Uspostavljanje i identifikacija modelu zeca na peritonealnoj karcinomatoza iz želuca cancer

osnivanje i utvrđivanje modelu zeca na peritonealnoj karcinomatoza od raka želuca
apstraktne pregled pozadine
rak želuca peritonejsku karcinomatoza je čest klinički problem, ali postoje nije prikladna veliki životinjski modeli za proučavanje ovog problema. Ova studija je da se uspostavi stabilna zec peritonealnoj karcinomatoza model karcinoma želuca pomoću VX2 tumor, i analizirati kliničko-patološka obilježja
metode
VX2 tumor implantiran u 36 novozelandskih kunića po 3 načina:. Laparotomic ortotropnih injekcija stanice raka u submukozne sloj želuca (skupina a), laparotomic implantacijom tumorskih tkiva u većoj omentuma neposredno ispod želučanog antruma (skupina B) i perkutane injekcije stanica tumora izravno u peritonealnu šupljinu (skupina C), 12 kunića u svakoj skupini. Životinje su pomno promatrali i bili su provedena detaljna kliničko-patoloških studija. Pregled Rezultati
stope uspješnosti peritonejsku formiranja karcinomatoza bili 100% (12/12), 91,7% (11/12) i 58,3% (7 /12), odnosno, za grupe a, B i C (p = 0,019, a nasuprot C, p = 0,077, B u odnosu na C, p = 0.500, a nasuprot B, Fisher-ov egzaktni test). Dva tjedna nakon stanice raka submukozna injekciju u grupi A, ulcerozni rak želuca s peritonejskom karcinomatoza pokazali tipičnu VX2 tumora patologije, s raširenim intraperitonealne metastatskih čvorova, krvavih ascitesom i jasna plućnih metastaza. Kliničko-patološki progresija uzorak je bio vrlo sličan pacijenata napredne rakom želuca s peritonealnoj karcinomatoza. Skupine B i C su pokazali sličan obrazac napredovanja raka, ali pregled manje agresivan. Zaključci
Prva velika životinja model peritonejsku karcinomatoza od raka želuca je osnovan od strane laparotomic ortotropnih ubrizgavanjem stanica raka VX2 u submukozne sloj želuca , pružajući više prikladan model za kirurške intervencijskih studija. U kliničko-patološka obilježja ovog modela sliče ljudskom peritonealnoj karcinomatoza.
Pozadina
loco-regionalna progresije gastrointestinalnih i ginekoloških karcinoma često rezultira u peritonealnoj karcinomatoza (PC), koja je karakterizirana prisutnošću tumorskih čvorića raznih veličina, broj i raspored na peritonealnoj površini, s vrlo lošom prognozom i medijan preživljavanja manje od 6 mjeseci [1, 2]. Trenutni tretmani za takvo računalo su sistemske kemoterapije, najbolju podršku njegu i palijativnu terapiju, bez nade u izlječenje. Kako bi se nosili ovaj problem, novi način liječenja naziva citoreduktivni operacije (CRS) plus Hipertermija intraperitonealnu kemoterapiju (HIPEC) razvijen je u posljednja dva desetljeća, uzimajući prednosti od operacije za smanjenje vidljive tumora teret i regionalna Hipertermija kemoterapiju u svrhu istrebljenja mikrometastaza [3-6]. pregled, dok su kliničke studije su napreduje, također su razvijeni neki eksperimentalni životinja PC modeli, uključujući miševe modelima i modelima štakora za procjenu učinkovitosti i negativne učinke eksperimentalnih HIPEC protokola [7-10]. Iako takve male animalni modeli su korisni u eksperimentalnim studijama, to je tehnički teško izvesti operacije na malim životinjama, jer je malo veličini tijela i delikatna hemodinamskih uvjetima. Velika životinja kao što su svinje je također bio korišten za testiranje farmakokinetiku HIPEC, ali životinje su korišteni zdravi svinje, a ne svinje s računalom [11]. Dakle, velika životinja PC Model pogodan za kirurške intervencijskih studija je poželjno. Ovdje smo izvješće o zec PC modela od raka želuca, uz kliničko-patološka obilježja ličiti na pacijentima s uznapredovalim rakom želuca.
