PLoS ONE: smanjenu Iskazivanje Proangiogenic faktora rasta i njihovih receptora u čireva na želucu i kod bolesnika s cirozom

Sažetak pregled

Ciljevi

Patogeneza višu pojavu peptičkog ulkusa u bolesnika s cirozom je složen. Trombociti može potaknuti angiogenezu i promicati čira na želucu ozdravljenja. Usporedili smo izraze proangiogenic faktora rasta i njihovih receptora u želučanog čira margini između bolesnika s cirozom s trombocitopenijom i onih koji nisu bolesnika s cirozom rasvjetljavanja mogućih mehanizama. pregled

Metode

Prihvatljivi cirotičnih pacijenata ( n = 55) i ne-cirotičnih pacijenata (n = 55) koji su želučani vrijed su bili upisani. Sluznica iz želučanog čira margin i neulcerozne područja su uzorci te mRNA izrazi proangiogenic faktora rasta (čimbenik rasta vaskularnog endotela [VEGF], faktor rasta krvnih pločica [PDGF], osnovni faktor rasta fibroblasta [bFGF]) i njihovi receptori (VEGFR1, VEGFR2, PDGFRA, PDGFRB, FGFR1, FGFR2) su mjere i uspoređuju. Broj trombocita i izrazi tih faktora rasta i njihovih receptora bili povezani jedni s drugima. Pregled

Rezultati

Dvije grupe uspoređivane su u pogledu spola, veličine ulkusa i stope zaraze od . Helicobacter pylori
Međutim, cirotični skupina bili mlađi dobi, imala smanji broj trombocita od onih u neciroznim skupine (p < 0.05). Cirotične pacijente se smanjila mRNA izraze PDGFB, VEGFR2, FGFR1, FGFR2 i u želučani ulkus razlikom u usporedbi s onima ne-cirotičnim pacijentima (p < 0.05). Smanjeno izrazi PDGFB i VEGFR2, FGFR1 i FGFR2 su dobro korelira sa stupnjem trombocitopenije u tim bolesnika s cirozom (ρ > 0,5; p < 0,001). Pregled

Zaključci pregled

Naša otkrića podrazumijeva da smanjena aktivnost proangiogenic čimbenika i njihovih receptora može doprinijeti patogenezi želučanog ulkusa u bolesnika s cirozom pregled

Izvor:. Luo JC Peng IL, Hou MC, Huang KW, Huang HC, Wang YW, et al. (2013) smanjenu Izražavanje Proangiogenic faktora rasta i njihovih receptora u želučanog ulkusa u bolesnika s cirozom. PLoS ONE 8 (4): e61426. doi: 10,1371 /journal.pone.0061426 pregled

Urednik: Matias A. Avila, Sveučilište Navarra Medicinskog fakulteta i Centra za primijenjena medicinska istraživanja (CIMA), Španjolska pregled

Primljeno: 24. prosinca 2012; Prihvaćeno: 9. ožujak 2013; Objavljeno: 19. travanj 2013 pregled

Copyright: © 2013 Luo et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Sadašnjost istraživanje je podržan od strane istraživačke potpore iz Opće bolnice branitelja Taipei (V101-028 i V102C-006). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Prethodne studije su pokazale da cirotičnih pacijenata imaju veću prevalenciju peptički ulkus bolesti (pud) nego u općoj populaciji [1], [2]. Nedavne velike, za stanovništvo kohortne studije iz Tajvana su pokazala da cirotičnih pacijenata imaju veći rizik od razvoja peptički ulkus krvarenje (pub) i čir ponovnog krvarenja [3], [4]. Patogeneza višu učestalost pud u bolesnika s cirozom je kompleksan i multi-faktorski. Teoretski, portalne hipertenzije je uključen što uzrokuje crijevni kongestija, poremećena reparativna procese gastro-duodenalni sluznice i želučani mikro-vaskularne abnormalnosti [5], [6], koji su svi dovesti do povećanja osjetljivosti na kiseline i pepsina. Također se je pokazalo da cirotični stanje dovodi do oštećenom želučane sluznice dodavanje /mehanizme uključujući oslabljene bikarbonata i lučenjem sluzi, smanjenom endogenog sintezu prostaglandina, želučane sluznice protok krvi i smanjenu sluznice kisika popravak [7], [8], [9 ]. pregled formacija

