Ihållande H. pylori koloniseringen i början av förvärv ålder av möss i samband med högre gastric sialylerade Lewis x, IL-10, men lägre interferon-γ uttryck

Ihållande H. pylori
kolonisering i början av förvärv ålder av möss i samband med högre gastrisk sialylerade Lewis x, IL-10, men lägre interferon-γ uttryck Bild Sammanfattning
Bakgrund
H. pylori
infektion är mindre vanliga i barndomen. Denna studie validerade om andelen H. pylori
kolonisering beror på olika förvärvs åldrar, och korrelerar med de olika gastric Lewis antigener eller cytokin uttryck efter H. pylori
förvärv.
Metoder
Vi tillämpade en unga (7 dagar gamla) C57BL /6 möss (n = 50) och vuxna (sex veckor gamla) C57BL /6 möss (n = 50). I varje grupp fick 30 möss utmanades med H. pylori Mössor och 20 möss tjänade som naiv kontroll. Framgången för H. pylori
kolonisering bedömdes på 2 nd vecka och 8 e veckan, respektive. Intensiteten hos den Lewis x, sialylerade Lewis x (sialyl-Le x), och cytokin-uttryck, inklusive TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-10 och IL-1β, var immunokemiskt färgas och Resultaten graderas.
på två nd vecka efter H. pylori
utmaning, koloniseringen andelen H. pylori
liknade mellan den unga möss gruppen och vuxna möss gruppen (89 % jämfört med 100%, P Hotel > 0,05). Men på 8 e veckan, var H. pylori
kolonisering takten betydligt lägre i den unga möss gruppen än i den vuxna möss gruppen (53% jämfört med 95%, P
= 0,003). På 8 e veckan, den unga möss med en persistens av H. pylori
kolonisering hade högre sialyl-Le x, högre IL-10, och den nedre IFN-γ än för de möss som förlorade kolonisering under 2 nd till 8 e veckan (P Hotel < 0,05).
Slutsats
ihållande H. pylori
kolonisering kan vara en förvärvs ålder determinant behandla. Efter H. pylori
exponering vid en tidig förvärvs ålder, värdsvaret med en högre sialyl-Le x och IL-10, men en lägre IFN-γ korrelerar till den därav persistens av H. pylori
kolonisering.
Introduktion
Helicobacter pylori
infektion kan orsaka kronisk gastrit och även magsår hos både barn och vuxna [1, 2]. I epidemiologiska studier seropositivitet av H. pylori
har visat sig vara mindre hos barn än hos vuxna [3, 4]. En uppföljande kohortstudie visade att den högsta förekomsten av serokonversion inträffar i den tidiga barndomen och gradvis minskar med åldern [3]. Flera studier har visat att en tidig förvärv av H. pylori
infektion i barndomen möjligen kan leda till en efterföljande förlust av kolonisering [3-6]. Men de exakta regler inom barn bestämma antingen förlust eller ihållande H. pylori
kolonisering efter tidig förvärv förblir inte känd. Review, en blodgrupp bindande adhesin (BabA) av H. pylori Review selektivt binder till fukosylerade Lewis antigen (Le b) av gastric celler medierar en tung bakteriell kolonisering [7-9]. Den andra sialinsyra bindande adhesin (SabA) av H. pylori
binder till gastric sialylerade Lewis x-antigen (sialyl-Le x) alternativt bistå ihållande kolonisering efter kronisk inflammation [10], och i synnerhet blir viktigt när Le B-antigen i värd är frånvarande eller svag [11]. Vår senaste studie avslöjade att H. pylori
infekterade barn hade en signifikant ökning av sialyl-Le x, men inte Le b uttryck [12]. Det är därför intressant att kontrollera om det fortfarande i början av förvärvet av H. pylori
i barndomen kunde relateras med de variabla värdsvaren från gastric inflammation eller av epitelial sialylering att anpassa Saba av H. pylori
.
med vuxna C57BL /6 möss äldre än sex veckor gamla, den kliniska H. pylori
stammar framgångsrikt kan kolonisera de flesta av mössen i mer än sex månader [13, 14]. Den kroniska H. pylori
infektion leder till olika Th1 typ dominerande gastric inflammationer med variabla proinflammatoriska och Th1-dominerande typen cytokinsvar mellan olika värdar [15-18]. Följaktligen till den aktuella studien syftar till först kontrollera om det fortfarande finns H. pylori
kolonisering kan vara ett förvärv ålder avgörande process. Dessutom försökte denna studie att svara på om den variabla sialyl-Le x och de inflammatoriska cytokiner uttryck efter H. pylori
utmaning kan avgöra den ihållande koloniseringen av H. pylori
infektion, särskilt i möss som mottar utmaning av tidig förvärv.
