Létrehozása és azonosítását nyúlmodellben peritoneális carcinomatosis származó gyomorrák

Létrehozása és azonosítását nyúlmodellben peritoneális carcinomatosis származó gyomorrák katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa Gyomorrák peritoneális carcinomatosis gyakori klinikai probléma, de nincsenek megfelelő nagy állat modell, hogy tanulmányozza ezt a problémát. Ez a tanulmány volt létrehozni egy stabil nyúl hashártya carcinomatosis modellje gyomorrák segítségével VX2 tumor, és elemzi a klinikopatológiai jellemzői. Katalógusa módszerek katalógusa VX2 tumort ültettünk be 36 új-zélandi nyulak 3 módszer: laparotomic orthotopikus injekciót rákos sejtek a nyálkahártya alatti réteg a gyomor (a csoport), laparotomic beültetés tumorszövet a cseplesz azonnal alatt a gyomor antrum (B csoport), és perkután befecskendezése közvetlenül a tumoros sejteken a hasüregbe (C csoport), 12 nyulak mindegyik csoportban. Az állatokat szigorú megfigyelés alatt, és részletes klinikopatológiai vizsgálatokat végeztek. Katalógusa Eredmények katalógusa A siker aránya peritoneális carcinomatosis felhalmozás volt 100% (12/12), 91,7% (11/12) és 58,3% (7 /12), illetve az a, B és C (p = 0,019, a versus C; P = 0,077, B versus C, P = 0,500, a versus B, Fisher-féle egzakt teszt). Két héttel azután, hogy a nyálkahártya alatti rákos sejtek injekció csoportjában, fekélyes gyomorrák peritoneális carcinomatosis megmutatta tipikus VX2 tumor patológiai, széles körű hasüregbe áttétes gócok, véres ascites és áttekinthető tüdő áttétek. A klinikopatológiai progresszió mintázat nagyon hasonló volt a betegek előrehaladott gyomorrák peritoneális carcinomatosis. B és C csoport megmutatta hasonló mintát daganatos progresszió, de kevésbé agresszív. Katalógusa Következtetések katalógusa Első nagy állat modell peritoneális carcinomatosis származó gyomorrák hozta létre laparotomic orthotopikus injekcióval VX2 ráksejtek submucosalis réteg a gyomor , amely egy megfelelő modellt sebészeti beavatkozással tanulmányok. A klinikopatológiai jellemzői ennek a modellnek hasonlítanak az emberi peritoneális carcinomatosis.
Alapon
A lokoregionális progresszióját gasztrointesztinális és nőgyógyászati ​​rák gyakran eredményez peritoneális carcinomatosis (PC), amelyet az jellemez, a jelenléte a tumor gócok különböző mérete, száma és eloszlása ​​a peritoneális felszínen, nagyon rossz prognózisú és átlagos túlélést kevesebb, mint 6 hónap [1, 2]. A jelenlegi kezelések ilyen PC szisztémás kemoterápia, a legjobb támogatást ellátás és a palliatív kezelés, nincs remény a gyógymódot. Annak érdekében, hogy megoldják ezt a problémát, egy új kezelési mód az úgynevezett cytoreductiv műtét (CRS), valamint a hipertermikus hasüregbe kemoterápia (HIPEC) került kifejlesztésre az elmúlt két évtizedben, figyelembe előnye a műtét csökkenti látható tumorral és regionális hipertermiás kemoterápia felszámolására mikrometasztázi- [3-6]. katalógusa Bár a klinikai vizsgálatok tették fejlődik, néhány kísérleti állatot PC modellek is kialakultak, például egerekben modellek és patkány modellek hatékonyságának értékelése és káros hatásait kísérleti HIPEC jegyzőkönyvek [7-10]. Bár az ilyen kis állatmodellek hasznosak kísérleti vizsgálatok, ez technikailag nehéz végrehajtani műveleteket kis állatok, mert a kis testméret és finom hemodinamikai körülmények között. Nagy állatban, mint például sertés is használják, hogy teszteljék a farmakokinetikáját HIPEC, de a felhasznált állatok voltak egészséges sertés helyett sertés PC [11]. Ezért egy nagy állat PC modell több alkalmas sebészeti beavatkozással tanulmányok kívánatos. Itt beszámolunk egy nyúl PC modellt gyomorrák, a klinikopatológiai jellemzők utánozzák betegek előrehaladott gyomorrák. Katalógusa Módszerek katalógusa Állatok katalógusa Harminchat új-zélandi fehér nyúl, 18 férfi és 18 nő, a testsúly 2,5 ~ 3,0 kg, nyertünk Animal Biosafety Level 3 Laboratóriumában Animal Kísérleti Központ Wuhan Egyetem (Animal Study Certificate SCXK 2003-0004). Az állatokat külön-külön helyeztük el és szabadon hozzáfértek standard laboratóriumi táplálékot és vizet, valamint a 12 órás világos és sötét ciklusban naponta. Az állat vizsgálati protokollt jóváhagyta Állatjóléti Bizottságának Center.
