Persistent H. pylori Besiedlung in frühen Akquisitions Alter von Mäusen, die mit höheren Magen sialylierte Lewis x bezogen, IL-10, aber niedriger Interferon-γ expressions

Persistent H. pylori
Kolonisierung in frühen Akquisitions Alter von Mäusen, die mit höheren Magen sialylierte Lewis x verwandte , IL-10, aber weniger Interferon-γ Ausdrücke
Zusammenfassung
Hintergrund
H. pylori
Infektion ist weniger weit verbreitet in der Kindheit. Diese Studie bestätigt, ob die Raten von H. pylori
Kolonisation verteilt auf verschiedene Erwerbsalter abhängen, und mit den verschiedenen Magen-Lewis-Antigene oder Zytokin Ausdrücke nach H. pylori-
Erwerb korrelieren.
Methoden
Wir wandten ein young (7 Tage alt) C57BL /6-Mäuse (n = 50) und Erwachsenen (6-Wochen alt) C57BL /6-Mäuse-Gruppe (n = 50). In jeder Gruppe wurden 30 Mäuse mit H. pylori
in Frage gestellt und 20 Mäuse dienten als naive Kontrolle. Der Erfolg von H. pylori
Kolonisation wurde auf der 2 beurteilt nd Woche und die 8 th Woche sind. Die Intensität des Lewis x, sialylierte Lewis x (Sialyl-Le x) und Cytokin-Ausdrücke, einschließlich TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-10 und IL-1β, waren immunchemisch gebeizt und benotet.
Ergebnis einschränken Am 2 nd Woche nach H. pylori-
Herausforderung waren die Kolonisation Raten von H. pylori
ähnlich zwischen der jungen Mäuse-Gruppe und der erwachsenen Mäuse-Gruppe (89 % gegenüber 100%, P
> 0,05). Doch auf der 8 th Woche, die H. pylori
Kolonisationsrate signifikant niedriger war in der jungen Mäuse-Gruppe als in der erwachsenen Mäuse-Gruppe (53% vs. 95%, p = 0,003
). Am 8. th Woche hatte die junge Mäuse mit einer Persistenz von H. pylori
Kolonisation höhere Sialyl-Le x, höhere IL-10 und IFN-γ niedriger als die der Mäuse, die verloren Besiedlung während der 2 nd an die 8 th Woche (P
< 0,05).
Fazit
die Persistenz von H. pylori
Kolonisation akquisitions Alter Determinante sein könnte verarbeiten. Nach H. pylori
Exposition in einem frühen Alter Nahme der Host-Reaktion mit einer höheren Sialyl-Le x und IL-10, aber eine niedrigere IFN-γ korreliert mit der daraus folgenden Persistenz von H. pylori
Kolonisation.
Einführung Helicobacter pylori Infektion
sowohl bei chronischer Gastritis und sogar Magengeschwüre Kindern und Erwachsenen führen kann [1, 2]. In epidemiologischen Studien pylori wird der Seropositivität von H.
bei Kindern gezeigt werden, weniger ist als bei Erwachsenen [3, 4]. Eine Follow-up-Kohortenstudie hat gezeigt, dass die höchste Inzidenz der Serokonversion in der frühen Kindheit auftritt und nach und nach mit dem Alter abnimmt [3]. Mehrere Studien haben gezeigt, dass eine frühe Übernahme von H. pylori
Infektion im Kindesalter möglicherweise zu einem späteren Verlust der Kolonisierung führen kann [3-6]. Die genauen Regelungen innerhalb Kinder jedoch entweder Verlust oder Persistenz von H. pylori
Kolonisation nach frühzeitigen Erwerb bestimmen bleibt nicht bekannt. Eine Blutgruppe Bindung Adhäsin (BabA) von H. pylori Bei
selektiv bindet zum fukosylierte Lewis Antigen (Le b) von Magen-Zellen, die eine schwere bakterielle Besiedlung zu vermitteln [7-9]. Die andere Sialinsäure-bindenden Adhäsin (SabA) von H. pylori
bindet an den Magen-sialylierte Lewis x-Antigen (Sialyl-Le x) alternativ die anhaltende Besiedlung Unterstützung nach chronischer Entzündung [10], und vor allem wird wichtig wenn die Le b Antigen des Wirtes fehlt oder schwach [11]. Unsere aktuelle Studie offenbart, dass H. pylori
infiziertem Kinder eine deutliche Steigerung von Sialyl-Le hatte x, aber nicht Le b Ausdruck [12]. Es ist daher interessant zu prüfen, ob die Persistenz der frühzeitigen Erwerb von H. pylori
in der Kindheit mit den variablen Wirtsreaktionen von Magenentzündung oder epithelialer Sialylierung zusammenhängen könnte die SabA von H. pylori
anzupassen.
