Terapevtski učinek intratumorska injekcijami dendritične celice za lokalno ponovitvijo raka želodca: primer report

terapevtski učinek intratumorska injekcijah dendritične celice za lokalno ponovitvijo raka želodca: prikaz primera
Povzetek
80-letnega moškega z zgodovina raka želodca in pljučni emfizem doživel distalni želodca za rakom želodca v letu 1997. v letu 2010 je endoskopska preiskava pokazala depresivni tipa lezije na ustni strani anastomoze, ki je bil diagnosticiran kot pečat obroča adenokarcinom. Kirurško zdravljenje je zdelo, vendar je bila zavrnjena zaradi obstrukcije in omejevalnih dogodkov dihal. Kemoterapija je bila prekinjena zaradi neželenih učinkov. Endoskopija je bil uporabljen za upravljanje intratumorska injekcije dendritičnih celic (DCS), namenjenih sintetizirane peptide Wilms tumorja 1 (WT1) in mucin 1, površini celice povezano (MUC1). Imunohistokemični Analiza vzorcev tumorjev navedeno pozitivnost za WT1 in MUC1. Mesec dni po tem, ko je bilo sedem ciklov DC dajemo (od novembra 2010 do aprila 2011), nobenih sumljivih lezij očitna, in njegovi biopsije rezultati so bili normalni. Bolnik je bil v remisiji 30 mesecev. Intratumorska injekcije DCS pokazala terapevtske učinke pri tem bolniku, ki je ni bilo mogoče opraviti endoskopski Submukozno disekcijo ali kirurški poseg.
Ključne besede
dendritičnih celic WT1 MUC1 imunoterapija in periodično želodčni rak Ozadje
želodčni rak drugi najpogostejši vzrok smrti, povezanih z rakom na svetu [1]. Čeprav kirurgija je dokončna zdravljenje želodčnih raka, alternativne terapevtske načine vključujejo endoskopsko Submukozno disekcijo (ESD), kemoterapije in obsevanja.
Zadnjem času, so poročali, da je polovica vseh malignih bolezni se pojavijo pri bolnikih, starih več kot 70 let [2 ]. Kronična obstruktivna pljučna bolezen (KOPB), ki je označen z omejitvijo zračnega toka, je pogosta tudi pri starejših posameznikih [3]. V nekaterih primerih, standardna terapija malignostmi ni primeren zaradi prisotnosti KOPB. Sakai et al
. [4] je pokazala, da je KOPB neodvisen dejavnik tveganja za znotraj in pooperativnih pljučnih zapletov. Poleg tega Dimopoulou sod
. [5] so poročali, da so nekateri proti raku zdravila povzroči pljučno toksičnost. Na primer, so poročali paklitaksel, docetaksel in irinotekan, da povzroči nespecifično intersticijski pnevmonitis. V nekaterih primerih, minimalno lahko invazivno zdravljenje potrebno pri starejših bolnikih s KOPB.
Dendritičnih celic (DCS) so antigen predstavljajoče celice, ki so specializirane za začetek T-celične imunosti [6, 7]. imunoterapija temelji DC, ki je usmerjena sintetizirane peptidov je v zadnjem času uporabljajo za različne raka, vključno z rakom želodca [8-11]. Ustrezna izbira sintetiziranih peptidov je potrebna za povečanje terapevtskega učinka imunoterapijo temelji DC raka želodca. V letu 2009 je antigen raka prednostno projekt National Cancer Institute uvrščen Wilms tumor 1 (WT1) in mucin 1, mobilnega površino povezan (MUC1) kot najvišje in drugo najvišje prednostnih antigenov, oziroma [12]. Kot je določeno z imunohistokemični (IHC), je bilo ugotovljeno, da je od 42 do 53% se izrazi WT1 in MUC1 v želodcu raka [13] in 93% [14], v tem zaporedju.
