Colonização persistente H. pylori em idade precoce aquisição de ratinhos relacionados com maior gástrica sialilada de Lewis X, IL-10, mas inferior-γ interferão expressions

persistente colonização de H. pylori
em idade precoce aquisição de ratinhos relacionados com maior gástrica sialilada de Lewis X , expressões IL-10, mas inferior interferon-gama da arte abstracta
Fundo
infecção por H. pylori
é menos prevalente na infância. Este estudo validado se as taxas de H. pylori colonização
dependem de diferentes idades de aquisição, e correlacionar com os diferentes antígenos Lewis gástricas ou expressões de citocinas após H. pylori aquisição
.
Métodos
foi aplicado um jovem (7 dias de idade) C57BL /6 ratos do grupo (n = 50) e adultos (6 semanas de idade) C57BL /6 ratos do grupo (n = 50). Em cada grupo, 30 ratinhos foram desafiados com H. pylori
e 20 ratos serviu como controlo ingénuo. O sucesso de H. pylori
colonização foi avaliado com 2 nd semana ea 8 th semana, respectivamente. A intensidade da Lewis X, sialilada de Lewis X (sialil-Le x), e citoquinas expressões, incluindo TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-10, e IL-1β, foram imunoquimicamente manchado e graduada.
resultados
no 2 nd semana depois de H. pylori
desafio, as taxas de colonização de H. pylori
foram semelhantes entre o grupo de ratos jovens e o grupo ratos adultos (89 % versus 100%, P
> 0,05). No entanto, no 8 th semanas, a taxa de colonização pylori
H. foi significativamente menor no grupo de ratos jovens do que no grupo de ratinhos adultos (53% versus 95%, P = 0,003
). No 8 th semana, a ratinhos jovens com uma persistência de colonização de H. pylori
tiveram maior sialil-Le x, mais elevada de IL-10, e IFN-γ inferior do que aqueles dos ratos que perdeu colonização durante o nd a 8 th semana (P Art < 0,05) 2.
Conclusão
a persistência de H. pylori colonização
poderia ser um determinante aquisição em idade processo. Depois de H. pylori
exposição a uma idade precoce aquisição, a resposta do hospedeiro a um maior sialil-Le x e IL-10, mas um menor de IFN-γ correlaciona-se com a consequente persistência de H. pylori
Introdução
Helicobacter pylori
infecção colonização.
pode causar gastrite crônica e úlcera péptica, mesmo em crianças e adultos [1, 2]. Em estudos epidemiológicos, a seropositividade de H. pylori
tem sido mostrado para ser menos em crianças do que em adultos [3, 4]. Um estudo de coorte de acompanhamento mostrou que a maior incidência de seroconversão ocorre na infância e gradualmente diminui com a idade [3]. Vários estudos têm sugerido que uma aquisição precoce da infecção pelo H. pylori
na infância pode eventualmente levar a uma perda subsequente da colonização [3-6]. No entanto, os regulamentos exatos dentro de crianças para determinar a perda ou persistência da H. pylori colonização
após a aquisição precoce permanece pouco conhecida.
Uma adesina de ligação do grupo sanguíneo (Baba) do H. pylori
liga selectivamente para o antigénio Lewis fucosilada (Le b) de células gástricas mediar uma colonização bacteriana pesada [7-9]. A outra adesina de ligação de ácido siálico (adesina SabA) de H. pylori
se liga ao antigénio de Lewis X sialilado gástrica (sialil-Le x), alternativamente, auxiliando a colonização persistente após a inflamação crónica [10], e, especialmente, torna-se importante quando o Le b antígeno do hospedeiro está ausente ou fraco [11]. Nosso estudo recente revelou que H. pylori
crianças infectados tiveram um aumento significativo de sialil-Le x, mas não Le b expressão [12]. É, portanto, interessante verificar se a persistência da aquisição inicial de H. pylori
na infância poderia estar relacionada com as respostas do hospedeiro variáveis ​​de inflamação gástrica ou de sialilação epitelial para se adaptar sabA de H. pylori
.