Material och metoder
möss grupper och H. pylori
isolat för utmaning experiment
Denna studie använde 100 C57BL /6-möss (50 sju dagar gamla unga möss och 50 sex veckors gamla vuxna hanmöss), inklusive 60 i experimentgruppen utmanas med en typ 1, Saba-positiv H. pylori
kliniskt isolat (HP 625) och 40 i naiva kontroller. Multiplikationerna av H. pylori
isolat applicerades med samma metod som vår tidigare möss modellstudie för att uppnå en densitet av 0,8 x 10 8 CFU /ml. [19]. För den experimentella gruppen, var en bakteriesuspensionen 0,1 ml för unga möss och 0,5 ml för vuxna möss oralt ympades under tre på varandra följande dagar, respektive. Tio vardera av de unga och vuxna möss i kontrollgruppen avlivades vid 2 nd och 8 e veckan. I försöksmöss, tio vardera av de unga och vuxna möss vid 2 nd vecka och 20 var och en av de unga och vuxna möss vid 8 e veckan efter ympning avlivades genom intraperitoneal injektion av pentobarbital ( 150-200 mg /kg). De isolerade Magarna inristade längs de större och mindre krökningar i två halvor. En hälften formalin inbäddad för histologi och Lewis antigen undersökningar. Den andra hälften placerades omedelbart i buffert, frystes på torris och förvarades vid -80 ° C under cytokin undersökning. H. pylori
infektion bevisades av en snabb ureatest och histologisk undersökning.
Gastric histologi av möss
Två utredare inklusive en patolog, omedveten om de demografiska data och kolonisering resultat, analyserade gastric histologi. Tillämpa metoden för vår tidigare möss modell [19], de histologiska parametrar, bland annat H. pylori
densitet (intervall 0-4), akut inflammatorisk poäng (AIS, intervall 0-3), kronisk inflammation poäng (CIS, intervall 0-3), atrofisk förändring (AT, intervall 0-1), och intestinal metaplasi (IM, intervall 0-3) utvärderades topografiskt över antrum, corpus och magmunnen, respektive. Det betygssystem av H. pylori
densitet som användes var enligt följande: 0, inga bakterier detekteras; 1, en mild grad av kolonisering och bakterier som inte upptäckts i varje gastric krypta; 2, en mild grad av kolonisering med bakterier som upptäckts i de flesta kryptor närvarande; 3, måttlig till tung kolonisering i alla kryptor; och 4, svår kolonisering med alla kryptor tätt packade med bakterier. De resultat som presenteras är medelvärdet för kolonisering för varje grupp. Den totala H. pylori
densitet (THPD) definierades som summan av densiteterna erhållna från antrum, corpus och magmunnen, och sålunda varierade från 0 till 12. Den totala akut (TAIS) och kroniska (TCis) inflammatoriska poäng var också en summa av poängen från tre platser (intervall 0-9).
bakteriell infektion av H. pylori
definierades som förekomst av bakterier i mag sektioner medan möss ansågs ha misslyckats med att inokuleras när inga bakterier sågs i histologi och negativa för CLO-test.
Immunohistokemisk färgning och poängsättning för gastric Lewis expression
Immunfärgning färgning~~POS=HEADCOMP av gastriska prover för Lewis-antigener utfördes med användning av avidin-biotin-peroxidas-tekniken med en vektor Ms.OM Immunodetection Kit. Den primära monoklonala antikroppen (anti-Le x, Signet Laboratories, Inc., Dedham, MA) selekterades för att detektera den gastriska Le x antigener [11, 12]. Förutom Le x antigen färgning, den monoklonala antikroppen mot sialyl-Le x (mus IgM MAB2096, Chemicon International, Inc., Temecula, CA) användes [12]. Icke-specifika bindningsställen mättades med 2-2,5% bovint serumalbumin. För varje gastric site, var intensiteten av Le x (intervall 0-5) och sialyl-Le x (intervall 0-4) scored enligt topografin på färgning (Figur 1). Totalt gastric Lewis antigen intensitet för Le x och sialyl-Le x var summan av antrum, corpus och magmunnen (intervall 0-15 i Le x och 0-12 i sialyl-Le x). Figur 1 immunohistokemiska (IHC) infärgning och gradering av Lewis x (Le x), och sialyl-Lewis x (sialyl- Le x) antigener visas för mag biopsier av möss (200 ×). IHC färgning visade negativa för två Lewis antigener och kallades poäng 0. För Lex, poäng 1 (A): ringa färgning (< 5% i parietalceller av de djupa körtlar, poäng 2 (B): djupa körtlar 5 -50% färgning och svag, poäng 3 (C): djupa körtlar > 50% färgning och stark, betyg 4 (D): hela lager av djupa körtlar med ytliga epitel färgning, ingen slem uttryck; poäng 5 (E): hela . lager med slem uttryck för sialyl- Lex, poäng 1 (F): endast ytan slem positiv, poäng 2 (G): slem och övre epitel, poäng 3 (H): övre epitel och djupa körtlar (huvud celler < 50% .); score 4 (i): övre epitel och djupa körtlar (chief celler ≥ 50%)
Immunohistokemisk färgning och poängsättning för cytokiner expression
De frusna sektioner (4

• Gastrit cystica profunda återfall efter kirurgisk resektion: två-year follow-up
• Lauren klassificering i kombination med HER2-status är en bättre prognostisk faktor på kinesiska magcancer patients