Mit erwachsenen C57BL /6-Mäuse älter als sechs Wochen alt sind, können die klinischen H. pylori-Stämme
erfolgreich die meisten der Mäuse zu kolonisieren für mehr als sechs Monate [13, 14]. Die chronische H. pylori
Infektion führt zu diversen Th1-Typ vorherrschende Magenentzündungen mit variabler pro-inflammatorischen und Th1-dominanten Typ Zytokinreaktionen unter verschiedenen Hosts [15-18]. Dementsprechend ist die aktuelle Studie auf den ersten Ziel zu prüfen, ob die Persistenz von H. pylori
Kolonisation ein akquisitions Alter Determinante Prozess sein könnte. Darüber hinaus versucht, diese Studie zu beantworten, ob die Variable Sialyl-Le x und die inflammatorische Zytokin Ausdrücke nach H. pylori-
Herausforderung könnte die anhaltende Kolonisierung von H. pylori-Infektion
bestimmen, vor allem in Mäusen, die die Herausforderung der frühzeitigen Erwerb.
Materialien und Methoden
Mäuse Gruppen und H. pylori
für Herausforderung Experiment isoliert
Diese Studie 100 C57BL /6-Mäuse verwendet (50 sieben Tage alten jungen Mäusen und 50 sechs -week alte erwachsene männliche Mäuse), darunter 60 in der Versuchsgruppe mit einer Art herausgefordert 1, SabA-positive H. pylori
klinischen Isolat (HP 625) und 40 in naiven Kontrollen. Die Multiplikationen der H. pylori
Isolate wurden mit dem gleichen Verfahren wie unsere früheren Mäuse Modellstudie angewendet, um eine Dichte von 0,8 × 10 8 CFU /ml zu erreichen. [19]. Für die experimentelle Gruppe, eine Bakteriensuspension 0,1 ml für junge Mäuse und 0,5 ml für den erwachsenen Mäusen wurde für drei aufeinanderfolgende Tage oral inokuliert, respectively. Zehn jeder der jungen und erwachsenen Mäusen der Kontrollgruppe wurden am 2 nd und die 8 th Woche geopfert. In den Versuchsmäusen, zehn jeder der jungen und erwachsenen Mäusen in der 2 nd Woche und 20 jeder der jungen und erwachsenen Mäusen am 8 th Woche nach der Inokulation wurden durch intraperitoneale Injektion von Pentobarbital getötet ( 150-200 mg /kg). Die isolierten Mägen wurden entlang der größeren und kleineren Krümmungen in zwei Hälften eingeschnitten. Eine Hälfte wurde für die Histologie und Lewis Antigen Untersuchungen Formalin eingebettet. Die andere Hälfte wurde sofort in Puffer, gefroren auf Trockeneis platziert und bei -80 ° C für Zytokin-Prüfung abgelegt. H.-pylori-Infektion
durch einen schnellen Harnstoff-Test und eine histologische Untersuchung nachgewiesen.
Magen-Histologie von Mäusen
Zwei Forscher einschließlich eines Pathologen, keine Ahnung von den demographischen Daten und Kolonisierung Ergebnisse, analysiert die Magen-Histologie. Die Anwendung der Methode unserer bisherigen Mäuse-Modell [19], die histologischen Parameter, einschließlich H. pylori
Dichte (Bereich 0-4), akute entzündliche Score (AIS, Bereich 0-3), eine chronische Entzündung Score (CIS, Reichweite 0-3) wurden atrophische Veränderung (AT, Bereich 0-1), und intestinale Metaplasie (iM, Bereich 0-3) topografisch über dem Antrum, Korpus und Kardia ausgewertet sind. Das Bewertungssystem von H. pylori
Dichte verwendet wurde, war wie folgt: 0, keine Bakterien nachgewiesen; 1, ein mildes Niveau der Kolonisierung und Bakterien nicht in jedem Magen-Krypta entdeckt; 2, ein mildes Niveau der Besiedelung mit in der Mehrzahl der Krypten nachgewiesenen Bakterien vorhanden sind; 3, mittlere bis starke Besiedlung in allen Krypten; und 4, starke Besiedelung mit allen Krypten dicht mit Bakterien verpackt. Die vorgestellten Ergebnisse sind der Mittelwert der Kolonisation für jede Gruppe. Die Gesamt H. pylori
Dichte (thpD) als die Summe der Dichten aus dem Antrum, Korpus und Cardia, und somit lag im Bereich von 0 bis 12. Die Gesamt akut (TAIS) und chronische (TCIS) entzündliche Scores erhalten definiert wurde waren auch eine Summe der Punkte aus drei Standorten (Bereich 0-9). Bakterielle Infektion von H. pylori

