Антимикробная активность, острая токсичность и цитопротективный эффект Crassocephalum vitellinum (Benth.) С. Мур экстракт в язвенной болезни желудка крыс этанол-HCl model

антимикробной активностью, острая токсичность и цитопротективный эффект Crassocephalum vitellinum (Benth.) С. Мур экстракт в крысу этанол-HCl язва желудка модель
Аннотация
Справочная информация
отваром Crassocephallum vitellinum
(Benth.) С. Мур (Asteraceae) используется в Кагера для лечения язвенной болезни. Это исследование призвано оценить водный экстракт этанола надземной части растения для безопасности и эффективности.
Методы
80% спиртового экстракта C. vitellinum
в дозах 100, 200, 400 и 800 мг /кг вес тела оценивали на способность защищать крыс Sprague Dawley из подкисленного этанола изъязвления желудка по сравнению с 40 мг /кг массы тела пантопразола. Экстракт и его дихлорметан, этилацетат, и водные фракции также оценивали по острой токсичности у мышей, рассола токсичности креветкой и антибактериальной активностью в отношении четырех грамотрицательных бактерий; Кишечная палочка
(АТСС 25922), сальмонеллы брюшного тифа
(НКТЦ 8385), холерный вибрион
(клинический изолят) и Streptococcus фекальный
(клинический изолят). Были также определены Группы фитохимические, присутствующих в экстракте.
Результаты
спиртового экстракта из С. vitellinum
дозозависимо защищены слизистую оболочку желудка у крыс против этанола /HCl оскорблении до максимум 88,3% при 800 мг /кг массы тела, получая тот же уровень защиты, как 40 мг /кг массы тела пантопразола. Экстракт также демонстрируют слабую антибактериальную активность против брюшного тифа
и кишечной палочки
, в то время как этилацетат, дихлорметан и водные фракции показали слабую активность против K. пневмонию, S.typhi, кишечной палочки
и V. холерного
. Экстракт был нетоксичным для мышей до 5000 мг /кг вес тела, а также от общего экстракта (ЛК <суб> 50 = 37,49 мкг /мл), и водную (ЛК <суб> 50 = 87,92 мкг /мл), этиловый эфир ацетат (ЛК <суб> 50 = 119,45 мкг /мл) и дихлорметана фракции (88,79 мкг /мл) показали низкую токсичность в отношении артемии. Фитохимическое скрининг показал, что экстракт содержит дубильные вещества, сапонины, флавоноиды и терпеноиды.
Заключение
Результаты подтверждают претензии традиционными целителями, что отвар из C.vitellinum
имеет противоязвенной активностью. Механизм цитопротекции еще предстоит определить, но фенольные соединения, присутствующие в экстракте могут внести свой вклад в его защитных действий. Однако доза придания гастро-защиты у крыс слишком велика, чтобы быть переведены на клиническое применение; Таким образом, биоанализа руководствоваться фракционирование, чтобы идентифицировать активное соединение /с или фракции необходимо, и использование большего количества моделей язвенная болезнь, чтобы определить механизм защитного действия.
Ключевые слова
Crassocephalum vitellinum
Народная медицина Желудочный цитопротекция антимикробным острые, Токсичность Предпосылки
Кагера регионе имеет богатую культуру в традиционной практике медицины, но большинство растений, используемых в этом регионе плохо документированы и еще не были оценены на безопасность и эффективность. Crassocephallum vitellinum
(Benth.) С. Мур (Asteraceae); Синоним: Gynura vitellina
Benth является одним из растений, используемых в Букобе для лечения язвенной болезни [1]. Надземные части C. vitellinum
варят с водой и полученный отвар принимать регулярно для управления язвенной болезни [1]. Сообщения из других областей показывают, что в Кении растение используется для лечения осложнений желудка, малярии и инфекций ротовой полости у детей [2], в то время как в Заире листья сгорают с теми, культивированных батата и зола применяется к шрамирование для лечение опухших ног [3]. В южной части Руанды C.vitellinum
используется как гепатопротекторное средство, которое в конечном счете, был связан с его антиоксидантными свойствами [4, 5]. Экстракт из растений защищен крыс против ацетаминофен индуцированной токсичности печени, и, кроме того, она совершила разворот барбитуратов, индуцированный сон у морских свинок [4]. Листья используются для лечения женского бесплодия, сильной лихорадки, дисменорея, запор, болезней детского возраста и облегчить освобождение плаценты [4]. Фильтрат измельченных листьев и цветков растения в сочетании с теми из подорожника Palmata
Hoof.f., Vernonia auriculifera
Hiern и физалис перуанский
Л. используется для лечения коклюша [6], в то время как листья используются для управления анорексии [7] и для дородовой [8]. Листья используются в ветеринарии для лечения мастита, лихорадки, а также содействовать лактацию и деятельность была связана с содержанием флавоноидов листьев [9]. Антиоксидант и антибактериальную активность эфирных масел надземных частей растения Недавно сообщалось [10]. В лагерях беженцев в Танзании, традиционные целители используют листья C. vitellinum
при запорах и абортов [11] .The листья также используются людьми Хайя для лечения гонореи [1].
