Die antimikrobielle Aktivität, die akute Toxizität und zytoprotektive Wirkung von Crassocephalum vitellinum (Benth.) S. Moore Extrakt in einem Ratten-Ethanol-HCl Magengeschwür-Modell

Die antimikrobielle Aktivität, die akute Toxizität und zytoprotektive Wirkung von Crassocephalum vitellinum (Benth.) S. Moore Ethanol-HCl Magengeschwür-Modell in einem Ratten-Extrakt
Zusammenfassung
Hintergrund Ein Auskochen von Crassocephallum vitellinum
(Benth
. ) S. Moore (Asteraceae) in Kagera Region verwendet Magen-Darm-Geschwüre zu behandeln. Diese Studie soll eine wässrige Ethanolextrakt von oberirdischen Teile der Pflanze für die Sicherheit und Wirksamkeit zu bewerten.
Methods
einer 80% igen ethanolischen Extrakt von C. vitellinum
bei Dosen von 100, 200, 400 und 800 mg /kg Körpergewicht wurde für die Fähigkeit bewertet, Sprague Dawley Ratten von angesäuertem Ethanol Magenulzeration im Vergleich zu 40 mg /kg Körpergewicht Pantoprazol zu schützen. Der Extrakt und die Dichlormethan, Ethylacetat und wässrige Fraktionen wurden auch auf akute Toxizität in Mäusen, Artemia Toxizität und antibakterielle Aktivität gegen Gram-negative Bakterien vier ausgewertet; Escherichia coli
(ATCC 25922), Salmonella Typhi
(NCTC 8385), Vibrio cholera
(klinisches Isolat) und Streptococcus faecalis
(klinisches Isolat). Die Gruppen von Phytochemikalien im Extrakt wurden ebenfalls bestimmt.
Ergebnisse
Der ethanolische Extrakt von C. vitellinum
dosisabhängig bei 800 mg Ratte Magenschleimhaut gegen Ethanol /HCl Beleidigung auf maximal 88,3% geschützt /kg Körpergewicht, die gleiche Schutzniveau wie von 40 mg /kg Körpergewicht Pantoprazol ergab. Der Extrakt zeigte auch schwache antibakterielle Aktivität gegen S. Typhi
und E. coli
, während seine Ethylacetat, Dichlormethan und wässrige Fraktionen schwache Aktivität gegen K. Pneumonie, S. typhi, E. coli
zeigte und V. Cholera
. Der Extrakt wurde ungiftig für Mäuse bis zu 5000 mg /kg Körpergewicht und der Gesamtextrakt (LC 50 = 37,49 &mgr; g /ml) und die wässrige (LC 50 = 87,92 &mgr; g /ml), ethyl Acetat (LC 50 = 119,45 ug /ml) und Dichlormethan-Fraktionen (88,79 pg /ml) zeigten eine geringe Toxizität gegenüber Salinenkrebsen. Phytochemical Screening zeigte, dass der Extrakt enthält Gerbstoffe, Saponine, Flavonoide und Terpenoide.
Fazit
Die Ergebnisse, die Forderungen von traditionellen Heilern unterstützen, die ein Absud von C.vitellinum
Antiulkuswirksamkeit hat. Der Mechanismus der Zytoprotektion ist noch nicht bestimmt werden, aber die phenolischen Verbindungen, die in dem Extrakt kann seine Schutzmaßnahmen beitragen. Jedoch ist die Dosis zur Übertragung der gastro-Schutz in der Ratte zu groß, um die klinische Anwendung übersetzt werden; so geführt Fraktionierung Bioassay Wirkstoff /s oder Fraktionen zu identifizieren, ist erforderlich, und die Verwendung von mehr Magengeschwür Modelle den Mechanismus für die Schutzwirkung zu bestimmen.