Tumor törzs és a rákos sejtek előkészítése katalógusa Nyúl VX2 carcinoma megállapításához használtak gyomorrák PC ebben a vizsgálatban. A VX2 tumor egy transzplantálható nyúl laphámrák, azzal jellemezve, gyors tumor növekedését és a korai metasztázis, létre egy vírus-indukálta papilloma által Rous és munkatársai [12]. A tumor tartottuk az egymást követő in vivo
beültetésre hátsó lábát 2 hordozó nyulak használható minden áthaladás.
Amikor a VX2 tumor nőtt és körülbelül 1 cm átmérőjű a hordozó nyúl, az állatot érzéstelenítjük fül véna injekció 3% -os nátrium-pentobarbitállal (30 mg /kg). Bőrre készítmény és fertőtlenítés, a tumor kivágtuk a hordozó nyúl és elhelyezni jéghideg 0,9% -os nátrium-klorid-oldattal. A daganatos szövetet darált be körülbelül 1,0 ~ 2,0 mm 3-fragmentumok és szuszpendáljuk 2 ml normál sóoldatban, majd készült egy 2 ml-befecskendező. Egyéb tumor szövetekben körülbelül 3,0 ~ 5,0 mm 3 helyeztük a homogenizáló ágyazott jeges fürdőben, amelyhez 3 ml jéghideg fiziológiás sóoldatot adunk hozzá, és a tumorsejtek szuszpenziót készült, és a tumorsejtek koncentráció ját 5 × 10 10 ampulla sejt /l volt. katalógusa építése gyomorrák PC katalógusa minden nyúl volt éjszakai koplalás kísérlet előtt, de vizet tetszés szerinti mennyiségű katalógusa. Miután randomizálás az állatokat elaltattuk fül vénájába injekcióval 3% nátrium-pentobarbitállal (30 mg /kg). A hasi bőrt tisztítani és fertőtleníteni kell. Három megközelítést fogadtak építésére nyúl modellek PC, 12 állatot tartalmazó csoportba. A csoport a nyálkahártya alatti tumorinokulációtól: A középvonali metszést 3 cm hosszú tette kezdődő 2 cm-rel a xyphoid és a has felső nyitva volt. A gyomrot volt kitéve, 0,1 ml tumorsejtek (5 × 10 10 ampulla sejtek /l) injektáltunk a nyálkahártya alatti réteg a gyomor (1. ábra), a savós réteg és az izom réteg, az injekció beadásának helyén volt préselt 1 percig tartani az injektált tumorsejtek a helyén, és a hasat összezárjuk egy kétrétegű 3-O Vicryl megszakított varrattal. B csoport a tumorszövet beültetés: A metszés ugyanaz volt, mint az A. csoport Amikor a gyomor volt kitéve, egy kis darab friss tumorszövetben körülbelül 1,0 mm 3 implantáltunk a cseplesz azonnal alatt a gyomor antrum, és a sebet zártuk. C csoport perkután injekció tumorsejtek: Miután bőr előkészítése, 0,1 ml tumorsejtek (5 × 10 10 ampulla sejt /liter) közvetlenül injektáljuk a felső hasi üreg, és az injekció beadásának helyén volt nyomva 1 percig. Tumorinokulálás után, penicillin G dózisban 100.000 NE /d-t intramuszkulárisan injektáltunk mindegyik állat 3 napon át. Minden állat volt, hogy az intravénás folyadék rehidratáló 100 ml 0,9% -os normál sóoldatot. 1. ábra építése nyúl hashártya carcinomatosis modell gyomorrák. Amikor a nyúl gyomor volt téve altatásban, egy 16 G tűt vezettünk át a serosa és izom rétegek a nyálkahártya alatti réteg a gyomor, és 0,1 ml a tumorsejtek (5 × 1010 ampulla sejt /L) injektáltunk, és a befecskendezés helyén volt nyomva 1 percig tartani a tumorsejtek helyett (lásd a szöveget a részletes leírást). katalógusa Állat megfigyelés és patológiai vizsgálatok