Čir je dinamičan neravnoteža između agresivnih sluznice čimbenika i obrambenim /popravljanje faktora. Kada se ovi obrambeni i ljekoviti faktori su manje od agresivnih faktora, ozljede sluznice pogoršati i čirevi razvoju [10]. Angiogeneza je središnji proces u čira na želucu ozdravljenje [11]. Nekoliko faktora proangiogenic pohranjuju se u trombocitima, uključujući čimbenik rasta vaskularnog endotela (VEGF), čimbenik rasta fibroblasta (bFGF) i faktor rasta iz trombocita (PDGF) [12]. Ovi faktori rasta se oslobađa u bazi čira iz trombocita i aktivirati i potaknuti nastajanje novih krvnih žila u fazi hemostaze od zarastanja čira [13]. To je vjerojatno da će račun za sposobnost trombocita kako bi potaknula angiogenezu i promicanja čira na želucu ozdravljenje [12], [14]. Trombocitopenija se obično vidi u bolesnika s cirozom zbog slezene sekvestracija trombocita i smanjenju razine i aktivnosti trombopoietinskim [15]. Pregled

U ovoj studiji usporedili smo iskaza proangiogenic faktora rasta (VEGF, PDGF, bFGF ) i njihovi receptori (VEGFR1, VEGFR2, PDGFRA, PDGFRB, FGFR1, FGFR2) tijekom želučanog čira razlikom između cirotičnih pacijenata s trombocitopenijom i onih necirotičnih pacijenata bez trombocitopenije. Osim toga, istražili smo ulogu proangiogenic čimbenika i njihovih receptora u želučanom zarastanja čira u bolesnika s cirozom.

Materijali i metode

Pacijenti Upis

cirotičnih i ne-cirotičnih pacijenata s želučanog ulkusa dokazanim putem video ezofagogastroduodenoskopija (EGD) dijagnoza (Olympus GIF-XQ260 gastrointestinalni videoscope, Aizo Olympus, Fukushima, Japan) se sukcesivno. Dijagnoza ciroze jetre u ovoj studiji je na temelju karakterističnih nalaza, uključujući fizičku stigmama ciroze, kompjutorizirana tomografija ili ultrazvučnih nalaza u nodularnog površini jetre, ogrubeo echogenicity od parenhima jetre, proširenoj slezena i detekciju varikozitete jednjaka i endoskopije [ ,,,0],16]. Kriteriji za isključenje uključeni oni koji su uzimali aspirin, nesteroidni protuupalni lijekovi (NSAR), klopidogrel, tiklopidin, steroidi, inhibitori protonske pumpe, histamin receptora 2 antagonisti, mizoprostol ili sorafenib, a oni koji su pili alkohol ili dimljeni, imao trombocitopeniju (trombocita < 30.000 /mm ^{3), karcinom ili drugi zloćudni tumor, uključujući malignih čireva, aktivni čireva s krvarenjem, u prošlosti povijesti želuca operacije, krvarenje sklonost, uremije, aktivnosti nestabilnog bolesti ili lošeg općeg stanja [17]. Ova studija je odobren od strane Institutional Review Odbora Taipei branitelja Opće bolnice (TVGHIRB: 98-12-04), a proveden je u skladu sa smjernicama Deklaracije u Helsinkiju. Svi pacijenti pod uvjetom pismeni informirani pristanak prije sudjelovanja u ovoj studiji pod pretpostavkom da su imali želučanog ulkusa tijekom EGD. Pregled}