Intratumorska upravo uporabo DC fagocitozo je potencialna ugodna možnost [15]. Uporabili smo esophagogastroduodenoscopy (EGD) za upravljanje intratumorska injekcije DCS impulznih z WT1 in MUC1.
Case predstavitev
po 80-letni moški z zgodovino raka želodca in pljučni emfizem doživel Billroth I distalni želodca za zgodnje želodčni rak v letu 1997. v letu 2005 in 2009, je bil iz za endoskopsko sluznice resekcijo lokalne želodčnega raka ponovitve (dobro diferenciranega cevasto adenokarcinom). V maju 2010 je doživel nadaljnje EGD, ki je pokazala na depresivni tipa lezije (10 x 18 mm velikosti) na telesu želodca v bližini anastomozo (O) (slika 1a). Histopatološko analizo biopsijo vzorcev pokazala pečat obroča adenokarcinom (slika 2a-a "). Računalniški tomografiji pokazale nobenih metastaz. Čeprav je skupno resekcija želodca ostanek je potencialno kurativno zdravljenje, ta operacija ni bila izvedena v zameno za bolnikove pljuč disfunkcije, ki je vključevala obstruktivna in restriktivne pljučne bolezni (vitalne kapacitete (VC): 2.12 L;% VC: 71,9%; prisiljeni izdiha obseg v 1,0 sekundah: 42,9%). Bolnik je imel zgodovino 50-letni kajenja. ESD je kontraindicirana, ker je bil rak nediferencirani tipa. Zato je zdravljenje z TS-1 (tegafur, gimeracil in oteracil kalij; Taihō Pharmaceutical Co, Ltd, Tokio, Japonska) se je začel avgusta 2010. Štiri tedne po TS-1 uprave, povezane z zdravljenjem, anoreksija (razred 2; pogosti terminologija merila za neželenih učinkov, opazili različica 4.0), in s tem je bila kemoterapija prekinjena na zahtevo pacienta. Slika 1 Esophagogastroduodenoscopy (EGD) slike. (A, b) pred cepljenjem tipa 0-IIC lezijo (10 x 18 mm po velikosti) na telesu želodca blizu anastomozni regiji (O) (a). Rak želodca nazadovala za prikriti lezija en mesec po zadnjem ciklu zdravljenja (b). Puščice kažejo lokacijo raka.
Slika 2 histološko analizo vzorca biopsije. Hematoksilin in eozin (H &E) obarvanja (aa ", ss") in imunohistokemično zaporednih odsekov tkiv za Wilms tumorja 1 (WT1) (bb ", gg") in mucin 1, celično površinsko povezan (MUC1) ( cc "hh"). (A-a ', f-f ") H & E obarvanje pred in po cepljenju. H & E obarvanje prikazuje pečat-obročnih celic v tkivu pred cepljenjem (a-a '). En mesec po zadnjem dajanju, patološko preiskavo razkrivajo normalne luminalno epitelijskih celic (f-f "). (B-b ", g-g") Obarvanje za WT1 pred in po cepljenju. Pozitiven vzorec za WT1 v približno 60% celic pred cepljenjem na mestu tumorja (b-b ") in izjemno zmanjšanje WT1 pozitivnosti potrjeno po cepljenju (g-g"). (C-c ", h-h") Obarvanje za MUC1 pred in po cepljenju. Približno 70% tumorskih celic so bili pozitivni za MUC1 pred cepljenjem (c-c "), in MUC1 obarvanje opazili pri normalnih žlez šele po cepljenju (f-f"). Imunohistokemijsko CD4 + in CD8 + T-celic v biopsijo vzorcih. Serijski deli tkiv, ki se uporabljajo za H & E barvanjem pripravljen in obarvamo za CD4 in CD8 (d, e, i, j). (D-d ", i-i") Obarvanje za CD4 prej (d-d ') in po cepljenju (i-i "). (E-e «j-j") Obarvanje za CD8 prej (e-e ") in po cepljenju (j-j"). CD4 + in CD8 + T-celice po cepljenju opazili pogosteje v normalnih želodčnih tkivih, kot je bilo opaziti v tumorskih tkivih pred cepljenjem. (Povečava: a-j 4 ×, A'-j "10 x, za" -j "20 ×).
