O efeito terapêutico das injeções intratumorais de células dendríticas para câncer gástrico localmente recorrente: relato de caso

O efeito terapêutico das injeções intratumorais de células dendríticas para o câncer gástrico localmente recorrente: relato de caso da arte abstracta
Um homem de 80 anos de idade, com uma história de câncer gástrico e enfisema pulmonar foi submetido a uma gastrectomia distal para câncer gástrico em 1997. em 2010, um exame endoscópico revelou uma lesão do tipo deprimido no lado bucal da anastomose, que foi diagnosticado como adenocarcinoma anel de sinete. O tratamento cirúrgico foi considerado, mas foi rejeitado por causa de eventos respiratórios obstrutivos e restritivos. A quimioterapia foi terminada devido a eventos adversos. A endoscopia foi utilizado para administrar injecções intratumorais de células dendríticas (DC) de segmentação péptidos sintetizados de tumor de Wilms 1 (WT1) e mucina 1, da superfície celular associado (MUC1). Uma análise imuno-histoquímica das amostras de tumor indicaram positividade para WT1 e MUC1. Um mês depois de sete ciclos de DC tinha sido administrada (entre novembro de 2010 e abril de 2011), não há lesões suspeitas eram evidentes, e os seus resultados da biópsia eram normais. O paciente está em remissão por 30 meses. injecções intratumorais de DCs mostrou efeitos terapêuticos neste paciente, que não poderia passar por dissecção submucosa endoscópica ou cirurgia.
Palavras-chave
células dendríticas WT1 MUC1 imunoterapia e recorrente fundo câncer gástrico
cancros gástricos são a segunda causa mais comum de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo [1]. Embora a cirurgia é o tratamento definitivo para cancros gástricos, modalidades terapêuticas alternativas incluem a dissecção endoscópica submucosa (ESD), quimioterapia e terapia de radiação.
Recentemente, foi relatado que metade de todos os tumores malignos ocorrem em pacientes com idade superior a 70 anos [2 ]. doença pulmonar obstrutiva crónica (DPOC), que é caracterizada pela limitação do fluxo de ar, também é comum em indivíduos idosos [3]. Em alguns casos, a terapia padrão para doenças malignas não é adequado devido à presença de DPOC. Sakai et al
. [4] mostraram que a DPOC foi um fator de risco independente para eventos pulmonares intra- e pós-operatórias. Além disso, Dimopoulou
et ai. [5] relatou que algumas drogas anti-câncer induzir toxicidade pulmonar. Por exemplo, o paclitaxel, o docetaxel, o irinotecan e têm sido relatados para causar pneumonia intersticial não-específica. Em alguns casos, a terapia minimamente invasiva pode ser necessário para pacientes idosos com DPOC.
As células dendríticas (CDs) são células apresentadoras de antigénio que são especializados para a iniciação da imunidade de células T [6, 7]. imunoterapia baseada em DC que tem como alvo os péptidos sintetizados foi recentemente utilizado para várias doenças malignas, incluindo cancro gástrico [8-11]. A selecção adequada de péptidos sintetizados é necessário para aumentar o efeito terapêutico da imunoterapia baseada em DC para o cancro gástrico. Em 2009, o projeto priorização antígeno do câncer do Instituto Nacional do Câncer classificou Wilms tumor 1 (WT1) e mucina 1, da superfície celular associado (MUC1) como os antígenos mais altos e segunda maior prioridade, respectivamente [12]. Tal como determinado por imuno-histoquimica (IHC), foram encontradas as expressões de WT1 e MUC-1 em cancros gástricos ser 42-53% [13] e 93% [14], respectivamente.