Mjerenja

medicinske i osobne povijesti bolesti pacijenata su pregledani i laboratorijski podaci, uključujući trombocita strani, serum albumin, hemoglobin i kreatinin su zabilježene. Tijekom postupka EGD, veličina čira na želucu je mjerena pomoću kalibrirane biopsija pincetu [18] i sluznice tkivo od čira marža uzima kao standardni postupak za histološke preglede kako bi se isključila maligna i za otkrivanje Helicobacter pylori (H. pylori) pregled infekcije (Giemsa boja) [17], [18]. Mukozna tkiva (ukupno oko 15 mg, dva dijela uzorka) od čira margine i neulcerozne područjima (antruma) se otopi, odnosno pomoću endoskopskih biopsija i odmah zamrznut u tekućem dušiku i spremljeni na -80 ° C do daljnje analize. Čir definirani su kao za sluznicu razbija ≥3 mm [17], [18]. Svi endoskopija postupci su i fotokopirati dvije starije endoscopists (Luo i HOU), a dijagnoza čira na želucu je potvrdila još dva endoscopists koji su bili zaslijepljeni na kliničkom statusu ispitanika. Pregled

Izolacija mRNA i real-time PCR pregled

ukupna RNA se ekstrahira iz želučane sluznice pomoću 500 ul TRIzol reagens (Invitrogen, Carlsbad, USA) u skladu s uputama proizvođača. RNK je dalje pročišćena korištenjem 100 ul kloroforma tretmana, a zatim istaloži pomoću 250 jal izopropanol prije sinteze DNA komplementarna. Genomska DNK je kontaminirano kod ekstrahirane RNA je uništen pomoću DNaseI (Invitrogen, USA), na sobnoj temperaturi tijekom 15 min. Kvaliteta izolirane RNA provjerena je elektroforezom na 1,0% agaroza-formaldehid gelu i njegova količina je utvrđena mjerenjem njene apsorbancije na valnoj dužini od 260- i 280-nm. Jednolančana komplementarna DNA sintetizira GoScript ™ reverzne transkriptaze (Promega, SAD) i oligo dT primer [19]. Pregled

Za kvantificiranje genske izraze VEGF, VEGFR1, VEGFR2, PDGFA, PDGFB, PDGFRA, PDGFRB, bFGF, FGFR1, FGFR2, kvantitativne real-time polimeraze lančane reakcije (PCR) se izvodi upotrebom LightCycler®480 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN). Sekvence naprijed i natrag primeri su opisane u tablici 1. pregled

U stvarnom vremenu kvantitativni PCR je provedena na LightCycler®480 pomoću GoTag® qPCR Master Mix (Promega, USA) u skladu s uputama proizvođača. Kvantitativni PCR se sastojao od početnog zastoja na 95 ° C tijekom 10 minuta, a zatim 45 ciklusa od 95 ° C za 15 s i 54 ° C tijekom 1 min, s 40 ng templatne cDNA i 2 uM klice se koristi za svaki uzorak , Signali iz svakog uzorka su normalizirani na vrijednosti dobivene za vođenje gena GAPDH, koji je vodio istodobno s eksperimentalnim uzorcima. Metoda usporedne prag ciklusa (Ct) (ΔΔCt) se koristi za izračunavanje relativnih genska ekspresija (promjena puta) između ispitivanih i referentnih uzoraka [19]. Kontrole bez koraka RT ili bez predloška su uključeni za svaki par početnica za provjeru eventualnih onečišćenja. Kao drugi kontrole kvalitete mjera, topljenje (disocijacija) krivulje PCR reakcije su praćene kako bi se osiguralo da postoji samo jedan produkt PCR-a nema primera regulator jačine [19]. Sva mjerenja je duplikat u svakom uzorku. Pregled

Statistička analiza pregled

Podaci su izraženi kao prosjek ± standardna devijacija (SD) i rezultati uspoređeni su između skupina pomoću hi-kvadrat testa, Fisherov egzaktni test , Studentov t-test, odnosno ne-parametarskog Mann-Whitney u test, kada je to potrebno. Korelacija između dviju skupina su analizirani pomoću Kopljanik metodu korelacije. Non-parametarska Wilcoxon Signed Rank testovi su korišteni za usporedbu kontinuiranog podatke za istog pacijenta između ulkusa i neulkusna područja. Sve statističke analize provedene su pomoću SPSS for Windows, verzija 14.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Sve p
vrijednosti su dvosmjerni, a vrijednost manja od 0,05 smatrala se statistički značajnom. Pregled