Használat után napi megfigyelés történt minden nyúl, hogy ellenőrizze a táplálékfelvételt, tevékenységek, és bármilyen rendellenesség, mint a hasmenés és a kiszáradás. A testsúly mérése minden 3 nap és a természettudományi, a betegség progressziójának rögzítették. Annak érdekében, hogy egy részletes leírást a progresszív fejlődésének gyomorrák PC, az eutanázia végeztünk 3 nyulak csoportjában a végén hét 1, 2, 3 és 4, a túladagolás injekció 3% pentobarbitál-nátrium segítségével a fül vénán . Az állatok számára a B és C csoport, az eutanázia is végeztünk, amikor az állatok megmutatta nyilvánvaló jelei szorongás és a hulladék, összhangban UKCCCR iránymutatások az állatok jólétének kísérleti neoplasia [13]. Post mortem patológiai vizsgálatok szerepelnek kórbonctani például a tumor méretét és eloszlását; lokális tumor jellemzői gyomorrák beleértve fekély kialakulása, akadályok és a perforáció; sajátosságai peritoneális carcinomatosis mint véres ascites, diszkrét vagy összefolyó tumorcsomók a hashártya, a rákos elváltozások a cseplesz és a bél akadály; áttétek főbb szervek, mint a máj, mellékvese, a hasnyálmirigyben és a tüdőben. Minden feltételezett szervi szövetek mintát vettek a rutin hisztopatológiai vizsgálat festett metszeteken hematoxilin-eozin (HE).
Statisztikai analízis
A testtömeg és a tumor súlya fejeztük átlag ± standard deviáció (M ± SD). A hasüregi áttétek és véres ascites regisztráltuk tartományok és a középső. SPSS statisztikai programcsomag 10.0 verziója (SPSS Inc., Chicago IL, USA) használtunk elemzés kétoldalas próba, és a P < 0,05 értéket tekintettük szignifikánsnak. Katalógusa eredményei katalógusa sikere PC modell építési katalógusa 36 felhasznált állatok PC modell építés, a művelet sikeres volt 33 nyúl- és 3 állat elpusztult 3 nappal a műtét után. A 3 haláleset, 1 nyúl C csoportjában halt szórt hashártyagyulladás 3. napon, mert a bőrön injekciót tévedésből a vékonybélbe; és 1 nyúl mindkét A B és C meghalt a pangásos szívelégtelenség a 2. napon, mert a gyors folyadék rehidratáló. További 3 nyúl a C-csoport nem alakult ki a PC ismeretlen okból. A siker aránya 100% (12/12) az A csoportban 91,7% (11/12) a B csoport és 58,3% (12/07) C-csoport (P = 0,019, A versus C, P = 0,077, B versus C, P = 0,500, B-vel szemben, Fisher exact teszt). katalógusa daganatok növekedését és annak hatása az állatra katalógusa után a rákos sejtek befecskendezése a gyomor nyálkahártya alatti csoportjában, a tumor bizonyította felgyorsult növekedés. A tumorok méretét (0,028 ± 0,012) cm 3, (1.183 ± 0,148) cm 3 és (7,706 ± 1,629) cm 3, illetve a hét végén 1, 2, és 3 . Az állatok megmutatta progresszív testsúly-csökkenés, honnan (2,48 ± 0,21) kg, mielőtt művelet (2,45 ± 0,21) kg a héten 1, (2,24 ± 0,19) kg 2. héten (2,02 ± 0,18) kg 3. héten (1,81 ± 0,1) kg 4. hét együtt testsúlyváltozásokat, az etetés és az általános egészségi állapot az állatok romlott fokozatosan. katalógusa szaporodási jellemzői peritoneális carcinomatosis állatkísérletes modellen katalógusa tumorjellemzők csoportjában