als das Vorhandensein von Bakterien in den Magen-Abschnitte definiert wurde, während Mäuse als gescheitert angesehen wurden geimpft werden, wenn wurden keine Bakterien in der Histologie und negativ für den CLO-Test gesehen.
Immunhistochemische Färbung und Scoring für Magen-Lewis Ausdruck
Immunostaining von Magen-Proben für die Lewis-Antigene durchgeführt wurde, mit einem Vektor, der das Avidin-Biotin-Peroxidase-Technik Ms.OM Immunnachweis-Kit. Der primäre monoklonale Antikörper (Anti-Le x, Signet Laboratories, Inc., Dedham, MA) wurde der Magen-Le zu erkennen ausgewählt x-Antigene [11, 12]. Neben Le x Antigen-Färbung, der monoklonale Antikörper gegen Sialyl-Le x (Maus-IgM-MAB2096, Chemicon International, Inc., Temecula, CA) verwendet wurde [12]. Die nicht-spezifische Bindungsstellen wurden mit 2-2,5% Rinderserumalbumin abgesättigt. Für jeden Magen-Site, die Intensität des Le x (Bereich 0-5) und Sialyl-Le x (Bereich 0-4) wurde entsprechend der Topographie der Färbung (Abbildung 1) erzielt. Die Gesamtintensität Magen-Lewis-Antigen für Le x und Sialyl-Le x war die Summe aus dem Antrum, Korpus und Kardia (Bereich 0-15 in Le x und 0-12 in Sialyl-Le x). Abbildung 1 Die immunhistochemische (IHC) -Färbung und Planierung von Lewis x (Le x) und Sialyl-Lewis x (Sialyl- Le x) Antigene sind für die Magenbiopsien von Mäusen gezeigt (200 ×). Die IHC-Färbung zeigte negativ für zwei Lewis-Antigene und wurde bezeichnet als Punktzahl 0. Für Lex, Score 1 (A): wenig Färbung (< 5% in Belegzellen der tiefen Drüsen; Note 2 (B): tiefe Drüsen 5 -50% Färbung und schwach; Note 3 (C): tiefe Drüsen > 50% Färbung und stark; Note 4 (D): ganze Schicht der tiefen Drüsen mit oberflächlichen Epithel-Färbung, ohne Ausdruck Schleim; Note 5 (E): ganze . Schicht mit Schleim Ausdruck für Sialyl- Lex, erzielt 1 (F): die Oberfläche nur Schleim positiv; 2 (G) Partitur: Mucus und oberen Epithels; 3 (H) Partitur: obere Epithel und tiefen Drüsen (Hauptzellen < 50% .), 4 (I Score): obere Epithel und tiefen Drüsen (Hauptzellen ≥ 50%)
Immunhistochemische Färbung und Scoring für Cytokine Ausdruck
Die Gefrierschnitte (4 &mgr; m) wurden für 2 Stunden bei Raumtemperatur getrocknet, und fixiert mit 3,7% Formaldehyd für 1 min. nach Waschen mit PBS zweimal die Proben wurden mit kaltem Aceton fixiert und dann mit PBS gewaschen. Die Maus Ig Blockierungsreagenz (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) wurde zur Blockierung unspezifischer Bindungsstellen verwendet. Die Ratten-anti-Maus-monoklonaler Antikörper (TNF-α, IL-6, IL-10, IL-1β und IFN-γ) und die Kaninchen-Anti-Maus-polyklonaler Antikörper (IL-1β) wurden als primäre Antikörper verwendet. Das HRP-Polymer-Konjugat breites Spektrum (Zymed Laboratories Inc. in South San Francisco, CA, USA) wurde als 2 nd Antikörper verwendet. Der AEC-Kit wurde verwendet, um den Fleck zu veranschaulichen. Die Intensität jedes Zytokin wurde entsprechend der Verteilung der Zellen eine positive Färbung auf dem Epithel (Bereich 0-3) hat, und auf die lamina propria Komponenten, einschließlich der Matrix, polymorphkernige Zellen, Lymphozyten und Fibrozyten (Tabelle 1) 1 .Tabelle Scoring von Zytokin-Ausdrücke auf die Magen-Epithel und Lamina propria.

