| Stomach Health > gyomor egészség >  > Stomach Knowledges > kutatások

Expression of a Na + /l-szimporter (NIS) jelentősen csökkent vagy hiányzik a gyomorrák és bélrendszeri metaplasztikus nyálkahártyájában Barrett nyelőcső

Kifejezés a Na + /l -symporter (NIS) jelentősen csökken vagy hiányzik a gyomorrák és a bél nyálkahártyáját metaplasticus Barrett oesophagus katalógusa Abstract katalógusa Háttér katalógusa A nátrium /jodid szimporter ( NIS) egy plazma membrán glikoprotein, amely közvetíti jodid (I -) közlekedés a pajzsmirigyben, a tejelő mell, nyálmirigyek, és a gyomor. Mivel NIS expresszió és szabályozás kiterjedten vizsgálták egészséges és daganatos pajzsmirigy és az emlő szöveteiben, keveset tudunk a NIS expresszió és funkció mentén az egészséges és beteg gyomor-bél traktusban. Katalógusa Methods
Ennek megfelelően vizsgáltuk NIS expresszió immunhisztokémiai analízis 155 gasztrointesztinális szövetminták és immunfoltelemzéssel 17 gyomor daganatok 83 beteg. katalógusa Eredmények katalógusa tekintve egészséges gyomor-bél megfigyeltük NIS kifejezés kizárólag a bazolaterális régiójában a gyomor mucin termelő hámsejtek. Gastritis, pozitív NIS festődés volt megfigyelhető ezekben a sejtekben mind a jelenlétében és hiányában a Helicobacter pylori katalógusa. Jelentősen, NIS expresszió volt jelen a gyomorrák, függetlenül a szövettani típus. Csak fokális halvány NIS expresszió kimutatható volt a közvetlen szomszédságában a gyomor tumorok, azaz a szövettanilag ép nyálkahártya, a kifejezés egyre fokozatosan erősebb és lineáris távolabb a tumor. Barrett nyálkahártya junctionalis és fundus-típusú oszlopos metaplasia jelenik pozitív NIS festés, míg Barrett nyálkahártya az intestinalis metaplasia negatív volt. NIS festés szintén hiányzott intestinalized gyomor polipok. Katalógusa Következtetés
Ez NIS kifejezés jelentősen csökkent vagy hiányzó esetén intestinalization vagy malignus transzformáció a gyomornyálkahártya javasolja, hogy a NIS bizonyulhat jelentős tumor marker diagnosztizálására és prognózisa gyomor rosszindulatú és rákmegelőző elváltozások, mint a Barrett nyálkahártya, kiterjesztve ezáltal az orvosi jelentősége NIS túl pajzsmirigybetegség. katalógusa Háttér katalógusa jodid (I -) elengedhetetlen alkotóeleme a pajzsmirigy hormonok trijód-tironin ( T 3) és tetraiodothyronine (T 4). Ezek a hormonok létfontosságúak a normális fejlődését és érését a központi idegrendszer a újszülött és több anyagcsere-funkciók a felnőtt. I - anyagcsere emberben, úgy tűnik, alkalmas arra, hogy elegendő I - a normál pajzsmirigy működését az arcát a környezeti szűkösség I -. A sarokköve I - anyagcsere aktív I - felvételét a pajzsmirigy, a folyamat által közvetített nátrium /jodid szimporter (NIS) [1, 2]. NIS szerves plazma membrán glikoprotein található a bazolaterális membrán a pajzsmirigy tüszős sejtjeiben [3]. Bár NIS-közvetített aktív I - felvétel már régóta úgy tekintenek, mint tisztán pajzsmirigy jelenség, most már világos, hogy az aktív I - közlekedés megfigyelt extrathyroidal szövetekben, mint a nyálmirigyek, a tejelő tőgy, a gyomor nyálkahártyáját, és placenta is közvetíti a NIS [3-8]. A NIS cDNS klónozott ezek a szövetek azonos pajzsmirigy NIS [5]. Valóban, deglikozilálása N-glikozidáz F vagy metionin-specifikus CNBr hasítása pajzsmirigy, gyomor, és emlőmirigy NIS fehérjék jelezte, hogy a NIS azonos fehérje minden ezekben a szövetekben [6]. NIS-közvetített radiojód felvétel a gyomorban és a nyálmirigyek rutinszerűen megfigyelhető radiojód / 99mTcO 4 -whole test scintiscans (1A ábra) [9]. 