Schlüsselwörter Crassocephalum vitellinum
Traditionelle Medizin Magen-Zytoprotektion Antimicrobial Akut, Toxizität Hintergrund
der Kagera Region hat eine reiche Kultur in der traditionellen Medizin der Praxis, aber die Mehrheit der Pflanzen in dieser Region verwendet werden, schlecht dokumentiert und sind noch nicht für die Sicherheit und Wirksamkeit bewertet. Crassocephallum vitellinum
(Benth.) S. Moore (Asteraceae); Synonym: Gynura vitellina
Benth gehört in Bukoba verwendet, um Pflanzen für die Behandlung von Magengeschwüren Krankheit [1]. Die oberirdischen Teile von C. vitellinum
werden mit Wasser gekocht und die entstehende Absud wird regelmäßig für das Management von Magengeschwüren genommen [1]. Berichte aus anderen Bereichen zeigen, in Kenia wird die Pflanze zur Behandlung von Magen-Komplikationen, Malaria und Mund-Infektionen bei Kindern verwendet [2], während in Zaire die Blätter sind mit denen des kultivierten Yamswurzel verbrannt und die Asche auf scarifications aufgebracht, dass die Behandlung von geschwollenen Beinen [3]. Im südlichen Ruanda C.vitellinum
als leberschützende Mittel verwendet wird, das auf seine antioxidative Eigenschaften verknüpft schließlich wurde [4, 5]. Ein Extrakt der Pflanze geschützt Ratten gegen Paracetamol Lebertoxizität induziert wird, und zusätzlich umgekehrt es Barbiturat induzierten Schlaf bei Meerschweinchen [4]. Die Blätter werden für die Behandlung von weiblicher Sterilität, starke Fieber, Dysmenorrhoe, Verstopfung, Kinderkrankheiten und erleichtern die Befreiung der Plazenta [4] verwendet. Das Filtrat von zerkleinerte Blätter und Blüten der Pflanze mit denen kombiniert von Plantago palmata
Hoof.f., Vernonia auriculifera
Hiern und Kapstachelbeere
L. wird für die Behandlung von Keuchhusten [6], während werden die Blätter für das Management von Magersucht [7] und für pränatale Versorgung [8] verwendet. Die Blätter werden in der Tiermedizin zur Behandlung von Mastitis, Fieber verwendet, und Laktation und Aktivität zu erleichtern hat die Flavonoid-Gehalt der Blätter in Verbindung gebracht worden [9]. Das Antioxidationsmittel und antibakterielle Aktivität der ätherischen Öle der oberirdischen Teile der Pflanze wurde kürzlich berichtet [10]. In Flüchtlingslagern in Tansania, traditionelle Heiler die Blätter von C. vitellinum
für Verstopfung und Abtreibung verwenden [11] .Die Blätter werden auch von den Haya Menschen verwendet Tripper zu behandeln [1].
Diese Studie wurde durchgeführt, Bewertung der Wirksamkeit eines Extraktes der oberirdischen Teile zum Schutz gegen angesäuerten Ethanol Magengeschwürbildung in Spague Dawley Ratten induziert. Der Extrakt wurde auf antibakterielle Aktivität getestet. Phytochemical Screening wurde durchgeführt, um die Gruppen von Verbindungen zu bestimmen, die in dem Extrakt, während die akute Toxizität bei Mäusen und Artemia Letalität Test durchgeführt wurden Sicherheit des Extraktes zu bestimmen.
Methoden
Materialien
Trypton-Soja-Brühe erworben wurde von HIMEDIA® (Himedia Laboratories Pvt Ltd, Mumbai, Indien, p-
Iodonitrotetrazolium Chlorid (INT) von SIGMA® (Sigma- Aldrich ®, St. Louis, USA); Pantoprazol (gefriergetrocknetes Pulver für iv-Injektion, Chargen-Nr JKJ 3534D und hergestellt von Sun Pharmaceutical Industries Ltd, Halol-Baroda Autobahn, Halol-389350, Gujarat, Indien.), wurde von einer lokalen Apotheke bezogen. Ethanol (absolut) wurde von Fluka Chemie GmbH erworben (Sigma-Aldrich ®, Zwijndrecht, Niederlande ), während Dimethylsulfoxid (DMSO) von Sigma ® (Poole, Dorset, UK). Cyclophosphamid, NEOPHOS erworben wurde 500® (CIPLA Ltd, MIDC Boisar, Indien) von einer lokalen Apotheke in Dar es Salaam, Tansania gekauft wurde. Escherichia coli
(ATCC 25922), Salmonella typhi
(NCTC 8385), Vibrio cholerae
(klinisches Isolat) und Klebsiella pneumoniae
(klinisches Isolat) wurden von der Abteilung für Mikrobiologie und Immunologie, Universität Muhimbili erhalten der Gesundheit und der Allied Sciences (MUHAS). Die Artemia Eier aus Aquakultur Innovations (Grahams 6140, Südafrika) und Meersalz gekauft wurden, wurde vor Ort hergestellt, indem Wasser aus dem Indischen Ozean gesammelt Verdampfen entlang der Dar es Salaam Küste.