Score

0
1
2
3
Epithels
Negative
Weniger als 33%
33% -67%
Mehr als 67%
Lamina propria
Matrix
Abwesenheit
Presence
Lymphocyte
Abwesenheit
Presence
fibrocyte
Abwesenheit
Presence
Neutrophilen
Abwesenheit
Presence
die quantitative Wertung jedes Zytokin auf das Epithel war wie folgt: 1 Tor: positive Färbung im Zytoplasma von Epithelzellen nur auf der oberen 1/3 Teil des Epithels; Note 2: auf dem oberen und mittleren Teil des Epithels (1 /3-2 /3); Note 3: auf der gesamten Schicht des Epithels (> 2/3). Die positive Anfärbung jedes Zytokin auf der Lamina propria (Lymphozyten, Fibrozyten und Neutrophile) bedeutet, dass es in einem hohen Leistungssichtfeld in der mikroskopischen Untersuchung.
Statistical analysis
Die Pearson χ mehr als fünf positive Zellen 2-Test wurde verwendet, um die Differenz der Kolonisierung Raten zwischen den experimentellen und Kontroll-Mäusen zu testen. Die histologischen Parameter, Lewis-Antigene und die Zytokin-Ausdrücke wurden mit der für verschiedene Untergruppen der exakte Test nach Fisher verglichen. Der Friedman-Test wurde verwendet, um die Differenz von H. pylori
Dichte zwischen dem Antrum, Korpus und Cardia des Magens in jeder Maus zu testen. Alle Tests wurden bewertet two-tailed und ein p
Wert < 0,05 wurde als signifikant genommen.
Ergebnisse, Die Raten der erfolgreichen H. pylori
Kolonisation bei Mäusen mit verschiedenen Akquisitions Alter
auf den 2 nd Woche nach H. pylori-
Herausforderung, H. pylori
Kolonisation war erfolgreich in 89% (8/9) der jungen Mäuse-Gruppe und 100% (10/10) der erwachsenen Mäuse-Gruppe. Im Gegensatz dazu ist auf der 8 th Woche nach H. pylori
Herausforderung war die Kolonisationsrate signifikant geringer in den jungen Mäusen als in den erwachsenen Mäusen (53% vs. 95%, P = 0,003
). Für diejenigen Mäuse, die mit erfolgreichen Kolonisation entweder auf dem 2 nd oder die 8 th Woche, die Dichten von H. pylori
wurden auf dem Antrum, Korpus gleichmäßig verteilt, und Cardia in jungen und erwachsenen Mäusen ( P
> 0,05)
altersspezifische Magen-Lewis-Antigen und Zytokine Ausdrücke in den naiven Mäuse
in der naiven Mäuse sowohl junger als auch Erwachsenengruppen, die Ausdrücke von Le x und Sialyl-. Le x waren auf der Magenantrum schwach. Allerdings ist eine schrittweise Erhöhung der Gesamtintensität von Le x und Sialyl-Le x Ausdrücke wurde in den Alters Schritten offenbart (2A & 2B). Eine solche Erhöhung erreichte ein Plateau aus dem chronologischen Alter von fast 5 Wochen alt. Am 2 nd Woche und die 8 th Woche nach H. pylori-
Herausforderung, die Le x Ausdrücke zwischen den kolonisierten und die Kontrollmäuse sowohl junge und erwachsene Gruppen nicht unterschiedlich waren. Figur 2 Die Intensität der Magen Lewis-Antigene in naive Mäuse zu verschiedenen Lebensalter (A) Lewis x, (B) Sialyl-Lewis x.
Die Intensität des Magen Zytokinexpression zwischen den verschiedenen Altersgruppen von Mäusen und Lage variiert. Für die proinflammatorische Zytokine, gab es keine positive Anfärbungen von TNF-α und IL-6 auf oberflächliche Epithel in einem der naiven Mäusen. Die positive Anfärbungen von TNF-α und IL-6 auf den Lymphozyten, Fibrozyten, und Neutrophile über die lamina propria waren signifikant höher bei Mäusen ≥ 5 Wochen gealtert als die gealterten < 5 Wochen (P
< 0,01; 3A & 3B). Die positive Färbung von IL-1β wurde in erster Linie auf das Epithel und äußerte früh bei Mäusen im Alter von < 5 Wochen. Die Rate der positiven Färbung von IL-1β auf Neutrophilen war höher bei Mäusen ≥ 5 Wochen gealtert als die im Alter von < 5 Wochen (P
< 0,05; 3C). Abbildung 3 Magen-Zytokin-Ausdrücke auf das Epithel und Lamina propria zwischen naiver Mäuse im Alter von ≥ 5 Wochen und < 5 Wochen. (A) Tumor Nekrose Faktor alpha (TNF-α), (B), Interleukin 6 (IL-6), (C), Interleukin-1 beta (IL-1β), (D), Interferon gamma (IFN-γ) und (E ) Interleukin-10 (IL-10). im frühen Leben der Mäuse
die positive IFN-γ-Färbung in der Mehrheit auf dem Epithel und Matrix, wie die Intensität der positiven IFN-γ-Färbung sank nach Alter ≥ gefunden wurde 5 Wochen (P
< 0,01, 3D). Allerdings wurde bei den Mäusen offenbart eine signifikant höhere Rate von positiven IFN-γ-Färbung auf Lymphozyten und Fibrozyten im Alter von ≥ 5 Wochen als Personen im Alter von < 5 Wochen (P
< 0,01).
Im Gegensatz zu den schweren IFN-γ-Färbung auf das Epithel im frühen Leben von Mäusen, IL-10 war in der Regel negativ auf das Epithel. Die positive Färbung von IL-10 war höher auf Lymphozyten und Fibrozyten in den Mäusen ≥ 5 Wochen gealtert als bei denen im Alter von < 5 Wochen (P
< 0,05; 3E).
Mäuse Histologie und Lewis-Antigen-Expression nach H. pylori-Infektion