Это исследование было сделано для оценить эффективность экстракта надземных частей для защиты от подкисленного этанола индуцированной зва желудка у крыс Spague Dawley. Экстракт также тестировали на антибактериальную активность. Фитохимическое скрининга было сделано для определения групп соединений, присутствующих в экстракте, в то время как острая токсичность на мышах и испытания летальности артемии были сделаны, чтобы определить безопасность экстракта.
Методы
материалы
Триптон Соевый бульон был приобретен от HIMEDIA® (HiMedia Laboratories Pvt Ltd, Мумбаи, Индия; p-
Iodonitrotetrazolium хлорид (INT) из Sigma® (Sigma-Aldrich®, Сент-Луис, США); пантопразола (лиофилизированный порошок для инъекций IV; Batch No. JKJ 3534D и производства Sun Pharmaceutical Industries Ltd, Халол-Бароды шоссе, Halol-389350, Гуджарат, Индия.), был получен из местной аптеке. Этанол (абсолютный) был приобретен у Fluka Chemie GmbH (Sigma-Aldrich®, Zwijndrecht, Нидерланды ), в то время как диметилсульфоксид (ДМСО) был приобретен у Sigma® (Poole, Дорсет, Великобритания). Циклофосфамид, NEOPHOS 500® (CIPLA Ltd, MIDC Boisar, Индия) был приобретен у местного аптеки в Дар-эс-Саламе, Танзания. кишечная палочка
(АТСС 25922), сальмонеллы брюшного тифа
(НКТЦ 8385), холерный вибрион
(клинический изолят) и Klebsiella пневмонии
(клинический изолят) были получены от кафедры микробиологии и иммунологии, Muhimbili университета здравоохранения и смежных наук (МУХАС). Яйца креветки рассола были куплены по аквакультуре инноваций (Грехемсхаус 6140, Южная Африка) и морская соль получали на местном уровне за счет испарения воды, собранной из Индийского океана, а также в Дар-эс-Саламе побережье.
Коллекция растительного материала
Антенна части Crassocephallum vitellinum
(Benth.) С. Мур (Asteraceae) были собраны опытным ботаником, г-н О. Гаджи Selemani кафедры ботаники, университет Дар-эс-Саламе и чековых образца нет. MH 164569 хранится в гербарии Института традиционной медицины Muhimbili университета здравоохранения и смежных наук.
Приготовление растительных экстрактов
воздух высушенный растительный материал измельчают в порошок с помощью фрезерного завода машины. Растительный материал был вымоченных в 80% этанола при комнатной температуре в течение 24 ч и фильтруют через Whatman фильтровальную бумагу № 1. Эту процедуру повторяли 3 раза, чтобы обеспечить полную экстракцию растительного материала. Объединенный экстракт концентрировали выпариванием при пониженном давлении в ротационном испарителе при 40 ° С. Выход экстракт 31 г из 292 г сухого растительного материала (10,62%).
Тестирование для противоязвенной активности
использовались как мужчины, так и у самок крыс Sprague Dawley весом 100-188 г. Крыс не кормили в течение 36 ч, но свободный доступ к питьевой воде. Тридцать крыс были случайным образом распределены на 5 групп по 6 крыс в каждой. Крысам в группе один (растворитель контроль) предварительно вводили перорально с 5 мл /кг массы тела на 1% Tween 80 в нормальном физиологическом растворе; крысы в ​​группе два были предварительно вводили перорально 40 мг /кг массы тела пантопразола (положительный контроль), и у крыс в группах 3, 4 и 5 были предварительно вводили перорально с 200, 400 и 800 мг /кг массы тела раствора C . vitellinum
извлечь за один час до перорального введения 5 мл /кг массы тела в ульцерогенного смеси. Ульцерогенное смесь содержала 80% этанола, 5% соляной кислоты и 15% дистиллированной воды. Животных умерщвляли с помощью эфирной анестезии через 4 часа после введения подкисленного этанола. Желудки были удалены, вскрыты вдоль большой кривизны, промывают нормальным физиологическим раствором, и наблюдали за тяжести язв. Степень изъязвлением (индекс Язва) оценивали в соответствии со способом, описанным ранее по Шей и его коллеги [12] следующим образом: 0 = нет повреждений (нормальный желудок); 0,5 = гиперемия (красный цвет); 1 = геморрагические пятна, 2 = 1-5 небольшие язвы; 3 = много мелких язв, 4 = многие малые и большие язвы; 6 = желудок полон язв наряду с перфорацией. Защита в процентах рассчитывают по сравнению с защитой необработанной контрольной группы Процент [12] <мо> =
<тп> 100
<Мо> -
Mean
язвой
индекс Каталог
лечение
группа
Mean
язвой
индекс из
управления
группа
<Мо> ×
<тп> 100
Статистическая анализ
результаты выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение (SD). Результаты среднего индекса язвы сравнивали с использованием непараметрического теста Крускала-Уоллиса.
Тестирование на антибактериальную активность
подопытные организмы
Четыре грамотрицательные бактерии (Enterobactericeae), а именно кишечная палочка, сальмонеллы брюшного тифа, вибро холера ,
и Klebsiella pneumonea
были использованы, которые были получены от кафедры микробиологии и иммунологии, Muhimbili университета здравоохранения и смежных наук.
Определение минимальной подавляющей концентрации (МИКО)