Com adultos camundongos C57BL /6 com mais de seis semanas de idade, a clínica H. pylori
estirpes com êxito pode colonizar a maior parte do camundongos há mais de seis meses [13, 14]. infecção crônica do H. pylori
leva a diversos tipo Th1 inflamações gástricas predominantes com respostas de citocinas pró-inflamatórias variáveis ​​e Th1 dominante tipo entre hospedeiros diferentes [15-18]. Assim, o presente estudo visa primeiro a verificar se a persistência de H. pylori
colonização poderia ser um processo determinante aquisição-idade. Além disso, este estudo tentou responder se a variável de sialil-Le x e as expressões de citocinas inflamatórias após o desafio H. pylori
poderia determinar a colonização persistente de infecção por H. pylori
, especialmente em ratinhos que receberam o desafio de aquisição precoce.
Materiais e métodos
grupos ratos e H. pylori
isola para o experimento desafio
Este estudo utilizou 100 camundongos C57BL /6 (50 ratos jovens de sete dias de idade e 50 de seis adulto -week de idade camundongos machos), incluindo 60 no grupo experimental desafiados com um tipo 1, Saba positivo H. pylori
isolado clínico (HP 625) e 40 nos controles ingênuos. Os multiplicações de a H. pylori
isolados foram aplicados com o mesmo método que o nosso estudo anterior modelo de ratos para alcançar uma densidade de 0,8 x 10 8 UFC /ml. [19]. Para o grupo experimental, uma suspensão de bactérias de 0,1 ml para ratinhos jovens e 0,5 ml para os ratinhos adultos foi inoculado por via oral durante três dias consecutivos, respectivamente. Dez cada um dos jovens e adultos ratos do grupo de controle foram sacrificados no 2 nd ea 8 th semana. Nos ratinhos experimentais, dez cada um dos jovens e adultos ratinhos no ND semanas 2 e 20, cada um dos jovens e adultos ratinhos no 8 th semanas após a inoculação foram sacrificados por injecção intra-peritoneal de pentobarbital ( 150-200 mg /kg). Os estômagos isolados foram objecto de uma incisão ao longo das curvaturas maior e menor em duas metades. Uma metade foi formalina-incorporado para histologia e exames de antígeno de Lewis. A outra metade foi imediatamente colocado em tampão, congeladas em gelo seco, e armazenado a -80 ° C para análise de citocina. H. pylori
infecção foi comprovada por um teste de ureia rápida e exame histológico.
Histologia gástrica de ratos
Dois investigadores, incluindo um patologista, desconhecem os dados demográficos e resultados de colonização, analisou a histologia gástrica. Aplicando o método do nosso modelo de camundongos anterior [19], os parâmetros histológicos, incluindo H. pylori
densidade (intervalo 0-4), pontuação inflamatória aguda (AIS, gama 0-3), pontuação inflamação crônica (CIS, gama 0-3), a mudança atrófica (AT, gama 0-1), e metaplasia intestinal (MI, gama 0-3) foram avaliados topograficamente mais o antro, corpus e cárdia, respectivamente. O sistema de classificação de H. pylori
densidade utilizado foi o seguinte: 0, nenhuma bactéria detectado; 1, um nível leve de colonização e as bactérias não detectadas em cada cripta gástrica; 2, um nível suave de colonização com bactérias detectados na maioria das criptas; 3, moderada a colonização intensa em todas as criptas; e 4, a colonização grave, com todas as criptas densamente com bactérias. Os resultados apresentados são a média de colonização para cada grupo. A H. pylori
densidade total (THPD) foi definido como a soma das densidades obtidas a partir do antro, corpus e cárdia e, portanto, varia de 0 a 12. A aguda total (TAIS) e crónica (TCIS) pontuações inflamatórias foram também uma soma da pontuação de três locais (intervalo de 0-9).
infecção bacteriana de H. pylori
foi definido como a presença de bactérias em nenhuma das secções gástricos, enquanto os ratinhos foram considerados como não conseguiram ser inoculado quando há bactérias foram vistos em histologia e negativo para o teste CLO.