Am 2 nd Woche nach H. pylori
Herausforderung, die H. pylori
-colonized junge Mäuse, die eine geringfügig höhere Rate der hohen TCIS zu haben schien als die Kontrollmäuse (88% vs. 50%, p = 0,15
) (≥ 4 Score), aber solche eine Rand Signifikanz wurde nicht in den erwachsenen Mäusen (30% vs. 30%, P = 1,00
) offenbart. Außerdem wird in der jungen Mäusen Gruppe, die Mäuse mit persistierender Kolonisierung auf der 8 th Woche hatte eine offenbar höhere Rate der Hoch TCIS als die Mäuse, die Kolonisierung verloren (40% vs. 11%, P = 0,30
) . Auf der 2 nd Woche nach H. pylori-
Herausforderung, der Prozentsatz der kolonisierten Mäusen jung, um eine hohe Intensität der Sialyl-Le x Ausdruck mit (Score ≥ 7) war, dass in den Kontrollmäusen sank im Vergleich (25% vs. 60%, P
= 0,19). Jedoch ist ein solcher Rückgang war nicht offensichtlich auf die 8 th Woche (100% vs. 90%, P
> 0,05) und erwachsenen Mäusen auf dem 2 nd Woche (90% vs. 100 %, P
> 0,05) und die 8 th Woche (58% vs. 60%, p
>. 0,05) nach H. pylori-
Herausforderungen Gastric Zytokinen Ausdruck
nach H. pylori-Infektion

am 2 nd Woche nach H. pylori-
Herausforderung, die junge Mäuse, die mit erfolgreichen Kolonisation eine deutlich höhere Intensität von IL-6 auf Fibrocyten hatte (75% vs. 0 %, P
= 0,002) und Matrix (75% vs. 20%, p
= 0,05), aber niedriger IFN-γ (0% vs. 100%, P
< 0,001) auf der Matrix als die naive Kontrollen (Tabelle 2). Auch bei den erwachsenen Mäusen, die Mäuse mit erfolgreichen Kolonisierung wurden offenbart, eine niedrigere Rate von IFN-γ-Expression auf Fibrozyten als die Kontrollmäuse zu haben (30% vs. 90%, P = 0,02
) .Tabelle 2 Die Magen Zytokin Ausdrücke auf der zweiten Woche von jungen und erwachsenen Mäusen mit persistierender H. pylori
Kolonisation und naiven Kontrollmäuse.


Erwachsene Mäuse
Parameter
Junge Mäuse (%)
kolonisiert
(n = 8)

Steuerung
(n = 10)
P
Wert
kolonisiert
(n = 10)
Steuerung
( n = 10)
P
Wert
IL-6 *
Matrix
75
20
0.05
70
30
NS
Lymphocyte
50 10
NS
60
70
NS
fibrocyte
75
0
0.002
80
50
NS
Neutrophilen
37,5
20
NS
20
70
0,07
TNF-α *
Matrix
87,5
70
NS
80
90
NS
Lymphocyte
62,5
40
NS
90
90
NS
fibrocyte
87,5
40
0,07
100
90
NS
Neutrophilen
12,5 10
NS
30
40
NS
IL-1β
Epithels ≥ 2
100
70
NS
100
90
NS
Matrix
a25
0
NS
100
80
NS
Lymphocyte
25
20
NS
30
0
NS
fibrocyte
a25
60
NS
100
100
NS
IFN-γ
Epithels ≥ 2
0
30
NS 10
0
NS
Matrix
0
100
< 0,001
40
20
NS
Lymphocyte
0
0
NS 10
30
NS
fibrocyte
12,5
10
NS
30
90
0,02
Neutrophil
0
0
NS
10
20
NS
IL-10*
Matrix
a25
60
NS
100
80
NS
Lymphocyte
25
20
NS
60
60
NS
fibrocyte
a37.5
50
NS
100
80
NS
Neutrophilen
12,5
0
NS 10
20
NS
CIS: chronische entzündliche Partitur; AIS: akute entzündliche Score. *: Kolonisiert Mittel Mäuse mit H. pylori infiziert
mit erfolgreichen Kolonisation (positive Harnstoff-Test und Histologie) auf das Opfer. a: P
Wert < 0,01; b: P
Wert ≤ 0,05 zwischen den Jugendlichen und Erwachsenen kolonisierten Mäusen. NS: keine Bedeutung. * Auf diesem Parameter angegeben, ist das Epithel eher schwach für eine solche Zytokin auf Immunhistochemie-Färbung.
Am 8. th Woche nach H. pylori-
Herausforderung, die Raten der hohen TNF-α (100% vs. 20%, P
= 0,02) auf der Matrix und hohe IL-1β (100% gegenüber 20%, P
= 0,02) auf Fibrozyten waren höher in den jungen Mäusen mit persistent Kolonisation als in den Kontrollmäusen ( Tabelle 3). Für den erwachsenen Mäusen mit erfolgreicher Kolonisierung, die Raten der hohen IFN-γ (30% gegenüber 100%, P = 0,003
), IL-10 (20% gegenüber 100%, P
= 0,001) und IL-6 (50% gegenüber 100%, P
= 0,03) auf Fibrozyten waren auch deutlich niedriger als die der Kontroll naiven Mäusen. Trotzdem war es häufiger in den kolonisierten erwachsenen Mäusen als die Kontrollmäuse eine höhere IFN-γ zu haben (80% vs. 40%), IL-10 (80% vs. 40%) und IL-6 (80% vs. 30%) auf dem matrix.Table 3 die Zytokin-Ausdrücke in der 8. Woche der jungen und erwachsenen Mäusen mit persistenten und verlor H. pylori
Kolonisation und naiven Kontrollmäuse.