Metode
životinjama
Trideset šest Novozelandski bijeli zečevi, 18 muškaraca i 18 žena, tjelesne težine između 2,5 ~ 3,0 kg, su dobiveni od životinja biološkoj sigurnosti Level 3 laboratorija na Animal Experimental Centra Sveučilišta Wuhan (Animal Study Certificate SCXK 2003-0004). Životinje su pojedinačno smješteni i slobodan pristup standardnom laboratorijskom hranom i vodom, kao i 12 sati svjetla i tame ciklusa dnevno. Protokol istraživanja Životinja je odobren od strane skrbi odbora Centra životinja.
Tumorske pritisak i priprema tumorskih stanica pregled Zec VX2 karcinom se koristi za uspostavljanje raka želuca s računalom u ovom istraživanju. Tumor VX2 je karcinom skvamoznih stanica transplatabilni zec, karakterizira brz rast tumora i metastaza rano, osnovana od papiloma virusom inducirane Rous i suradnici [12]. Tumor je održavan uzastopnim in vivo
transplantaciju u buta 2 nosioca kunića koji se koriste za svaki prolaz.
Kada je tumor VX2 narastao na oko 1 cm u promjeru na zeca nosača, životinja je anesteziraju uha vena injekcija 3% natrijeva pentobarbitala (30 mg /kg). Nakon pripreme kože i dezinfekcije, tumor je isječen iz zeca nosača i stavljena u ledenu hladnu 0,9% otopine natrijevog klorida. Tumorsko tkivo je mljevena u približno 1.0 ~ 2.0 mm 3 fragmenata i suspendira u 2 mL fiziološke otopine, a zatim uvučen u 2 ml injektor. Drugi tumorskim tkivima oko 3,0 ~ 5,0 mm 3 su smješteni u homogenizatoru ugrađen u ledenoj kupelji, u koju se doda 3 ml ledeno hladna fiziološke otopine i suspenzija tumorskih stanica, napravljen je s koncentracijom stanica tumora je podešen na 5 × 10 10 bočice stanica /L. pregled Izgradnja raka želuca s računalom pregled svih kunića imala preko noći posta prije eksperimenta, ali je dao vodu ad libitum pregled. Nakon randomizacije, životinje se anesteziraju vene uha injekcijom 3% natrijeva pentobarbitala (30 mg /kg). Trbušna Koža je očistiti i dezinficirati. Tri su načina usvojen izgraditi zec modele PC-u, 12 životinja za svaku grupu. Skupina A stanične inokulacije submukozna tumora: središnji rez od 3 cm duge su napravljene na početku 2 cm ispod xyphoid i gornjeg abdomena je bio otvoren. Želudac je bio izložen, 0.1 mL tumorskih stanica (5 x 10 10 bočice stanica /L) se injicira u submukozne sloj želuca (slika 1), preko seroznog sloja i mišićnom sloju, na mjestu injektiranja je bila pritisnutom 1 min da bi ubrizgava tumorskih stanica na mjestu, a trbuh je bio zatvoren sa dvoslojnim 3-O vicryl prekinut šav. Skupina B usađivanja tumorskih tkiva: Rez je bio isti kao u skupini A. Kada je želudac bio izložen, mali komad svježeg tumorskog tkiva oko 1,0 mm 3 je umetnut u većoj omentuma odmah ispod želučanog antruma i rana je zatvorena. Skupina C u perkutanom injekcijom tumorskih stanica: poslije pripreme kože 0.1 mL tumorskih stanica (5 x 10 10 bočice stanica /L) je direktno injektirana u gornju trbušnu šupljinu, a mjesto ubrizgavanja preša za 1 min. Nakon inokulacije tumora, penicilina G u dozi od 100.000 IU /d intramuskularno injektira svaku životinju 3 dana. Sve životinje su dati intravenski rehidraciju tekućine s 100 mL 0,9% normalne slane otopine. Slika 1 Izgradnja kunića peritonejsku karcinomatoza modela od raka želuca. Kad je želudac kunić je izložen pod općom anestezijom, 16 G igla kroz serozne i mišićnim slojevima u submukozne sloj želuca i 0.1 mL tumorskih stanica (5 x 1010 bočica stanica /L) su injicirani i ubrizgavanje stranica je pritisnut 1 min da tumorske stanice na mjestu (vidi tekst za detaljni opis). promatranje pregled životinja i patološke studije