Sammlung von Pflanzenmaterial
die Antenne Teile Crassocephallum vitellinum
(Benth.) S. Moore (Asteraceae) von einem erfahrenen Botaniker gesammelt wurden, nicht Herr Haji O. Selemani der Abteilung für Botanik der Universität von Dar es Salaam und Belegprobe. MH 164569 wird am Herbarium des Instituts für traditionelle Medizin, Muhimbili University of Health and Allied Sciences gehalten.
Herstellung von Pflanzenextrakten
Das luftgetrocknete Pflanzenmaterial in Pulver mit einer Pflanze Fräsmaschine gemahlen wurde. Das Pflanzenmaterial wurde 24 h in 80% Ethanol bei Raumtemperatur mazeriert und durch Whatman No.1 Filterpapier filtriert. Dieses Verfahren wurde 3 mal wiederholt vollständige Extraktion von Pflanzenmaterial zu gewährleisten. Der gepoolte Extrakt wurde bei 40 ºC durch Eindampfen unter vermindertem Druck in einem Rotationsverdampfer konzentriert. Der Extrakt Ausbeute betrug 31 g von 292 g trockenes Pflanzenmaterial (10,62%).
Testing für Antiulkuswirksamkeit
Sowohl männliche als auch weibliche Sprague Dawley Ratten mit einem Gewicht von 100-188 g verwendet wurden. Die Ratten wurden für 36 h gefastet, aber freien Zugang zu Trinkwasser erlaubt. Dreißig Ratten wurden 5 Gruppen von jeweils 6 Ratten zufällig zugeteilt. Die Ratten in Gruppe eins (Lösungsmittelkontrolle) wurden vordosiert oral mit 5 ml /kg Körpergewicht von 1% Tween 80 in normaler Kochsalzlösung; in Ratten Gruppe waren zwei vordosiert oral mit 40 mg /kg Körpergewicht Pantoprazol (positive Kontrolle), und Ratten, die in Gruppen 3, 4 und 5 wurden vordosiert oral mit 200, 400 und 800 mg /kg Körpergewicht Lösung C eine Stunde vor der oralen Verabreichung von 5 ml /kg Körper. vitellinum
extrahieren wt des ulcerogene Mischung. Die ulcerogene Mischung enthielt 80% Ethanol, 5% -iger Salzsäure und 15% destilliertem Wasser. Die Tiere wurden durch Etheranästhesie 4 h nach der Verabreichung von angesäuertem Ethanol euthanasiert. Die Mägen wurden entfernt, entlang der großen Kurvatur aufgeschnitten, mit normaler Salzlösung gewaschen und für die Schwere der Geschwüre beobachtet. Der Grad der Geschwüre (Ulkus-Index) wurde nach einem Verfahren abgestuft zuvor von Shay und Kollegen [12] wie folgt: 0 = keine Läsionen (normale Magen); 0,5 = Hyperämie (rote Färbung); 1 = hämorrhagischen Flecken, 2 = 1-5 kleine Geschwüre; 3 = viele kleine Geschwüre, 4 = viele kleine und große Geschwüre; 6 = Magen voller Geschwüre zusammen mit Perforationen. Prozentual Schutz wurde durch Vergleich mit der unbehandelten Kontrollgruppe Prozentsatz Schutz [12] =
100
berechnet -
Mittelwert
Geschwür
Index
von
behandelt
Gruppe
Geschwür
Index
von Steuer
Gruppe
×
100
Statistische
Mittlere Analyse
Die Ergebnisse sind als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) ausgedrückt. Die Ergebnisse des mittleren Ulcus-Index wurden die nicht-parametrischen Kruskal-Wallis-Test verglichen werden.