1. ábra NIS expresszióját különböző szövetekben. A: radiojód felhalmozódás NIS-t expresszáló humán szövetekben (SG: nyálmirigyek, T: a pajzsmirigy, a G: gyomor) után 2 órával a 99mTc-pertechnetát adminisztráció (5 mCi). B: Immunoblot elemzések az emberi NIS expresszió Graves pajzsmirigy (T), normál nyálmirigyek (SG), és a normál gyomornyálkahártya (G). Összes fehérje (50 ug) elektroforézisnek mindegyik sáv; a nitrocellulóz membránt próbaként 3 nM affinitással tisztított anti-humán-NIS Ab leírt Anyagok és módszerek. C-H: immunhisztokémiai elemzéseket NIS expresszió humán-jodid-koncentráló szövetekben. C: Normál pajzsmirigy (eredeti nagyítás: 400 ×), D: Graves pajzsmirigy, erős basolaterális NIS festése follikuláris hámsejtek (eredeti nagyítás: 1000 ×), E: A nyálmirigy (eredeti nagyítás: 400 ×), F: bazolaterális NIS festés a nyál ductalis sejtek (eredeti nagyítás: 1000 ×), G: gyomornyálkahártya (eredeti nagyítás: 400 ×), H: bazolaterális NIS festés a gyomor mucin-kiválasztó sejtek (eredeti nagyítás: 1000 ×). katalógusa a kínálat a I - a pajzsmirigy hormon bioszintézis szabályozza táplálék I - bevitel, I - felszívódás, és a pajzsmirigy I - felvételt. I - feltételezhető, hogy felszívódik a vékonybélben, de sem az anatómiai helyét a felszívódás sem a mechanizmust azonosítottak. Érdekes módon, a gyomor NIS közvetíti aktív transzport I - a véráramból a gyomor lumenbe, azaz az aktív szekréció
I - a gyomornedv. A szekretált i - ezután recirkuláltatjuk a véráramba, amikor ez felszívódik együtt újonnan lenyelt táplálék I -, a vékonybélben. I - végül kiválasztódik elsősorban a vesén keresztül. A szerepe szekretált I - a gyomornedvben ismeretlen, mivel a funkciója NIS-mediált I - szekréció a nyál a nyálmirigyekben. Ezzel szemben a funkcionális szerepe a NIS-közvetített I - transzlokáció a szoptatós tejmirigy elengedhetetlen, és nagyon világos: az a folyamat eredményezi azt - szekréció a tejet, így ellátó anion a szoptatott újszülött az ő /saját pajzsmirigy hormon bioszintézis [6]. katalógusa adatok NIS expressziós és funkcionális régiókban a gyomor-bélrendszer más, mint a gyomorban még gyér és kissé ellentmondásos. A jelenléte a NIS átirat, által érzékelt RT-PCR-rel, számoltak be mind a vastagbél [10] és a vékonybélben [11]. Azonban más vizsgálók nem tudták, hogy megerősítsék a NIS transzkriptum sem a két szövetek [5, 12, 13]. By immunoshistochemistry, Spitzweg munkatársai
[5], Lacroix és munkatársai katalógusa [13], és Wapnir munkatársai katalógusa [14] megfigyelték néhány NIS protein expresszió a vastagbélben; Ezzel szemben, a Vayre munkatársai katalógusa [15] figyelhető meg csak a végbélben, de nem a többi a vastagbélben. Egyik vizsgálatok eddig elvégzett mutattak NIS kifejezést a nyelőcső [3]. Megállapítások NIS kifejezés a gastrointestinalis tumorok is korlátozott. Gyomorrák, ellentétben a nyálkahártya normális, általában számoltak be, hogy nem mutatják azt - vagy pertechnetát ( 99mTcO 4 -) felhalmozási [16-18] (pertechnetát egy anion azonos méretű és töltés ahogy - és hasonlóképpen szállítják NIS), az egyetlen kivételt a Wu és munkatársai katalógusa [19], akik arról számoltak be radiojód felvételét a gyomor adenokarcinóma. Ezen túlmenően, az 1960-as és a 70-es, radiojód vagy 99mTcO 4 -gastric szcintigráfia vizsgálták, mint lehetséges módszer a diagnózis a gyomor-daganat, azon a felismerésen alapul, hogy a malignus gyomor szöveti nem szállítható I -vagy 99mTcO 4 -ba a gyomornedv [16-18]. Továbbá, az ugyanabban az évtizedben, Berquist munkatársai
használt 99mTcO 4 - szcintigráfia a diagnózis felállítását Barrett nyelőcső alapuló jellemző csere a disztális nyelőcső-nyálkahártya a 99mTcO 4 -concentrating gyomor hengerhám [20, 21]. Ezek a megfigyelések azt sugallják, hogy nemcsak NIS expresszió károsodhat eredményeként malignus transzformáció, de azt is, hogy a meghatározását NIS expresszió és funkció lehet diagnosztikus értékű gastrooesophagealis betegség.