Nakon operacije, svakodnevno opažanje na svakoj zeca provjeriti unos hrane, aktivnosti, i bilo abnormalnosti kao što su proljev i dehidracija. Tjelesna težina je mjerena svaka 3 dana, a prirodna povijest progresije bolesti zabilježen. Kako bi se dobio detaljan opis progresivnog razvoja raka želuca PC Eutanazija je provedena na 3 kunića u grupi A na kraju tjedna 1, 2, 3 i 4, do predoziranja injekcijom 3% natrijeva pentobarbitala preko ušne vene , Za životinje u skupinama B i C, eutanazija je također provedena kada je životinja pokazivala očite znakove stresa i otpada, u skladu s UKCCCR smjernice za dobrobit životinja u eksperimentalne neoplazije [13]. Post mortem patološki pregledi uključeni patologiju, kao što su veličina tumora i distribucije; Lokalne značajke tumora želuca raka, uključujući nastanak čira, opstrukcije i perforacija; posebnosti peritonejsku karcinomatoza poput krvavih ascitesom, diskretnih ili konfluentnih tumorskih čvorića na peritoneum, kancerogenih promjena u većoj omentuma i crijevnih prepreka; metastaze do glavnih organa, kao što su jetra, nadbubrežne žlijezde, pankreasa i pluća. Sve se sumnja organa tkiva su uzorkovani za rutinsko histopatoloških studija s dijelovima obojeni hematoksilinom i eozinom (HE mrlja). Pregled, Statistička analiza pregled tjelesne težine i tumorske mase su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (M ± SD). Intra-abdominalni metastaza i krvave ascites zabilježeni su kao rasponi i medijani. SPSS statistički softver paket verzija 10.0 (SPSS Inc., Chicago IL, USA) je korišten za analizu, a dvostrani test, i P < 0,05 smatrala se statistički značajna. | Rezultati
Uspjeh PC modela gradnje Netlogu od 36 životinja koje se koriste za PC modela izgradnje, operacija je bila uspješna u 33 kunića i 3 životinje je umrla 3 dana nakon operacije. Od 3 smrti, 1 kunića u skupini C umrlo od rasprostranjena peritonitis 3. dana jer injektiranja perkutanih pogreškom u tanko crijevo; i 1 zec svaki u grupama B i C umrlo od kongestivnog zatajenja srca na dan 2 zbog brzog rehidracije tekućine. Još 3 kunića u skupini C nije razvio računalo zbog nepoznatih razloga. Stope uspjeh bili su 100% (12/12) u skupini A, 91,7% (11/12), u skupini B i 58,3% (7/12) u skupini C (P = 0,019, A naspram C; P = 0,077, B u odnosu na C; p. = 0.500, a u odnosu na B, Fisherov egzaktni test) rasta pregled tumora i njen utjecaj na životinjskom Netlogu Nakon ubrizgavanja stanice raka u želudac submukozi u skupini a, tumor pokazao ubrzani rast. Veličine tumora bili su (0,028 ± 0,012) cm 3, (1,183 ± 0,148) cm 3 i (7,706 ± 1,629) cm 3, odnosno, na kraju tjedna 1, 2, i 3 . životinje su pokazali progresivno smanjenje tjelesne težine, iz (2,48 ± 0,21) kg prije operacija (2.45 ± 0.21) kg na tjedan 1, (2.24 ± 0.19) kg na tjednu 2, (2.02 ± 0.18) kg na 3. tjedna i (1,81 ± 0,1) kg na tjedan 4. uz promjene tjelesne težine, hranjenja i opće zdravstveno stanje životinja pogoršala progresivno.