Минимальная ингибирующие концентрации ( МИК) определяли с помощью метода микроразведения [13]. Исходный раствор экстракта получали путем растворения 100 мг экстракта этанола на 80% в 1 мл ДМСО (100 мг /мл). Каждый из 96-луночных микротитрационных планшетах были сначала предварительно загружены с помощью 100 мкл трипсинизированном бульона сои с последующим добавлением 100 мкл экстракта в первые лунки строк, чтобы общий объем 200 мкл в первых скважин. После тщательного перемешивания 100 мкл переносили из первого ряда скважин в следующем ряду скважин. Процесс повторяли последовательно до последней скважины на дне, где отбрасывали 100 мкл. После этого 100 мкл бактериальной суспензии (0.5Mac Фарланд стандарт мутности) затем добавляли в каждую лунку, чтобы сделать окончательный объем 200 мкл в каждую лунку. Гентамицин сульфат (100 мкг /мл) использовали в качестве стандартного препарата. Ряды, содержащие бульон, ДМСО и бактерии были включены в качестве отрицательного контроля (контроль растворителя) и строки, содержащие бульон и бактерии были включены только для того, чтобы увидеть, был ли рост бактерий или нет (контроль роста). Затем планшеты инкубировали при 37 ° С в течение 24 ч. После инкубации в течение 24 ч при 37 ° С, 40 мкл 0,02% р-iodonitrotetrazolium (ИНТ) раствор хлорида добавляли в каждую лунку с последующей инкубацией в течение 1 ч при 37 ° С. Бактериальный рост указывает изменение цвета до розового в лунках. Отсутствие роста бактерий указывало изменения цвета красителя. Первая концентрация, при которой не происходило роста бактерий было принято в качестве MIC.
Артемия тест летальность
Тест артемии летальности (БСТ) был использован для прогнозирования наличия, в экстракте, цитотоксической активности [14] , Растворы экстракта были сделаны в ДМСО при концентрациях в пределах от 8-240 мкг /мл и инкубировали в дублированных флаконах с личинками рассоле креветки. Дес ть личинок креветок рассол были помещены в каждый из дублирующих флаконов. Личинки артемии управления размещались в смеси только искусственной морской воды (3,8 г /л морской соли) и ДМСО. Через 24 часа науплиусы были рассмотрены на освещенной фоне, и определяли среднее количество живых личинок в каждом дубликате флаконе. Средний процент смертности в виде зависимости от логарифма концентрации и концентрации убивает пятьдесят процентов личинок (LC <югу> 50) определяли из графика [15].
Анализ данных
о среднем результаты артемии смертность от логарифмов концентраций были нанесены с помощью компьютерной программы рис P (Биософт Inc, США), который также дает уравнения регрессии. Уравнения регрессии были использованы для расчета LC <суб> 16, LC <суб> 50 и ЛК <суб> 84 значения. Доверительные интервалы (95% ДИ) Затем были рассчитаны с использованием трех результатов [14, 15]. LC <югу> 50 значение больше, чем 100 мкг /мл было сочтено, что неактивное соединение или экстракта. Испытание
Острая токсичность
Острая токсичность было сделано в соответствии с руководящими принципами ОЭСР 425 [16]. были использованы как мужчины, так и оригинальные альбиносов самок мышей Theiller в. Мыши были акклиматизированы в комнате с кондиционером при 20 ° С в течение 7 дней до начала экспериментов. Перед тем как дозирование с экстрактами мышей голодали в течение 18-24 ч с доступом к питьевой воде, в клетках с проволочной сетки дном, чтобы предотвратить копрофагии. Первоначально в дозе 1000 мг /кг массы тела вводили в группе из 6 мышей (3 мужчин и 3 женщин), и мышей наблюдали на признаки немедленной токсичности и /или смерти в течение 72 часов. Если не было обнаружено никакой токсичности другая группа 3 самца и 3 самок мышей давали дозу 2000 мг /кг вес тела и тех же наблюдений, сделанных. Если не произошло каких-либо признаков токсичности или смерти дозы были последовательно увеличено до 3000, 4000 и 5000 мг /кг вес тела, соответственно. Экстракты солюбилизировали в 1% Tween 80 в нормальном физиологическом растворе и вводят в объеме одной дозе 5 мл /кг вес тела или двух дозах 5 мл /кг вес тела в зависимости от растворимости, в пределах одного часа интервала. Контрольную группу вводили разовую 5 мл или 5 мл /кг массы тела в 1% Tween 80 в два раза, чтобы соответствовать с дозой вводимого растительного экстракта.
Фитохимический скрининг
80% экстракта Этанол тестировали на наличие стероидов, сапонины, флавоноиды, терпеноиды, сердечные гликозиды, алкалоиды и дубильные вещества с использованием стандартных методов [17, 18].
Ethical клиренс
Данное исследование было дано разрешение этического комитета по Muhimbili университета здравоохранения и смежных наук наблюдательный совет Институциональный .
Результаты
противоязвенной активностью
80-% экстракт этанола С. vitellinum
показал дозозависимое защиту от этанола /HCl, индуцированного изъязвления желудка. В таблице 1 показано, что экстракт защищен желудка крысы из изъязвления на 55% при дозе 200 мг /кг вес тела (Р ≤ 0,001), и эта цифра возросла до 71,7 (P ≤ 0,001), и 88,3% (P ≤ 0,001) при 400 и 800 мг /кг массы тела по сравнению с растворителем получавших соединение крыс, соответственно. Это был такой же процент защиты, как 40 мг /кг массы тела ингибитора протонного насоса, пантопразол. На рисунке 1 показано, что при 800 мг /кг массы тела в желудке появился похож на крыс, предварительно обработанных 40 мг /кг массы тела пантопразола. На рисунке 2 показана зависимость доза-реакция для контроля, 400 и 800 мг /кг массы тела завода extractTable 1 противоязвенного активность 80% этанольного экстракта надземной части C. vitellinum
группы N
<бр> доза экстракта (мг /кг массы тела)

