posljedica kronične upalne reakcije na H. pylori pregled infekcije i Cox-2 inhibicije. Pregled oba H. pylori pregled infekcija, a NS398 tretman izazvao jedinstvene transkripcije potpisa želučane sluznice miševa, unatoč sličnosti u patologija ocjenama i gustoće kolonizacije između različitih skupina (Slika 1). To je zanimljiva jer je u drugom izvješću zapošljava model limfoma povezanog sa sluznicom limfnog tkiva (MALT limfom), transkripcijskih profila u BALB /c miševa inficiranih H. heilmannii pregled utvrđeni su nakon 12 do 24 mjeseci, a velike promjene u genu propis dogodila u ranijim fazama bolesti (< 12 mjeseci, blage do umjerene patologije) [28]. Nakon tog vremena, skupina od 300 najviše različito izraženim genima dopuštenom segregaciju zaraženih miševa u grupe koje odgovaraju gotovo točno sa svojim patološkim karakterizacije. S obzirom na naše podatke, mi bi se zaključiti da je u ranoj fazi razvoja kroničnog aktivnog gastritisa, standardna analiza patologija nije u mogućnosti otkriti suptilne, ali važne promjene u sluznici. Pregled NS398 specifično inhibira aktivnost COX-2 protein i promjene u COX-2
genske ekspresije može se očekivati, kada zaraženi miševi su tretirani sa specifičnim COX-2 inhibitora, bilo kao posljedica mogućeg mehanizmom povratne uključuje PGE 2 [29], ili kako je kompenzacijski mehanizam za prevladavanje enzimske inhibicije. Nema značajne promjene u COX-2 pregled izrazu zabilježen je in vivo pregled, međutim, podržava ideju da je ekspresija gena COX-2 pregled, u želucu se kontrolira različitim faktorima. COX-2 se izražava upalnih i želučanih epitelnih stanica [22] i njegove ekspresije može se kontrolirati različitim mehanizmima u vrstama različitih stanica.
Smo u mogućnosti identificirati podskupa gena koji su različito izraženih kao rezultat Cox -2 potiskivanje, naglašavajući opseg utjecaja COX-inhibitora u želučanom upalom. COX-2 ovisne gene pala u brojne funkcionalne skupine, uglavnom onih koji su uključeni u želučanom fiziologiji (lučenje kiseline, pokretljivosti), epitelne popravak i proliferaciji i posrednika kod upala. Pregled Gastrin (Gast pregled) je važan medijator u želucu [30-34] i izražavanje u sluznici snažno je utjecao, ne samo od infekcije s H. pylori pregled, ali i suzbijanje COX-2 aktivnosti (Slika 3, dodatne datotečne 1, Tablica S4). Osim njene uloge u reguliranju lučenja želučane kiseline, gastrin ima trofičko djelovanje i regulira proliferaciju i popravak u sluznicu. Doista INS-GAS transgenskih miševa koji pate od hipergastrinemija razviti karcinom nakon infekcije s H. pylori
[35]. Razvoj karcinoma ipak ograničena na mužjake u ovom modelu [35]. Ostali radnici također su primijetili da COX-2 inhibicije utjecajem izraz gastrin u in vitro
kolorektalnog karcinoma modela [34], a također u H. pylori pregled pozitivnih pacijenata s rakom želuca [36].
Gdje ekspresija apoptoza posredovanje faktor diferencijacije rasta 3 (Gdf3
) i c-myc (Mycs pregled) geni nalazio se na tjedan dana 13, apoptoza inhibirajući gen Clustcrin (clú pregled) snažno smanjen na ovoj vremenskoj točki. Uzeti zajedno, ekspresija gena uzorak ukazuje na promjenu brzine proliferaciju /apoptozu epitel nakon 13 tjedana infekcije kao rezultat NS398 liječenja. Dugoročne studije će biti potrebna kako bi se utvrdilo da li se nastavlja ovaj efekt ili ponavlja. Određen broj gena koji su prethodno bili opazili da se prekomjerno izražen u tumorima (Mycs, Clú
) [37], tumorske prigušivači (skrpan, PTCH
), ili na neki drugi način uključeni u metastaza ili popravak DNA: bikunin ( Ambp pregled) [38], ornitin dekarboksilaze gena (ODC pregled), faktor trolista 1 (Tff1 pregled) [39], inzulinu sličnog čimbenika rasta (IGF2 Netlogu) [40] i popravak DNA proteina 1 (Ddb1 pregled), također su s različitiom ekspresijom u NS398 pomiješa zaraženih miševa (slika 3). Način ekspresije bio složen međutim, i neki posrednici liječi se povećati Cox-2 supresije, dok je većina podregulirani (Slika 3). To je vjerojatno odraz regulatornu ulogu za COX-2 kao dio mreže kontrolnih mehanizama za epitela održavanje. U ODC pregled gen, na primjer, kodira ključnu regulatorni enzim u proizvodnji poliaminima koji su neophodni za proliferaciju stanica [41] i pokazano je da ima ulogu uz bok s COX-2 u razvoju atrofičnog gastritisa [42 43]. Predloženo je da COX-2 inhibitori mogu inhibirati ODC, te na taj način biti odgovoran za promatrane antiproliferacijskih efekata Cox-2 inhibitora [44]. Naše promatranje smanjivanje ODC izražavanja kao rezultat NS398 tretiraju H. pylori infekcije pregled u oba in vivo pregled i in vitro pregled istraživanja (Tablica 1 i Slika 4c) je u skladu s tim pojmom.