Összhangban a fenti koncepció a mi nemrégi jelentés csökkent vagy hiányzó NIS expresszió 27 gyomor adenocarcinoma által vizsgált nagy sűrűségű szöveti microarray [14]. Mivel szöveti microarray optimálisak nagy áteresztőképességű szűrés, a mintavételi szöveti magok korlátozódik tehát bővíteni megállapítások és alaposabban megvizsgálni az NIS expresszió gastrooesophagealis rák és annak lehetséges diagnosztikus értékét elemeztük NIS expresszió normál és malignus gastrointestinalis szövetmintákat 83 betegeknél. A mintákat során nyert sebészi eltávolítását vagy endoszkópos vizsgálat és immunhisztokémiával analizáltuk hagyományos szöveti metszeteken, tekintettel arra, hogy ez a technika az előnyt kínálja, (több RT-PCR) annak meghatározása, expresszióját és a celluláris lokalizáció a NIS protein helyett a NIS transzkriptum [22] . Azt is vizsgálták NIS kifejezés immunfoltelemzéssel megtudni a sajátosságait az észlelt immunreaktivitás. Katalógusa módszerek katalógusa Snap fagyasztott szöveti mintákat vettünk immunfoltelemzéshez 17 átesett betegek reszekció gyomor daganatok (3 MALT és 14 adenocarcinoma 5 nőstény és 12 férfi beteg; átlagéletkor: 62). Megfelelő normál peritumorális szövetek is gyűjtöttünk. Katalógusa vizsgáltuk immunhisztokémiai módszerrel szövetminta nyert emésztőrendszeren 66 beteg (átlagéletkor: 54; férfi /nő arány: 37/29). Abban az esetben, a 20 rákos betegek, mintákat vettünk tumorok és a szomszédos területek (tumor, a tumor árrés, és 1 cm-es, és több mint 3 cm-re a tumor árrés) után azonnal reszekció a műtőben; A fennmaradó 46 (66-20) volt biopszia. Szövetminta vékony- és vastagbél kaptuk minden szegmense a bélrendszer (jejunum, ileum, és a jobb és bal oldali vastagbél). Hozzáférés a vizsgálat nyert a helyi etikai bizottság a Szent György Egyetemi Oktató Kórház Székesfehérvár, Magyarország. Katalógusa Immunoblot katalógusa szövettani mintákat összekeverjük 1 percig Polytron homogenizáló (Brinkman Instruments, Westbury, New York) és homogenizált, keverővel típusú üveg-teflon homogenizálóval (Caframo-Wiarton, Ontario, Kanada) egy pufferben, amely 250 mM szacharózt, 1 mM EDTA, 10 mM HEPES (pH = 7,5), és a proteáz-gátlók (90 ug /ml aprotinin, 4 ug /ml leupeptin, 0,8 mM fenil-metánszulfonil-fluorid). A membrán frakciókat ismertetett módon állítjuk elő [23]. PAGE és elektroblottingot nitrocellulóz végeztünk a korábban leírtak [23]. Az összes mintát hígítottuk 1: 2 arányban mintapufferben, és melegítettük 37 ° C-on 30 percig az elektroforézis előtt. Immunfoltelemzés leírtak szerint végezzük [23], és affinitás-tisztított anti-humán-NIS (-hNIS) AB [6, 14] (1 ug /ul) 1: 2000 hígításban, és 1: 2000 hígítás egy torma-peroxidázzal kapcsolt szamár anti-nyúl IgG-t (Amersham). Mindkét inkubálást is végzünk 1 órán át. A fehérjéket tettük láthatóvá a fokozott kemilumineszcencia (ECL) Western-blot-érzékelő rendszer (Amersham).
