Gli scienziati NIH sviluppano un nuovo metodo di preparazione del campione per rilevare SARS-CoV-2

Scienziati del National Institutes of Health (NIH) hanno sviluppato un nuovo metodo di preparazione del campione per rilevare SARS-CoV-2, il virus che causa il COVID-19. Il metodo aggira l'estrazione del materiale genetico dell'RNA del virus, semplificando la purificazione del campione e riducendo potenzialmente i tempi e i costi del test. Il metodo è il risultato di una collaborazione tra ricercatori del National Eye Institute (NEI), il Centro Clinico NIH (CC), e l'Istituto nazionale di ricerca dentale e craniofacciale (NIDCR).

I test diagnostici rimangono uno strumento cruciale nella lotta contro la pandemia di COVID-19. I test standard per il rilevamento di SARS-CoV-2 comportano l'amplificazione dell'RNA virale a livelli rilevabili utilizzando una tecnica chiamata PCR di trascrizione inversa quantitativa (RT-qPCR). Ma prima, l'RNA deve essere estratto dal campione. I produttori di kit di estrazione dell'RNA hanno avuto difficoltà a tenere il passo con la domanda durante la pandemia di COVID-19, ostacolando la capacità di test in tutto il mondo. Con l'emergere di nuove varianti di virus, il bisogno di meglio, test più veloci è più grande che mai.

Un team guidato da Robert B. Hufnagel, M.D., dottorato di ricerca, capo della NEI Medical Genetics and Oftalmic Genomic Unit, e Bin Guan, dottorato di ricerca, un borsista presso il Laboratorio di Genomica Oftalmica del NEI, ha utilizzato un agente chelante prodotto dalla società di forniture di laboratorio Bio-Rad chiamato resina Chelex 100 per preservare l'RNA di SARS-CoV-2 in campioni per il rilevamento mediante RT-qPCR.

"Abbiamo utilizzato campioni nasofaringei e di saliva con varie concentrazioni di virioni per valutare se potevano essere utilizzati per il rilevamento diretto dell'RNA, " disse Guan, l'autore principale di un rapporto sulla tecnica, pubblicato questa settimana su iScience. "La risposta è stata sì, con una sensibilità decisamente elevata. Anche, questa preparazione ha inattivato il virus, rendendo più sicuro per il personale di laboratorio gestire i campioni positivi".

Il team di Hufnagel ha fatto la sua scoperta testando una varietà di sostanze chimiche utilizzando campioni sintetici e umani per identificare quelle che potrebbero preservare l'RNA in campioni con una degradazione minima, consentendo al contempo il rilevamento diretto del virus mediante RT-qPCR.

Per convalidare il test, Blake M. Warner del NIDCR, DDS, dottorato di ricerca, MPH, e il suo team hanno raccolto campioni di pazienti (sul protocollo di ricerca NIH IRB 20-D-0094) e li hanno conservati in entrambi i mezzi di trasporto virale, o il tampone di resina chelante di nuova concezione presso il NIH Symptomatic Testing Facility.

I campioni nei mezzi di trasporto virale sono stati testati dal team di test COVID-19 presso il Centro clinico del NIH, guidato da Karen M. Frank, M.D., dottorato di ricerca, utilizzando l'estrazione dell'RNA convenzionale e il test RT-qPCR. I campioni nel tampone di resina chelante sono stati riscaldati e l'RNA virale è stato, poi, testato mediante RT-qPCR. La nuova preparazione ha aumentato significativamente la resa di RNA disponibile per i test, rispetto al metodo standard.

Riteniamo che questa nuova metodologia abbia chiari vantaggi di aumentare la sensibilità, risparmio di tempo e denaro per i test. Il metodo stabilizza l'RNA a temperatura ambiente per facilitarne il trasporto, Conservazione, e la gestione in contesti clinici."

Robert B. Hufnagel, M.D., dottorato di ricerca, Capo dell'Unità di Genetica Medica e Oftalmica Genomica del NEI

NEI ha protetto la proprietà intellettuale di questa tecnologia e sta cercando partner per il co-sviluppo/licenza. Contatta [email protected] per ulteriori informazioni..

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