karakteristike rasta peritonejsku karcinomatoza u životinjskom modelu pregled obilježja tumora u skupini a su pomno zabilježeni , Tjedan dana nakon submukoza injekcije stanica raka, mnoge male, tvrde i transparentne čvorići počeo razvijati na većoj omentuma i antruma želuca. Ne ascites je promatrao. Dva tjedna kasnije, čvorići na veće omentuma počeo spojiti u konfluentnih mase bez uočljivih razgraničenja s trbuha. Masa na želučanu stijenku rastao veći i virila u želucu šupljine u obliku tipične ulcerozni raka (Slika 2). Bilo je oko 5 mL krvave ascitesa u trbušnoj šupljini. Tri tjedna kasnije, mnogi čvorići počela formirati mezenterija i retroperitoneum. Masa sastojaka masa na većoj omentuma počeo upasti jetru i spakirati želudac (slika 3). Često želudac masa i veća omentuma mase spojene u jednu veliku tumora blok. Krvavi ascites mogla doseći čak 100 mL. Bilo je i nakupljanje tekućine u perikarda. Mnogi čvorići su vidjeli na trbušni zid. Nema čvorovi su primijećeni su u plućima. Četiri tjedna kasnije, brojni tumorske čvorovi su zabilježene u pluća, jetra, nadbubrežne žlijezde, tanko crijevo, poprečno debelo crijevo i mokraćni mjehur. Trbušni zid potpuno je provalila tumora. Tumori u skupinama B i C pokazali su slične karakteristike rasta. Slika 2 Rabbit rak želuca u skupini A. Dva tjedna nakon submukozne inokulacije tumorskih stanica VX2, patološka studija nakon životinjskog eutanazije pokazuje tipičnu ulcerozni raka želuca (strelica) u Novom Zelandu zeca.
Slika 3 Rabbit PC model želučane podrijetlom iz grupe A. Tri tjedna nakon stanice VX2 karcinoma su ubrizgane u submukozne sloj želuca, pritoka tumorske mase na većoj omentuma uvukla u želucu zid (crna strelica) i jetre (žuta strelica).
Patohistološke ih obilježja VX2 zeca PC
Svi ispitivani uzorci tumora su pokazali veliko invazivni rast i propadanje tkiva. Tumori, na većoj zakrivljenosti želučanog antruma, prodrli u sluznice sloj u obliku čireva. Mikroskopski pogled mogao naći raka gnijezda prodoran cijeli želudac zid, s tipičnim invazije u sloj mišića i želučanih žlijezda (slika 4a). Tumorske stanice su okrugli, ovalni ili atipični morfologiju s mnogim patološkim mitoze (slika 4b). Bilo je i osobiti limfociti, plazma stanice i na drugim upalnim stanicama infiltracije. Slika 4 Histopatologija modela zečjeg rakom želuca s računalom, 2 tjedna nakon stanicama karcinoma VX2 injektirano submukozne sloj želuca u grupe tumorskih stanica A. VX2 napao cijeli želučane stijenke (4A, 100 ×, HE bojom) i pokazuje mnogo patološke mitoze figure (4B, × 200, HE mrlja) pregled. Glavne značajke ovog kunića modelu računala od raka želuca mogu se sažeti u tablici 1.Table 1 Tumorski karakteristike tri različita inokulacije pristupi pregled pregled B
Grupa C
Tehničke značajke skupina A
Group
Laparotomic ortotropnih
tumorske stanice injekcija u želučanoj submukozi pregled Laparotomic inokulacija tkiva ortotropnih pregled tumor ispod želučanog antruma pregled Perkutana ubrizgavanja tumorskih stanica u peritoneum
uspjeh stopa
100% (12/12)
91,7% (11/12)
58,3% (7/12)
glavnih patoloških zbivanja pregled brzog napredovanja tumora ostvaruju sindroma respiratornog distresa, difuzno peritonitis zbog perforacije želučane tumora, intestinalne opstrukcije, zatajenje bubrega