Helicobacter pregled infekcija je čvrsto povezan s indukcijom jake Th1 tipa upalnog odgovora, s visokim razinama IFNy, koji uzrokuje ekspresiju drugih medijatora upale kao što iNOS i COX-2
, a također i u cirkulaciji faktore rasta kao gastrin [45]. Potpora ideju da IFNy igra ključnu ulogu u privlačenju i aktiviranje limfocita [46, 47], primijetili smo da je ekspresija T-stanični površinski biljezi Icam1 pregled [48, 49] i CD86 pregled i liganada (Prodaja
) [50] je vrhunac u tjednu 13 u zaraženih miševa. Zavisne GTP interferon (Igtp pregled, Iigp patentnoj
) regulira antimikrobna aktivnost IFNy na način ovisan STAT1 [51, 52], i njihova ekspresija je znatno smanjena kod miševa tretiranih NS398 kraja studija. Ukupna inhibicija COX-2 aktivnosti dovela do smanjene ekspresije upalnih posrednika između tjedana 13 i 19 (slika 3); zanimljivo je ta promjena nije se odrazilo na rezultate patologija. COX-2 pokazano je da modulira Th1 /Th2 ravnotežu u upalnim odgovorima, a inhibicija COX-2, koristeći NS398 dovelo do polarizacije odgovora in vitro pregled stimulirane humanim PBMC prema Th1 [53]. Autori su pretpostavili da kronična ekspresija COX-2 i proizvodnja rezultira PGE2 u inhibiciji učinkovitosti mukoznog imunog odgovora povećanje stanje tolerancije. Izraz gena uzorak smo opazili ovdje doista u skladu s učinkom COX-2 inhibicije na upalni odgovor (vidi sliku 3 i Tablica 1), iako se promjene u ekspresiji klasičnih Th1 /Th2 medijatora kao što je IL-12, I-10 i IL-4 nije se značajno razlikuju u našem istraživanju. pregled, infekcija s H. pylori pregled je bio prijavljen do oštećenja epitela integritet i nekoliko potencijalnih mehanizama za to su izvijestili (prikaz u [54]). CagA, glavni H. pylori pregled patogenost faktor, je premještena u epitelnim stanicama putem aparata za izlučivanje tipa IV [55, 56]. Studije u psećem bubrega stanica modelu (MDCK) pokazali su da CagA povezuje s tijesnim junction adapter proteina zona occludens 1 (ZO-1, miš homologije -tight junction protein 1, Tjp1) i spojnog adhesion molecule (Jcam ili pekmez), što je dovelo na dugi rok prekida epitelne funkciju barijere in vitro pregled [57]. Dok smo promatrali povećana ekspresija Tjp1 Netlogu na razini transkripcije u NS398 liječenih zaraženih miševa, Jcam pregled izraz nije mijenjalo. Osim toga, EST s homologije prema koneksini 45 (AV148957, Gja7
) i Aqp5 pregled su pod utjecajem H. pylori
infekcije bez obzira NS398 tretmana (Slika 3). Kao iu koneksini 45 i Aqp5 se zna da igraju ulogu u međustanične transport vode i malih molekula, a tu je eksperimentalni dokazi da koneksini 45 djeluje izravno s Tjp1 [58, 59], čini se da COX-2 također ima ulogu u održavanju ravnoteže vode u želučanom epitela. Ova ideja je podržan od strane naših in vitro
promatranja porasta COX-2 ovisne u Zo-1 ekspresije proteina u MKN28 stanicama. Za razliku od izvještaja Amieva et al. [57] taj učinak nije vezana za status CagA H. pylori pregled (slika 4). Barrier funkcija efekti u mišjem modelu su u svakom slučaju vjerojatno neće biti zbog akcije CagA, jer iako smo otkrili da je H. pylori pregled SS1 izrazio CagA protein, nismo bili u mogućnosti detektirati translokacije u bilo in vitro
ili in vivo eksperimentima pregled (podaci nisu prikazani). Dakle, čini se da je H. pylori infekcija pregled, ima dodatne mehanizme kojima bi se utjecalo epitela integritet. To je također napomenuti da je još jedna H. pylori pregled patogenosti faktor, vakuolirajući toksin (vaca) uzrokuje formiranje vakuole ispunjenih tekućinom u epitelnim stanicama i nadalje, ova aktivnost može se inhibirati in vitro pregled po NS398 liječenja [60] , Kao želučanog aquaporin izražava Aqp5 na bočnim stranama i međustanične membrana u želučane kripte [59], možemo nagađati da je to pore utječe promjena u čvrsti spoj proteina i da ima ulogu u razvoju edema u epitelu tijekom infekcija.
A broj objavljenih izvješća su pokušali rasvijetliti regulaciji gena u H. pylori pregled infekcije pomoću microarray pristup za proučavanje globalnog ekspresiju gena u želučanim epitelnim stanicama in vitro pregled [61-63] ( prikazani u [64]), izvještavanje brzo regulaciji upalnih medijatora i razne transkripcijskih faktora da se obilježja u obrascu ekspresije.

• Želučana premosnica i mehanizmi poboljšanje T2DM: matematički model
• Antimikrobna aktivnost prirodnih proizvoda protiv Helicobacter pylori: pregled