Средний индекс язвы (п = 6)

% защиты от возраста

1
Растворитель управления
6
0 страница 2 200
2,7 ± 1,0
55,0 * страница 3 400
1,7 ± 1,4
71,7 * 4
800
0,7 ± 0,4
88,3 *
5.
40 мг /кг массы тела пантопразол
0,7 ± 0,9
88,3 *
Каждое значение представляет собой среднее результатов 6 крыс , * = Значительное P ≤ 0,001 по сравнению с растворителем управления. Рисунок 1
фотография, демонстрирующая желудок следующее оскорбление с этанолом /HCl (80% /5%) смеси. В (А) крыса была предварительно дозировать с растворителем перед оскорблением этанолом смеси /HCl. В (Б) крыс предварительно вводили 800 мг /кг массы тела 80% -ного этанольного экстракта C. vitellinum
до воздействия язвенного смеси и на стадии (в) крыс предварительно вводили 40 мг /кг массы тела пантопразол. Рисунок 2
Фотографии слизистой оболочки желудка у крыс, показывающие, в зависимости от дозы эффект C. vitellinum против подкисленным этанолом изъязвления слизистой оболочки желудка крысы. A = Solvent контроль; В = 400 мг /кг массы тела растительного экстракта; C экстракт = 800 мг /кг массы тела растений; D = 40 мг /кг массы тела пантопразол.
Антибактериальную активность
Результаты антибактериальной активности (таблица 2) свидетельствуют о том, что общий экстракт имел слабую активность против сальмонеллы брюшного тифа
и кишечной палочки
с МИК 3,125 мг /мл. Когда экстракт фракционировали на водный, этилацетата и дихлорметана фракций результаты показывают, что доля этилацетат активно против четырех бактерий, используемых; т.е. К. Пневмококк, С. брюшного тифа, E. Coli и V.
холера
, и был активен в отношении бактерий больше, чем общего экстракта. Оба дихлорметан и этилацетат экстракты имели очень слабую активность в отношении всех четырех бактерий used.Table 2 Антибактериальная активность этилацетата, ДХМ и водном фракций экстракта этанола C.vitellinum
грам-ве тест изолирует