brzog napredovanja tumora je rezultiralo crijevna opstrukcija, zatajenje bubrega pregled brzog napredovanja tumora je rezultiralo u crijevnoj prianjanja opstrukcije, zatajenje bubrega
patologiju pregled ulcerozni rakom želuca s računala, ascites
ulcerozni rakom želuca s računala, ascitesa pregled, PC, bez čira na želucu, ascites
histopatoloških pregled Prodor rast stanica karcinoma gnijezda napada okolne strukture, nekroze tumora u središnjem području tumorske mase pregled Prednosti pregled Većina nalikuju klinički rak želuca s računalom pregled, tehnički manje teško
tehnički lako
Nedostaci pregled tehnički teško pregled Nije točno oponašaju raka želuca s računalom pregled Pogrešna injekcija u crijevima
Rasprava
računala predstavlja ozbiljan klinički izazov za liječenje gastrointestinalnih i ginekoloških karcinoma. Kod karcinoma želuca, PC je čest događaj s 15% na 50% ili više pacijenata koji imaju računalo na kirurškom istraživanja, pogotovo kada postoji serozne angažman tumora [14-16]. Čak i nakon kurativne resekcije karcinoma želuca, PC ostaje glavni problem postoperativnog recidiva. Korejski istraživanje u 500 bolesnika s rakom želuca liječi standardiziranim radikalne gastrektomije i lymphadectomy, pokazalo je da u roku od 5 godina objavili gastrektomije, PC je najčešći uzorak (51,7%) od raka recidiva [17]. Još jedna randomizirana prospektivna studija u Japanu je također pokazalo peritonejsku povratak je najčešći događaj (15,8%) na 3 godine u 530 bolesnika liječenih visoko standardiziranim ljekovitom gastrektomije [18]. Prospektivno Talijanska studija na 200 bolesnika otkrio da je na prosječnog praćenja od 42,3 mjeseci, PC iznosio je 32,9% od recidiva [19]. Još jedan talijanski studija s 441 pacijenata oboljelih od raka želuca je pokazao 17% PC ponavljanje na medijana praćenja od 48 mjeseci [20]. Dakle, sinkroni i metachronous PC je najvažniji problem želučane recidiva raka i metastaza. Takav želuca PC je povezan s lošom prognozom sa srednjom preživljavanja u rasponu od 1-1.6 mjeseci [21, 22] na 3,1-9 mjeseci [1, 15]. Kao što je s pravom rekao, rizik od peritonejsku ponovne pojave raka želuca je osobito visoka u bolesnika s difuzno pomiješana tumora i infiltracijom seroze, protiv kojih kirurgija sama, bez obzira koliko je ostatak, mogu ponuditi malu mogućnost izlječenja [20]. Dakle, novi sveobuhvatni strategije liječenja su obavezna.
Kliničke studije ukazuju na to da CRS plus HIPEC mogla postići dobru učinkovitost u odabranih bolesnika s računalom. Prema našim saznanjima postoje 4 institucionalne studije o HRB-plus HIPEC u bolesnika s rakom želuca, 2 retrospektivnom (42 i 26 bolesnika, odnosno) [3, 23], 1 potencijalni (49 bolesnika) [4] i 1 komparativna nerandomizirani ( 34 bolesnika) studije [24]. Medijan preživljenja u rasponu od 6,6 mjeseci [24], 8 mjeseci [23] za 10-11 mjeseci [3, 4] i 5-godišnje preživljavanje kretala se u rasponu od 6% [3, 25] do 16% [4]. Ove kliničke studije se temelje na nehomogene i ne-standardiziranih skupinama bolesnika. Kako bi se objektivno ocijeniti takav tretman, potrebno je proučiti ovaj način liječenja u eksperimentalnim uvjetima.