Metode, ki so bili uporabljeni za pripravo DC so bili prej [16] opisano. DCS so ritmično z velikimi histokompatibilnega kompleksa (MHC) -I omejenih antigene peptidnih WT1, glede na bolnikovo človeških levkocitov antigen (HLA) -A vzorec (HLA-A 2402; CYTWNQMNL (mutant WT1 peptid, Neo-MPS, San Diego , California, ZDA) in MUC1 dolg peptid (30 mer na 20 mg /ml; TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAP- GSTAP; Greiner Japonskem Tokio, Japonska)). DCS bila značilna uporabe pretoka citometrijo, da se zagotovi, da so dosegli značilno fenotip zrelih DCS. Površinske molekule, ki so bili izraženi s DCS bili določeni. Fenotip CD14 - /nizko /HLA-DR + /HLA-ABC + /CD80 + /CD83 + /CD86 + /CD40 + /CCR7 + je štelo, da opredelijo zrelih DC,. DCS bile krioprezervirane do dneva uporabe. Suspenzijo DC je bila prilagojena s skupnim volumnom 1,0 ml z raztopino.
Šest mesecev po tem, ko je bila želodca ponovitev raka diagnosticirali so intratumorska injekcije DCS dajati po EGD od novembra 2010 do aprila 2011. Ta obravnava je bil sprejet z institucionalni pregled odbor Isoukai (številka odobritve: 26-1) in je bila opravljena v skladu s Helsinško deklaracijo
Cepljenja so ponovili sedemkrat na dva do osem-tedenskih presledkih (približno 2,99 × 10 7 celic /. injekcija, prve štiri cepljenja v dvotedenskih intervalih in zadnje tri cepljenja v štiri- do osem-tedenskih intervalih). Igla je bila uporabljena (premer 25 G, dolžina 4 mm) za upravljanje DC, na štirih Submukozno plasti mestih okoli tumorja. Kasneje smo dajali OK432 (1-3KE) raztopimo v 0,5 ml fiziološke raztopine na dveh lokacijah v Submukozno plasti okoli tumorja. terapija DC je dobro prenašajo in le z zdravljenjem povezani neželeni dogodek je bila kuga, s telesno temperaturo nad 38 ° C za dva dni po zadnjem cepljenju. En mesec po končnem uprave, je bilo ugotovljeno, rak želodca, da so popolnoma nazadovala (slika 1b). Histopatološko preiskavo vzorcev z biopsijo niso pokazali pečat obroči celice (Slika 2F-f "). V 30 mesecih po imunoterapijo DC, ki temelji, niso opazili patološka ponovitve. Laboratorijski podatki kažejo zmanjšanje karcinoembrionski antigenov in ogljikovih hidratov antigen 19-9 ravni po zdravljenju DC, ki se je zmanjšal z 8,2 na 6,8 ng /ml (normalni razpon: < 5,0 ng /ml) in od 33,2 do 24,7 U /ml (normale: . < 37,0 U /ml), oziroma
IHC za WT1 (monoklonskih 6 F-H2, Dako Cytomation, CARPINTERIA, Kalifornija, Združene države Amerike) [13] in MUC1 (Becton Dickinson Labware; Franklin Lakes, New Jersey, United navaja) smo izvedli kot je opisano predhodno [17], z nekaj spremembami. Rezultati IHC so bili pozitivni za WT1 v približno 60% pečatni prstan celic pred cepljenjem (slika 2b-b "); Vendar pa je število celic obarvanja pozitivna izredno zniža po cepljenju (Slika 2g-g "). Približno 70% celic so bili pozitivni za MUC1 pred cepljenjem (slika 2c-c "). Po cepljenju je bilo preoblikovanje potrjena na mestu malignih celic, in MUC1 pozitivnost opazili le v normalnih žlez (Slika 2h-h ").