gondosan feljegyzett . Egy héttel azután, submucosa injekció a rákos sejtek, sok kis, kemény és átlátható csomók kezdett kialakulni a cseplesz és a antrum a gyomor. Nem ascites volt megfigyelhető. Két héttel később, csomók a cseplesz kezdett beleolvadnak összefolyó tömegek nélkül felismerhető a lehatárolás a gyomrot. A tömeg a gyomor fal nagyobbra nőtt, és kiálló a gyomorba üreg képez tipikus fekélyes rák (2. ábra). Volt körülbelül 5 ml véres ascites a hasüregben. Három héttel később, sok csomók kezdtek kialakulni a mesenteriumban és a retroperitoneum. Az összefolyó tömeg a cseplesz kezdett betörni a máj és a gyomor burkolják (3. ábra). Gyakran a gyomor tömegének és a cseplesz tömeg egybeolvadt nagy tumor blokk. Véres ascites elérheti akár 100 ml. Volt még néhány folyadékgyülem a szívburokban. Sok csomók voltak láthatók a hasfalon. Nem csomók volt megfigyelhető a tüdőben. Négy héttel később, számos tumor gócok volt megfigyelhető a tüdőben, a májban, a mellékvesék, a vékonybél, a keresztirányú vastagbél és a húgyhólyag. A hasfalat teljesen megszállták a tumor. Daganatok A B és C azt mutatta, hasonló növekedési jellemzőit. 2. ábra Rabbit gyomorrák csoport A. Két héttel azután, submucosalis beoltása VX2 tumorsejtek patológiai vizsgálat után az állatok eutanázia mutatja a tipikus fekélyes gyomorrák (nyíl) az új-zélandi nyúl.
3. ábra Nyúl PC modellje gyomor eredetű Group A. Három héttel azután, VX2 karcinóma sejteket injektáltunk a nyálkahártya alatti réteg a gyomor, a konfluens tumor tömege a cseplesz beburkolt gyomorfal (fekete nyíl) és a májban (sárga nyíl).
hisztopatológiai jellemzői VX2 nyúl PC
Minden vizsgált daganatminták megmutatta kiterjedt invazív növekedés és szövetelhalás. A tumorok, a nagyobb görbület a gyomor antrum, behatolt a nyálkahártya réteg alkotnak fekélyek. Mikroszkópos képe találtunk rák fészkek behatol az egész gyomor falán, tipikus invázió az izomba réteg és a gyomor mirigyek (4A). A tumor sejtek kerek, ovális vagy atipikus morfológiájú sok patológiás mitotikus figurák (4b ábra). Voltak feltűnő limfociták, plazma sejtek és más gyulladásos sejtek infiltráció. 4. ábra Kórszövettan nyúl modell gyomorrák PC-vel, 2 hét után VX2 karcinóma sejteket injektáltunk a nyálkahártya alatti réteg a gyomor A. csoport VX2 tumorsejtek megtámadta az egész gyomor fal (4a, × 100, HE), és megmutatta sok kóros mitotikus figurák (4B, × 200, HE). katalógusa legfontosabb jellemzői ennek a nyúl modell PC-re gyomorrák lehetne táblázat 1.Table 1 tumorjellemzők három különböző beoltás megközelítések katalógusa katalógusa A csoport Matton B csoport Matton C csoport Matton Műszaki jellemző katalógusa Laparotomic orthotopikus katalógusa tumorsejt injektálás a gyomor nyálkahártya alatti katalógusa Laparotomic orthotopikus katalógusa daganatos szövet beoltás alatt a gyomor antrum katalógusa Percutan tumorsejt befecskendezése a hashártya katalógusa siker mértéke katalógusa 100% (12/12) hotelben 91,7% (11/12) hotelben 58,3% (7/12) katalógusa fő patológiás események