Administração intratumoral utilizando DC fagocitose é um potencial opção favorável [15]. Usamos esofagogastroduodenoscopia (EGD) para administrar injeções intratumorais de DCs pulsadas com WT1 e MUC1. Apresentação
caso
Um homem de 80 anos de idade, com uma história de câncer gástrico e enfisema pulmonar foi submetido a uma gastrectomia distal Billroth I para o início câncer gástrico em 1997. em 2005 e 2009, ele foi encaminhado para uma ressecção endoscópica da mucosa de recorrência do câncer gástrico (adenocarcinoma tubular bem diferenciado) local. Em maio de 2010, ele foi submetido a uma EGD de acompanhamento que revelou uma lesão do tipo deprimido (10 × 18 mm de tamanho) no corpo do estômago perto da anastomose (O) (Figura 1a). A análise histopatológica das amostras de biópsia revelou adenocarcinoma anel de sinete (Figura 2a-a "). A tomografia computadorizada revelou nenhuma metástase. Embora ressecção total do remanescente gástrico é uma terapia potencialmente curativa, esta cirurgia não foi realizada tendo em consideração a disfunção pulmonar do paciente, que incluiu obstrutiva e doença pulmonar restritiva (capacidade vital (VC): 2,12 L;% CV: 71,9%; forçado volume expiratório em 1,0 segundos: 42,9%). O paciente teve uma história de tabagismo de 50 anos. ESD foi contra-indicada, pois o câncer era de um tipo indiferenciado. Portanto, o tratamento com TS-1 (tegafur, gimeracilo, e oteracilo potsico; Taiho Pharmaceutical Co., Ltd., Tóquio, Japão) foi iniciado em Agosto de 2010. Quatro semanas após a administração de TS-1, anorexia relacionada com o tratamento (grau 2; terminologia comum critérios de eventos adversos, foi observada versão 4.0) e, portanto, a quimioterapia foi descontinuado a pedido do paciente. Figura 1 esofagogastroduodenoscopia (EGD) imagens. (A, b) Tipo 0-IIc lesão (10 × 18 mm de tamanho) sobre o corpo do estômago, perto da região da anastomose (S) antes da vacinação (a). O cancro gástrico regrediu para uma lesão obscura um mês após o ciclo final de tratamento (b). As setas indicam a localização do cancro.
Figura 2 A análise histológica da amostra de biópsia. Hematoxilina e eosina (H & E) coloração (aa ", ff") e imuno-histoquímica de secções em série de tecidos de tumor de Wilms 1 (WT1) (bb ", gg") e mucina 1, da superfície celular associado (MUC1) ( cc ", hh"). (A-A ", f-F") H & E coloração antes e após a vacinação. H & coloração de E mostrando células em anel de sinete no tecido antes da vacinação (A-A "). Um mês após a administração final, o exame patológico revelando células epiteliais luminais normais (f-f "). (B-b ", G-G") A coloração para WT1 antes e após a vacinação. As amostras positivas para WT1 em aproximadamente 60% das células antes da vacinação no local do tumor (b-b ") e a redução notável em WT1 positividade confirmada após a vacinação (G-G"). (C-C ", h-h") A coloração para MUC1 antes e após a vacinação. Aproximadamente 70% das células tumorais foram positivas para MUC-1 antes da vacinação (C-C ") e coloração MUC1 foi observada em glândulas normais somente após a vacinação (f-f"). a coloração imuno-histoquímica de células T CD4 + e células T CD8 + nas amostras de biópsia. Secções em série dos tecidos usados ​​para a H & E coloração preparadas e coradas para CD4 e CD8 (d, e, i, j). (D-d ", i-i") A coloração para CD4 antes (d-d ") e após a vacinação (i-i"). (E-E ", J-J") A coloração para CD8 antes (E-E ") e após a vacinação (J-J"). CD4 + e células T CD8 + observados mais frequentemente em tecidos gástricos normais após a vacinação do que havia sido observado em tecidos tumorais antes da vacinação. (Ampliação: A-J 4 ×, a'-J '10 ×, um "-j" 20 ×).
Os métodos que foram utilizados para a preparação DC foram descritos anteriormente [16]. As DC foram pulsadas com o complexo principal de histocompatibilidade (MHC) -I-restrito antigénios de péptido de WT1, de acordo com antigénio de leucócitos humanos do paciente (HLA) -A-A HLA padrão (2,402; CYTWNQMNL péptido (mutante de WT1, neo-MPS, San Diego , Califórnia, Estados Unidos da América) e MUC1 péptido longo (30 mer a 20 mg /mL; TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAP- GSTAP; Greiner Japão, Tokyo, Japão)). As DC foram caracterizados por citometria de fluxo para garantir que conseguido o fenótipo típico de DCs maduras. Foram determinadas as moléculas de superfície que foram expressas pelos DCs. O fenótipo CD14 - /baixo /HLA-DR + /HLA-ABC + /CD80 + /CD83 + /CD86 + /CD40 + /CCR7 + foi considerado para definir DCs maduras. As DCs foram criopreservadas até o dia de administração. A suspensão CC foi ajustada para um volume total de 1,0 ml com solução salina.