coloração imuno-histoquímica e de pontuação para a expressão Lewis gástrica
imunocoloração de amostras gástricas para antígenos Lewis foi realizada através da técnica avidina-biotina-peroxidase com um vector Ms.OM Kit imunodetecção. O anticorpo monoclonal primário (anti-Le x, Signet Laboratories, Inc., Dedham, MA) foi escolhido para detectar a Le gástrica x antígenos [11, 12]. Além Le X coloração de antigénio, o anticorpo monoclonal contra o sialil-Le X (IgM de ratinho MAB2096, Chemicon International, Inc., Temecula, CA) foi utilizado [12]. Os locais de ligação não específicos foram saturadas com 2-2,5% de albumina de soro bovino. Para cada local gástrico, a intensidade de Le X (intervalo de 0-5) e sialil-Le X (gama 0-4) foi pontuada de acordo com a topografia da coloração (Figura 1). Total gástrica Lewis intensidade antígeno para Le x e sialil-Le x foi a soma do antro, corpus e cárdia (faixa de 0-15 em Le x e 0-12 em sialil-Le x). Figura 1 A imuno-histoquímica (IHC) coloração e classificação de Lewis X (Le x), e sialil-Lewis X (sialil Le x) antigénios são mostradas para as biópsias gástricas de ratinhos (200 ×). A coloração IHC mostrou negativo para dois antígenos Lewis e foi referida como pontuação 0. Para Lex, marcar 1 (A): coloração escassa (< 5% nas células parietais das glândulas profundas; marcar 2 (B): glândulas profundas 5 -50% da coloração e fraco; marcar 3 (C): glândulas profundas > 50% da coloração e forte; marcar 4 (D): camada inteira de glândulas profundas com coloração do epitélio superficial, sem expressão de muco; marcar 5 (e): toda . camada com expressão de muco Para Lex sialil, marcar 1 (F): somente muco superfície positiva; marcar 2 (G): O muco e o epitélio superior; marcar 3 (H): epitélio superior e glândulas profundas (células principais < 50% .); classificação: 4 (I): epitélio superior e glândulas profundas (células principais ≥ 50%)
coloração imuno-histoquímica e de pontuação para a expressão de citocinas
As secções congeladas (4 uM) foram secas a temperatura ambiente durante 2 h, e fixadas com formaldeído a 3,7% durante 1 min. Após lavagem duas vezes com PBS, as amostras foram fixadas com acetona fria e, em seguida, lavadas com PBS. A Ig de ratinho reagente bloqueador (Vector Laboratories, Burlingame, CA, E.U.A.) foi utilizado para bloquear locais de ligação não específicos. Os anticorpos de rato anti-ratinho monoclonais (TNF-a, IL-6, IL-10, IL-1 e IFN-y) e o anticorpo policlonal de coelho anti-ratinho (IL-1β) foram utilizadas como o anticorpo primário. A HRP conjugado de polímero de largo espectro (Zymed Laboratories Inc., South San Francisco, CA, E.U.A.) foi utilizado como o 2 ND anticorpo. O kit de AEC foi usada para ilustrar a mancha. A intensidade de cada citocina foi pontuada de acordo com a distribuição das células de coloração positiva sobre o epitélio (intervalo de 0-3), e nos componentes da lâmina própria, incluindo a matriz, as células polimorf onucleares, linfócitos, e fibrócitos (Tabela 1) 1 .table scoring de expressões de citocinas na gástrica epitélio e lâmina própria.