Rapid tumorprogresszió okozhat légzési distressz szindróma, szétszórt hashártyagyulladás miatt perforációja gyomor tumor, bélelzáródás, veseelégtelenség katalógusa Rapid tumor progresszió ami bélelzáródást, veseelégtelenség katalógusa gyors tumor progresszióját eredményez bél tapadás akadályba, veseelégtelenség
kórbonctani katalógusa Colitis gyomorrák PC, ascites katalógusa Colitis gyomorrák PC, ascites
PC nélkül gyomorfekély, ascites katalógusa Kórszövettani katalógusa Átható rákos sejt fészkek betörő a környező struktúrák, a tumor nekrózis a központi zónában a daganat tömegének katalógusa Előnyök katalógusa legtöbb hasonlítanak klinikai gyomorrák PC
technikailag kevésbé nehéz katalógusa technikailag egyszerű katalógusa hátrányai katalógusa technikailag nehéz katalógusa Nem pontosan utánozzák gyomorrák PC katalógusa téves befecskendezése a belek katalógusa Vita katalógusa PC megjelenése komoly klinikai kihívás a kezelés a gasztrointesztinális és nőgyógyászati ​​rák. A gyomorrák, a PC egy gyakori esemény, 15% és 50% vagy több, a betegek, amelyek PC a sebészi feltárás, különösen akkor, ha a szerológiai bevonása a tumor által [14-16]. Még azután gyógyító resection gyomorrák, PC továbbra is komoly problémát posztoperatív megismétlődését. Egy koreai tanulmány 500 gyomorrákos betegeknél standardizált radikális gastrectomián és lymphadectomy, megállapította, hogy 5 éven belül közzé gastrectomián PC a leggyakoribb minta (51,7%) a rák kiújulásának [17]. Egy másik randomizált prospektív tanulmány Japánban is találtak peritoneális kiújulás a leggyakoribb esemény (15,8%) 3 év 530 kezelt beteg erősen standardizált gyógyító gastrectomián [18]. A leendő olasz tanulmány 200 beteg jutott, hogy az átlagos követési idő 42,3 hónap, PC elszámolt 32,9% a kiújulás [19]. Egy másik olasz tanulmány 441 gyomorrákos beteg mutatott 17% PC kiújulás a medián követési idő 48 hónap [20]. Ezért a szinkron és metakron PC a legfontosabb probléma a gyomorrák kiújulás és áttétek. Az ilyen gasztrikus PC rossz prognózissal társul az átlagos túlélés kezdve 1-1,6 hónap [21, 22], hogy 3,1-9 hónap [1, 15]. Amint helyesen megállapította, a kockázat a peritoneális kiújulásának gyomorrák különösen magas betegeknél diffúz kevert tumorok és beszivárgása a savóshártyát, amely ellen a műtét önmagában nem számít, mennyire radikális, kínálhat kevés lehetőség a gyógyulás. [20] Ezért új, átfogó kezelési stratégiákra van szükség. Katalógusa Klinikai vizsgálatok arra utalnak, hogy a CRS plusz HIPEC lehetett elérni jó hatékonyságot kiválasztott betegek PC. Tudomásunk van 4 intézményi tanulmányok CRS plusz HIPEC betegeknél gyomorrák, 2 retrospektív (42 és 26 beteg, ill) [3, 23], 1 leendő (49 beteg) [4] és 1 összehasonlító nem randomizált ( 34 beteg) tanulmányok [24]. A medián túlélés között mozgott 6,6 hónap [24], 8 hónap [23] 10-11 hónap [3, 4], és az 5 éves túlélés között mozgott 6% [3, 25] 16% [4]. Ezek a klinikai vizsgálatok alapulnak, nem homogén és nem-szabványosított betegcsoportok. Annak érdekében, hogy több objektíven értékelni az ilyen kezelés, szükséges tanulmányozni ezt a kezelési mód a kísérleti körülmények között.