Seis meses após a recorrência de cancro gástrico tinha sido diagnosticada, injecções intratumorais de DCs foram administrados usando EGD entre Novembro de 2010 e Abril de 2011. Este tratamento foi aprovado pela Institutional Review Board of Isoukai (número de aprovação: 26-1) e foi conduzido de acordo com a Declaração de Helsinki
vacinações foram repetidas sete vezes em dois a intervalos de oito semanas (cerca de 2,99 × 10 7 células /. injecção; as quatro primeiras vacinações em intervalos de duas semanas e as últimas três vacinações em quatro a intervalos de oito semanas). Uma agulha foi usada (diâmetro de 25 L, comprimento de 4 mm) para administrar DCs em quatro locais camada submucosa em torno do tumor. Posteriormente, administrou OK432 (1-3KE) dissolvido em 0,5 ml de solução salina em dois locais na camada submucosa em torno do tumor. DC terapia foi bem tolerada e o único evento adverso relacionado com o tratamento foi a febre, com uma temperatura corporal superior a 38 ° C durante dois dias após a quarta vacinação. Um mês após a administração final, o cancro gástrico foi encontrado para regrediram completamente (Figura 1b). Um exame histopatológico das amostras de biópsia não revelou células em anel de sinete (Figura 2f-f "). Durante os 30 meses seguintes imunoterapia baseada em DC, não houve recorrência patológica tem sido observado. Os dados laboratoriais indicaram reduções de antigénio antigénio de hidrato de carbono e níveis carcinoembrionário 19-9 após terapia DC, que diminuiu 8,2-6,8 ng /ml (intervalo normal: < 5,0 ng /mL) e 33,2-24,7 U /ml (intervalo normal: <. 37,0 U /mL), respectivamente
IHC para WT1 (monoclonal 6 F-H2, Dako Cytomation, Carpinteria, Califórnia, Estados Unidos) [13] e MUC1 (Becton Dickinson médico laboratorial; Franklin Lakes, New Jersey, Estados Unidos da América) foi realizada como previamente descrito [17], com algumas modificações. IHC resultados foram positivos para WT1, em aproximadamente 60% das células em anel de sinete antes de vacinação (Figura 2b-b "); No entanto, o número de células que coram positivo foi notavelmente reduzidos após a vacinação (Figura 2G-G "). Aproximadamente 70% das células foram positivas para MUC-1, antes de vacinação (Figura 2C-C "). Após a vacinação, remodelação foi confirmado no local de células malignas, e MUC1 positividade foi observada apenas nas glândulas normais (Figura 2 h-h ").
Nenhum aumento nas proporções de CD4 + e CD8 + células-T foram observadas no sangue periférico, com base em avaliações realizadas antes e após a vacinação (CD4 + células-T: 43,9-42,5%; CD8 + células-T: 29,3 a 25,5%). Por outro lado, CD4 + e CD8 + células-T foram observados com maior frequência no tecido gástrico normal após a vacinação (Figura 2-I-i ", jj") do que havia sido observado nos tecidos tumorais antes vacinação (Figura 2D-d ", EE").
A frequência de linfócitos T citotóxicos específicos para WT1 (CTLs) aumentaram 0,03-0,08%. O método usado foi descrito no nosso relatório anterior [16]. Aos 31 meses após a vacinação final, os níveis de CTL específicos de WT1 permaneceu elevada (0,10%) (Figura 3a-c). A Figura 3 um tumor (WT1) Análise de Wilms linfócitos T citotóxicos (CTLs) espec�icos. (A) Antes da vacinação. (B) Após a vacinação. (C) em 31 meses após a vacinação final. níveis de CTL específicos de WT1 antes da vacinação aumentou de 0,03 (a) 0,08% a vacinação final (b). Aos 31 meses após a vacinação final, os níveis de CTL específicos para WT1 aumentada para 0,10% (C).