Pontuação

0
1
2
3
Epitélio
negativo
Menos de 33%
33% -67%
mais de 67%
Lâmina própria
Matrix
Ausência
Presença
Linfócitos
Ausência
Presença
fibr�itos
Ausência
Presença
Neutrófilos
Ausência
Presença of the pontuação quantitativa de cada citocina no epitélio foi o seguinte: marcar 1: coloração positiva no citoplasma das células epiteliais apenas na parte superior 1/3 parte do epitélio; escore 2: sobre a parte superior e médio do epitélio (1 /3-2 /3); pontuação 3: em toda a camada de epitélio (> 2/3). A coloração positiva de cada citocina na lâmina própria (linfócitos, fibrócitos, e neutrófilos) significa que havia mais de cinco células positivas em um campo de alta potência de vista no exame microscópico. Análise
Estatística
χ de Pearson 2 de ensaio foi usado para testar a diferença de taxa de colonização entre os ratinhos experimentais e de controlo. Os parâmetros histológicos, antígenos de Lewis, e as expressões das citocinas foram comparados com o teste exato de Fisher para os diferentes subgrupos. O teste de Friedman foi utilizado para testar a diferença de H. pylori densidade
entre o antro, corpus e cárdia do estômago em cada rato. Todos os testes foram avaliados bicaudais e um valor p Art < 0,05 foi tomado como significativo.

Resultados As taxas de sucesso H. pylori
colonização em ratos com idades de aquisição diferentes
No 2 nd semana depois de H. pylori
desafio, H. pylori
colonização foi bem sucedida em 89% (09/08) do grupo de ratos jovens e 100% (10/10) do grupo de ratos adultos. Em contraste, no 8 th semana após desafio H. pylori
, a taxa de colonização foi significativamente menor nos ratinhos jovens do que nos ratinhos adultos (53% versus 95%, P = 0,003
). Para aqueles ratos com a colonização bem sucedida tanto no 2 nd ou 8 th semana, as densidades de H. pylori
foram distribuídos uniformemente sobre o antro, corpus, e cárdia em ratos jovens e adultos ( P Art > 0,05)
gástricas antígenos e citocinas expressões específicas por idade Lewis nos ratos ingênuos
no camundongos normais de ambos os jovens e adultos grupos, as expressões de Le x e sialil. Le x eram fracos no antro gástrico. No entanto, um aumento gradual da intensidade total de Le x e sialil-Le x expressões foram divulgadas nos incrementos de idade (Figura 2A & 2B). Tal aumento atingiu um patamar a partir da idade cronológica de perto de 5 semanas de idade. No nd semana 2 e os 8 th semana depois de H. pylori desafio
, o Le x expressões não foram diferentes entre os ratos colonizados eo controle em ambos os grupos jovens e adultos. Figura 2 A intensidade de Lewis gástrica antígenos em ratos naïve em diferentes idades da vida (A) x Lewis, (B) sialil-Lewis x.
A intensidade da expressão das citocinas gástrica variou entre as diferentes idades de ratos e localização. Para as citocinas pró-inflamatórias, não houve colorações positivas de TNF-α e IL-6 no epitélio superficial em qualquer um dos ratinhos ingénuos. As colorações positivas de TNF-α e IL-6 sobre os linfócitos, fibrócitos, neutrófilos e mais de lâmina própria foram significativamente maiores nos ratos com idade ≥ 5 semanas do que aqueles com idade < 5 semanas (P
< 0,01; Figura 3A & 3B). A coloração positiva de IL-1β foi encontrada principalmente no epitélio e expressa precoce em ratos com idade < 5 semanas. A taxa de coloração positiva de IL-1β em neutrófilos foi maior em ratinhos com idade ≥ 5 semanas do que aqueles com idade < 5 semanas (P
< 0,05; Figura 3C). Figura 3 expressões citocinas gástricas na propria epitélio e lâmina entre camundongos normais com idade ≥ 5 semanas e < 5 semanas. (A) tumoral necrótico alfa (TNF-α), (B), interleucina 6 (IL-6), (C) a interleucina 1 beta (IL-1β), (D) de interferão gama (IFN-γ), e (E ) interleucina 10 (IL-10).
no início dos anos de vida dos ratinhos, a coloração de IFN-γ positiva estava na maioria encontrado no epitélio e da matriz, como a intensidade da coloração de IFN-γ positiva diminuiu após a idade ≥ 5 semanas (P
< 0,01, figura 3D). No entanto, uma taxa significativamente mais elevada de coloração de IFN-γ positivo em linfócitos e fibrócitos foi divulgado nos ratinhos idade igual ou superior do que cinco semanas aqueles com idade < 5 semanas (P
< 0,01).