Testen auf antibakterielle Aktivität
Testorganismen
Vier Gram-negative Bakterien (enterobactericeae), nämlich Escherichia coli, Salmonella typhi, Vibro cholera
und Klebsiella pneumonea
verwendet, die von der Abteilung für Mikrobiologie und Immunologie, Muhimbili University of Health and Allied Sciences erhalten.
Bestimmung der minimalen Hemmkonzentrationen (MHK)
minimalen Hemmkonzentrationen ( MHK) wurden unter Verwendung des Mikrodilutionsverfahren [13] bestimmt. Eine Stammlösung des Extraktes wurde durch Auflösen von 100 mg des 80% Ethanolextraktes in 1 ml DMSO (100 mg /ml) hergestellt. Jede der 96-Well-Mikrotiterplatten wurden zuerst mit 100 &mgr; l tryptische Sojabrühe durch Zugabe von 100 &mgr; l des Extrakts in die ersten Vertiefungen der Reihen folgt vorgespannt, um ein Gesamtvolumen von 200 &mgr; l in den ersten Brunnen machen. Nach gründlichem Vermischen von 100 &mgr; l wurden aus der ersten Reihe Brunnen in die nächste Zeile Brunnen übertragen. Der Prozess wurde der Reihe nach auf den letzten gut am Boden wiederholt, wobei 100 &mgr; l wurde verworfen. Danach wurden 100 &mgr; l der Bakteriensuspension (0.5Mac Farland Standardtrübungs) wurde dann in jede Vertiefung gegeben in jeder Vertiefung ein Endvolumen von 200 &mgr; l zu machen. Gentamicin-Sulfat (100 ug /ml) wurde als Standard-Medikament verwendet. Zeilen mit Brühe, DMSO und Bakterien wurden als negative Kontrollen (Lösungsmittelkontrolle) und Zeilen enthalten, Brühe und Bakterien enthalten, nur um enthalten waren, um zu sehen, ob es das Wachstum von Bakterien oder nicht (Wachstumskontrolle) war. Die Platten wurden dann 24 h bei 37 ° C inkubiert. Nach Inkubation für 24 h bei 37 ° C, 40 &mgr; l von 0,02% p-Iodnitrotetrazolium (INT) -chlorid-Lösung wurde bei 37 ° C für 1 h zu jeder Vertiefung, gefolgt von der Inkubation zugegeben. Bakterienwachstum wurde durch eine Farbänderung angegeben in den Vertiefungen zu rosa. Abwesenheit von Bakterienwachstum wurde durch keine Farbänderung des Farbstoffes angegeben ist. Die erste Konzentration, bei der kein bakterielles Wachstum auftrat, wurde als MHK genommen.
Salinenkrebse Letalität Test
die Artemia Letalität Test (BST) wurde verwendet, um die Anwesenheit, in dem Extrakt vorherzusagen, der zytotoxischen Aktivität [14] . Lösungen des Extrakts wurden in DMSO in Konzentrationen im Bereich von 8 bis 240 &mgr; g /ml inokuliert und in zweifacher Ausfertigung Vials mit Artemia Larven hergestellt. Zehn Artemia Larven wurden in jeder der doppelten Ampullen gegeben. Kontrolle Artemia Larven wurden in einer Mischung aus künstlichem Meerwasser (3,8 g /l Meersalz) und DMSO nur platziert. Nach 24 h wurden die Nauplien gegen einen beleuchteten Hintergrund untersucht, und die durchschnittliche Anzahl von lebenden Larven in jeder Dubletten Phiole wurde bestimmt. Der mittlere Prozentsatz Mortalität gegen den Logarithmus der Konzentration aufgetragen wurde und die Konzentration zu töten fünfzig Prozent der Larven (LC 50) wurde aus der Kurve bestimmt [15].
Datenanalyse
Die mittlere Ergebnisse von Artemia Sterblichkeit gegen die Logarithmen der Konzentrationen wurden mit dem Bild P Computerprogramm (Biosoft Inc, USA) aufgetragen, die auch die Regressionsgleichungen gibt. Die Regressionsgleichungen wurden verwendet, LC zu berechnen 16, LC 50 und LC 84 Werte. Konfidenzintervall (95% CI) wurden dann berechnet, um die drei Ergebnisse unter Verwendung von [14, 15]. Ein LC 50-Wert von mehr als 100 &mgr; g /ml wurde als eine inaktive Verbindung oder Extrakt zu repräsentieren.