Rezultati

Demografski podaci pregled

Od veljače 2010. do siječnja 2012, 55 pravo cirotični i 55 prihvatljivi cirotičnih pacijenata koji su endoskopski dokazano želučanog ulkusa su bili upisani uzastopno. Od ukupno 110 enrollees, srednja dob bila je 60,3 ± 11,8 godina (raspon 27-86 godina). Šezdeset i devet (62,7%) bolesnika bili muškarci, a 41 (37,3%) su žene. Demografski podaci svih pacijenata prikazani su u tablici 2. Dvije skupine su bile usporedive u smislu spola, veličine ulkus, hemoglobina, serumskog kreatinina i stope zaraze od H. . Pylori
Međutim, cirotični grupa bila mlađa dob i imao je manji broj trombocita i serum albumin od onih neciroznim skupini (p < 0,05). (Tablica 2) pregled

mRNA izrazi Proangiogenic faktori rasta i njihovih receptora pregled

nije bilo značajne razlike u mRNA izrazima proangiogenic faktora rasta (VEGF, bFGF, PDGF) i njihovi receptori (VEGFR1, VEGFR2, FGFR1, FGFR2, PDGFRA, PDGFRB) tijekom non -ulcer područja želučane sluznice između cirotičnih i necirotičnih grupa (Tablica 3). Tijekom ulkus margini želučane sluznice, cirotične grupa i necirotičnih grupe bile su usporedive u izrazima VEGF, VEGFR1, bFGF, PDGFA, PDGFRA i PDGFRB (Sl. 1). Međutim, cirotični grupa imala niže mRNA izraze PDGFB, VEGFR2, FGFR1 i FGFR2 nego neciroznim skupine (Sl. 1). Pregled

Daljnja analiza pomoću Wilcoxon Signed Rank ispitivanja provedena je usporediti podatke za isti pacijent između ne-čir na želucu i čira margin područjima. Došlo je do značajnog povišenja mRNA izrazima bFGF i PDGFRB na margini područja ulkusa u usporedbi s ne-čira područja u oba necirotičnih i bolesnika s cirozom (Tablica 4). Nije bilo značajnih povišenja mRNA izraza VEGF, VEGFR1, PDGFA i PDGFRA na margini područja ulkusa u usporedbi s ne-čira područja u oba necirotičnih i bolesnika s cirozom (Tablica 4). Došlo je do značajnog povišenja mRNA izraza VEGFR2, PDGFB, FGFR1 i FGFR2 na margini područja ulkusa u usporedbi s ne-čira područja (p < 0,05) u neciroznim grupu, ali nije bilo značajnijih povišenja mRNA izrazi PDGFB, VEGFR2, FGFR1 i FGFR2 na margini područja ulkusa u usporedbi s ne-čira područja u ciroza skupine (sl. 2 i Tablica 4). pregled

Korelacija Proangiogenic faktora rasta /receptore i trombocita Točka pregled

mRNA izrazi PDGFB, VEGFR2, FGFR1 i FGFR2 u želucu margin područjima bolesnika s cirozom imali dobru korelaciju s brojem trombocita (ρ > 0,5, p. < 0,001, Slika 3).

Rasprava pregled

otkrili smo da cirotičnih pacijenata se smanjila mRNA izraze proangiogenic faktora rasta (PDGFB) i njihove receptore (VEGFR2, FGFR1 i FGFR2) u želuca marže u usporedbi s onima u ne- cirotičnih pacijenata. Te smanjena izrazi PDGFB, VEGFR2, FGFR1, FGFR2 i su dobro korelirane sa stupnjem trombocitopenije u cirotičnih pacijenata. Ovi rezultati upućuju na smanjenu čira na želucu rana u bolesnika s cirozom i pružiti moguće objašnjenje za višu pojavu peptičkog ulkusa u bolesnika s cirozom. Pregled

