PLoS ONE: Chitinase-mRNA-Spiegel durch quantitative PCR unter Verwendung der Standard-Einzel DNA: Saure Mammalian Chitinase ist ein wichtiger Transcript in der Maus Magen

Abstrakt

Chitinasen hydrolysieren die β-1-4 glykosidische Bindungen von Chitin, eine wichtige strukturelle Komponente von Pilzen, Krustentieren und Insekten. Obwohl Säugetiere, nicht Chitin oder seine Synthase produzieren drücken sie zwei aktive Chitinasen, Chitotriosidase (Chit1) und saure Säugetier Chitinase (AMCase). Diese Säugetier Chitinasen haben beträchtliche Aufmerksamkeit erregt wegen ihrer erhöhten Expression in Patienten mit einer Reihe von Krankheitszuständen, einschließlich der Gaucher-Krankheit, Alzheimer-Krankheit und Asthma. Jedoch bleibt der Beitrag dieser Enzyme an der Pathophysiologie dieser Krankheiten bestimmt werden. Die Quantifizierung der Chit1 und AMCase mRNA-Spiegel und der Vergleich dieser Ebenen mit den Ebenen der bekannten Referenz Gene können nützlich und biomedizinisch relevante Informationen erzeugen. Am Anfang haben wir eine quantitative PCR-System in Echtzeit, die durch Ligieren der cDNA-Fragmente der Zielgene erzeugten Standard-DNA verwendet. Dieses System ermöglicht es uns, die Expressionsniveaus der Chitinasen und die Referenzgene im gleichen Maßstab zu quantifizieren und zu vergleichen. Wir fanden, dass AMCase mRNA bei außerordentlich hohen Mengen in den Mäusemagen synthetisiert wird. Die Höhe dieser mRNA in der Maus Magen war 7- bis 10-fach höher als die Niveaus der Housekeeping-Gene und war vergleichbar mit, dass das Niveau der mRNA für Pepsinogen C (progastricsin), eine Hauptkomponente der Magenschleimhaut. Somit ist AMCase mRNA ein Haupttranskript in Maus Magen, dass AMCase Funktionen als Verdauungsenzym was darauf hindeutet, dass polymere Chitin bricht und als Teil der Wirtsabwehr gegen Chitin-haltige Pathogene in den Mageninhalt. Unsere Methodik ist für die Quantifizierung von mRNAs für mehrere Gene über mehrere Proben den gleichen Maßstab unter Verwendung

Citation. Ohno M, Tsuda K, Sakaguchi M, Sugahara Y, Oyama F (2012) Chitinase-mRNA-Spiegel durch Quantitative PCR unter Verwendung der Standard-Einzel DNA: Saure Mammalian Chitinase ist ein wichtiger Transcript in der Maus Magen. Ein PLoS 7 (11): e50381. doi: 10.1371 /journal.pone.0050381

Editor: Dominik Hartl, Universität Tübingen, Deutschland

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