Em contraste com a forte coloração de IFN-γ no epitélio no início da vida de murganhos, a IL-10 foi geralmente negativo sobre o epitélio. A coloração positiva de IL-10 foi mais elevada nos linfócitos e fibrócitos nos ratinhos idade igual ou superior a 5 semanas, em pessoas com idade < 5 semanas (P Art < 0,05; Figura 3E). Histologia
Ratos e expressão de antigénios Lewis após a H. pylori
infecção
Na nd semana 2 depois de H. pylori
desafio, o H. pylori
-colonized ratos jovens parecia ter uma taxa ligeiramente superior de alta TCIS (pontuação ≥ 4) do que os ratinhos de controlo (88% versus 50%, P = 0,15
), mas tais um significado marginal não foi divulgada nos ratinhos adultos (30% versus 30%, P = 1,00
). Além disso, no grupo de ratos jovens, os ratos com a colonização persistente no 8 th semana tinha uma taxa mais elevada de evidentemente elevados TCIS do que os ratos que perdeu colonização (40% versus 11%, P = 0,30
) . Na nd semana 2 depois de H. pylori desafio
, a percentagem de ratos jovens colonizados com uma alta intensidade de sialil-Le x expressão (pontuação ≥ 7) caiu em relação ao que nos ratinhos de controlo (25% versus 60%, P = 0,19
). No entanto, uma tal queda não foi evidente no dia 8 th semanas (100% vs 90%, P
> 0,05) e com ratinhos adultos no 2 ND semanas (90% vs 100 %, P Art > 0,05) e a 8 th semana (58% vs. 60%, P Art >. 0,05) após a H. pylori
desafios
expressão citocinas gástrico após a infecção por H. pylori
na nd semana 2 depois de H. pylori desafio
, o jovem ratos com a colonização bem sucedida teve uma intensidade significativamente maior de IL-6 no fibrocytes (75% vs. 0 %, P = 0,002
) e da matriz (75% versus 20%, P = 0,05
), mas inferior de IFN-γ (0% vs 100%, P
< 0,001) na matriz do que os controlos sem tratamento prévio (Tabela 2). Também nos ratos adultos, a ratinhos com sucesso colonização foram divulgados para ter uma menor taxa de expressão de IFN-γ em fibrócitos do que os ratinhos de controlo (30% versus 90%, P = 0,02
) .table 2 A citocina gástrica expressões na segunda semana de jovens e adultos camundongos com persistente H. pylori
colonização e controle ingênuo camundongos.


ratos jovens
ratos adultos
Parâmetro (%)
Colonizada
(n = 8)

Controle
(n = 10)
P
valor
Colonizada
(n = 10)
Controle
( n = 10)
P
Valor
IL-6 *
Matrix
75
20
0,05
70
30
NS
linfócitos
50
10
NS
60
70
NS
fibr�itos
75
0
0,002
80
50
NS
neutrófilos
37,5
20
NS
20
70
0,07
TNF-α *
Matrix
87,5
70
NS
80
90
NS
linfócitos
62,5
40
NS
90
90
NS
fibr�itos
87,5
40
0,07
100
90
NS
neutrófilos
12,5
10
NS
30
40
NS
IL-1β
Epitélio ≥ 2
100
70
NS
100
90
NS
Matrix
a25
0
NS
100
80
NS
linfócitos
25
20
NS
30
0
NS
fibr�itos
a25
60
NS
100
100
NS
IFN-γ
Epitélio ≥ 2
0
30
NS
10
0
NS
Matrix
0
100 Art < 0.001
40
20
NS
Linfócitos
0
0
NS
10
30
NS
fibr�itos
12,5
10
NS
30
90
0,02
Neutrophil
0
0
NS
10
20
NS
IL-10*
Matrix
a25
60
NS
100
80
NS
Linfócitos
25
20
NS
60
60
NS
fibr�itos
a37.5
50
NS
100
80
NS
neutrófilos
12,5
0
NS
10
20
NS
CIS: pontuação inflamatória crónica; AIS: pontuação inflamatória aguda. *: Ratos meios colonizados infectados com H. pylori
com a colonização bem sucedida (teste positivo ureia e histologia) em sacrifício. um: P <valor
; 0,01; b: P valor
≤ 0,05 entre os ratos colonizados jovens e adultos. NS: nenhum significado. * Indicado neste parâmetro, o epitélio é bastante fraca para essa citocina na coloração imuno-histoquímica.