Faktori koji mogu utjecati čira na želucu ozdravljenje uključuju dob, piće, pušenje, korištenje nesteroidnih protuupalnih lijekova, aspirin, steroidi, klopidogrel, tiklopidin, inhibitori protonske pumpe, histamin receptor 2 antagonisti, mizoprostol, status H. pylori
infekcije i prehrambene stanje [20]. Mi smo isključeni pacijenata koji su pili alkohol, pušili, uzeo navedene lijekove, a oni s aktivnošću nestabilnom bolesti, lošeg općeg stanja, odnosno temeljne malignih bolesti tijekom upisa kako bi se izbjegle ove čimbenike. Cirotičnih pacijenti su mlađe dobi, a imali su i manju serum albumin u odnosu na ne-bolesnika s cirozom. Međutim, oni su usporedivi u serumskog kreatinina, želučanog čira veličine, a po stopi od H. pylori infekcija pregled. pregled

PDGF, glikoprotein, pohranjen u trombocitima te se oslobađa nakon stimulacije. PDGF čini oko 50% od krvnih pločica mitogene aktivnosti [21], poticanje proliferacije arterijskih glatkih stanica i fibroblasta. PDGF, zajedno s bFGF, igra važnu ulogu u obnovi vezivnog tkiva, uključujući angiogeneze i ubrzava zacjeljivanje ulkusa [21], [22]. Dobra povezanost između broja trombocita i PDGFB izraza sugerira da trombocitopenija kod bolesnika s cirozom može imati utjecaj na lučenje PDGFB time utjecati na čir želuca ozdravljenje. Pregled

bFGF, aktiviranjem FGFR-ERK signalnog puta, pokazalo se da je značajno ubrzavanje zarastanja čira preko povećanja gustoće kapilarama u čirevima tkiva i promicanje epitelnih stanica proliferaciju [19], [22], [23]. Naši rezultati su pokazali da mRNA izrazi bFGF bila značajno povećana u želučanog čira rubu obiju cirotičnih i necirotičnih pacijenata (Tablica 4). Međutim, mRNA izrazi FGFR1 i FGFR2 su značajno smanjeni u želuca marginama cirotičnih pacijenata u usporedbi s onima od necirotičnih pacijenata te da je mRNA za FGFR dobro korelira sa trombocita u cirotičnih pacijenata. Zbog ograničene količine uzoraka želuca, ne možemo pojasniti odnos bFGF FGFR-ERK signalni put, angiogeneze i proliferacije epitelnih stanica u cirotičnih pacijenata. Daljnja istraživanja pomoću cirozom jetre modelu štakora su potrebne pojasniti ulogu trombocitopenije u bFGF FGFR-ERK signalizaciju, angiogeneze, i zarastanja čira. Pregled

Prisutnost VEGF mRNA i proteina u megakariocita pruža jake dokaze da je sinteza VEGF tijekom trombopoeze je podrijetlo trombocita VEGF [24]. VEGF, koji je pohranjen u pločicama a-granulama, izlučuje agregacije trombocita inducirane trombinom, kolagena ili adenozin difosfat [25]. VEGF i njegova receptora, VEGFR, znatno ubrzava zarastanje čira na želucu koje pojačavaju angiogeneze uključujući proliferaciju endotelnih stanica, migraciju i cijevi postrojbi na čir stranicama [22], [26]. Jedna studija je pokazala da životinja trombociti ubrzani čira na želucu iscjeljenje kroz prezentaciju VEGF [27]. Međutim, naše istraživanje samo je pokazala da je mRNA VEGFR2 značajno u ulkus marginama ne-bolesnika s cirozom, ali ne i povećana je u bolesnika s cirozom koji su imali značajno niže broja trombocita. Ni VEGF, niti PDGFA je uzdignut u čira na želucu marginu cirotičnih i ne-cirotičnih u našoj studiji, što nije u skladu s prethodnim istraživanjima koja pokazuju povećanu VEGF i PDF izražavanje tijekom želučanog ulkusa ozdravljenje i kod ljudi i kod pokusnih životinja [11], [ ,,,0],12], [22], [26]. Moguće objašnjenje je da smo upravo je površno (ne duboko) biopsija s malom pincetom da se tkivo sluzi od čira margine kako u cirotičnih i ne-cirotičnih kako bi se izbjeglo nakon biopsije krvarenje u cirotičnih pod etičko razmatranje. Pregled