Test der akuten Toxizität
Akute Toxizität erfolgte nach OECD-Richtlinie 425 [16]. Sowohl männliche als auch Original-Albinomäuse weiblichen Theiller wurden verwendet. Die Mäuse wurden in einem klimatisierten Raum bei 20 ° C für 7 Tage vor dem Experiment akklimatisiert. Vor dem Dosieren mit Extrakten die Mäuse für 18-24 h mit Zugang zu einer angemessenen Trinkwasser ausgehungert wurden, in Käfige mit Drahtgitterböden coprophagy zu verhindern. Anfänglich eine Dosis von 1000 mg /kg Körpergewicht wurde an eine Gruppe von 6 Mäusen (3 männliche und 3 weibliche) verabreicht und Mäuse für 72 h auf Anzeichen von Toxizität sofortige und /oder Tod beobachtet. Wenn keine Toxizität eine andere Gruppe von drei männlichen und drei weiblichen Mäusen beobachtet wurde, wurde eine Dosis von 2000 mg /kg Körpergewicht und die gleichen Beobachtungen gegeben. Wenn keine Anzeichen von Toxizität oder Tod Dosen auftraten, wurden der Reihe nach auf 3000 erhöht, 4000 und 5000 mg /kg Körpergewicht, respectively. Extrakte wurden in 1% Tween 80 in normaler Kochsalzlösung solubilisiert und an einem Dosisvolumen von 5 ml /kg Körpergewicht oder zwei Dosen von 5 ml /kg Körpergewicht, je nach Löslichkeit, die innerhalb einer einstündigen Intervall verabreicht. Eine Kontrollgruppe wurde eine einzelne 5 ml oder 5 ml /kg Körpergewicht von 1% verabreicht Tween 80 zweimal mit der Dosis des verabreichten Pflanzenextrakt zu entsprechen.
Phytochemical Screening
die 80% Ethanol-Extrakt wurde auf das Vorhandensein getestet von Steroiden, Saponine, Flavonoide, Terpenoide, Herzglykoside, Alkaloide und Gerbstoffe Verwendung von Standardverfahren [17, 18].
Ethical Clearance
Diese Studie wurde ethische Genehmigung durch die Muhimbili University of Health and Allied Sciences Institutional Review Board gegeben
.
Ergebnisse Antiulkuswirksamkeit
Die 80% Ethanol-Extrakt von C. vitellinum
eine dosisabhängige Schutz gegen Ethanol /HCl-induzierten Magengeschwürbildung zeigte. Tabelle 1 zeigt, dass der Extrakt der Ratte Magen von Geschwüren um 55% geschützt in einer Dosis von 200 mg /kg Körpergewicht (p ≤ 0,001), und dies erhöhte sich auf 71,7 (p ≤ 0,001) und 88,3% (p ≤ 0,001) an 400 und 800 mg /kg Körpergewicht im Vergleich behandelten Ratten zu Lösungsmittel, respectively. Dies war der gleiche Prozentsatz Schutz als 40 mg /kg Körpergewicht der Protonenpumpenhemmer Pantoprazol. 1 zeigt, dass bei 800 mg /kg Körpergewicht der Magen erschien ähnlich derjenigen der Ratten mit 40 mg /kg Körpergewicht Pantoprazol vorbehandelt. Abbildung 2 zeigt die Dosis-Wirkungs-Beziehung für die Kontrolle, 400 und 800 mg /kg Körpergewicht der Anlage extractTable 1 Antiulkuswirksamkeit einer 80% igen Ethanolextrakt von Luftteilen von C. vitellinum
Gruppe Nr

Dosis des Extraktes (mg /kg Körpergewicht)
Ulkus-Index Mittelwert (n = 6)
% Alter Schutz
1

• Vielfalt in der Bakterium-Wirt-Interaktionen innerhalb der Spezies Helicobacter heilmannii sensu stricto
• Der Status des Magenspülung bei Neugeborenen mit Mekonium gefärbten Fruchtwasser geboren: eine randomisierte, kontrollierte trial