Em 8 th semana depois de H. pylori
desafio, as taxas de alta TNF-α (100% vs. 20%, P = 0,02
) na matriz e altos níveis de IL-1β (100% vs 20%, P = 0,02
) em fibrócitos foram maiores nos jovens camundongos com colonização persistente do que nos ratinhos de controlo ( tabela 3). Para os ratinhos adultos com colonização bem sucedida, as taxas de alta IFN-γ (30% versus 100%, P = 0,003
), IL-10 (20% versus 100%, P = 0,001
) e IL-6 (50% versus 100%, P = 0,03
) em fibrócitos também foram significativamente inferiores aos dos ratinhos de controlo sem tratamento prévio. No entanto, foi mais comum nos ratos adultos colonizados do que os ratinhos de controlo que tem um IFN-γ mais elevada (80% vs 40%), IL-10 (80% vs. 40%), e IL-6 (80% vs. 30%) na matrix.Table 3 as expressões de citocinas na 8ª semana de jovens e adultos camundongos com persistente e perdeu H. pylori
colonização e controle ingênuo camundongos.


ratos jovens
ratos adultos
Variáveis ​​(% )
persistente colonização
(n = 5)
Perdeu colonização
(n = 4)
Controle
(n = 10)

P
† valor
persistente colonização
(n = 10)
Controle
(n = 10)
P
valor
IL-6 *
Matrix
100
80
50
NS
80
30
NS
de linfócitos
25
60
50
NS
70
70
NS
fibr�itos
100
80
70
NS
50
100
0,03
neutrófilos
0
20
50
NS
20
70
NS
TNF-α *
Matrix
100
100
20
NS
100
60
NS
Linfócitos
100
80
60
NS
90
90
NS
fibr�itos
100
100
70
NS
100
80
NS
neutrófilos
25
20
60
NS
10
40
NS de Il-1β
Epitélio ≥ 2
100
80
70
NS
100
80
NS
Matrix
75
40
30
NS
100
80
NS
linfócitos
50
60
0
NS
50
60
NS
fibr�itos
100
60
20
NS
100
100
NS
neutrófilos
0
0
20
NS
0
10
NS
IFN-γ
Epitélio ≥ 2
0
80
20
0,048
30
0
NS
Matrix
75
100
40
NS
80
40
NS
Linfócitos
75
60
40
NS
30
50
NS
fibr�itos
75
100
50
NS
30
100
0,003
Neutrophil
0
0
40
NS
20
0
NS
IL-10*
Matrix
100
20
70
0.048
80
40
NS
Linfócitos
100
20
70
0,048
40
50
NS
fibr�itos
100
60
70
NS
20
100
NS
neutrófilos
50
0
10
NS
0
10
NS
†: o significado foi comparada entre jovens camundongos com a colonização persistente e perdeu. * Indicado neste parâmetro, o epitélio é bastante fraca para essa citocina na coloração imuno-histoquímica.
Superior sialil-Lex coexiste com maior IL-10, mas inferior INF-γ por H. pylori
colonização
Na 2 ND semanas, os ratos jovens tinham colonizado nenhuma diferença significativa na intensidade de sialil-Le x expressão do que os ratinhos de controlo (P
> 0,05). No entanto, no dia 8 th semana depois de H. pylori desafio
, o jovem ratos com a colonização persistente teve uma maior taxa de evidente sialil-Le x expressão (pontuação ≥ 7) do que os dos ratos que colonização perdido (100% vs 56%, P = 0,03
). Além de mostrar uma maior taxa de sialil-Le x expressão (pontuação ≥ 7), todos os persistentemente H. pylori
-colonized ratos jovens significativamente coexistiram com menor IFN-γ e maiores de IL-10 expressões que aqueles ratos que tinham perdido a colonização persistente no 8 th semana (Tabela 4, 100% vs. 0%, P = 0,008
) .table 4 a baixa gástrica IFN-γ (pontuação ≤ 1) expressão na epitélio coexistindo com alta sialil-Lex (pontuação ≥ 7) e IL-10 (em ambos matriz e linfócitos) foi correlacionada para colonização bacteriana persistente na idade precoce aquisição de ratinhos.