Variablen
Junge Mäuse Mäuse
Erwachsene (% )
Persistent Kolonisation
(n = 5)
Verlorene Kolonisation
(n = 4)
Steuerung
(n = 10)

P
† Wert
Persistent Kolonisation
(n = 10)
Steuerung
(n = 10)
P
Wert
IL-6 *
Matrix
100
80
50
NS
80
30
NS
Lymphocyte
25
60
50
NS
70
70
NS
fibrocyte
100
80
70
NS
50
100
0,03
Neutrophilen
0
20
50
NS
20
70
NS
TNF-α *
Matrix
100
100
20
NS
100
60
NS
Lymphocyte
100
80
60
NS
90
90
NS
fibrocyte
100
100
70
NS
100
80
NS
Neutrophilen
25
20
60
NS 10
40
NS
IL-1β
Epithels ≥ 2
100
80
70
NS
100
80
NS
Matrix
75
40
30
NS
100
80
NS
Lymphocyte
50
60
0
NS
50
60
NS
fibrocyte
100
60
20
NS
100
100
NS
Neutrophilen
0
0
20
NS
0 10
NS
IFN-γ
Epithels ≥ 2
0
80
20
0,048
30
0
NS
Matrix
75
100
40
NS
80
40
NS
Lymphocyte
75
60
40
NS
30
50
NS
fibrocyte
75
100
50
NS
30
100
0,003
Neutrophil
0
0
40
NS
20
0
NS
IL-10*
Matrix
100
20
70
0.048
80
40
NS
Lymphocyte
100
20
70
0,048
40
50
NS
fibrocyte
100
60
70
NS
20
100
NS
Neutrophilen
50
0 10
NS
0 10
NS
†: die Bedeutung war im Vergleich zwischen jungen Mäusen mit persistenten und verlor Kolonisation. * Auf diesen Parameter angegeben, ist das Epithel eher schwach für solche Cytokine auf Immunohistochemie-Färbung.
Higher Sialyl-Lex mit höheren IL-10 koexistiert, aber niedriger INF-γ für H. pylori
Kolonisierung
Bei der 2 nd Woche, die kolonisiert junge Mäuse hatten keinen signifikanten Unterschied in der Intensität der Sialyl-Le x Ausdruck als die Kontrollmäuse (P
> 0,05). Doch auf der 8 th Woche nach H. pylori-
Herausforderung, die junge Mäuse mit persistierendem Kolonisation hatte eine höhere Rate der offensichtlich Sialyl-Le x Ausdruck (Score ≥ 7) als die der Mäuse, die verloren Kolonisation (100% vs. 56%, p
= 0,03). Zusätzlich zu einer höheren Rate von Sialyl-Le zu zeigen x Ausdruck (Score ≥ 7), die alle die anhaltend H. pylori
-colonized jungen Mäusen signifikant mit niedrigeren IFN-γ und höhere IL-10 Ausdrücke koexistierten als jene Mäuse, die persistent Besiedlung am 8. th Woche (Tabelle 4, 100% vs. 0%, P = 0,008
) .Tabelle 4 Eine niedrige Magen-IFN-γ (Score ≤ 1) Ausdruck auf die verloren hatten Epithel mit hoher Sialyl-Lex koexistieren (Score ≥ 7) und IL-10 (sowohl Matrix und Lymphozyten) wurde in den frühen Erwerb Alter von Mäusen auf persistente bakterielle Besiedlung korreliert.
Zytokin-Expression (%)
Colonization von
jungen Mäusen OR (95% CI)
P
Wert *