Kis állatmodelljeiben PC hoztak létre, beleértve a csupasz egerek modellek és patkány modellek [26-29]. A legtöbb ilyen állati modellek, rákos sejteket injektáltunk közvetlenül a hashártya, ami azt eredményezi, széles körben elterjedt a PC kellő időben [25, 30-32]. Mindezek a kis állat modelleket csak alkalmas HIPEC egyedül, mert a kis test mérete és korlátozott vérellátása nem bírja nagyobb sebészeti beavatkozás. A létesítmény a nagy állat modell a pC gyomorrák szükséges kísérleti vizsgálatok tesztelés CRS és HIPEC.
VX2 karcinóma egy nyúl tumor epiteliális eredetű létre egy vírus-indukálta papilloma által Rous és munkatársai [12]. A gyors a tumor növekedését és a korai áttét, ez a tumor rendkívül rosszindulatú és lehet allogeneously átültetett szinte bárhol nyulak. Bár VX2 egy laphámrák modell, amely eltérhet adenokarcinóma, azt már használják számos kísérleti tanulmány fej-nyaki rák [33-36], tüdőrák [37], nyelőcsőrák [38, 39], mell rák [40], gyomorrák [41, 42], májrák [43, 44], a vastagbél rák [45, 46], veserák [47-49], hólyagrák [50], csont tumor [51] és az egyszerű peritoneális carcinomatosis [52]. Ebben a tanulmányban épített nyúlmodellben gyomorrák PC. Eredményeink igazolták, hogy a ortotopikus beoltás tumorsejtek a gyomorba a legmegfelelőbb módszer, ami a tipikus fekélyes gyomorrák és progresszív PC, az összes hasonló jellemzőket mutat a klinikai-patológiai progresszióját gyomor rákos betegeknél. Összehasonlításképpen, perkután befecskendezése a rákos sejtek a hasüregbe vezethet intestinalis sérülést véletlenül. Nem fekélyes gyomorrák lehetne indukált, és a daganatbeviteli ráta alacsony. Ezek az eredmények alátámasztják az elképzelést, hogy orthotopikus tumor modell előnyös a tanulmány a daganat biológiai viselkedését és beavatkozások [53]. A természettudományi ez a modell körülbelül 4 hét, beleértve a szubklinikai fázisban az első héten, a klinikai stádium a második héten, gyorsított PC szakaszában a harmadik héten, és végső stádiumban a negyedik héten. Tipikus PC funkciók hasnyálmirigyrák csomók különböző méretű az egész hasüregben, "cseplesz torta", bélelzáródás és véres ascites. A vége az első héten lehet tekinteni, mint a korai PC, míg a végén a második héten, mint a fejlett PC. Ezért speciális kezelési módszereket lehetne kialakítani, hogy célozhatja korai PC vagy fejlett PC. Katalógusa Következtetések katalógusa A nyúlmodellben gyomorrák PC állapították befecskendezésével VX2 ráksejtek submucosalis réteg a gyomor. A modell jellemzi a tipikus fekélyes gyomorrák progresszív PC, ami még inkább alkalmas a sebészeti beavatkozással felmérő tanulmányok CRS HIPEC ellen gyomor PC. Katalógusa megjegyzi katalógusa Lie-június Mei, Xiao-Jun Yang hozzájárult egyaránt ezt a munkát.
nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás katalógusa a kutatómunkát Alapítvány szerzője Nemzeti Kiváló doktori értekezés kínai (No FANEDD-200464); Tudományos Alap Creative Kutatóhelyek a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 20621502, 20921062). katalógusa A szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12885_2009_1923_MOESM1_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 12885_2009_1923_MOESM2_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 2. ábrán 12885_2009_1923_MOESM3_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 3. ábra 12885_2009_1923_MOESM4_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 4. ábra 12885_2009_1923_MOESM5_ESM.pdf A szerzők eredeti fájl 6. ábra versengő érdekek
A szerzők kijelentik, hogy nem ellentétes érdekek. katalógusa

• Dózisfüggő gátlását gyomor sérülés által hidrogén lúgos elektrolizált ivás water
• Vizsgálata lovak mirigyes gyomor léziók baktériumok, beleértve a Helicobacter spp fluoreszcens in situ hybridisation