Ni povečanje deležev CD4 + in CD8 + T celice so bile ugotovljene v periferni krvi, ki temelji na ocenah, izvedenih pred in po cepljenju (CD4 + T-celic: 43,9-42,5%; CD8 + T-celic: 29,3-25,5%). Po drugi strani pa CD4 + in CD8 + bile celice T pogosteje v normalnem želodčnega tkiva po cepljenju opazili (slika 2R-i "jj"), kot so bili opazili v tumorskih tkivih, preden cepljenje (slika 2d-d "ee").
frekvenco citotoksičnih T limfocitov WT1 specifičnega (CTL) povečal od 0,03 do 0,08%. Uporabljena metoda je bila opisana v prejšnjem poročilu [16]. Na 31 mesecev po zadnjem cepljenju ravni WT1 specifični CTL ostala visoka (0,10%) (slika 3a-c). Slika 3 Analiza Wilms tumorja 1 (WT1) limfociti -specifične citotoksični T (CTLs). (A) pred cepljenjem. (B) Po cepljenju. (C) Po 31 mesecih po zadnjem cepljenju. WT1 specifični CTL ravni pred cepljenjem povečal z 0,03 (a) 0,08% na zadnjem cepljenju (b). V 31 mesecih po zadnjem cepljenju, WT1 specifični ravni CTL povečala na 0,10% (c).
Razprava
V tem primeru, restriktivna pljučna bolezen pripeljala primarni onkologa, da se odločijo za kemoterapijo namesto operacijo. Vendar pa je pacient razvil nevzdržno povezanega s kemoterapijo anoreksijo, ki je zahtevalo prekinitev zdravljenja. Ker so nekaj prejšnje študije so pokazali, da je mogoče DC imunoterapija varno dajati bolnikom z rakom kot minimalno invazivno zdravljenje [8, 9, 18], smo se odločili za to zdravljenje za pacienta. Neposredno vbrizgavanje DCS v tumorjev so raziskovali v kliničnih študijah, vključno s tistimi o hepatomom [19], raka trebušne slinavke [20], in rakom želodca [21]. Wen et al
. [22] v primerjavi terapevtskega imuniteto ki ga je dosegla več načinov DC injektiranja, vključno intratumorska, intranodal, intravenozno, in podkožne injekcije pri miših. Stopnje preživetja so dramatično povečali za cepljenje preko intratumorska injekcijo, v primerjavi z injekcijami, izvedenih z uporabo drugih načinov izvajanja. Pellegatta et al
. [23] poročali, da so v primerjavi z drugimi metodami dostavni lahko intratumorska injekcija DCS poveča učinkovitost protitumorsko s spreminjanjem intratumorska okolja in povečanje T-celično posredovanih imunskih odzivov. V tem primeru so bile po DC imunoterapijo opazili povišane ravni CTL WT1 specifičnega, kar kaže, da so DC predstavili WT1 na naivnih CD8 + T-celic v natančno. Predlagamo, da bi se rak želodca dober znak za neposredno vbrizgavanje DCS in da je primerno mesto za injiciranje je mogoče izbrati s pomočjo žive slike s EGD.
Nezrelih DC, so bili uporabljeni za neposredne injekcije v prejšnjih študijah, saj ima njihova fagocitne sposobnost štelo, da je boljši od tistega zrelih so DC [24]. Vendar so nezrele DC pokazalo, da inducira toleranco in inhibicijo antigen specifičen za efektorsko funkcijo celic T [25, 26]. Drutman in Trombetta [27] je pokazala, da je zrel DC ohranila močan sposobnost za zajemanje topne antigene. Poleg tega so antigeni mature so DC ponotranjene uspešno predstavila na MHC razreda celic II in navzkrižno predstavljeni na MHC celic razreda I. De Vries et al
. [28] je pokazala, da je zrel DC učinkovito selijo na območja T-celic poseljenih bezgavk bolnikov z melanomom. Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da bi bilo smiselno uporabiti zrele DC, za neposredne injekcije v tumorjih.