Persistent (n = 4)
Lost (n = 5)


Low IFN-γ
100
20
0,2 (0,1-1,2)
0,048
hoch IL-10
100
0
- 0.008
Nieder IFN-γ und hoher Sialyl -Lex
100
0
- 0.008
Nieder IFN-γ und hohe IL-10
100
0
- 0,008 oder in : ungerades Verhältnis; CI: Vertrauensintervall; *: Exact Test
Tabelle 5 Fisher zeigt den Torreigen von IFN-γ auf dem Epithel und IL-10 auf der Matrix und Lymphozyten zwischen Mäusen mit persistenten und verlor Besiedlung an der 8 th Woche nach H. pylori
Herausforderung. Keine der jungen Mäusen mit persistierender bakterielle Besiedlung hatte IFN-γ-Expression auf dem Epithel hatte aber offensichtlich IL-10-Expression auf der Matrix und Lymphozyten im Vergleich zu den Mäusen ohne colonization.Table 5 Der Wert von IFN-γ auf das Epithel und IL -10 auf der Matrix und Lymphozyten in der 8. Woche nach H. pylori-
Herausforderung in der jungen Mäuse mit und ohne persistent Kolonisation.



Score von IL-10
Mäuse Nr
Colonization
Score von IFN-γ auf Epithel
auf Matrix
auf lymphocyte