МИК (мг /мл) 80% экстракта этанола и его фракций

80% экстракта этанола (общее)

этилацетат (фракция)

DCM (фракция) <бр>
водном (фракция)

K.pneumonea Buhsoft Forums -
6,25
12,5
12,5
S.typhii

3,125
3,125
12,5
12,5
Е. coli

3,125
3,125
6,25
6,25
V.cholera Buhsoft Forums -
3,125
12,5
12,5
рассол тест летальность креветки
результаты испытаний артемии (таблица 3) показывают, что в целом общий экстракт (LC <суб> 50 = 37,49 мкг /мл) и водный, дихлорметан и этилацетат фракции все выставлены умеренно низкой артемии toxicity.Table 3 эффекта C. vitellinum общий экстракт и его фракции по токсичности артемии
Экстракты

LC50 (мкг /мл)

95% ДИ (мкг /мл)

80% экстракт этанола
37.49
27,98 - 50,16
водную фракцию
87.92
63.71-121.33
этиловый ацетат фракции
119,45
86.56-164.84
Dichloromethane фракция
88,79
69.37-113.65
Острая токсичность на мышах
Общий экстракт до 5000 мг /кг вес тела не сделал никаких признаков токсичности на мышах и всех мышей выжили до 28 дней периода наблюдения.
Фитохимическое Screening
результаты фитохимическому скрининга показывают, что 80% этаноловый экстракт Crassocephalum vitellinum
содержит дубильные вещества, сапонины , флавоноиды и тритерпены.
Обсуждение
механизм этанола изъязвления желудка из-за прямого токсического действия на эпителий, приводящей к некротических поражений, истощение желудка слизи, которая ломает барьер слизистой оболочки, повышение проницаемости слизистой оболочки желудка ведет к повышению утечка ионов водорода из просвета, обратной диффузии кислоты и уменьшения транслюминальная разности электрических потенциалов [19-21]. Этанол также вызывает изменения в слизистой оболочке кровотока, уничтожают микрососудистой и не-сосудистых клеток, дегрануляцию тучных клеток, neutophil опосредованное повреждение слизистой оболочки, а также истощение некоторых кислородных свободных радикалов [22]. В дополнение к истощению поглотителей свободных радикалов, свободных радикалов освобождаются от метаболизма этанола [22], и это, если еще более усугубляется ингибированием биосинтеза простагландинов цитопротекторных [23].
В этом исследовании пантопразола показали четкий защитный действие против подкисленной изъязвления этанола, вероятно, предполагая роль желудочной кислоты в подкисленной этанол-индуцированной язвой желудка. Внешний вид пантопразола обрабатывают слизистую оболочку желудка крысы показывает большую разницу в валовой внешний вид по сравнению с контрольной группой растворителей. С другой стороны, водный этанольный экстракт C. vitellinum,
при 800 мг /кг вес тела, присвоил один и тот же уровень защиты слизистой оболочки желудка у крыс (88,3%) в виде 40 мг /кг массы тела пантопразола. Важным вопросом здесь является то, что является основой для защитного действия экстракта. Конечно, нет достаточных доказательств, чтобы позволить нам предложить механизм гастроэнтерита защиты. Результаты фитохимическому скрининга показали, что экстракт из надземной части C. vitellinum
содержит дубильные вещества, флавоноиды и терпеноиды, которые являются фенольные соединения. Завод фенольные соединения, как известно, антиоксиданты и ловушки свободных радикалов [24]. В связи с установленным фактом, что этанол-индуцированной язвы желудка, связанной с нейтрофильной опосредованного повреждения слизистой через высвобождение свободных радикалов кислорода, протеаз и лизосомальных ферментов [22], есть сильный признак того, что С. vitellinum
экстракт обязан своим анти-ульцерогенное эффект частично из-за наличия флавоноиды, дубильные вещества и терпеноиды, которые обладают антиоксидантным и свободных радикалов активностью. Антиоксидант свойства этого растения были зарегистрированы в другом исследовании [4].
Экстракт этанола 80% и его фракции выставлены некоторые антибактериальной активностью в отношении четырех грамотрицательных бактерий, который, кажется, самой высокой в ​​этилацетате фракции. Он был предназначен для тестирования экстрактов для тормозящего действия против Helicobacter Pylori
который причастен к язвенной болезни. Тем не менее, не было возможности получить эти организмы из любого промышленного источника или с помощью других лабораторий. Было решено проверить выписки против четырех энтеробактерий, чтобы просто получить ориентировочные результаты, но это не означает, что в любом случае, что получение положительных результатов является прямым свидетельством того, что экстракты также автоматически активны против H. пилори
но делает предполагают, что экстракты могут быть полезны для лечения других кишечных состояний, связанных с инфекцией этими бактериями. Это понятие не поддерживается некоторыми из традиционных видов медицины [5, 8, 9].
Экстракт C. vitellinum
показали никаких существенных изменений в поведении животных или неблагоприятные признаки токсичности во время оценки после лечения мышей после лечения до 5000 мг /кг массы тела, тем самым предполагая, что он безопасен при введении остро. Аналогичные результаты наблюдались в испытании на токсичность артемии, в котором как общий экстракт и его фракции показали минимальную токсичность.
Заключение
Эти результаты подтверждают претензии традиционными целителями, что экстракт из надземной части C.vitellinum <бр> обладает противоязвенной активностью. Поскольку доза придания максимальной защиты очень велика, маловероятно, что результаты могут иметь непосредственное клиническое применение. Хотя можно предположить, что фенольные соединения способствуют защитные действия экстракта, есть нужно сделать биоанализа руководствоваться фракционирование, чтобы идентифицировать активное соединение /с или фракций. Механизм защитного действия также остается предметом дальнейших исследований
Сокращения
BST:.
Артемии тесты