Rezultate IHC za WT1 in MUC1 navedeno pomembne spremembe po cepljenju. Mucin je visoka teža glikoprotein molekulsko, ki ima pomembno vlogo pri zaščiti trakta epitelij gastrointestinalnega in je običajno prisotna v izobilju na luminalne površini različnih sekretornih epitelnih celic. Jedro peptide v tandem ponavljanja domeni maskirane v normalnih celic in izpostavljena rakom MUCINS celicami povezano. CTL za MUC1 rakavih celic le napad z izpostavljenimi tandem ponovnih področjih [29]. V tem primeru so bili MUC1-pozitivne celice prisoten na površini pečat obroča adenokarcinom pred cepljenjem (slika 2c-c "); Vendar pa so bili MUC1-pozitivne celice potrjena le na običajnih luminalno epitelnih celic po DC imunoterapije, kot smo pričakovali (Slika 2h-h ").
sklepe
Kolikor nam je znano, je to prvo poročilo o terapevtske učinke so DC, da je cilj sintetizirane peptidov pri bolniku z rakom želodca, ki niso mogli opraviti ITR ali kurativno operacijo.
soglasje
smo zagotovili natančne razlage o terapije za bolnika in njegove družine. Oni so dali pisno soglasja za objavo tega poročila prakse in vseh priloženih slik. Kopijo pisnega soglasja je na voljo za pregled s strani Editor-in-Chief te revije. Informacije
avtorjev
MK je direktor Seren kliniki. MN je pomočnik osebje na kirurgijo Oddelek prebavil, Kanagawa Cancer Center, direktor Seren kliniki, in profesor na oddelku za imunologijo, St Marianna University School of Medicine. TS, AC, in je bilo zaposlenih pomočnikov v Seren kliniki. MO, SS, YY, YS in NS so tudi profesorji na vsaki univerzi
Kratice
KOPB.
Kronična obstruktivna pljučna bolezen
CTL: limfociti
citotoksičnih T
DC:
dendritičnih celic
EGD:
Esophagogastroduodenoscopy

HLA:
antigen humani levkocitov
IHC:
Imunohistokemija
MUC1:
mucin 1 , na površino celic, povezane
WT1:
Wilms tumorja 1.
deklaracij
Potrditve
Zavedamo se bolnika, ki se strinjali, da sodelujejo v tej študiji in njegovih primarnih onkologi. Ta študija je prejela nobene finančne podpore.
Avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev prvotna predloženih spisov za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12957_2014_1883_MOESM2_ESM.tif avtorjev 12957_2014_1883_MOESM1_ESM.tif avtorjev prvotne datoteke za izvirno datoteko Slika 2 12957_2014_1883_MOESM3_ESM.tif avtorjev za slika 3. Konkurenca interesov
Avtorji nimajo finančnih ali osebnih odnosov z ljudmi ali organizacij, ki bi neprimerno vpliv to delo. prispevki
avtorjev
MK in MN, zasnoval in izdelane študije in zbrani, sestavljeni, analizirajo in razlagajo podatke. TS, AC, An, MO, SS, YY, YS in NS razlaga podatkov. MK in MN napisal rokopis in odobril končno rokopis. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Primerjava med boljše in slabo diferenciranega lokalno napredovalega raka želodca v predoperativno kemoterapijo: retrospektiva, primerjalna študija na enem terciarni zavod za nego
• Korelacija med povečevalno ozek pas slikanje in histopatologije želodčnega štrlečih /ali polypoid poškodb: a poskusno pilot izvedljivosti