Utvrđena mala životinjska modela računala, uključujući i golih miševa modela i modela štakora [26-29]. U većini tih životinjskih modela, stanice raka se ubrizgava izravno u peritoneum, što će rezultirati rasprostranjenog PC pravodobno [25, 30-32]. Svi ovi mali animalni modeli su prikladni samo za samo HIPEC jer je mala veličina tijela i ograničeni dotok krvi ne može podnijeti velike kirurške intervencije. Uspostava velikom životinjskom modelu računala od raka želuca je potrebno za eksperimentalne studije testiranja CRS i HIPEC. Pregled VX2 karcinoma je tumor zec epitelnog porijekla, osnovana od papiloma virusom inducirane Rous i suradnici [12]. Karakteriziran brzim rastom tumora i početkom metastaza, ovaj tumor vrlo je maligni i može se allogeneously transplantirati gotovo bilo gdje u kunića. Iako VX2 je model karcinom skvamoznih stanica, koja može biti različita od adenokarcinoma, ona je korištena u mnogim eksperimentalnim studijama na karcinomom glave i vrata [33-36], rak pluća [37], raka jednjaka [38, 39], dojke rak [40], rak želuca [41, 42], rak jetre [43, 44], raka debelog crijeva [45, 46], rak bubrega [47-49], karcinom mjehura [50], tumor kostiju [51] i jednostavno peritonejska karcinomatoza [52]. U ovom istraživanju smo konstruirani model zeca od raka želuca s računalom. Naši rezultati su pokazali da je ortotropnih inokulacije tumorskih stanica u želucu je najprikladnija metoda, što je rezultiralo u tipičnom ulcerozni raka želuca i progresivnog PC-u, sve ima sličan kliničko-patološka progresiji pacijenata s rakom želuca. Za usporedbu, perkutanom injekcijom tumorskih stanica u trbušnu šupljinu može dovesti do ozljeda crijeva greškom. Ne ulcerozni raka želuca može biti izazvana, a stopa tumora uzeti niska. Ovi rezultati podupiru ideju da ortotropnih tumorski model je poželjan za proučavanje tumora bioloških ponašanja i intervencije [53]. Prirodna povijest ovog modela je oko 4 tjedna, uključujući i supkliničkom fazi u prvom tjednu, klinički stadij u drugom tjednu, ubrzani PC fazi u trećem tjednu i terminalnoj fazi u četvrtom tjednu. Tipične karakteristike računala su peritonealne kvržica rak različitih veličina tijekom cijele trbušne šupljine, "omentuma kolača", crijevna opstrukcija i krvave ascitesom. Kraj prvog tjedna može se smatrati ranim PC, dok je krajem drugog tjedna kao napredan računalo. Dakle, specifični pristupi liječenju mogu biti dizajnirani da ciljaju rano računala ili napredni PC-a. Pregled Zaključci
zeca modelu karcinoma želuca s računalom je uspostavljena ubrizgavanjem stanica raka VX2 u submukozne sloj želuca. Model se odlikuje tipičnom ulceroznog raka želuca sa progresivnim PC-u, što je više prikladan za kirurške intervencijskih studija za procjenu CRS i HIPEC protiv želučane računalu. Pregled Bilješke pregled Lie-lip Mei, Xiao-lipanj Yang doprinijeli jednako na taj . rad pregled deklaracija
Zahvale pregled ovaj rad je podržan zaklada za Autor Nacionalnog Izvrsna doktorska disertacija Kine (br FANEDD-200464); znanosti Fond za kreativne istraživačkih grupa Nacionalne zaklade prirodoslovni Kine (br 20621502, 20921062). pregled autora na originalni podnio datoteke za slike
Ispod su linkovi na autora izvornika dostavljenih datoteka za slike. Izvorna datoteka za Slika 1 12885_2009_1923_MOESM2_ESM.jpeg autorskim 12885_2009_1923_MOESM1_ESM.jpeg autora izvorne datoteke za sliku 2 12885_2009_1923_MOESM3_ESM.jpeg autorskim izvorne datoteke na Slici 3 12885_2009_1923_MOESM4_ESM.jpeg autorskim izvorne datoteke za Slika 4 izvorne datoteke 12885_2009_1923_MOESM5_ESM.pdf pisaca za slici 6 suprotstavljenih interesa
autori izjavljuju da nemaju konkurentne interese. pregled

• O dozi ovisne inhibicije želučane ozljeda vodikom u alkalnom elektrolizirane vode za piće
• Ispitivanje konjski žljezdane želučanih lezija za bakterije, uključujući i Helicobacter spp strane fluorescentne in situ hibridizacije