Immunhisztokémia
Minden gasztrointesztinális szöveti szakaszok (3 um) adunk paraffinmentesített és rehidratált. Minden metszeten antigen útján 10% -os citrát-puffer. Mosófolyadékokat történik TBST [0,3 M NaCl, 0,1% Tween 20, 0,05 M Tris-HCl-t (pH = 7,6)] 5 percig. Endogén peroxid aktivitást blokkoltuk 5% -os H 2 O 2 15 percig. Az endogén biotin aktivitást blokkoltuk a DAKO biotin blokkoló rendszerrel (Carpinteria, CA). A metszeteket 1 órán át inkubáltuk az affinitás-tisztított poliklonális anti-humán NIS antitest ellen létrehozott az utolsó 16 aminosavat a karboxi-terminális végén a fehérje [22]. A kezdeti koncentrációja az ABS volt 1 ug /ul; azokat hígítjuk a blokkoló oldatban 1: 6000. A katalizált Signal Amplification Kit (DAKO, Carpinteria, CA) alkalmaztunk a hátralévő szerinti eljárás a szállító utasításai szerint. Nyálmirigyek fültőmirigy használtunk pozitív kontrollként és bélfodri nyirokcsomó, mint negatív kontrollt. Valamennyi metszetet hematoxilinnel ellenfestettük.
Eredménye
immunhisztokémiai vizsgálatát NIS a pajzsmirigy, nyálmirigyek, és a gyomor kiderült nagyon tisztán, amelyben különösen sejtekben NIS található az egyes szövetek, nevezetesen a pajzsmirigy epiteliális (ábra. 1C, D), nyálmirigy ductalis epithelialis (ábra. 1E, F), és a gyomor- mucin-termelő epiteliális sejtek (ábra. 1G, H). Mindhárom típusú sejtek, NIS egyértelműen megfigyelhető a bazolaterális plazmamembrán. Az immunoblot analízissel membrán frakciók, az emberi NIS detektáltunk főként, mint egy teljesen glikozilált érett ~ 90-120 kDa polipeptid pajzsmirigy, nyálmirigy, és a gyomor (ábra. 1B és ábra. 2). Korábban már kimutatták, hogy a patkány szövetekben, NIS különbségek elektroforetikus mobilitása miatt különböző mértékű glikozilációs [6]. A részlegesen glikozilált ~ 50 kDa-os prekurzor sáv és ~ 180 kDa-dimer sáv figyelhető meg pajzsmirigy is kimutattak nyálmirigyek és a gyomorban után hosszabb expozíciót. 2. ábra az immunoblot analízist a gyomor NIS expresszió emberi gyomor tumorok (T) és a normál peritumorális szövetek (N). A, B, és D: adenokarcinóma, a C: MALT lymphoma.
Megvizsgáltuk NIS protein expresszióját immnunoblot elemzés 17 gyomor daganatok (3 maláta és 14 adenokarcinómák), és a nekik megfelelő peritumorális normális szövetekben. Tizenkét tumor (71%) nem mutatott NIS expresszióját és 5 (29%) mennyiségben a tumoros szövetek szignifikánsan csökkent NIS expresszió képest, hogy a normál gyomornyálkahártya (1. táblázat). Hat peritumorális szövetek jelenik NIS expresszió hasonló a normál nyálkahártya, 4 mutatott gyenge kifejezés, és a 7. hiányzott NIS kifejezés teljesen. Nem MALT elváltozások jelennek meg a NIS-festés; Érdekes, hogy a normális nyálkahártya közvetlen közelében a tumor szintén negatív volt (1. táblázat és ábra. 2) .table 1 immunoblot elemzését a Na + /L- szimporter protein expresszió gyomor tumorok
Case N ° Matton Szövet- Matton Neme Matton Kor Matton immunoblot tumor Matton immunoblot nyálkahártya normális Matton 1 katalógusa adenokarcinóma katalógusa M
71 katalógusa - -
2
  • gyomor cikk
    •   
  • A gyomor szerkezet
    •   
  • Gondoskodás a gyomor
    •   
  • kutatások

    • kutatások

    kutatások

    Other Languages

    gyomor egészség © https://www.stomachillness.com/hu