expressão das citocinas (%)
Colonização de jovens ratos
OR (IC 95%)
P valor
*

persistente (n = 4)
Lost (n = 5)


Baixa IFN-γ
100
20
0,2 (0,1-1,2)
0,048
alta IL-10
100
0
- 0,008
Baixa IFN-γ e de alta sialil -Lex
100
0
- 0,008
Baixa IFN-γ e de alta IL-10
100
0
- 0,008
OR : razão estranha; IC: intervalo de confiança; *: Teste exato de Fisher
Tabela 5 mostra a marcação de IFN-γ no epitélio e IL-10 na matriz e linfócitos entre ratos com persistente e colonização perdida no 8 th semana depois de H. pylori
desafio. Nenhum dos ratinhos jovens com a colonização bacteriana persistente tinham expressão de IFN-γ no epitélio mas teve óbvio a expressão de IL-10 sobre a matriz e linfócitos em comparação com os ratos sem colonization.Table 5 A pontuação de IFN-γ no epitélio e IL -10 na matriz e linfócitos na 8ª semana após o H. pylori
desafio nos jovens camundongos com e sem colonização persistente.



Resultado de IL-10
Mice No.
Colonização
Resultado de IFN-γ no epitélio
na matriz
em lymphocyte

1
Yes
0
1
1
2
Yes
0
1
1
3
Yes
0
1
1
4
Yes
0
1
1
5
No
1
0
0
6
No
2
1
0
7
No
2
0
0
8
No
2
0
0
9
No
2
0
1
Discussão
Aquisição de H. pylori
ocorre principalmente na infância e na eliminação espontânea da infecção geralmente ocorre em crianças jovens [3-6, 20]. Neste estudo, os ratinhos adultos C57BL /6 teve uma favorável H. pylori
taxa de colonização de isolados que variam em mais de 80%, o que é compatível com relatórios anteriores [13, 14]. Esta elevada taxa de colonização em ratinhos adultos também é compatível para suportar o facto de que a aquisição final de H. pylori
em pacientes humanos adultos geralmente resulta na colonização crónica [20]. Além disso, em comparação com a 2 ND semana de ratos jovens após H. pylori
aquisição, a taxa de colonização no 8 th semanas foi de 53%, que suporta que a eliminação espontânea de H. pylori
realmente ocorre durante a idade de aquisição precoce de ratos. Assim, o presente estudo deve ser altamente original para introduzir um modelo de rato desenhado para validar que deve haver uma perda de H. pylori
colonização após uma aquisição anterior do H. pylori
, que imita os achados clínicos em jovens crianças.
Nosso estudo anterior mostrou que a intensidade da gástrica Le x está positivamente relacionada com o incremento da idade nos seres humanos [12]. No entanto, para aqueles sem H. pylori
infecção, a expressão do sialil-Le x no epitélio gástrico é fraco ou ausente em crianças de dispepsia e adultos [12]. Compatível com os seres humanos, a intensidade da gástrica sialil-Le x de camundongos também está correlacionada positivamente para o incremento da idade (Figura 2B). Uma tal constatação em ratos, também é compatível com um estudo de rato, que revelou um aumento relacionado com a idade de glicosilação em tecidos do fígado [21]. Aumentando gástrica sialil-Le x expressão após a infecção por H. pylori
tem sido relatada em seres humanos e macacos Rhesus [9-12]. No entanto, em nosso estudo ratos, uma diminuição da intensidade da gástrica sialil-Le xwas divulgado no H. pylori
infectados ratos jovens, mas não em ratos adultos no nd semana 2, em comparação com os ratinhos de controlo. Mais notavelmente, no dia 8 th semana depois de H. pylori
aquisição, tal diminuição de sialil-Le x desapareceu em ambos os jovens e adultos ratos colonizados, que tinha uma mucosa gástrica totalmente sialilada. Esta constatação sugere que a H. pylori
desafio devem ser envolvidos para perturbar a curva de maturação relacionada com a idade de sialilação nos jovens camundongos. Além disso, indirectamente sugere que as alterações de antigénio sialil-Lewis em ratos jovens deve ser altamente correlacionados com a persistência ou a perda de H. pylori colonização
.