Ovo je prva klinička studija koja pokazuje smanjena mRNA izraze proangiogenic faktora rasta (PDGFB) i njihove receptore (VEGFR2, FGFR1 i FGFR2) u želuca marginama bolesnika s cirozom, a da ti smanjena izrazi su dobro povezana s nižim trombocita u tih bolesnika. Trombociti su važni u zarastanja čira [12]. Trombocitopenična štakori se pokazalo da imaju odgođeno želučanog čira zacjeljivanje u usporedbi sa zdravim štakorima [28]. To retardirano zarastanja čira može okrenuti transfuzije trombocita iz zdravih životinja i povećanje broja trombocita u krvotoku kod štakora poboljšana želučanog čira rana davanjem thrombopoeitin [27], [28]. Pregled

Neočekivano, smanjena ekspresija VEGF i PDGFA-proangiogenic faktori rasta nije pronađen, dok je smanjena ekspresija VEGFR2, FGFR1 i FGFR2 -proangiogenic čimbenike rasta zabilježeno je receptori. Sve cirotičnih smo uključeni u ovu studiju imali povijest jednjaka varikoziteta krvarenja i dobio varičela podvezivanja i redovito praćenje, što znači da oni imaju težu portalna hipertenzija. Vrlo je vjerojatno da pacijenti s nižom trombocita imao težu portalna hipertenzija, te da je vaskularna derangements srednjih do portalne hipertenzije dovesti do smanjenja ekspresije receptora za proangiogenic faktora kao što su FGFR1, FGFR2 i VEGFR2. Stoga je potrebno daljnje istraživanje pomoću eksperimentalnih životinja razjasniti problem. Pregled

Postoji nekoliko ograničenja ovog istraživanja. Prvo, iako je prosječna veličina čira bila usporediva u obje skupine, uzorkovanje pristranosti (biopsija iz želuca margine) ne može se izbjeći. Drugo, bilo je ograničen broj uzoraka želuca svaki predmet razjasniti odnos između izraza faktora proangiogenic rasta, njihovi receptori, putevima prijenosa signala za angiogeneze i proliferacije stanica pomoću Western upijanja ili druge metode. Treće, ulkus ozdravljenja i izraz faktora rasta su dinamični. Stoga je nemoguće i neetično imitirati istraživanja na životinjama [28] i procijeniti promjene u proangiogenic faktora rasta, njihovi receptori i mehanizmi procesa ozdravljenja nakon transfuzije trombocita u bolesnika s cirozom ili nakon iscrpljivanja trombocita u ne-bolesnika s cirozom.

Zaključak pregled

patogeneza pud kod bolesnika s cirozom je složen, a mehanizmi koji uključuju odgođeno zarastanja čira može biti jedan od glavnih razloga. Otkrili smo da je smanjena mRNA izrazi proangiogenic faktora rasta (PDGFB) i njihove receptore (VEGFR2, FGFR1 i FGFR2) u želuca marginama su dobro usklađene s stupnjem trombocitopenije u bolesnika s cirozom. Ovi nalazi sugeriraju da smanjena aktivnost proangiogenic čimbenika i njihovih receptora može doprinijeti patogenezi želučanog ulkusa u bolesnika s cirozom. Pregled

Izvori pregled

Autori zahvaljuju gospođi Pui-Ching Lee ( Zavod za medicinu, Taipei Veterani Opće bolnice) za njezinu pomoć u statističkom konzultacije i slika uređivanje. pregled

• PLoS ONE: Utjecaj PSCA varijacija na čir želuca Susceptibility
• PLoS ONE: Metabolomics kombinaciji s multivarijatne podatke i Pathway analize o mogućim biomarkera u čira na želucu i intervencija Efekti Corydalis yanhusuo Alkaloid