Discussão Neste caso, doença pulmonar restritiva levou o oncologista primária optar por quimioterapia, em vez de cirurgia. No entanto, o paciente desenvolveu anorexia associada a quimioterapia intolerável, que exigiu a interrupção do tratamento. Desde alguns estudos anteriores indicaram que a DC imunoterapia pode ser administrada com segurança a pacientes com câncer como um tratamento minimamente invasiva [8, 9, 18], optamos por esta terapia para o nosso paciente. A injecção directa de DCs em tumores tem sido investigada em estudos clínicos, incluindo aqueles em hepatoma [19], o cancro pancreático [20], e cancro gástrico [21]. Wen et al
. [22] em relação a imunidade terapêutico conseguido por vários meios de injecção de DC, incluindo intratumoral, intranodal, intravenosa e as injecções subcutâneas em ratinhos. As taxas de sobrevivência foram dramaticamente aumentada pela vacinação através de injecção intratumoral, em comparação com injeções realizadas através de outros métodos de entrega. Pellegatta et al
. [23] relataram que, em comparação com outros métodos de entrega, injecção intratumoral de DCs pode aumentar a eficácia anti-tumoral por alteração do ambiente intratumoral e aumentar as respostas imunes mediadas por células-T. Neste caso, foram observados níveis aumentados de CTL específicos de WT1 após imunoterapia DC, indicando que as DCs apresentados para WT1 ingénuo CD8 + células-T de um modo preciso. Nós sugerimos que o câncer gástrico poderia ser uma boa indicação para a injeção direta de DCs e que o local apropriado para injecção podem ser selecionados usando imagens ao vivo com EGD.
Imaturo DCs foram utilizados para injeções diretas em estudos anteriores, porque a sua capacidade fagocítica tem foi considerada como sendo superior ao de DCs maduras [24]. No entanto, as DCs imaturos foram mostrados para induzir tolerância e a inibição específica de antigénio de função efectora de células T [25, 26]. Drutman e Trombetta [27] mostrou que madura DCs manteve uma robusta capacidade de capturar antígenos solúveis. Além disso, os antígenos internalizados por DCs maduras foram eficientemente apresentados em MHC classe II e células cross-apresentado em células I MHC classe. De Vries et al
. [28] demonstraram que madura DCs migrar de forma eficiente em áreas-T-cell povoada dos gânglios linfáticos de pacientes com melanoma. Tomados em conjunto, estes resultados sugerem que poderia ser razoável usar DCs maduras para injecções directas em tumores.
Resultados IHC para WT1 e MUC1 indicou alterações significativas após a vacinação. A mucina é uma glicoproteína de elevado peso molecular que desempenha um papel importante na protecção do epitélio do tracto gastrointestinal e é normalmente presente em abundância na superfície luminal de diversas células epiteliais secretoras. Os péptidos do núcleo do domínio de repetição em tandem são mascarados nas células normais e exposta em mucinas associadas a células cancerosas. CTLs para MUC1 células cancerosas só atacam com domínios em tandem repeat expostos [29]. Neste caso, as células de MUC1-positivas estavam presentes na superfície do adenocarcinoma do anel de sinete antes de vacinação (Figura 2C-C "); No entanto, as células MUC1-positivos apenas foram confirmados em células epiteliais luminais normais após imunoterapia DC, como tínhamos esperado (Figura 2h-h ").
Conclusões
Para o melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro relatório sobre os efeitos terapêuticos de DCs que alvejam sintetizados peptídeos em um paciente com câncer gástrico que não poderia sofrer ESD ou cirurgia curativa.
Consentimento
Nós forneceu explicações exactas da terapia para o paciente e sua família. Eles assinaram consentimento informado para a publicação deste relato de caso e quaisquer imagens que o acompanham. Uma cópia da autorização escrita está disponível para análise pelo Editor-in-Chief da revista.
Informações dos autores
MK é um diretor de Seren Clinic. MN é um assistente pessoal do Departamento de Cirurgia Gastrointestinal, Kanagawa Cancer Center, um diretor de Seren Clinic, e professor no Departamento de Imunologia da Faculdade de Medicina da Universidade de St Marianna. TS, AC e AN eram assistentes da equipe na Seren Clinic. MO, SS, YY, YS, e NS também são professores em cada universidade
abreviações
DPOC:. Doença pulmonar obstrutiva crônica
CTLs: linfócitos T citotóxicos

DC: células dendríticas
EGD:
esofagogastroduodenoscopia

HLA:
antígeno leucocitário humano
IHC:
imunohistoquímica
MUC1:
mucina 1 , da superfície celular associada
WT1:
tumor de Wilms 1.
Declarações
Agradecimentos
Nós reconhecemos o paciente que concordou em participar neste estudo e seus oncologistas primários. Este estudo não recebeu apoio financeiro.
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Os autores não têm relações financeiras ou pessoais com pessoas ou organizações que possam inapropriadamente influência deste trabalho. contribuições
dos autores
MK e MN concebido e desenhado o estudo e coletados, reunidos, analisados ​​e interpretados os dados. TS, AC, AN, MO, SS, YY, YS, e NS interpretados os dados. MK e MN escreveu o manuscrito e aprovaram o manuscrito final. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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