Neste modelo animal, cedo H. pylori
aquisição causou maiores CIS do que nos controles no 2 nd semana (87,5% vs. 50%, P
= 0,15), mas não no 8 th semana (40% vs. 30%, P
= 0,36) após a H. pylori
desafio. Assumindo que a inflamação densa faz com que os sintomas clínicos mais graves, esta mudança histologia poderia ser correlacionados com os achados anteriores de que o H. pylori
infecção pode causar dor epigástrica de curto prazo em crianças, embora normalmente resolvidos no follow-up [22]. No que diz respeito tanto a observação clínica e dados in vivo modelo ratos, H. pylori
aquisição em crianças geralmente se apresenta como uma sequela auto-limitada na inflamação.
Após a infecção por H. pylori
, as diferentes respostas hospedeiras do gástrica citocinas poderia estar relacionado com os resultados clínicos diferentes [14, 18, 23, 24]. Neste estudo, os ratinhos naive foram encontrados a ter regulares IL-1β e expressões de IFN-γ (Figura 3C & 3D) no epitélio gástrico, o que é consistente com um relatório anterior, em seres humanos [15]. O nosso estudo ratinhos exibiram uma expressão de citocinas específicas de idade no epitélio gástrico (IFN-γ) e lâmina própria (IL-6, TNF-α, IFN-γ, e IL-10). Devido à resposta específica para a idade das citocinas, o nosso estudo suporta que deve haver diferentes respostas imunes naive entre crianças e adultos.
Com base no estudo de imuno-histoquímica, este estudo confirmou que as expressões de citoquinas pró-inflamatórias na lâmina gástrica propria poderia mudar tanto no 2 nd ea 8 th semana depois de H. pylori
desafio [25, 26]. Tanto em ratos como em seres humanos, as respostas de citoquinas gástricas de infecção por H. pylori
ter sido demonstrado ser Th1 dominante, pois o nível de IFN-γ é aumentada em H. pylori
indivíduos infectados por comparação com os controlos [15, 18, 23, 27]. Um alto nível de INF-γ tem sido atribuída como marca do H. pylori
-relacionados gastrite, especialmente durante a inflamação crônica e potencialmente atribuído como um papel protetor contra H. pylori
colonização [16-18, 28]. Como mostrado na Tabela 3, que revelou que ratos jovens com uma perda de colonização tinha uma expressão de IFN-γ mais elevada no epitélio do que os ratos com a colonização persistente (P = 0,048
). Este resultado é compatível com um estudo humano em crianças que mostrou que as crianças com infecção por H. pylori
tinha uma concentração mais baixa de IFN-γ do que nos controlos não infectados [29]. Estes dados em ratinhos sugerem que pode haver uma correlação significativa a perda de colonização uma vez que há uma expressão elevada de IFN-γ. Por conseguinte, deve ser referido para examinar a resposta do hospedeiro diferente de IFN-γ que pode estar relacionada com diferentes têm H. pylori resultados
em crianças. De Il-10 é uma citocina de Th2, e pode ser desencadeada pela regulação compensatório após uma mudança de Th1 pela H. pylori
desafio para proteger a mucosa gástrica [13, 15, 23, 27]. Portanto, não é tão surpreendente para ilustrar um aumento significativo da expressão de IL-10 em ratos jovens com a colonização persistente (Tabela 3). Como mostrado na Tabela 4, a ratinhos jovens com baixo IFN-γ no epitélio ter uma persistência de colonização de H. pylori
tinha uma coexistência 100%, com uma expressão elevada de IL-10 sobre a matriz e linfócitos.

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