1
Yes
0
1
1
2
Yes
0
1
1
3
Yes
0
1
1
4
Yes
0
1
1
5
No
1
0
0
6
No
2
1
0
7
No
2
0
0
8
No
2
0
0
9
No
2
0
1
Diskussion
Erwerb von H. pylori
tritt vor allem in der Kindheit und spontane Beseitigung der Infektion tritt meist bei jungen Kindern [3-6, 20]. In dieser Studie hatten die C57BL /6 erwachsenen Mäusen eine günstige Kolonisationsrate von Isolaten
H. pylori bis hin zu mehr als 80%, was mit früheren Berichten kompatibel ist [13, 14]. Diese hohe Kolonisationsrate bei erwachsenen Mäusen ist auch kompatibel die Tatsache, dass die verspätete Übernahme von H. pylori
bei erwachsenen menschlichen Patienten in der Regel kommt es zu chronischen Kolonisation [20] zu unterstützen. Außerdem ist, wie im Vergleich zu der 2 nd Woche von jungen Mäusen nach H. pylori
Akquisition der Kolonisationsrate in der 8 th Woche betrug 53%, das von H. pylori, dass spontane Eliminierung unterstützt
tritt wirklich in den frühen Erwerb Alter von Mäusen. So sollte die vorliegende Studie sehr originell sein, ein Mausmodell einzuführen entworfen zu bestätigen, dass es einen Verlust von H. pylori
Kolonisierung sollte nach einem früheren Erwerb von H. pylori
, die eng an die klinischen Befunde bei jungen nachahmt Kinder. Unsere früheren Studie
hat gezeigt, dass die Intensität des Magen-Le x positiv auf die Zunahme des Alters beim Menschen [12] verwandt ist. Doch für diejenigen, ohne H.
Infektion, die Expression von Sialyl-Le-pylori x auf Magenepithels schwach oder fehlt in dyspeptischen Kindern und Erwachsenen ist [12]. Kompatibel mit den Menschen, die Intensität des Magen-Sialyl-Le x von Mäusen auch positiv auf die Zunahme des Alters (2B) korreliert. Solche in Mäusen ein Befund ist auch kompatibel zu einer Studie an Ratten, die eine altersbedingte Zunahme von Glykosylierung in Lebergewebe [21] offenbart. Eine Erhöhung des Magens Sialyl-Le x Ausdruck nach H. pylori-Infektion
wurde bei Menschen und Rhesusaffen berichtet [9-12]. Jedoch in unseren Mäusen Studie eine verminderte Intensität des Magen-Sialyl-Le xwas in der H. pylori
-infizierten jungen Mäusen offenbart, aber nicht in erwachsenen Mäusen auf die 2 nd Woche im Vergleich zu die Kontrollmäuse. auffallend, mehr auf dem 8 th Woche nach H. pylori
Erwerb, wie eine Abnahme von Sialyl-Le x in verschwanden sowohl die kolonisierten jungen und erwachsenen Mäusen, die eine vollständig sialylierten Magenschleimhaut hatte. Dieser Befund legt nahe, dass H. pylori
Herausforderung beteiligt werden sollte, die altersbedingte Reifungskurve der Sialylierung in den jungen Mäusen zu stören. Darüber hinaus ist es schon sagt indirekt, dass die Änderungen von Sialyl-Lewis-Antigen in jungen Mäusen sollte hoch zur Persistenz oder Verlust von H. pylori
Kolonisierung korreliert werden. In diesem Tiermodell
, frühe H. pylori
Akquisition verursachte eine höhere GUS als auf der 2 in Kontrollen nd Woche (87,5% vs. 50%, P
= 0,15), aber nicht auf dem 8 th Woche (40% vs. 30%, P
= 0,36) nach H.
Herausforderung pylori. Unter der Annahme, dass dichte Entzündung mehr schwere klinische Symptome verursacht, könnte dies Histologie Änderung unserer bisherigen Erkenntnisse in Beziehung gesetzt werden, dass H. pylori-Infektion
kurzfristige Magenschmerzen bei Kindern verursachen könnten, obwohl in der Regel bei der Nachuntersuchung aufgelöst [22]. sowohl klinische Beobachtung in Bezug auf und in-vivo-Mäuse-Modelldaten, H. pylori
Erwerb bei Kindern in der Regel stellt sich als selbstlimitierend Fortsetzung der Entzündung.
nach H. pylori-Infektion
, die verschiedenen Wirtsreaktionen des Magen Zytokine könnte möglicherweise zu verschiedenen klinischen Ergebnissen in Beziehung gesetzt werden [14, 18, 23, 24]. In dieser Studie wurden die naiven Mäusen regelmäßig IL-1β und IFN-γ Ausdrücke (3C & 3D) zu haben, auf die Magen-Epithel, die mit einem früheren Bericht des Menschen vereinbar ist [15]. Unsere Studie Mäuse zeigten eine altersspezifische Cytokin-Expression auf dem Magenepithel (IFN-γ) und Lamina propria (IL-6, TNF-α, IFN-γ und IL-10). Aufgrund der altersspezifischen Reaktion der Cytokine, unsere Studie unterstützt, dass es verschiedene naïve Immunreaktionen zwischen Kindern und Erwachsenen sein sollte. Auf der immunhistochemischen Studie
Basierend, bestätigt diese Studie, dass die pro-inflammatorischen Zytokins Ausdrücke auf die Magen-Lamina propria könnten beide ändern auf der 2 nd und die 8 th Woche nach H. pylori-
Herausforderung [25, 26]. Sowohl bei Mäusen als auch bei Menschen, die Magen-Zytokinreaktionen von H. pylori-Infektion
wurde gezeigt, dass Th1-dominant, weil das Niveau der IFN-γ zu sein ist in H. pylori erhöht
infiziertem Probanden im Vergleich zu Kontrollen [15, 18, 23, 27]. Eine hohe INF-γ-Ebene hat sich als Markenzeichen von H. pylori
-related Gastritis, vor allem bei chronischen Entzündungen und möglicherweise zugeschrieben als Schutzfunktion gegen H. pylori
Besiedlung zugeschrieben worden [16-18, 28]. Wie in Tabelle 3 gezeigt wird, offenbarten wir, dass junge Mäuse, die mit einem Verlust der Kolonisierung auf das Epithel als die Mäuse mit persistent Kolonisation (P
= 0,048) eine höhere IFN-γ-Expression hatte. Dieser Befund ist mit einem menschlichen Studie bei Kindern kompatibel, die zeigten, dass Kinder mit H. pylori Infektion
hatte eine niedrigere Konzentration von IFN-γ als bei nicht-infizierten Kontrollen [29]. Diese Daten können in Mäusen legen nahe, dass es, sobald eine signifikante Korrelation zu Kolonisierung Verlust sein kann gibt es eine hohe Expression von IFN-γ. Daher sollte es darum, die verschiedenen Host-Reaktion von IFN-γ zu überblicken, die in Beziehung gesetzt werden können verschiedene H. pylori-Infektion
Ergebnisse in Kinder zu haben.
IL-10 ist ein Th2-Zytokin, und kann ausgelöst werden durch Ausgleichsregelung nach einer Th1-Verschiebung durch die Herausforderung
H. pylori die Magenschleimhaut [13, 15, 23, 27] zu schützen. Daher ist es nicht so auffällig, einen signifikanten Anstieg der IL-10-Expression in den jungen Mäusen mit persistent Kolonisierung zu veranschaulichen (Tabelle 3). Wie in Tabelle 4 dargestellt ist, haben die jungen Mäusen mit niedrigen IFN-γ auf das Epithel eine Persistenz von H. pylori
Kolonisation mit einem hohen IL-10-Expression auf der Matrix und Lymphozyten eine 100% Koexistenz hatte.

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