CI: <бр> Доверительный интервал


ДМСО:
Диметилсульфоксид


HCl:
Соляная кислота


INT:
р-iodonitrotetrazolium


LC:
летальная концентрация


MIC:
Минимальная ингибирующая концентрация


ОЭСР:.
Организации экономического сотрудничества и развития


декларациях
Выражение признательности
Мы признательны г-ну Didas Ngemera , традиционный целитель, который дал нам эту информацию, и г-н О. Гаджи Selemani для сбора и идентификации растительного материала. Это исследование было частично финансируется за счет гранта на Eeh от правительства Бельгии под эгидой бельгийского технического сотрудничества.
Авторов оригинальные представленные файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинальных представленных файлов для изображений. 'Исходный файл для фигурного 1 13104_2013_2655_MOESM2_ESM.pdf Авторского 13104_2013_2655_MOESM1_ESM.pdf авторов исходного файла для фигуры 2 конкурирующими интересами
Авторы не имеют никаких конкурирующих интересов для этого исследования, и разделяют чаяния традиционных целителей Кагера области для улучшения здравоохранения услуги в их сообществе взносы
авторов
MJM сделал ethnomedical исследования, которые задокументированы эти растения и определили растения для данного исследования. участвовал в консультировании дизайн исследования, оказывал поддержку и руководство в лаборатории и при условии, что теоретическое руководство проекта. Он также подготовил эту рукопись. RSON участвовали в экспериментах и ​​была лаборатория супервизор для исследования. Он также участвовал в разработке исследования. EEH сделал некоторые из экспериментов, в том числе подготовка растительного материала, экстракции, биопроб и т.д. под руководством RSON который тесно сотрудничал с ним в лаборатории. RLAM является совместным наставником EEH и участвовал в консультировании разработке дизайна исследования и предложения развития. AWK сделал фитохимические эксперименты скрининг и эксперименты летальность артемии. Все авторы прочитали и одобрили рукопись.

• Разнообразие в бактерии-хозяине взаимодействий в пределах вида Helicobacter heilmannii в буквальном смысле слова
• Состояние промывания желудка у новорожденных, родившихся с меконием околоплодных водах: рандомизированное к…